含有蛋壳膜成分的肝保护剂、以及使用该肝保护剂的药物组合物、食品添加剂及食品的制作方法【专利摘要】本发明提供消化吸收率被改善的肝保护剂及其应用；该肝保护剂含有含蛋壳膜的微粉末，该含蛋壳膜的微粉末是体积平均粒径为6μm以下的含蛋壳膜的微粉末、和/或体积最大粒径为20μm以下的含蛋壳膜的微粉末；在喂食含有上述值的含蛋壳膜微粉末(样品C)的饲料时，与对照组(control)相比，肝损伤组(CCl4)的体重显著减轻，相对于此，蛋壳膜摄取组(ESM)维持与对照组相等的体重。【专利说明】含有蛋壳膜成分的肝保护剂、以及使用该肝保护剂的药物组合物、食品添加剂及食品【
技术领域：
】[0001]本发明涉及含有蛋壳膜成分例如含蛋壳膜的微粉末的肝保护剂及其应用。[0002]此处的"肝保护"也包括"肝功能改善"，且存在包括肝保护和肝功能改善两者的情况、仅包括肝保护的情况、以及仅包括肝功能改善的情况这三种形态。另外，在本说明书中，原则上是以"肝保护"也包括"肝功能改善"的形态使用，但有时也将两者分开使用。【
背景技术：
】[0003]蛋壳膜是位于鸡蛋等禽类蛋的蛋壳内侧的膜，其具有由主要成分为卵角蛋白(Ovokeratin)和卵粘蛋白（Ovomucin)的结实的纤维性蛋白质构成的网状结构。这些蛋白质相对于酸、碱、蛋白酶比较稳定且不溶于水。因此，鸡蛋蛋壳膜作为食品产业中的副产品几乎未得到利用而被扔掉，但是，已知蛋壳膜具有促进皮肤再生的作用、和促进特别是也被称为胎儿型胶原蛋白的III型胶原蛋白的生成的作用，因此，其对于生物体的有效性得到关注。[0004]本发明人等曾发表报告称：在使四氯化碳诱发性肝损伤大鼠长期摄取蛋壳膜成分时，发现对于因注射四氯化碳而产生的、（1)体重减轻、（2)肝脏和肾脏肿大、（3)升高后的AST、ALT的活性具有改善效果，同样地，血浆中的脂类、血浆F值以及肝脏中的脂类均呈恢复趋势（非专利文献1)。[0005]另外，在对长期摄取蛋壳膜成分的大鼠的基因表达谱的变化进行分析后得知，蛋壳膜的摄取对于脂类在肝脏中的积累进行抑制的作用可能与SREBP-Ic调节信号的、调节因子SHP介导的通路等多个通路有关，并且，在上述大鼠中，抗炎症、抗氧化酶的血红素加氧酶-I(HemeOxygenase-Ι)及其上游的调节基因AP-1、JUN的表达提高，产生保护身体以免诱发氧化应激的反应。[0006]另外，最近由Benson等人发表报告称，在使用外周血单个核细胞的细胞实验中，通过添加蛋壳膜粉末的水溶性提取物，减少了引起炎症的因子TNF-α(非专利文献2)。[0007]在上述使用蛋壳膜的现有实验中，使用的是市售的蛋壳膜粉末，这些市售的粉末如具有90%以上通过70目筛的粒度的粉末（非专利文献3)那样其粒子较大。另外，70目也取决于筛眼的规格，相当于筛眼孔径为约213μm左右。[0008]【在先技术文献】[0009]【非专利文献】[0010]非专利文献1:"日本食品科学工学会第58届大会演讲集"、58页、2Dal2、2011年9月[0011]非专利文献2:Benson，K.F.etal.，JMedFood2012April;15(4):360-368[0012]非专利文献3:日本丘比株式会社、"EMP0WDER300"的产品目录http://www.kewpie.co.jp/finechemical/products/pdf/01d/em300/em300_pamph.pdf#search=?ΜP0WDER300'[0013]但是，对于上述蛋壳膜成分的作用机理或有效的作用增强方法尚未充分了解。另夕卜，如上所述，构成蛋壳膜的材料本身是以网状结构的纤维质为主要成分而构成且难溶于水等，因此，本来就难以被人体消化吸收。因此，期望能够进一步改善消化吸收率。[0014]为了改善消化吸收率，例如可以举出下述方法等，即，通过（1)利用酸、碱等对蛋壳膜进行水解处理、或者（2)将蛋壳膜更细地进行粉碎从而增大蛋壳膜粒子的每单位体积的表面积，由此提高每单位时间内溶解或析出蛋壳膜成分的效率。[0015]但是，在水解处理中，由于利用的是化学反应，因此，容易产生在水解过程中蛋壳膜中所包含的各种活性组分劣化或改性这样的缺点。考虑到这一点，可以认为将蛋壳膜机械性地粉碎较为有利。因此，为了调查将蛋壳膜更细地粉碎时的效果，本发明人等对于以70目进行分级处理后得到的蛋壳膜和以150目进行分级处理后得到的蛋壳膜进行了比较调查，但是，这两种蛋壳膜的消化吸收率之间完全未发现显著性差异。即，蛋壳膜的消化吸收率并非单纯地与粒径成比例地增加。因此，即使以现有技术中所利用范围的级别来改变粒径并将蛋壳膜粉碎，也无法实现消化吸收率的进一步提高。【
发明内容】[0016]本发明是鉴于上述情况而完成的，其课题在于提供一种相比现有技术进一步改善了消化吸收率的、含有含蛋壳膜微粉末的肝保护剂以及使用该肝保护剂的药物组合物、食品添加剂等的应用。[0017]本发明人等在对使蛋壳膜成分对于四氯化碳诱发性肝损伤大鼠的作用有效地发挥的方法进行研究，而且对其作用机理详细地调查后，发现通过以粒径处于某一范围内的微粒子的形式摄取或注射蛋壳膜成分，能够增强肝保护作用和/或肝功能改善作用，进而得知蛋壳膜成分是对哪些基因产生作用且如何发挥效果，由此完成了本发明。[0018]因此，上述课题是通过以下的本发明实现的。艮P，[0019]本发明的肝保护剂的特征在于，含有体积平均粒径为6μπι以下的含蛋壳膜的微粉末。[0020]本发明的肝保护剂的一实施方式，优选所使用的含蛋壳膜的微粉末的体积最大粒径为20μm以下。[0021]在本发明的肝保护剂的一实施方式中，该肝保护剂是肝纤维化抑制剂。[0022]另外，在本发明的肝保护剂的一实施方式中，该肝保护剂是选自由Tgf-β3、Pdgfra、Vedgf、IgfbpULtbpl以及Ltbp4构成的组中的任一种以上基因的表达抑制剂。[0023]本发明的肝保护剂的一实施方式，优选利用于选自口服剂用和食品添加用中的至少任意一种用途中。[0024]本发明的食品添加剂的特征在于由本发明的肝保护剂构成、或者含有本发明的肝保护剂。[0025]另外，本发明的食品的特征在于添加有该食品添加剂。[0026]本发明的药物组合物优选含有本发明的肝保护剂和赋形剂。该情况下，优选将本发明的药物组合物利用于口服用途中。[0027]本发明的药物组合物的一实施方式，优选该药物组合物为片剂。[0028]本发明的片剂的另一实施方式，优选以10wt%?40wt%的比例含有蛋壳膜成分。[0029]本发明中所使用的含蛋壳膜的微粉末的制造方法的特征在于，至少经过微粉碎工序进行制造，其中，该微粉碎工序是使至少含有从蛋壳内面剥离出的蛋壳膜的含蛋壳膜原料在气体中相互碰撞从而进行微粉碎的工序。[0030]本发明中所使用的含蛋壳膜的微粉末的制造方法的特征在于，至少经过微粉碎工序进行制造，其中，该微粉碎工序是使至少含有呈蛋壳膜附着于蛋壳内面的状态的蛋壳的含蛋壳膜原料在气体中相互碰撞从而进行微粉碎的工序。[0031]本发明中所使用的含蛋壳膜的微粉末的制造方法的一实施方式，优选在经过微粉碎工序之后，实施利用筛眼孔径为20μm以下的筛子进行分级从而除去粗大粒子的分级工序。[0032]本发明中所使用的含蛋壳膜的微粉末的制造方法的另一实施方式，优选微粉碎工序包括第一微粉碎处理和第二微粉碎处理，并在利用高压蒸汽对第一微粉碎处理结束后的原料粉末进行了杀菌处理之后进行第二微粉碎处理。[0033]剂型为片剂的本发明的药物组合物的制造方法，优选至少经过未包衣片剂形成工序来制造片剂，其中，该未包衣片剂形成工序是使用至少含有含蛋壳膜的微粉末的压片用原料进行压片从而形成未包衣片剂的工序。[0034]剂型为片剂的本发明的药物组合物的制造方法的一实施方式，优选进而实施对未包衣片剂进行保护涂层处理的保护涂层工序。[0035]剂型为片剂的本发明的药物组合物的制造方法的一实施方式，优选压片用原料含有含蛋壳膜的微粉末和赋形剂。[0036](发明效果）[0037]根据本发明，能够提供由相比现有技术进一步改善了消化吸收率的含蛋壳膜微粉末构成的肝保护剂及其应用。根据本发明的肝保护剂，能够增强目前在蛋壳膜成分中观察到的对于肝脏的作用，从而能够通过更短时间的使用或摄取而得到更强的作用。另外，本发明的肝保护剂无需进行蛋壳膜成分的提取、精制等复杂工序便可制造，因此，在制造时几乎不会产生废弃物和损耗，从而能够简单且以较高的收获率进行制造，由此从经济和环保方面来看也是有利的。【专利附图】【附图说明】[0038]图1是表示含蛋壳膜的微粉末对于肝损伤模型大鼠的体重的影响的图。左侧部分表示使大鼠摄取在常规饲料中添加含蛋壳膜的微粉末样品C(800目、2%、7周）的饲料后的体重，右侧部分表示使大鼠摄取在常规饲料中添加含蛋壳膜的微粉末样品A(70目、1%、13周）的饲料后的体重。在图1及以下各图中，"Control"表示未诱发肝损伤且仅喂食常规饲料，"CC14"表示诱发肝损伤且仅喂食常规饲料，"ESM"表示诱发肝损伤且喂食常规饲料+蛋壳膜微粉末样品，各数值以1组6只的平均值土SD表示，附有不同字母（a、b、c)表示存在显著性差异（Tukey、p<0.05)。[0039]图2是表示含蛋壳膜的微粉末对于肝损伤模型大鼠的肝脏和肾脏重量的影响的图。纵轴为各脏器相对于体重的重量（％)。上段是摄取了样品A的大鼠的结果，下段是摄取了样品C的大鼠的结果，在各段中，左侧部分表示肝脏的重量，右侧部分表示肾脏的重量。[0040]图3是表示含蛋壳膜的微粉末对于肝损伤模型大鼠的血浆肝功能标志物的影响的图。上段是摄取了样品A的大鼠的结果，下段是摄取了样品C的大鼠的结果，在各段中，左侧部分表示谷草转氨酶（AST)的测量结果，右侧部分表示谷丙转氨酶（ALT)的测量结果。[0041]图4是表示含蛋壳膜的微粉末对于肝损伤模型大鼠的脂类过氧化物（TBARS)量的影响的图。上段是摄取了样品A的大鼠的结果，下段是摄取了样品C的大鼠的结果，在各段中，左侧部分表示血浆的测量结果，右侧部分表示肝脏的测量结果。[0042]图5是表示含蛋壳膜微粉末（样品C)对于肝损伤模型大鼠的体重的影响和所经过时间之间关系的图。[0043]图6?图8是表示含蛋壳膜的微粉末（样品C)对于肝损伤模型大鼠的基因表达的影响的图。纵轴表示mRNA表达水平（对照组的表达水平为1时的相对值）。[0044]图6表示关于以下各基因的结果，从上段左侧起为"Collal"=I型胶原蛋白al(CollagerutypeI、alphal)、"Colla2"=I型胶原蛋白a2(CollagerutypeI、alpha2)、"Sppl"=分泌型焦磷酸蛋白l(Secretedphosphoproteinl)，从下段左侧起为"Aspn"=无孢蛋白（Asporin)、"Sponl"=反应蛋白I(Spondinl，extracellularmatrixprotein)、"Timpl"=金属蛋白酶组织抑制因子-I(TissueInhibitorofMetalloproteinase-1)。[0045]图7表示关于以下各基因的结果，从左侧起为"Pdgfra"=血小板衍生生长因子受体a(platelet-derivedgrowthfactoralphareceptor)、"Igfbpl，'=膜岛素样生长因子结合蛋白I(Insulin-likegrowthfactorbindingproteinl)、"Vegf"=血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor)〇[0046]图8表示关于以下各基因的结果，从左侧起为"Tgf-β3"=转化生长因子β3(Transforminggrowthfactorβ3)、"Ltbpl"=潜转化生长因子β结合蛋白I(Latenttransforminggrowthfactorbetabindingproteinl)、"Ltbp4，'=潜转化生长因子β结合蛋白4(Latenttransforminggrowthfactorbetabindingprotein4)〇[0047]图9是以蛋白水平说明TGF-β的作用的图，其中，"TGF-β"表示转化生长因子β(transforminggrowthfactor0)，"LTBP1"表不潜转化生长因子β结合蛋白I(Latenttransforminggrowthfactorbetabindingproteinl)，"LAP"表不潜态相关性多肤(latencyassociatedprotein)〇[0048]图10是以蛋白水平说明肝损伤、炎症、纤维形成的产生机理的图。【具体实施方式】[0049](肝保护剂）[0050]本发明的肝保护剂含有含蛋壳膜（ESM)的微粉末。本发明中所使用的含蛋壳膜的微粉末的特征在于，其体积平均粒径为6μπι以下。另外，本发明中所使用的含蛋壳膜的微粉末的特征在于，其体积最大粒径为20μπι以下。需要说明的是，在本申请说明书中，含蛋壳膜的微粉末的"体积平均粒径"和"体积最大粒径"是指使用激光衍射式粒度分布测量仪(LMS-30、日本株式会社清新企业制）测量的值。在此，"体积平均粒径"是指粒度分布中从小粒径侧起的累积值为50%的粒径。另外，在测量含蛋壳膜的微粉末的粒径时，使用将含蛋壳膜的微粉末利用表面活性剂分散到水中的测量试样。[0051]通过将含蛋壳膜的微粉末的粒度分布控制为含蛋壳膜的微粉末的体积平均粒径为6μm以下、或者体积最大粒径为20μm以下，与以70目或150目进行分级处理后得到的现有蛋壳膜粉末（最大粒径为100μm?200μm的蛋壳膜粉末）相比，能够进一步提高消化吸收率及肝保护或肝功能改善的效率。[0052]能够得到如此效果的理由并不确定，但是，本发明人推断如下：S卩，在最大粒径为100μm?200μm左右、平均粒径为数十?百数十μm级的现有蛋壳膜粉末中，即使在该粒径范围级别内改变最大粒径或平均粒径而更细地进行粉碎，消化吸收率和肝保护效率也几乎得不到改善。可以认为其理由如下：即，蛋壳膜具有主要成分为纤维状蛋白质的牢固的网状结构，即使以上述粒径范围级别进行粉碎，其粉碎后的蛋壳膜粒子也仍然维持牢固的网状结构。即，由于维持牢固的网状结构，因此，即使在经口摄取蛋壳膜时，也难以通过胃液或唾液等各种消化液促进蛋壳膜的分解或溶解。[0053]另外，一般来说，粒径越小则粒子的每单位体积的表面积越大。因此，当粒子仅由相对于消化液呈可溶性或易溶性的物质构成时，随着粒径变小而消化吸收率得以改善，从而能够期待提高肝保护或肝功能改善的效率。但是，即使在上述粒径范围内改变粒径，消化吸收率也几乎得不到改善。由此可以推测出：仅仅是粉碎蛋壳膜的过程中生成的断裂面或粉碎面等的一部分变得易溶于消化液，而呈维持牢固的网状结构状态的蛋壳膜粒子主体部分依然维持相对于消化液不溶或难溶的状态。[0054]另一方面，与现有的蛋壳膜粉末相比，根据本发明中所使用的含蛋壳膜的微粉末，消化吸收率、肝保护或肝功能改善效率分别得到大幅提高。这样的消化吸收率及肝保护或肝功能改善效率提高的原因，并不是单纯因为粒径变小而产生的，而是推测如下：在将蛋壳膜微粉化的过程中，蛋壳膜微粒子整体中的、蛋壳膜本来所具有的纤维状且牢固的网状结构被破坏，从而使蛋壳膜微粒子整体变得更易溶于消化液中。[0055]另外，从更进一步改善消化吸收率及肝保护或肝功能改善效率的观点来看，更优选含蛋壳膜的微粉末的体积平均粒径为6μm以下且体积最大粒径为20μm以下。另外，在并不过多追求效果而仅希望获得适当效果时，也可以使含蛋壳膜的微粉末的体积最大粒径超过20μm、或者使含蛋壳膜的微粉末的体积平均粒径超过6μm、或者使含蛋壳膜的微粉末的体积最大粒径超过20μm且体积平均粒径超过6μm。[0056]在含有本实施方式的含蛋壳膜的微粉末的肝保护剂中，至少含有被微粉化的蛋壳膜成分，但是，除此之外还可以含有被微粉化的蛋壳I丐（Eggshellcalcium)成分。该情况下，本实施方式的含蛋壳膜的微粉末，尤其优选为仅含有蛋壳膜成分的形态（第一形态）、或者仅含有蛋壳膜成分和蛋壳钙的形态（第二形态）中的任一形态。在含有第一形态的含蛋壳膜的微粉末的肝保护剂的情况下，由于完全仅含有蛋壳膜成分，因此，能够广泛地利用于药物组合物、尤其是片剂等固体剂型的药物组合物、食品添加剂等各种用途中。另外，在第一形态的含蛋壳膜的微粉末和第二形态的含蛋壳膜的微粉末的任一种微粉末中，都允许含有制造过程等中混入的杂质成分。另外，在含有本实施方式的含蛋壳膜微粉末的肝保护剂中，除了蛋壳膜成分和蛋壳钙成分之外还可以含有其他的营养素等。[0057]蛋壳膜是位于蛋壳内侧的膜，蛋壳膜能够从由蛋壳钙构成的蛋壳上剥离取出。另夕卜，在制造含有蛋壳膜成分的片剂时，可以将蛋壳钙用作片剂的硬度提高剂。此外，蛋壳钙也适合作为人摄取的钙源。考虑到这一点，当片剂等成品中同时含有蛋壳膜成分和蛋壳钙成分时，在制造该成品时尤其优选使用第二形态的含蛋壳膜的微粉末。该情况下，由于在一系列制造过程中能够省略将蛋壳膜从蛋壳剥离的工序，因此，能够谋求制造工序的简化和低成本化。另外，在使用第二形态的含蛋壳膜的微粉末的情况下，也可以使用被剥离的蛋壳膜。[0058]构成本发明中所使用的含蛋壳膜的微粉末的蛋壳膜，只要是位于禽类蛋的蛋壳内侦_膜（外蛋壳膜和/或内蛋壳膜）均可以使用。其中，从获取容易度、成本等方面来看，尤其优选使用鸡蛋的蛋壳膜。[0059]在制造本发明中所使用的含蛋壳膜的微粉末时，可以利用市售的蛋壳膜粉末、或者市售的蛋壳膜粉末和蛋壳钙，并将其微粉碎至体积平均粒径为6μm以下、和/或体积最大粒径为20μm以下。或者，也可以使用蛋壳膜附着于蛋壳上的状态的原料、或者同时使用该原料和蛋壳膜粉末。另外，作为市售的蛋壳膜粉末，例如可以利用"EMP0WDER300"（商品名称）（日本丘比株式会社制）。另外，关于本实施方式的含蛋壳膜的微粉末的制造方法之后详细进行叙述。[0060](本发明的肝保护剂中所使用的含蛋壳膜的微粉末的制造方法）[0061]本发明的肝保护剂中的含蛋壳膜的微粉末，可以至少经过使含蛋壳膜原料在气体中相互碰撞从而进行微粉碎的微粉碎工序来制造。在该微粉碎工序中，使用的是：使从喷嘴喷射出的高压空气或蒸汽等气体以超高速喷射流（Ultrahighspeedjet)的形式冲撞粒子，从而通过粒子彼此间的碰撞而将粒子粉碎至数微米级的微粒子的粉碎装置、即所谓的喷射式粉碎机。与使旋转刀等硬质粉碎部件与原料碰撞从而进行粉碎的现有粉碎方法相t匕，上述粉碎方法在进行粉碎时几乎不会因为粉碎部件与原料接触、碰撞等而产生摩擦热。因此，减少了对于蛋壳膜中所含的氨基酸或蛋白质等容易因为热而发生改性、劣化、分解的成分的破坏。即，在制造过程中不易损失蛋壳膜中的活性组分。此外，由于为了粉碎原料使用的是高压气体而不是粉碎部件，因此，不会发生来自粉碎装置的杂质混入含蛋壳膜的微粉末中的情况。[0062]另一方面，在使粉碎部件与原料碰撞从而进行粉碎的粉碎方法中，难以粉碎成粒径小于30μm级的粉末。关于利用这样的粉碎方法粉碎原料时的粉碎临界粒径，例如在切碎机（cuttermill)中为500μm左右，在破碎机（crackingmachine)中为150μm左右，在雾化器（atomizer)中为50μm左右，在叶轮式粉碎机（impellermill)中为70μm左右，在宽腔针盘磨机（contraplexmill)、球磨机以及ACM磨粉机（ACMpulverizermill)中为30μm左右。因此，即使使用筛眼孔径为20μm左右的筛子进行分级处理，也几乎无法得到本实施方式的含蛋壳膜的微粉末，而且收获率也极低。另外，在上述粉碎方法中，粉碎时被加热的粉末在粉碎后的冷却阶段中容易吸收空气中的水分。其结果是，还存在易于滋生腐生菌或霉菌这一缺点。[0063]另外，作为微粉碎工序中所使用的含蛋壳膜原料，可以使用（1)至少含有从蛋壳内面剥离出的蛋壳膜的原料（第一形态的含蛋壳膜原料），和/或，（2)至少含有呈蛋壳膜附着于蛋壳内面的状态的蛋壳和蛋壳膜的原料（第二形态的含蛋壳膜原料）中的任一种原料。在此，作为至少含有从蛋壳内面剥离出的蛋壳膜的含蛋壳膜原料，例如可以使用"EMP0WDER300"（日本丘比株式会社制）。另外，在如后述的片剂制造等那样在后工序中同时使用蛋壳钙和蛋壳膜的情况下，从生产率的观点来看，优选使用第一及第二形态的含蛋壳膜原料中的、使用未从蛋壳剥离的蛋壳膜的第二形态的含蛋壳膜原料。[0064]在微粉碎工序中，优选通过喷射式粉碎机粉碎至含蛋壳膜原料的体积平均粒径达到40μm以下为止，更优选粉碎至体积平均粒径达到20μm以下为止，进一步优选粉碎至体积平均粒径达到10μm以下为止。另外，该情况下，优选粉碎至体积最大粒径达到20μm以下为止。另一方面，利用喷射式粉碎机粉碎后的含蛋壳膜原料的体积平均粒径的下限并没有特别限定，但是，从生产率等实用性方面出发，优选为4μm以上，更优选为5μm以上。[0065]关于利用喷射式粉碎机粉碎后的含蛋壳膜原料，只要体积最大粒径为20μπι以下、和/或体积平均粒径为6μm以下，便可以直接将其用作本发明的含有含蛋壳膜微粉末的肝保护剂。另一方面，当粒度分布中含有粒径超过20μm的粗大粒子时，也可以在经过微粉碎工序之后进而实施分级工序，其中，该分级工序是利用筛眼孔径为20μm以下的筛子进行分级从而除去粗大粒子的工序。[0066]另外，在本发明的肝保护剂中的含蛋壳膜微粉末的制造方法中，也可以根据需要实施其他的工序或工艺。例如，微粉碎工序也可以包括第一微粉碎处理和第二微粉碎处理，并且在利用高压蒸汽对第一微粉碎处理结束后的原料粉末进行了杀菌处理之后进行第二微粉碎处理。在通过喷射式粉碎机将含蛋壳膜原料粉碎并且微细化的过程中，蛋壳膜的抗菌性容易降低，但是，通过如上所述进行杀菌处理，可容易地防止在本实施方式的含蛋壳膜的微粉末中滋生霉或细菌。[0067](药物组合物）[0068]本发明的药物组合物含有本发明的肝保护剂和至少一种赋形剂。在将本发明的肝保护剂制成药物组合物时，优选制成经口摄取的用途、即片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、液剂等的口服药物组合物。用于制造包括以上所例示剂型在内的各种剂型的药物组合物的各种成分和制造方法为制剂学领域中公知的成分和方法，本领域技术人员可根据需要适当地进行选择。从高浓度且均匀地含有蛋壳膜，在保存时、流通时、服用时等不会发生变形或损坏，使用性出色，并且能够经口简单地服用的观点来看，本发明的药物组合物尤其优选以片剂的形式使用。[0069]本发明的肝保护用和/或肝功能改善用的药物组合物的有效给药量，根据欲治疗或预防的肝疾病或症状的种类或程度、给药对象的状态、剂型等的不同而不同。本发明的肝保护用和/或肝功能改善用的药物组合物由于有效性高，因此，一般来说其用量可以明显少于公知蛋壳膜的有效量、或者在以与公知蛋壳膜相同的用量进行使用的情况下可以减少给药次数或者给药期间。[0070]另外，此处的"药物组合物"并不限定于人用药物组合物，还包括作为宠物或家畜饲养的狗或猫等哺乳动物用的药物组合物。该药物组合物相对于人（体重为60kg的成年人）的给药量，在换算成蛋壳膜成分的量时优选为每日IOmg?50000mg。具体来说，例如本发明的药物组合物的有效给药量可以是每日的蛋壳膜成分共计为18mg?48000mg，进而优选的值可为500mg?25000mg。[0071](片剂）[0072]以下，作为使用本发明的肝保护剂的药物组合物的例子，对片剂进行说明。本实施方式的片剂含有上述含蛋壳膜的微粉末和赋形剂。[0073]本实施方式的片剂中所含的微粉末状蛋壳膜成分的含有量并没有特别限制，但是，从能够顺利地进行粒子的造粒和压片（Tabletting)，经口摄取（服用）片剂时对于肝损伤的预防和/或治疗效果更佳，生物体内生成的活性氧的减少或消除能力增强等观点来看，优选相对于片剂的总质量而以5wt%?40wt%的比例含有蛋壳膜成分，更优选以IOwt%?25wt%的比例含有蛋壳膜成分。[0074]通过将蛋壳膜成分的含有量设为5wt%以上，无需为了得到肝保护效果、活性氧的减少或消除能力而摄取大量片剂。另一方面，通过将片剂中的蛋壳膜成分的含有量设为40wt%以下，粒子的造粒和压片变得容易，从而易于制造片剂。[0075]在本实施方式的片剂中，作为用于形成片剂的各种添加剂，除了赋形剂之外例如还可以适当地添加结合剂、崩解剂、润滑剂及其他营养素等。[0076]赋形剂是在活性组分较少时以适于使用的量进行添加的添加剂。赋形剂可以适宜地利用公知的赋形剂，但是，作为片剂用赋形剂优选使用化工淀粉和乳糖中的至少一种。从赋形性的观点而言，赋形剂的含有量优选为蛋壳膜成分的质量的〇.5倍?3倍，更优选为1倍?2.5倍。作为化工淀粉可以举出焙烧糊精（白糊精、黄糊精等）等糊精类、氧化淀粉(次氯酸氧化淀粉等）、低粘性改性淀粉（酸浸淀粉、酶处理淀粉等）等，可以使用上述化工淀粉中的一种或两种以上。其中，作为化工淀粉优选使用糊精，作为具体例可以举出日本日食株式会社制的"WAXYa(^ia)，，、日本松谷化学株式会社制的"PINEFIBER(パ4774一）"等。从能够更加顺利地进行压片这一点来看，化工淀粉更优选同时使用"WAXYa"和"PINEFIBER"。在同时使用"WAXYa"和"PINEFIBER"时，优选以l:4?4:l的质量比来使用"WAXYa"和"PINEFIBER"。[0077]另外，在作为赋形剂同时使用化工淀粉（尤其是"WAXYa"和"PINEFIBER"）和乳糖时，化工淀粉：乳糖的使用比例（质量比）优选为1:5?5:1，更优选为1:3?3:1〇[0078]结合剂是为了将构成片剂原料的粉体彼此间粘结起来而使用的添加剂。作为结合剂可以适宜地利用公知的结合剂，例如可以举出淀粉糊、阿拉伯胶糊、羟丙基纤维素等。[0079]崩解剂是为了通过其吸收唾液等水分而进行膨胀等从而使片剂崩解，由此使蛋壳膜成分等活性组分容易释放而添加的添加剂。作为崩解剂可以适宜地利用公知的崩解剂，例如可以使用纤维素类等。另外，淀粉也具有作为崩解剂的功能。[0080]润滑剂是为了提高构成片剂原料的粉体的流动性，从而使压片时的压缩成形变得容易而使用的添加剂。作为润滑剂可以适宜地利用公知的润滑剂，例如可以举出硬脂酸镁、蔗糖脂肪酸酯等的石蜡类、滑石或者维生素C等。[0081]进而，本实施方式的片剂尤其优选作为硬度提高剂而含有蛋壳钙，以提高片剂的硬度，防止片剂的变形或损伤，提高包装时、保存时、流通时等片剂的使用性，使摄取性变得良好。在片剂含有蛋壳钙的情况下，作为片剂的制造中所使用的原料，可以至少使用第一形态的含蛋壳膜的微粉末和蛋壳钙、或者至少使用第二形态的含蛋壳膜的微粉末。[0082]蛋壳钙是将鸡蛋等的禽类蛋的壳粉碎并干燥后形成的微粉末，只要是人可摄取的蛋壳钙，均可使用于本实施方式的片剂中。作为蛋壳钙，例如可以直接使用目前市售的日本丘比株式会社制的"CALH0PE"（商品名称）、日本太阳化学株式会社制的蛋壳钙等。另外，在使用第二形态的含蛋壳膜的微粉末来制造片剂时，也可以省略上述蛋壳钙的使用。片剂中所含的蛋壳I丐的含有量，优选相对于片剂的总质量为5wt%?20wt%，更优选为8wt%?15wt%〇[0083]为了加快蛋壳膜在体内的吸收，进一步提高肝脏疾病的预防和/或治愈效果，另外为了进一步提高生物体内生成的活性氧的减少或消除能力，本实施方式的片剂优选在含有蛋壳膜成分的同时还含有以下物质。即，本实施方式的片剂优选含有：（1)公知的具有肝保护作用和/或肝功能改善作用的物质、（2)健康增进剂（例如维生素类、β-胡萝卜素以及蜂王浆等）、（3)可同时使用的各种医疗用成分（例如抗炎症剂等）中的至少一种。[0084]本实施方式的片剂中所含有的维生素的种类并没有特别限制，只要是人或哺乳动物能够摄取的维生素均可使用。例如可以举出维生素A、维生素D、维生素E、维生素F、维生素K等脂溶性维生素类，维生素Β、维生素C、维生素Η、维生素L等水溶性维生素类等，本实施方式的片剂可以含有这些维生素类的一种或两种以上。β-胡萝卜素和维生素类的含有量，可以根据适于人等对象摄取的各种维生素的量而适宜地确定。[0085]另外，从能够充分发挥本实施方式的片剂的上述作用效果方面、成本等方面而言，蜂王浆的含有量优选为蛋壳膜成分的总质量的〇.1倍?1.5倍，更优选为0.2倍?1倍，进一步优选为〇.5倍?0.8倍。[0086]为了达成防止片剂中所含的成分变质或分解，另外提高片剂表面的耐损伤性等目的，本实施方式的片剂优选被涂膜包覆。涂膜可以由与作为片剂的涂膜目前正使用的涂膜相同的皮膜形成材料而形成。皮膜形成材料并没有特别的限定，例如可以利用日本岐阜紫胶株式会社制的"Shellac"（Track30)(商品名称）等。[0087]另外，本实施方式的片剂优选被糖衣包覆，以易于经口摄取。作为此时的糖衣，只要是片剂中目前使用的糖衣均可使用。另外，本实施方式的片剂也可以根据需要着色成适当的颜色，以提高其商品价值。另外，也可以在着色后进行抛光处理。[0088]本实施方式的片剂的大小并没有特别限制，可以适宜地进行确定，但是，从使用性、服用容易度等方面出发，一般优选形成为直径约为7mm?IOmm左右的圆形或椭圆形的片剂。[0089]进而，本实施方式的片剂例如优选1粒片剂的重量约为350mg?600mg左右，并且优选在这样的1粒片剂中含有约18mg?240mg的量的蛋壳膜成分，更优选为35mg?150mg。[0090]例如，假设本实施方式的每粒片剂以约18mg?240mg的比例含有蛋壳膜成分。该情况下，当成人每日摄取或服用1粒?200粒该片剂（每日的蛋壳膜成分共计为ISmg?48000mg)时，能够消除或减少体内生成的活性氧从而促进各种肝疾病的预防或恢复。[0091](片剂的制造方法）[0092]本实施方式的片剂，可以使用至少含有本实施方式的含蛋壳膜的微粉末的压片用原料，并适宜地利用公知的片剂制造方法来制造。具体而言，可以至少经过未包衣片剂(Uncoatedtablet)形成工序（压片工序）来制造本实施方式的片剂，其中，该未包衣片剂形成工序（压片工序）是通过使用压片用原料进行压片从而形成未包衣片剂的工序。[0093]另外，在压片用原料中，除了本实施方式的含蛋壳膜的微粉末之外，还可以含有上述的蛋壳膜成分以外的其他活性组分。此外，通常含有选自赋形剂、结合剂、崩解剂等中的至少一种添加剂，但是，优选至少含有赋形剂。另外，也可以作为硬度提高剂进而含有蛋壳钙。[0094]在未包衣片剂形成工序中，可以利用公知的压片法，例如，可以利用直接对称量、混合规定原料而得到的压片用原料进行压片的直接压片法来实施，也可以利用在经过将压片用原料造粒成颗粒的造粒工序后进行压片的颗粒压片法来实施。[0095]在造粒工序中，例如可以按照以下顺序将压片用原料进行颗粒化。首先，相对于压片用原料100质量份而以约10质量份?20质量份的比例添加醇类（乙醇）从而制成含醇混合物。接着，使用该含醇混合物并采用目前已知的造粒法、例如搅拌造粒法、转动造粒法、喷雾造粒法等造粒方法进行造粒。然后，通过对所得到的粒子进行以例如40°C?70°C左右的温度加热的干燥工序，从而能够得到压片用的颗粒。另外，优选在使用筛子对得到的压片用颗粒进行分级从而使粒度均匀后进行压片。[0096]未包衣片剂形成工序中所使用的压片装置，可以使用与医药等领域中目前用于制造片剂的装置相同的压片装置。另外，在进行压片时，优选在经过造粒工序和干燥工序得到的压片用颗粒中添加维生素C和蔗糖脂肪酸酯等润滑剂后进行压片。此时，粒子的流动性和光滑性提高，从而能够更加顺利地进行压片。在此，在润滑剂使用维生素C和蔗糖脂肪酸酯时，其添加量优选如下：即，压片时维生素C的添加量优选相对于干燥状态的压片用颗粒100质量份为8质量份?10质量份，另外，蔗糖脂肪酸酯的添加量优选相对于干燥状态的压片用颗粒100质量份为〇.1质量份?3.0质量份。[0097]经过未包衣片剂形成工序后得到的未包衣片剂可以直接作为本实施方式的片剂，也可以进一步实施对未包衣片剂实施保护涂层处理的保护涂层工序。保护涂层工序中所使用的涂层剂种类如上所述并没有特别限制，例如可以使用日本岐阜紫胶株式会社制的"Shellac"等。保护涂层的涂层量没有特别限制，一般优选在1粒片剂中为Img?5mg左右。[0098]另外，被施以保护涂层处理后的片剂可以直接作为产品流通、销售，但是，优选包覆糖衣以便容易服用片剂。包覆糖衣的糖衣包覆工序可以由一个阶段进行，但是，为了使表面的加工质量光洁美观而优选使用下述分多个阶段进行的方法，即：在利用高粘度的含糖分糊状物包覆片剂之后进行干燥，进而利用低粘度的含糖分糊状物或含糖分溶液再次进行包覆的多个阶段。[0099]糖衣材料的种类并没有特别限制，目前用于片剂的糖衣处理中的糖衣材料等均可以使用，例如可以使用含有砂糖、阿拉伯胶或明胶等增粘剂、蛋壳钙、煅烧牛骨粉等的糖衣材料。[0100]包覆有糖衣的片剂可以直接进行流通、销售，但是，通过进一步实施着色，能够形成为更美观且商品价值高的片剂。此时的着色方法并没有特别限制，可以采用与目前已知的对片剂表面实施着色的方法相同的方法进行。另外，通过在着色之后进行抛光处理，能够使片剂的外观变得更好。抛光可以使用例如巴西棕榈錯（carnaubawax)等的抛光剂进行，由此得到的本实施方式的片剂在进行分选、称重、包装等之后上市。[0101](食品添加剂）[0102]本发明的肝保护剂可以单独或者与其他食品添加剂等的生理学上允许的各种成分组合而作为点心类、健康食品、保藏食品、加工食品等食品中添加用的食品添加剂进行使用。本发明的食品添加剂可以通过本【
技术领域：
】公知的方法添加在各种食品中进行使用，以达成肝保护或肝功能改善的目的。例如，关于蛋壳膜在食品中的应用，提出了含有粉碎成粉末状的蛋壳膜的片剂或点心类等（日本特许第3862600号、日本特开2009-165421号公报）。上述专利文献中记载的片剂或点心类中所使用的蛋壳膜粉末，可以使用含有本发明的肝保护剂的食品添加剂。[0103]另外，此处的"食品"并不限定于人用食品，还包括作为宠物或家畜饲养的狗或猫等哺乳动物用的饲料。另外，在"食品"概念中，除了通常的食品之外，还包括饮料、所谓的补充剂（supplement)、健康食品、肠内营养食品、特殊用途食品、营养功能食品、特定保健用食品等。[0104]【实施例】[0105]以下，举以实施例对本发明进行说明，但是，本发明并不仅限于以下的实施例。[0106]1.含蛋壳腊粉末的制诰[0107](1)含蛋壳膜粉末样品A的准备[0108]含蛋壳膜粉末样品A(以下称为"样品A"）使用日本丘比株式会社制的"EMP0WDER300"（商品名称）。该样品具有90%以上可通过70目筛（筛眼孔径约为213μm左右）的粒度。使用激光衍射式粒度分布测量仪（日本株式会社清新企业制、LMS-30)测量粒径的结果是,体积最大粒径为213μm，体积平均粒径为35μm。[0109](2)含蛋壳膜粉末样品B的准备[0110]含蛋壳膜粉末样品B(以下称为"样品B"）使用利用喷射式粉碎机将"EMP0WDER300"粉碎后的物质。作为喷射式粉碎机而使用单轨喷射式粉碎机（Single-trackjetmill)(日本株式会社清新企业制、FS-4)，并以风量为I.2m3/min、动力为Ilkw的条件实施粉碎直到体积最大粒径变为325目（筛眼孔径约为45μm)左右为止。[0111](3)含蛋壳膜粉末样品C的准备[0112]含蛋壳膜粉末样品C(以下称为"样品C"）使用利用喷射式粉碎机将"EMP0WDER300"粉碎后的物质。作为喷射式粉碎机而使用单轨喷射式粉碎机（日本株式会社清新企业制、FS-4)，并以风量为I.2m3/min、动力为Ilkw的条件实施粉碎直到体积最大粒径变为800目（筛眼孔径约为20μm)左右为止。使用激光衍射式粒度分布测量仪（日本株式会社清新企业制、LMS-30)测量粉碎后的粒径的结果是，体积最大粒径为19.6μm，体积平均粒径为5.8μm。[0113]2.消化测试[0114]使用按照上述方式制成的含蛋壳膜粉末样品进行消化效率试验。准备四支装有0.8ml稀释200倍后的样品A的悬浮液的试管。接着，在各试管中加入消化酶（取自猪胰脏的胰酶），并以37°C的温度分别加热0分钟、30分钟、60分钟以及180分钟。然后，以KKTC的温度加热5分钟，在反应停止后以1500rpm进行10分钟离心分离处理，然后利用考马斯亮蓝法（Bradford法）测量上清液中的可溶性蛋白质。测量结果以牛血清白蛋白为标准进行换算。另外，作为空白组（Blank)，取代悬浮液而使用0.IM的磷酸缓冲液。另外，对于样品B、C也实施了同样的测试。[0115]根据加热时间对检测出的可溶性蛋白质进行整理后的结果如表1所示。由表1明确可知，在分散有样品C的悬浮液中加入消化酶时的可溶性蛋白质的检测量，相比在分散有样品A、B的悬浮液中加入消化酶时要多约20%左右。相对于此，在分散有样品A的悬浮液中加入消化酶时和在分散有样品B的悬浮液中加入消化酶时的可溶性蛋白质的检测量未发现差异。[0116][表1]【权利要求】1.一种肝保护剂，其特征在于，所述肝保护剂含有含蛋壳膜的微粉末，所述含蛋壳膜的微粉末的体积平均粒径为6μm以下，并且，所述肝保护剂为肝纤维化抑制剂。2.-种肝保护剂，其特征在于，所述肝保护剂含有含蛋壳膜的微粉末，所述含蛋壳膜的微粉末的体积最大粒径为20μm以下，并且，所述肝保护剂为肝纤维化抑制剂。3.-种肝保护剂，其特征在于，所述肝保护剂含有含蛋壳膜的微粉末，所述含蛋壳膜的微粉末的体积平均粒径为6μηι以下，并且，所述肝保护剂为Tgf-β3、Pdgfra、Vedgf、Igfbpl、Ltbpl以及Ltbp4中的任意一种以上基因的表达抑制剂。4.一种肝保护剂，其特征在于，所述肝保护剂含有含蛋壳膜的微粉末，所述含蛋壳膜的微粉末的体积最大粒径为20μm以下，并且，所述肝保护剂为Tgf-β3、Pdgfra、Vedgf、Igfbpl、Ltbpl以及Ltbp4中的任意一种以上基因的表达抑制剂。5.-种肝保护用和/或肝功能改善用的药物组合物，其特征在于，含有权利要求1?4中任一项所述的肝保护剂和赋形剂。6.如权利要求5所述的肝保护用和/或肝功能改善用的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为片剂。7.-种食品添加剂，其特征在于，含有权利要求1?4中任一项所述的肝保护剂。8.-种食品，其特征在于，添加有权利要求7所述的食品添加剂。【文档编号】A23L1/29GK104274491SQ201310285283【公开日】2015年1月14日申请日期:2013年7月9日优先权日:2013年7月9日【发明者】加藤久典,贾慧娟,长谷部由纪夫申请人:国立大学法人东京大学,株式会社瑷兰梦朵