一种质粒在大肠杆菌上进行转化的方法
【专利摘要】本发明公开了一种质粒在大肠杆菌上进行转化的方法。步骤如下：(1)挑取平板上活化的大肠杆菌DH5a接种于3mlLB培养液中，37°C振荡培养过夜；(2)按1：150-200挑取过夜培养菌液接种于200mlLB培养液中，37°C振荡培养2~2.5h(OD600约为0.4)；(3)培养物放入冰浴中冷却lOmin。本发明的有益效果是，实验简单，费用较低，抗体的制备为将来检测临床器官和人工肝中的PERV的表达及传播具有重要意义。
【专利说明】一种质粒在大肠杆菌上进行转化的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种实验方法，具体来说，一种质粒在大肠杆菌上进行转化的方法。
【背景技术】
[0002]质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器(主要指线粒体和叶绿体)中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌(大肠杆菌)、酵母菌和放线菌等生物中细胞核或拟核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体(Vector)。许多细菌除了拟核中的DNA外，还有大量很小的环状DNA分子，这就是质粒(plasmid)(补充:部分质粒为RNA)。质粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四环素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些质粒称为附加体(episome)，这类质粒能够整合进真菌的染色体，也能从整合位置上切离下来成为游离于染色体外的DNA分子。质粒在宿主细胞体内外都可复制，通过个些特性，人们可以把一些目的DNA片断构建在质粒中，通过转化入大肠杆菌中，不断的复制，来得到目的产物。这就是转化的目的。
【发明内容】
[0003]为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案:
一种质粒在大肠杆菌上进行转化的方法，步骤如下:
(1)挑取平板上活化的大肠杆菌DH5a接种于3mlLB培养液中，37°C振荡培养过夜；
(2)按1:150-200挑取过夜培 养菌液接种于200ml LB培养液中，37° C振荡培养2~2.5h (0D600 约为 0.4)；
(3)培养物放入冰浴中冷却IOmin；
(4)把每支离心管中菌体重新悬浮于IOml预冷(4°C)的lOOmmol/LCaCh溶液中，’冰浴中20min, 4° C SOOOrpm离心12min,收集菌体；
(5)把每支离心管中菌体悬浮于IOml预冷(4°C)的IOOmmoI/LCaCh溶液中；
(6)分装在四支离心管中,4°C 3000rpm离心12min,收集菌体；
(7)再将每支离心管中菌体悬浮于2ml预冷的lOOmmol/LCaCb溶液分装在1.5ml的离心管中；
(8 )取感受态细胞I ;;冰h解冻30iTiin、加入al pGEX-4T_l质粒载体；
(9)放入冰浴中30min，转入42°C水浴90sec，再冰浴2min培养液，37° C振荡培养
Ih;
(10)取己转化的感受态细胞均勾铺于含Amp的LB平板上，待平板中的液体吸收后，倒置平板，37° C恒温培养过夜。
[0004]本发明的有益效果是，实验简单，费用较低，抗体的制备为将来检测临床器官和人工肝中的PERV的表达及传播具有重要意义。【具体实施方式】
[0005]一种质粒在大肠杆菌上进行转化的方法，步骤如下:
(1)挑取平板上活化的大肠杆菌DH5a接种于3mlLB培养液中，37°C振荡培养过夜；
(2)按1:180挑取过夜培养菌液接种于200ml LB培养液中，37° C振荡培养2h (0D600约为0.4)；
(3)培养物放入冰浴中冷却IOmin；
(4)把每支离心管中菌体重新悬浮于IOml预冷(4°C)的lOOmmol/LCaCh溶液中，’冰浴中20min, 4° C SOOOrpm离心12min,收集菌体；
(5)把每支离心管中菌体悬浮于IOml预冷(4°C)的IOOmmoI/LCaCh溶液中；
(6)分装在四支离心管中,4°C 3000rpm离心12min,收集菌体；
(7)再将每支离心管中菌体悬浮于2ml预冷的lOOmmol/LCaCb溶液分装在1.5ml的离心管中；
(8 )取感受态细胞I ;;冰h解冻30iTiin、加入al pGEX-4T_l质粒载体；
(9)放入冰浴中30min，转入42°C水浴90sec，再冰浴2min培养液，37° C振荡培养
Ih;
(10)取己转化的感受态细胞均勾铺于含Amp的LB平板上，待平板中的液体吸收后，倒置平板，37° C恒温培养过夜。
[0006]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种质粒在大肠杆菌上进行转化的方法，其特征在于，步骤如下:(1)挑取平板上活化的大肠杆菌DH5a接种于3mlLB培养液中，37°C振荡培养过夜； (2)按1:150-200挑取过夜培养菌液接种于200ml LB培养液中，37° C振荡培养2~2.5h (0D600 约为 0.4)； (3)培养物放入冰浴中冷却IOmin； (4)把每支离心管中菌体重新悬浮于IOml预冷(4°C)的lOOmmol/LCaCh溶液中，’冰浴中20min, 4° C SOOOrpm离心12min,收集菌体； (5)把每支离心管中菌体悬浮于IOml预冷(4°C)的IOOmmoI/LCaCh溶液中； (6)分装在四支离心管中,4°C 3000rpm离心12min,收集菌体； (7)再将每支离心管中菌体悬浮于2ml预冷的lOOmmol/LCaCb溶液分装在1.5ml的离心管中； (8 )取感受态细 胞I ;;冰h解冻30iTiin、加入al pGEX-4T_l质粒载体；(9)放入冰浴中30min，转入42°C水浴90sec，再冰浴2min培养液，37° C振荡培养Ih; (10)取己转化的感受态细胞均勾铺于含Amp的LB平板上，待平板中的液体吸收后，倒置平板，37° C恒温培养过夜。
【文档编号】C12N1/21GK103614403SQ201310521935
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年10月30日 优先权日:2013年10月30日
【发明者】徐丽 申请人:徐丽