一种对含有artpA质粒进行构建的方法
【专利摘要】本发明公开了一种对含有artpA质粒进行构建的方法。步骤如下：首先需要在离心管中加入所述反应体系，然后用离心机高速旋转后混匀溶液；将离心管放置在漂浮物上，并悬空；在室温条件为35摄氏度的情况下，预热36摄氏度；至酶切反应完全状态；2-3小时后终止反应；取适量琼脂糖凝胶进行电泳测验，保持在电压80-100伏之间；将混合物在子等下进行观察即可；还需要加入适量缓冲液，所述缓冲液的PH为低于七；所述反应体系中，质粒的重量比例为百分之十到百分之十五。本发明的有益效果是，成本较低、重复性好，转化效率低，而且可以比较完全的对比目的片段。
【专利说明】—种对含有artpA质粒进行构建的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生化实验室方法，具体来说一种对含有artpA质粒进行构建的方法。
【背景技术】
[0002]质粒(Plasmid)是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子(即细胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分的质粒虽然都是环状构形，然而目前也发现有少数的质粒属于线性构形，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的线粒体等胞器中。天然质粒的DNA长度从数千碱基对至数十万碱基对都有。质粒天然存在于这些生物里面，有时候一个细胞里面可以同时有一种乃至于数种的质粒同时存在。质粒的套数(copy number)在细胞里从单一到数千都有可能。有时有些质粒含有某种抗药基因(如大肠杆菌中就有含有抗四环素基因的质粒)。有一些质粒携带的基因则可以赋予细胞额外的生理代谢能力，乃至于在一些细菌中提高它的致病力。一般来说，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。它是基因工程最常见的运载体。
【发明内容】
[0003]为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案:
一种对含有artpA质粒进行双酶切的方法，步骤如下:首先需要在离心管中加入所述反应体系，然后用离心机高速旋转后混匀溶液；将离心管放置在漂浮物上，并悬空；在室温条件为35摄氏度的情况下，预热36摄氏度；至酶切反应完全状态；2-3小时后终止反应；取适量琼脂糖凝胶进行电泳测验，保持在电压80-100伏之间；将混合物在子等下进行观察即可。
[0004]本发明中，还需要加入适量缓冲液，所述缓冲液的PH为低于七。
[0005]本发明中，所述反应体系中，质粒的重量比例为百分之十到百分之十五。
[0006]本发明的有益效果是，成本较低、重复性好，转化效率低，而且可以比较完全的对比目的片段。
【具体实施方式】
[0007]一种对含有artpA质粒进行双酶切的方法，其特征在于，步骤如下:首先需要在离心管中加入所述反应体系，然后用离心机高速旋转后混匀溶液；将离心管放置在漂浮物上，并悬空；在室温条件为35摄氏度的情况下，预热36摄氏度；至酶切反应完全状态；2-3小时后终止反应；取适量琼脂糖凝胶进行电泳测验，保持在电压80-100伏之间；将混合物在子等下进行观察即可。再需要加入适量缓冲液，所述缓冲液的PH为6.2 ;所述反应体系中，质粒的重量比例为百分之十二。
[0008]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种对含有artpA质粒进行构建的方法，其特征在于，步骤如下:首先需要在离心管中加入所述反应体系，然后用离心机高速旋转后混匀溶液；将离心管放置在漂浮物上，并悬空；在室温条件为35摄氏度的情况下，预热36摄氏度；至酶切反应完全状态；2-3小时后终止反应；取适量琼脂糖凝胶进行电泳测验，保持在电压80-100伏之间；将混合物在子等下进行观察即可。
2.如权利要求1所述的一种对含有artpA质粒进行构建的方法，其特征在于，还需要加入适量缓冲液，所述缓冲液的PH为低于七。
3.如权利要求1所述的一种对含有artpA质粒进行构建的方法，其特征在于，所述反应体系中，质粒的重量比例为百分之十到百分之十五。
【文档编号】C12N15/10GK103756995SQ201310535541
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2013年11月4日 优先权日:2013年11月4日
【发明者】刘军 申请人:刘军