一种对铜绿微囊藻具有溶解作用的巨大芽孢杆菌及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种对铜绿微囊藻具有溶解作用的巨大芽孢杆菌及其应用。本发明提供的菌株A0对铜绿微囊藻具有溶解作用，当投加量为7.5%时，其溶解作用在共培养第6天已非常明显，第6天的藻细胞数比对照组低66.7%，藻细胞叶绿素a含量比对照组低35.2%。
【专利说明】一种对铜绿微囊藻具有溶解作用的巨大芽孢杆菌及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一株由富营养化水体中筛得的具有溶藻作用的菌种，该菌株对造成水体富营养化的主要藻类-铜绿微囊藻(Microcystisaeruginosa)具有溶解作用。
[0002]本发明所称的一种对铜绿微囊藻具有溶解作用的巨大芽孢杆菌命名为:巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium) A。，已于2013年9月27日在中国典型培养物保藏中心保藏，地址为:中国武汉武汉大学，编号为CCTCC NO:M 2013452。
【背景技术】
[0003]近年来，随着工业化程度的提高、城市化进程的不断加快以及人口的不断增加，人类活动越来越频繁和深刻地影响着水环境。水体中氮、磷积累达到一定数量就会引起水体的富营养化，甚至引发有害藻类水华。由于排入海湾和湖泊中的氮、磷等营养物质不断增加，使水体富营养化进程加快。目前我国有66%以上的湖泊和水库处于不同程度的富营养化污染，不仅破坏了水域生态系统的平衡，且水华发生的水体中占主导地位的微囊藻(Microcystis)会产生大量藻毒素等代谢产物对公众健康、牲畜和水源供给带来负面影响。有害藻类水华有规律地爆发在富营养化水体中，并在我国及世界范围的爆发频率有逐年增加的趋势，探索行之有效的抑制藻类水华暴发的途径极为迫切。
[0004]在利用物理、化学和其它生物方法控制藻类水华不甚理想的情况下，利用溶藻细菌除藻成为目前生物控藻的研究热点。溶藻细菌是指通过直接或间接方式，抑制藻类生长或杀死藻类、溶解藻细胞的细菌的统称。溶藻细菌作为水生生态系统生物种群结构和功能的重要组成部分，对维持藻的生物量平衡具有非常重要的作用，因此，利用溶藻细菌控制藻类水华有着广阔的应用前景。
【发明内容】
[0005]为了解决以上问题，本发明提供一种对铜绿微囊藻具有溶解作用的巨大芽孢杆菌{Bacillus megaterium) A0,已于2013年9月27日在中国典型培养物保藏中心保藏，编号% CCTCC NO:M 2013452。以下简称菌株 A。。
[0006]本发明的另一目的是提供一种溶解铜绿微囊藻的方法。
[0007]本发明提供的巨大芽孢杆菌A0的筛选方法如下:
从某富营养化水体中采集水样，用梯度稀释法稀释成不同浓度，平板涂布，30°C培养48h，获得单菌落，取单菌落进行平板划线，30°C培养48h，获得5株纯培养的菌株，编号为A0 ~A4。
[0008]取各纯 菌株接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，3(TC，160r/min恒温振荡器中培养24小时，按10%(v/v)的接种量接种到预培养10天的铜绿微囊藻藻液中，设置空白对照，最终有2株菌能使藻液黄化，其中K菌使铜绿微囊藻黄化的速度更快，效果更好。
[0009]菌株Atl的鉴定结果如下:
A.菌株Atl的形态与特征:菌落呈圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，乳白色半透明。显微镜下观察菌体杆状，为革兰氏阳性菌，中生芽孢，无荚膜；
B.菌株Atl的生理生化特性
菌种代谢可产生色氨酸酶、过氧化氢酶；不分解或较少分解葡萄糖，不还原硝酸，牛奶石蕊胨化，液化明胶，水解淀粉。
[0010]C.菌株Atl的16S rDNA的测序及进化树的制作
菌株Atl基因组总DNA提取:按常规方法，经菌株培养，菌体收集，菌体裂解，DNA提取，沉淀，洗涤，抽(晾)干7个步骤，最终得到基因组总DNA，取IOyL用1%琼脂糖凝胶电泳检测。[0011 ] 菌株Atl基因组DNA的PCR扩增:以总DNA为模板，50 μ L反应体系见表1。
[0012]表1
【权利要求】
1.一种对铜绿微囊藻具有溶解作用的巨大芽孢杆菌，其特征在于:巨大芽孢杆菌(BaciIlus mega terium) Atl,于中国典型培养物保藏中心保藏，编号为CCTCC NO:M2013452。
2.权利要求1所述的对铜绿微囊藻具有溶解作用的巨大芽孢杆菌在溶解铜绿微囊藻中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于:于铜绿微囊藻藻液中，按体积百分比，投入5%-10%的权利要求1所述的保藏编号为CCTCC NO:M 2013452的巨大芽孢杆菌(Bacillusmega t eri uni) A0。
【文档编号】C12N1/20GK103667111SQ201310554926
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年11月7日 优先权日:2013年11月7日
【发明者】付保荣, 郭鑫, 杨玉东, 张润洁, 付豪, 苗斌 申请人:辽宁大学