一种宫颈异常细胞筛查试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种宫颈异常细胞筛查试剂盒，盒体1、盒盖2、固定座3、固定液试剂瓶4、染色液试剂瓶5、复染液试剂瓶6、A盒7、B盒8和酶标液基细胞保存液瓶13；其中A盒7内包装有A1瓶9、A2瓶10，B盒8内包装有B1瓶11、B2瓶12。本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、制造容易、检测过程不易受污染。
【专利说明】一种宫颈异常细胞筛查试剂盒
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及制药【技术领域】，具体涉及一种宫颈异常细胞筛查试剂盒。
【背景技术】
[0002]宫颈癌在女性恶性肿瘤占第二位，仅次于乳腺癌，全球大约每两分钟就有一位女性死于宫颈癌，全球每年估计有27万女性死于宫颈癌，每年新发病例有50万，其中大约有一半来自亚洲。
[0003]宫颈癌是早期发现可以成功治愈的癌症之一。有大量证据表明早期发现宫颈癌并进行治疗，女性完全可以获得康复。因此，疾病的早期发现至关重要，同时也是一项极具意义的公共政策。世界卫生组织和所有发达国家及一些发展中国家的政府部门都在极力推进和鼓励21-64岁的女性每年进行一次宫颈癌筛查，尤其对于性生活正常的女性，不管年龄大小，每年都需要进行此项检查。
[0004]目前宫颈癌筛查方法的原理是基于对细胞形态学异常改变的观察。遗憾的是，这项技术包括对这一技术的最新改进，步骤过于复杂、耗时长，都难以迎合进行大规模宫颈异常细胞的筛查的要求。为了满足这一需要，我们开发了这种宫颈异常细胞的快速筛查试剂盒。本实用新型通过增强在传统涂片上异常宫颈细胞的可视性，同时提高了传统涂片法的敏感性和特异性。
[0005]本实用新型的试剂盒包括盒体、盒盖、固定座、涂片、滤纸及多种试剂瓶。
实用新型内容
[0006]本实用新型的目的在于提供一种宫颈异常细胞筛查试剂盒，该试剂盒能够通过对酸性磷酸酶表达的检测来进一步分析筛查宫颈异常细胞，实现对宫颈异常细胞的高效准确的筛查。
[0007]本实用新型试剂盒具体包括:
[0008]一种用于筛查宫颈异常细胞的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒包括盒体1、盒盖
2、固定座3、固定液试剂瓶4、染色液试剂瓶5、复染液试剂瓶6、A盒7、B盒8和酶标液基细胞保存液瓶13 ;其中A盒7内包装有Al瓶9、A2瓶10，B盒8内包装有BI瓶11、B2瓶12。
[0009]进一步的，上述固定液试剂瓶4、染色液试剂瓶5、复染液试剂瓶6、A盒7、B盒8、Al瓶9、A2瓶10、BI瓶11、B2瓶12和酶标液基细胞保存液瓶13均使用塑料制作。
[0010]酸性磷酸酶是在男性前列腺高表达的一种酶，酸性磷酸酶检测已被当作一个生物标志物，来诊断前列腺癌及检测肿瘤有否向身体其他组织扩散，同时也被用来检测治疗效果。为了检测女性宫颈组织是否也有酸性磷酸酶表达，我们发现在宫颈异常细胞中酸性磷酸酶高表达，而在正常宫颈细胞中则没有表达。这项发现提示酸性磷酸酶是宫颈异常细胞筛查的一个非常实用的生物标志物。利用酸性磷酸酶这个生物标志物，开发出新的检测试剂盒用于宫颈异常细胞的筛查。这种新方法应用细胞染色技术，利用传统宫颈涂片来检测酸性磷酸酶的表达来甄别宫颈异常细胞，其原理是利用萘酚AS-BI盐或萘酚AS-MX盐作为酸性磷酸酶底物，利用快红紫、固酱紫或品红等重氮盐作为偶联物在异常细胞内形成红色沉淀。这种方法选择性标记宫颈异常细胞，而正常细胞则不会着色。因此，标记上红色的异常宫颈细胞与传统染色相比结果更鲜明突出，显著增加了异常细胞的可视性。
[0011]这种结果可读性的增强减少了传统涂片染色或新发展的液基细胞学检查中结果读取过程中的模糊性。我们的临床实验结果显示新的方法可以提高20%以上的灵敏度，降低假阴性率达60%以上。而且，新方法在可读性方面的提高适用于自动化，因而显著增加宫颈异常细胞筛查中的高敏感性和特异性的输出。新的检测方法更快捷、花费更小，同时采用了常规可靠的染色方法，这种检测方法在可以进行传统涂片检查的任何实验室都可以进行。新方法结果可读性的增加同时也显著减少了样本检测所需要的时间，传统涂片染色的操作可以由实验室技术员或医务人员进行，但结果则需要专业的病理学家来解读。
[0012]【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1.本实用新型试剂盒示意图【具体实施方式】
[0014]下面结合附图和实施例对本实用新型进行进一步说明。
[0015]一、试剂盒组成
[0016]如图1所示，本实用新型为一种宫颈异常细胞筛查试剂盒，包括盒体1、盒盖2、固定座3、固定液试剂瓶4、染色液试剂瓶5、复染液试剂瓶6、A盒7、B盒8和酶标液基细胞保存液瓶13;其中A盒7内包装有Al瓶9、A2瓶10，B盒8内包装有BI瓶11、B2瓶12。
[0017]所述固定液试剂瓶4、染色液试剂瓶5、复染液试剂瓶6、A盒7、B盒8和酶标液基细胞保存液瓶13、Al瓶9、A2瓶10、BI瓶11、B2瓶12可以使用塑料或玻璃制作。
[0018]各个试剂瓶中具体溶液为:
[0019](I)固定液试剂瓶4:10%福尔马林溶液
[0020](2)A1瓶9:12.5g / I萘酚AS-BI磷酸盐溶液，由萘酚AS-BI磷酸盐溶于二甲基甲酰胺配制而成
[0021](3)A2瓶10:4% (w / v)盐酸品红溶液，由盐酸品红溶于2N HCl配制而成
[0022](4) BI 瓶 11:0.5MNaN02
[0023](5)B2 瓶 12:2.5M 醋酸钠溶液，ρΗ5.2
[0024](6)复染液试剂瓶6:苏木素复染液
[0025](7)染色液试剂瓶5:染色液
[0026](8)酶标液基细胞保存液试剂瓶13:酶标液基细胞保存液，具体组成如下:
[0027]A: 15% 甲醇
[0028]B:0.2-0.5mM EDTA
[0029]C:0.1mM NaCl
[0030]D:0.1M 醋酸缓冲液，pH4-6
[0031]E:5% Proclin300
[0032]F:dd H2O。
[0033]二、染色步骤:
[0034]1.涂片在固定液中固定I分钟[0035]2.用水充分洗净
[0036]3.将试剂染色液试剂瓶、盐酸品红试剂瓶、亚硝酸钠试剂瓶、醋酸钠试剂瓶中试剂混匀后，用滤纸过滤到染色缸中
[0037]4.将涂片放入染色液中置于25_37°C染色20-30分钟
[0038]5.用水充分洗净
[0039]6.用苏木素复染液染色I分钟
[0040]7.封片或晾干，镜检
[0041]三、染色结果:
[0042]异常宫颈细胞胞质中有红色沉淀，核呈蓝色；正常细胞胞质无着色，核呈蓝色。
[0043]四、临床试验结果:
[0044]安徽医科大学第一附属医院和安徽省立医院的临床研究结果有力的证明了产品敏感性高、特异性强、假阴性率低的特点。我们在2010年I月至5月期间从安徽医科大学第一附属医院常规就诊的门诊病人和安徽省立医院常规就诊的门诊病人中共收集有效病例208例，同时采用PAP染色和TCT / LCT的方法进行制片染色。在30例确证为宫颈癌的病例中，FSC染色全部阳性，FSC试剂的诊断宫颈癌的敏感性100%，特异性高于93% (结果见表I)。
[0045]结果与巴氏染色相比，FSC染色较易寻找阳性细胞，阅片时间短，检测诊断结果的可重复性高。对不能明确意义的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)诊断率减少，低度鳞状上皮内病变(LSIL)阳性率明显升高，高度鳞状上皮内病变(HSIL)及鳞状细胞癌(SCC)阳性率持平。FSC与TCT检查对于宫颈病变中HSIL及SCC的筛查的稳定性相同，前者对LSIL诊断的阳性率高，而对ASCUS的诊断率较后者略低。FSC较TCT-巴氏诊断所用的时间短，诊断的可重复性高，体现了在疾病筛查中的优势。
[0046]敏感性及特异性计算方式:
[0047]灵敏度=TP / (TP+FN)如果大于1，记为100% ；
[0048]特异性=TN / (TN+FP)。TP:真阳性病人数；TN:(某检测方法测得)阴性病人数；FP:假阳性病人数
[0049]表1:临床试验数据
[0050]
【权利要求】
1.一种用于筛查宫颈异常细胞的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒包括盒体(I)、盒盖(2)、固定座(3)、固定液试剂瓶(4)、染色液试剂瓶(5)、复染液试剂瓶出)、A盒(7)、B盒(8)和酶标液基细胞保存液瓶(13);其中A盒(7)内包装有Al瓶(9)、A2瓶(10)，B盒(8)内包装有BI瓶(11)、B2瓶(12)。
2.权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:所述固定液试剂瓶(4)、染色液试剂瓶(5)、复染液试剂瓶(6)、A盒(7)、B盒(8) 'Al瓶(9)、A2瓶(10)、B1瓶(11)、B2瓶(12)和酶标液基细胞保存液瓶(13)均使用塑料制作。
【文档编号】C12Q1/04GK203613202SQ201320319816
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2013年6月5日 优先权日:2013年6月5日
【发明者】沈玉先, 王阳, 方圣文 申请人:合肥安旸生物医药有限公司