一种富集耳炎假单胞菌的培养基的制作方法
【专利摘要】本发明公开一种富集耳炎假单胞菌的培养基，包括基础培养基、葡萄糖、碳酸氢钠、蛋白胨、硝酸铵、酵母膏和维生素D；每1000mL基础培养基加入1.0～5.0g葡萄糖、0.1-0.5g碳酸氢钠、1.0～5.0g的蛋白胨、0.1-0.5g硝酸铵、0.05～0.1g的酵母膏和0.05～0.1g维生素D。用本发明的培养基培养富集耳炎假单胞菌，培养速度快，成本低。弥补了耳炎假单胞菌生长期过慢等方面的不足之处，提高了生长速率，使达到最大生长量的时间缩短了9～11个小时。
【专利说明】一种富集耳炎假单胞菌的培养基
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种富集细菌的培养基，具体涉及一种富集耳炎假单胞菌的培养基。
【背景技术】
[0002] 耳炎假单胞菌（Pseudomonas otitidis.)是在2006年鉴定出的新型假单胞菌属的 菌株，该菌株第一次是从感染的人耳临床样本中分离得到的，一种致病力较低但抗药性强 的杆菌。该菌株是一种条件致病菌，只在某种特定条件下才能致病。并且耳炎假单胞菌具有 潜在工业运用的标志性特征，该菌株可用于水体净化，具有好氧反硝化的功能，营养需求简 单，因此，应用前景十分广阔，耳炎假单胞菌可降解废水中的一些污染物质，因此又具有很 高的研究和应用价值。耳炎假单胞菌的推广和应用，关键在于需要合适的培养基质，由于耳 炎假单胞菌生长期过慢，目前采用的富集耳炎假单胞菌的培养基，其平均富集时间为28? 35d，周期均较长。
【发明内容】
[0003] 为了解决现有技术存在的缺陷和不足，本发明提供一种富集耳炎假单胞菌的培养 基，用本发明的培养基培养富集耳炎假单胞菌，培养速度快，成本低。弥补了耳炎假单胞菌 生长期过慢等方面的不足之处，提高了生长速率，使达到最大生长量的时间缩短了 9?11 个小时。
[0004] 本发明所采用的技术方案为：一种富集耳炎假单胞菌的培养基，包括基础培养基、 葡萄糖、碳酸氢钠、蛋白胨、硝酸铵、酵母膏和维生素 D，每1000mL基础培养基加入葡萄糖 1. 0?5. 0g、碳酸氢钠0. 1-0. 5g、蛋白胨1. 0?5. 0g、硝酸铵0. 1-0. 5g、酵母膏0. 05?0. lg 和维生素 DO. 05?0. lg。
[0005] 优选的，每l〇〇〇mL基础培养基加入葡萄糖3. 0g、碳酸氢钠0. 3g、蛋白胨3. 0g、硝酸 铵〇. 3g、酵母膏0. 07g和维生素 DO. 07g。
[0006] 基础培养基是假单胞菌的常用培养基。可以选用现有技术中经常用的，并已公开 的假单胞菌培养基。
[0007] 利用上述的培养基富集培养耳炎假单胞菌的方法：将上述富集耳炎假单胞菌的培 养基的pH调节至7. 0?7. 2,121 °C灭菌30min，将耳炎假单胞菌按1 %的接种量接种于富集 耳炎假单胞菌的培养基中，振荡混匀，在温度为30°C的恒温培养箱中培养。
[0008] 葡萄糖对耳炎假单胞菌的生长量的影响随着葡萄糖的浓度的增加而增大，经过 20h的避光培养后，当葡萄糖的用量为3. 0g/L时（每1000mL基础培养基加入3. 0g)，其菌 体繁殖速度很快，菌液〇D6(?达1. 50,当葡萄糖的用量小于3. 0g/L时，菌液0D_小于1. 50。 因此，葡萄糖的用量以3. 0g/L为宜。
[0009] 碳酸氢钠对耳炎假单胞菌的生长量的影响随着碳酸氢钠的浓度的增加而增大，经 过20h的避光培养后，当碳酸氢钠的用量为0. 3g/L时（每1000mL基础培养基加入0. 3g)， 其菌体繁殖速度很快，菌液〇D_达1. 50,当碳酸氢钠的用量小于0. 3g/L时，菌液0D_小于 1.50。因此，碳酸氢钠的用量以0. 3g/L为宜。
[0010] 蛋白胨对耳炎假单胞菌的生长量的影响，随着蛋白胨的浓度的增加而增加，经过 20h的避光培养后，当蛋白胨的用量为3.0g/L(每1000mL基础培养基加入3.0g)时，其菌 体繁殖速度很快，菌液〇D 6(?达1. 50,当蛋白胨的用量大于3. Og/L时，菌液0D_小于1. 50。 因此，蛋白胨以3.0g/L为宜。
[0011] 硝酸铵对耳炎假单胞菌的生长量的影响随着硝酸铵的浓度的增加而增大，经过 20h的避光培养后，当硝酸铵的用量为0. 3g/L时（每1000mL基础培养基加入0. 3g)，其菌 体繁殖速度很快，菌液〇D6(?达1. 50,当硝酸铵的用量小于0. 3g/L时，菌液0D_小于1. 50。 因此，硝酸铵的用量以0. 3g/L为宜。
[0012] 酵母膏对耳炎假单胞菌的生长量的影响，随着酵母膏的浓度的增加而增加，经过 20h的避光培养后，当酵母膏的用量为0. 07g/L (每1000mL基础培养基加入0. 07g)时，其菌 体繁殖速度很快，菌液〇D6(?达1. 50,当酵母膏的用量大于0. 07g/L时，菌液0D_小于1. 50。 因此，酵母膏以0.07g/L为宜。
[0013] 维生素 D对耳炎假单胞菌的生长量的影响，随着维生素 D的浓度的增加而增加，经 过20h的避光培养后，当维生素 D的用量为0. 07g/L (每1000mL基础培养基加入0. 07g)时， 其菌体繁殖速度很快，菌液〇D6(?达1. 50,当维生素D的用量大于0. 07g/L时，菌液0D_小 于1.50。因此，维生素 D以0. 07g/L为宜。
[0014] 本发明的有益效果是：
[0015] 利用本发明的培养基富集培养耳炎假单胞菌的方法富集培养速度快，由于在基础 培养基中加入了葡萄糖、碳酸氢钠、蛋白胨、硝酸铵、酵母膏和维生素 D等营养成分，为微生 物的生长不仅提供了碳源、氮源、能源，而且加入了作为生长因子的酵母膏和维生素 D，从而 为耳炎假单胞菌创造了一个更好的营养条件，使耳炎假单胞菌生长繁殖速度迅速提升，培 养20h后，其0D 6(?达到1. 50左右。
[0016] 耳炎假单胞菌生长期延长，最大生长量提高。随着培养时间的增加，菌液〇D_逐 渐增加，培养20h时，其0D_为1. 50,菌液生长量达最高峰，比使用基础培养基培养耳炎假 单胞菌时的〇D6(?有所提高，其生长量最大值提前了 9?11小时，对其繁殖更有促进作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0017] 图1是本发明与常规培养基，在培养基富集培养过程中，光密度〇D_的变化图。
[0018] 图中，a代表常规培养基，b代表本发明富集耳炎假单胞菌的培养基。
【具体实施方式】
[0019] 实施例1
[0020](一）一种富集耳炎假单胞菌培养基的配制
[0021] 基础培养基：磷酸氢二钾3. 8g、磷酸二氢钾1. 0g、氯化钠1. 0g、氯化铵0. lg、硫酸 镁〇. 2g，蒸馏水1000mL。
[0022] 在上述基础培养基中，加入3. 0g葡萄糖、0. 3g碳酸氢钠、3. 0g蛋白胨、0. 3g硝酸 铵、0. 07g酵母膏和0. 07g维生素 D。
[0023](二）耳炎假单胞菌的培养
[0024] 将上述培养基的pH调至7. 0,121 °C灭菌30min。将耳炎假单胞菌按1 %的接种量 接种于培养基中，振荡混勻，置于恒温培养箱中培养，温度30 °C。
[0025] 富集培养结果：恒温培养18h后，菌液0D_为1. 40,恒温培养20h后，达到最大生 长量，菌液〇D6(?为1. 50,使耳炎假单胞菌的最大生长量提前了 10h。
[0026] 实施例2
[0027](一）一种富集耳炎假单胞菌培养基的配制
[0028] 基础培养基：磷酸氢二钾3. 8g、磷酸二氢钾1. 0g、氯化钠1. 0g、氯化铵0. lg、硫酸 镁〇. 2g，蒸馏水1000mL。
[0029] 在上述基础培养基中，加入1. 0g葡萄糖、0. lg碳酸氢钠、1. 0g蛋白胨、0. lg硝酸 铵、0. 05g酵母膏和0. 05g维生素 D。
[0030] (二）耳炎假单胞菌的培养
[0031] 将上述培养基的pH调至7. 0,121 °C灭菌30min。将耳炎假单胞菌按1 %的接种量 接种于培养基中，振荡混勻，置于恒温培养箱中培养，温度30 °C。
[0032] 富集培养结果：光照培养18h后，菌液0D_为1. 30,避光培养21h后，达到最大生 长量，菌液〇D6(?为1. 50,使鲍曼不动杆菌的最大生长量提前了 9h。
[0033] 实施例3
[0034] (一）一种富集耳炎假单胞菌培养基的配制
[0035] 基础培养基：磷酸氢二钾3. 8g、磷酸二氢钾1. 0g、氯化钠1. 0g、氯化铵0. lg、硫酸 镁〇. 2g，蒸馏水1000mL。
[0036] 在上述基础培养基中，加入5. 0g葡萄糖、0. 5g碳酸氢钠、5. 0g蛋白胨、0. 5g硝酸 铵、〇. lg酵母膏和〇. lg维生素 D。
[0037](二）耳炎假单胞菌的培养
[0038] 将上述培养基的pH调至7. 0,121 °C灭菌30min。将耳炎假单胞菌按1 %的接种量 接种于培养基中，振荡混勻，置于恒温培养箱中培养，温度30 °C。
[0039] 富集培养结果：避光培养20h后，达到最大生长量，菌液0D_为1. 50,使耳炎假单 胞菌的最大生长量提前了 9h?llh。
[0040] 对比例
[0041] 分别取实施例1中富集耳炎假单胞菌的培养基与已公开的实施例1中的基础培养 基，分别调节培养基的pH为7,121°C灭菌30min。将耳炎假单胞菌按1 %的接种量分别接种 于两种培养基中，振荡混勻，置于恒温培养箱中培养，温度30°C。避光培养40h，测定培养基 富集培养过程中光密度〇D_变化如图1所示。从图1中a可知，使用常规的基础培养基培 养耳炎假单胞菌，30h左右时菌液0D 6(?为0.985 ;从图1中b可知，使用本发明培养基培养 耳炎假单胞菌，随着培养时间的增加，菌液〇D_逐渐增加，培养20h左右，其0D 6(?为1. 50， 本发明的培养基使耳炎假单胞菌达到最大生长量的时间提前了 9h?llh，并且对其繁殖和 快速培养更有促进作用。
【权利要求】
1. 一种富集耳炎假单胞菌的培养基，其特征在于，包括基础培养基、葡萄糖、碳酸氢钠、 蛋白胨、硝酸铵、酵母膏和维生素 D，每lOOOmL基础培养基加入葡萄糖1. 0?5. Og、碳酸氢 钠0.1-0.58、蛋白胨1.0?5.(^、硝酸铵0.1-0.58、酵母膏0.05?0.18和维生素00.05? 0. lg〇
2. 根据权利要求1所述的富集耳炎假单胞菌的培养基，其特征在于：每lOOOmL基础培 养基加入葡萄糖3. 0g、碳酸氢钠0. 3g、蛋白胨3. 0g、硝酸铵0. 3g、酵母膏0. 07g和维生素 DO. 07g〇
3. -种利用权利要求1或2所述的培养基富集培养耳炎假单胞菌的方法，其特征在 于：将权利要求1或2所述的富集耳炎假单胞菌的培养基的pH调至7. 0?7. 2,121°C灭菌 30min，将耳炎假单胞菌按1 %的接种量接种于富集耳炎假单胞菌的培养基中，振荡混匀，在 温度为30°C的恒温培养箱中培养。
【文档编号】C12N1/20GK104046582SQ201410245469
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年6月4日 优先权日:2014年6月4日
【发明者】徐成斌, 王闻烨, 东天, 马溪平, 孟雪莲, 李鲜珠 申请人:辽宁大学