用于防治果蔬采后病害的菌株及生防菌剂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物拮抗菌，具体为一种用于防治果蔬采后病害的菌株，于2014年3月7日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏登记号为CCTCC?M2014076。一种用于防止果蔬采后病害的生防菌剂，包括权利要求1所述菌株的菌悬液，所述菌悬液的浓度为1×108cfu/mL，所述每毫升菌悬液中添加25～100mM的Na2SiO3；或者，包括权利要求1所述菌株的菌悬液，所述菌悬液的浓度为1×108cfu/mL，所述每毫升菌悬液中添加25～100mM的NaHCO3。本发明所述的菌株能够很好地抑制果蔬采后灰霉病的发生，也就大大提高了果蔬采后病害的防治效果。
【专利说明】【技术领域】
[〇〇〇1] 本发明涉及生物拮抗菌，具体为一种用于防治果蔬采后病害的菌株及生防菌剂。 用于防治果蔬采后病害的菌株及生防菌剂 【背景技术】
[0002] 果蔬采后病害引起的腐烂造成的损失是非常巨大的。目前，控制果蔬采后病害最 有效的措施是低温贮藏结合化学杀菌剂。但长期使用化学杀菌剂，不仅容易使病原菌产生 抗药性，而且污染环境，对人体健康造成不利影响。因此，寻找低毒性、高效、环境友好和残 留量低的杀菌剂的替代品或部分替代品就日渐迫切。
[0003] 应用拮抗菌进行生物防治成为近年来的研究热点。目前，分离到的生防菌主要有 小型丝状真菌、细菌和酵母菌等。迄今为止，已从柑橘、苹果、桃、梨、猕猴桃、鲜枣等10多 种水果中筛选出几十种拮抗微生物。目前应用较多的生防细菌主要有芽孢杆菌（Bacillus subtilis)、假单胞杆菌（Pseudomonas spp·)、土壤放射菌（Agrobacterium radiobacter) 等。目前商品化应用的主要有丁香假单胞杆菌（Pseudomonas syringae)、枯草芽胞杆菌 (Bacillus subtilis)、酵母菌（Candidoleophil)中的季也蒙毕赤酵母菌（Pichiaguillier mondii)、哈茨木霉（Trichoderma harzianum)、白粉寄生菌等。
[0004] 使用拮抗酵母菌防治果蔬采后病害，可以减少化学农药的用量和在果蔬产品上的 残毒，对保护人体健康和防止环境污染都极为重要。Aspire?、BiosavellO和Biosavelll 是国外己经注册登记的微生物抗菌剂，主要用于控制柑橘类和仁果类果实的采后腐烂。这 展示了利用拮抗菌来安全有效地防治水果采后病害具有广阔的前景。
[0005] 洋葱伯克氏菌（Burkholderia cepacia)是20世纪50年代作为一种植物病原菌 被人们所认识，Burkholder在1950年首次报道该菌可以引起洋葱的鳞茎发生腐烂，称为 洋葱假单胞菌（Pseudomonas cepacia)。农业领域中，洋葱伯克氏菌具有生物防治、生物 降解以及促进植物生长等多种功能，也显示了其在农业方面的广泛的应用前景。近年来， 随着分子生物学技术的发展，随着细菌分类技术也相应得到发展，洋葱伯克氏菌已不仅仅 作为一个种，而是一组基因型不同、表型相近的复合物，称为洋葱伯克霍尔德氏菌复合群 (Burkholderia cepacia complex,简称Bcc)。Bcc可以有效防治多种植物的真菌性病害， 近年来国外以防治立枯病、镰刀病菌和腐霉病等土传病害的报道较多，但也有一些对梨青 霉病、苹果灰霉病和桃褐腐病等采后病害及植株茎叶病害的相关报道。范青等发现Bcc对 甜樱桃褐腐病表现出显著的抑制效果，谢关林等发现在离体条件下Bcc菌株可显著抑制水 稻纹枯病菌和恶苗病菌的生长。郑维等从堆肥中分离出了 Bcc菌株CF-66,并发现该菌株对 尖镰孢菌、立枯丝核菌和酵母菌表现出很强的抗菌活性。此外，Bcc还可以利用多种物质作 为唯一碳源，可以降解邻苯二甲酸盐、除草剂和氯代烃类化合物等土壤和地下水污染的有 毒物质，也是一种很有潜力的生物降解菌，是一种很有潜力的生防菌株。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种新的用于防治果蔬采后病害的菌株及生防菌剂。
[0007] -种用于防治果蔬采后病害的菌株，于2014年3月7日保藏在中国典型培养物保 藏中心，保藏中心保藏编号为CCTCC NO :M2014076,地址：中国.武汉.武汉大学。
[0008] -、本发明所述拮抗菌的筛选方法如下：
[0009] 1、实验材料与方法
[0010] 1. 1、实验材料
[0011] 灰葡萄孢霉（B. cinerea)从自然发病的番茄果实表面分离得到，经纯化后接种于 PDA培养基上，在26 °C下培养7d后，采用血球计数法用无菌水配成1 X 106孢子/mL的孢子 悬浮液。
[0012] 用于分离拮抗菌的果实蔬菜采自山西省代县、繁峙县及太原市小店区，或购于太 原市场，样品及采样地见表1。
[0013] 接种用的番茄购于太原市小店区。
[0014] 表1样品及米样地点
[0015]
【权利要求】
1. 一种用于防治果蔬采后病害的菌株，于2014年3月7日保藏在中国典型培养物保藏 中心，保藏登记号为CCTCC Μ 2014076。
2. -种用于防止果蔬采后病害的生防菌剂，其特征在于：包括权利要求1所述菌株 的菌悬液，所述菌悬液的浓度为lX10 8cfu/mL，所述每毫升菌悬液中添加25?100mM的 Na2Si03〇
3. -种用于防止果蔬采后病害的生防菌剂，其特征在于：包括权利要求1所述菌株 的菌悬液，所述菌悬液的浓度为lX10 8cfu/mL，所述每毫升菌悬液中添加25?100mM的 NaHC03〇
4. 一种用于防止果蔬采后病害的生防菌剂，其特征在于：包括权利要求1所述菌株的 发酵液，发酵条件：在LB液体培养基中，30°C，20r/min摇瓶培养48h。
5. -种权利要求1所述的用于防治果蔬采后病害的菌株的培养方法，其特征在于：配 制培养基的组成如下：麦芽浸粉8?15g/L，大豆蛋白胨8?15 g/L，MnS04 · 7H20 0. 5? 1. 5 g/L，ΚΗ2Ρ04 0. 5?1. 0 g/L，然后在所述培养基中进行接种培养。
6. 权利要求1所述的菌株在防止果蔬采后病害方面的应用。
【文档编号】C12R1/01GK104109645SQ201410251215
【公开日】2014年10月22日 申请日期:2014年6月6日 优先权日:2014年6月6日
【发明者】施俊凤, 孙常青, 王潇冉, 高伟 申请人:山西省农业科学院农产品贮藏保鲜研究所