一种细菌复合厌氧矿化2,4,6-三溴苯酚的方法

一种细菌复合厌氧矿化2,4,6-三溴苯酚的方法
【专利摘要】一种细菌复合厌氧矿化2,4,6-三溴苯酚的方法，本发明涉及厌氧矿化2,4,6-三溴苯酚的方法。本发明是要解决现有的生物降解2,4,6-三溴苯酚的方法矿化率低的技术问题。本发明的方法：一、制造厌氧条件；二、由厌氧发酵Ma13菌株和还原脱卤Dehaloabacter菌种在厌氧条件下对2,4,6-三溴苯酚进行还原脱溴；三、由硫酸还原DS菌株进行氧化分解，完成细菌复合厌氧矿化2,4,6-三溴苯酚。根据14C-苯酚示踪试验计算，2,4,6-三溴苯酚矿化到CO2的百分比为100％所需要的时间约28～35天。本方法适于处理深层地下水、厌氧反应器中的2,4,6-三溴苯污染物。
【专利说明】一种细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚的方法

【技术领域】
[0001] 本发明涉及厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚（2, 4, 6-TBP)的方法。 技术背景
[0002] 2, 4, 6-三溴苯酚（2, 4, 6-TBP)被广泛应用于杀虫剂、防腐剂以及新型阻燃剂溴化 环氧树脂的中间体等农业及电子行业。据统计在2001年，2, 4, 6-TBP在日本的产量高达每 年2, 500吨，全球的产量则高达每年9, 500吨。2, 4, 6-TBP是一种具有急性毒性的溴代酚类 化合物，具有脂溶性、难降解性等特点，可造成大气、水和土壤环境的大范围污染，并对人类 健康和生态环境造成了严重威胁。基于它的广泛应用、持久性和高毒性，2, 4, 6-TBP在1998 年被美国环保协会列为危险废物。
[0003] 目前，利用生物分解2, 4, 6-TBP的研究主要集中在还原脱溴，而还原脱溴的终产 物，苯酚，依然具有很高的毒性，需要进一步分解矿化。目前报道具有直接矿化2, 4, 6-TBP 能力的微生物很少。Takashi 等（Biosci Biotechnol Biochem, 72 (5)，2008)筛选出一株 苍白杆菌（Ochrobactrum sp.)TB01好氧菌株，这株菌在36小时内对TBP的脱溴率达到 100%，研究推断可继续对苯酚进行好氧分解，而其矿化率没有报道。Ronen等（Soil Biol Biochem, 37 (9)，2005)利用一株营养缺陷型皮氏无色杆菌（Achromobacterpiechaudii) TBPZ降解土壤中的TBP，发现营养源酵母浸出物对不同生长阶段的细胞生长和活性有显著 影响，矿化率未报道。申请号为201110025511. 5的中国专利公开了一种降解2, 4, 6-三 溴苯酚的芽孢杆菌GZT，该芽孢杆菌GZT对2, 4, 6-三溴苯酚的降解率为96. 2 %，脱溴率为 88. 4%，矿化率为29. 0%。然而以上几种方法对2, 4, 6-三溴苯酚的矿化率低。


【发明内容】

[0004] 本发明提供一种细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-TBP的方法，以解决现有的生物处理 方法难以直接矿化2, 4, 6-TBP及矿化率低的技术问题，而提供一种细菌复合厌氧矿化 2, 4, 6-三溴苯酚的方法。
[0005] 本发明的细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-TBP的方法按以下步骤进行：
[0006] -、制造厌氧条件：将厌氧培养基加入到玻璃容器中，吹入氮气驱除容器 内的氧气，然后将容器密封，进行灭菌处理，再向灭菌后容器内注入Na 2S溶液和 Titanium(III) -NTA溶液，把容器内的厌氧培养基还原至无氧状态，得到厌氧容器；
[0007] 二、由厌氧发酵菌（Clostridium sp. strain Mal3,简称 Mal3 菌株） (Yoshida et al, 130, Bioresour Technol, 478-485, 2013)和还原脱氯菌群（其中 Dehaloabacter菌种起还原脱齒作用，占菌群数量的51% ) (Yoshida et al,ApplEnviron Microbiol, 75 (8)，2400-2405)在厌氧条件下对2, 4, 6-三溴苯酚（2, 4, 6-TBP)进行还原脱 溴：将待处理的污染物2, 4, 6-TBP、蛋白胨、葡萄糖依次注入到步骤一得到的厌氧容器中， 再接入活性Mal3菌株和Dehaloabacter菌种，将厌氧容器放在温度为30?35°C的培养箱 中培养，从厌氧容器中取样，检测其中苯酚的浓度大于等于待处理2, 4, 6-TBP浓度的80% 时，还原脱溴过程完成；
[0008] 三、向厌氧容器内注入Na2S04溶液，并接入硫酸还原菌株（Desulfobacterium parachlorophenolicastrain DS,简称 DS 菌株）（Suzuki et al, Int J Syst Evol Micr.，in press, doi : 10. 1099/i js. 0. 064360-0)对苯酚进一步氧化分解，继续在30?35°C的培养箱 中培养8?15天，完成2, 4, 6-TBP的厌氧矿化。
[0009] 本发明采用细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-TBP，即采用单菌和高度富集的菌种来实 现卤代芳烃的厌氧矿化，矿化步骤分两步实现：一、厌氧发酵和还原脱溴：还原脱溴过程 由Mal3菌株和Dehaloabacter菌种同时复合实现，复合菌还原脱溴2, 4, 6-TBP的步骤为 2, 4, 6-TBP还原脱溴为2, 4-二溴苯酚，然后是4-溴酚，然后是苯酚；二、还原脱溴产物（苯 酚）的进一步分解由继而添加的DS菌株氧化分解实现，其中额外添加 Na2S04作为苯酚分解 的电子受体，DS菌株所需的无机碳源C02由Mal3菌株厌氧发酵过程提供。本发明在同一体 系中同时满足不同菌体的还原、氧化条件要求，各种菌的功能作用相互支持、协同，无其他 杂菌，没有电子供体/受体间不必要的氧化还原反应，也没有各种菌之间的营养竞争和无 益的生物化学反应，提高了分解处理效率，又降低了矿化成本。
[0010] 本发明的方法处理浓度约为20 μ Μ的2, 4, 6-TBP需要用28?35天的时间。根据 苯酚生成率计算，大约20天后2, 4, 6-ΤΒΡ的脱溴率达到100%。根据14C-苯酚示踪试验计 算，约28?35天后，2, 4, 6-TBP矿化到C02的百分比为99. 6 %。
[0011] 本发明的方法，适于处理深层地下水、厌氧反应器中的2, 4, 6-三溴苯污染物。

【专利附图】

【附图说明】
[0012] 图1为试验1中Mal3菌株、Dehaloabacter菌种和DS菌株对2, 4, 6-TBP的还原 脱溴和矿化过程中2, 4, 6-三溴苯酚及降解后产物的浓度变化曲线图。

【具体实施方式】

【具体实施方式】 [0013] 一：本实施方式的细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚的方法按以 下步骤进行：
[0014] -、制造厌氧条件：将厌氧培养基加入到容器中，吹入氮气驱除容器内的氧气，然 后将容器密封，进行灭菌处理，再向灭菌后容器内注入Na 2S溶液和Titanium (III)-NTA溶 液，把容器内的厌氧培养基还原至无氧状态，得到厌氧容器；
[0015] 二、由Mal3菌株和Dehaloabacter菌种在厌氧条件下对2, 4, 6_三溴苯酚进行还 原脱溴：将待处理的污染物2, 4, 6-TBP、蛋白胨、葡萄糖依次注入到步骤一得到的厌氧容器 中，再接入活性Mal3菌株和Dehaloabacter菌种，将厌氧容器放在温度为30?35°C的培养 箱中培养，从厌氧容器中取样，检测当其中的苯酚浓度大于等于2, 4, 6-TBP的初始浓度的 80%时，还原脱溴过程完成；
[0016] 三、由DS菌株进行氧化分解：向厌氧容器内注入Na2S04溶液，接入硫酸盐还原菌株 (Desulfobacterium sp.，简称DS)，继续在30?35°C的培养箱中培养8?15天，完成细菌 复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚。
[0017]

【具体实施方式】二：本实施方式与【具体实施方式】一不同的是步骤一中的厌氧培养基 每 lOOOmL 由 lg NH4C1、0. 05g CaCl22H20、0. lg MgCl26H20、0. 4g KH2P04、200mmol3-(N-吗啉） 丙磺酸、lg刃天青盐、lmL维他命储备液、lmL SLelO微量元素溶液和余量的水组成，pH值为 7. 0?7. 2 ;其它与【具体实施方式】一相同。

【具体实施方式】 [0018] 三：本实施方式与二不同的是维他命储备液每 1000mL由20mg蛋白生物素、20mg叶酸、100mg维生素 B6、50mg硫胺素、50mg维生素 B2、50mg 泛酸盐、50mg维生素 B12、50mg对氨基苯甲酸、50mg硫辛酸、50mg烟酰胺、50mg类脂酸、50mg 氯高铁血红素、50mgl，2-萘醌、50mg维他命K2和余量的水组成；其它与二相 同。

【具体实施方式】 [0019] 四：本实施方式与一至三之一不同的是所述的SLelO 微量元素溶液每l〇〇〇mL由10mL质量百分浓度为25%的HC1、1. 5gFeCl3 ·4Η20、0· 07gZnCl2、 0· lg MnCl4 ·4Η20、0· 19g CoCl2 ·6Η20、2ι? CUC12 ·2Η20 g、0. 02g NiCl2 ·2Η20、0· 04g Na2Mo04 ·Η20 和余量的水组成；其它与一至三之一相同。

【具体实施方式】 [0020] 五：本实施方式与一至四之一不同的是步骤一中，吹 氮气的时间为15?20min。其它与一至四之一相同。
[0021 ] 吹氮气的目的是驱除容器内的氧气。

【具体实施方式】 [0022] 六：本实施方式与一至四之一不同的是步骤一中，容 器密封用聚四氟乙烯塞和铝箔盖密封。其它与一至四之一相同。
[0023] 采用这种方式密封后，可用注射的方式将其他材料加入到容器中，而不影响容器 的厌氧状态。

【具体实施方式】 [0024] 七：本实施方式与一至六之一不同的是步骤一中，灭 菌处理是在温度为121°C、压力为0. 2MPa的灭菌锅灭菌处理15?30min。其它与具体实施 方式一至六之一相同。

【具体实施方式】 [0025] 八：本实施方式与一至七之一不同的是步骤二中，蛋 白胨的添加量为〇. 01?lmg/L。其它与一至七之一相同。

【具体实施方式】 [0026] 九：本实施方式与一至八之一不同的是步骤二中，葡 萄糖的浓度控制在〇. 5?2. 5mmol/L之间。其它与一至八之一相同。
[0027] 本实施方式中，葡萄糖既作为Mal3菌株的发酵产氢底物又作为Dehaloabacter菌 种的有机碳源来源，葡萄糖的浓度可确保Mal3菌株和Dehaloabacter菌种的生长状况良 好，当添加的葡萄糖浓度大于5mM时，还原脱溴反应不会发生。

【具体实施方式】 [0028] 十：本实施方式与一至九之一不同的是步骤二中，接 入活性Mal3菌后，Mal3菌的16s rRNA基因拷贝浓度为102?105copies/mL ;其它与具体实 施方式一至九之一相同。

【具体实施方式】 [0029] i^一 ：本实施方式与一至十之一不同的是步骤二 中，接入Dehaloabacter菌种后，Dehaloabacter菌种的16s rRNA基因拷贝浓度大于 8X 103copies/mL。其它与一至十之一相同。
[0030] 本实施方式中，Dehaloabacter菌种的16s rRNA基因拷贝初始浓度大于 8 X 103copies/mL，可确保Mal3菌株和Dehaloabacter菌种的生长状况良好,且2, 4, 6-TBP 在20天之内被分解为苯酚；当转接的Dehaloabacter菌种初始16s rRNA基因拷贝浓度小 于102copies/mL时，Dehaloabacter菌种的生长受到严重抑制，且还原脱溴反应不会发生。
[0031]

【具体实施方式】十二：本实施方式与【具体实施方式】一至i^一之一不同的是步骤二中 Dehaloabacter菌种中包含两种种系类型，FTH1和FTH2, FTH1种系类型占菌体量的41%， FTH2菌占菌体量的7%。其它与【具体实施方式】一至i^一之一相同。

【具体实施方式】 [0032] 十三：本实施方式与一至十二之一不同的是步骤三中 Na2S04的浓度为1. 0?2. 5mmol/L。其它与一至十二之一相同。

【具体实施方式】 [0033] 十四：本实施方式与一至十三之一不同的是步骤三中 接种的活性DS菌株的初始16s rRNA基因拷贝浓度要大于104c〇pieS ml/1。其它与具体实 施方式一至十三之一相同。
[0034] 用以下试验验证本发明的有益效果：
[0035] 试验1 :本试验的细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴酚的方法按以下步骤进行：
[0036] -、制造厌氧条件：将25mL厌氧培养基加入到60mL血清瓶内，吹入氮气15分钟， 驱除容器内的氧气，然后将血清瓶用聚四氟乙烯塞和铝箔盖密封，放在温度为121°C、压力 为0. 2MPa的灭菌锅灭菌处理30min，再向灭菌后血清瓶内注入15mM的Na2S溶液和2. 5mM的 Titanium(III) -NTA溶液，当培养基颜色由粉色变为无色后，说明培养基的含氧条件由微氧 变为无氧状态，得到厌氧状态的血清瓶；
[0037] 其中厌氧培养基每 1000mL 由 lg NH4C1、0. 05g CaCl22H20、0. lg MgCl26H20、 0. 4gKH2P04、200mmol/L3-(N-吗啉）丙磺酸、lg刃天青盐、lmL维他命储备液、lmL SLelO微量 元素溶液和余量的水组成，用NaOH或HC1调整pH为7. 0-7. 2 ;维他命储备液每1000mL由 20mg蛋白生物素、20mg叶酸、100mg维生素 B6、50mg硫胺素、50mg维生素 B2、50mg泛酸盐、 50mg维生素 B12、50mg对氨基苯甲酸、50mg硫辛酸、50mg烟酰胺、50mg类脂酸、50mg氯高铁 血红素、50mgl，2-萘醌、50mg维他命K2和余量的水组成；SLelO微量元素溶液每1000mL由 10mL 质量百分浓度为 25% 的 HC1、1. 5g FeCl3 · 4Η20、0· 07gZnCl2、0. lg MnCl4 · 4Η20、0· 19g CoCl2 · 6H20、2m CUC12 · 2H20 g、0. 02g NiCl2 · 2Η20、0· 04g Na2Mo04 · H20 和余量的水组成；
[0038] 二、厌氧发酵菌（Clostridium sp. strain Mal3,简称 Mal3 菌株） (Yoshida et al, 130, Bioresour Technol, 478-485, 2013)和还原脱齒氯群（其中 Dehaloabacter菌种起还原脱齒作用，占菌群数量的51% ) (Yoshida et al,ApplEnviron 皿1(^〇1^〇1，75(8)，2400-2405)在厌氧条件下对2,4,6-三溴苯酚（2,4,6-了8?)进行还原 脱溴：将待处理的污染物2, 4, 6-TBP、蛋白胨、葡萄糖依次注入到步骤一得到的血清瓶中， 其中2,4,6-TBP的初始浓度为20μπι〇1/1，蛋白胨的浓度为0.01mg/L，葡萄糖的浓度为 2. 0mmol/L,再接入活性Mal3菌和Dehaloabacter菌，其中Mal3菌的16s rRNA基因拷贝 浓度为 104copies/mL，Dehaloabacter 菌的 16s rRNA 基因拷贝浓度为 2X104copies/mL， Dehaloabacter菌中包含2种种系类型，FTH1和FTH2,其中FTH1占41%，FTH2占7%。将血 清瓶放在温度为30°C的培养箱中培养20天，第一天开始每隔5天从血清瓶中取样，检测其 中的物质种类及浓度，当第20天时，苯酚的浓度达到20 μ mol/L，此浓度已经与2, 4, 6-TBP 的初始浓度相等，完成了还原脱溴和氧化分解；
[0039] 三、由DS菌株进行氧化分解：第20天，向血清瓶内注入Na2S04溶液，使Na 2S04的 浓度为 2. 0mmol/L,接入硫酸还原菌株（Desulfobacterium parachlorophenolicastrain DS，简称 DS 菌株）（Suzuki et al, Int J Syst Evol Micr.，in press, doi :10. 1099/ ijs. 0. 064360-0)，硫酸还原菌株的16s rRNA基因拷贝浓度为105copies ml/1，继续在30°C 的培养箱中培养，每隔2天从血清瓶中取样，检测其中的物质种类及浓度，在第28天时，检 测到容器内苯酚的浓度降为0. 04 μ mol/L，完成细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚。
[0040] 从将污染物2, 4, 6-TBP、Mal3菌和Dehaloabacter菌加入到血清瓶中起，不断取 样，检测血清瓶的物质，以此监测2, 4, 6-三溴苯酚的还原脱溴和矿化过程，得到的血清瓶 中的物质种类及浓度随着时间变化的情况如图1所示，其中a为2, 4, 6-三溴苯酚的浓度变 化情况，b为2,4-二溴苯酚的浓度变化情况，c为4-溴苯的浓度变化情况，d为苯酚的浓度 变化情况。从图1可以看出，处理浓度为20 μ Μ的2, 4, 6-TBP需要用28天的时间。2, 4, 6-TBP 首先被还原为2, 4-二溴酚，然后再到4-溴酚，经过20天之后，2, 4, 6-ΤΒΡ被完全脱溴为苯 酚，脱溴率为100%。接入DS菌株和NaS04之后，苯酚开始分解。大约28天后，苯酚浓度降 低为零。根据 14C-苯酚示踪试验计算，28天后2, 4, 6-TBP矿化到C02的百分比为94. 1 %。
[0041] 试验2 :本试验与试验1不同的是步骤二中，接入活性Mal3和Dehaloabacter菌 后，Mal3 菌的 16s rRNA 基因拷贝浓度为 103copies/mL，Dehaloabacter 菌的 16s rRNA 基因 拷贝大于9 X 103copies/mL，Dehaloabacter菌中包含2种种系类型，FTH1和FTH2,其中FTH1 占 41%，FTH2占7% ;其它与试验1相同。
[0042] 本试验处理浓度为20 μ Μ的2, 4, 6-TBP需要用34天的时间。2, 4, 6-TBP首先被还 原为2, 4-二溴酚，然后再到4-溴酚，经过23天之后，2, 4, 6-ΤΒΡ被完全脱溴为苯酚，脱溴 率为100%。接入DS菌株和NaS04之后，苯酚开始分解。大约34天后，苯酚浓度降低为零。 根据 14C_苯酚示踪试验计算，34天后2, 4, 6-TBP矿化到C02的百分比为96. 5%。
[0043] 试验3、本试验与试验1不同的是步骤三中，第20天，向血清瓶内注入Na2S0 4溶液， 使Na2S04的浓度为2. 4mmol/L，接入硫酸还原菌株（Desulfobacterium sp.，简称DS)，硫酸 还原菌株的16s rRNA基因拷贝浓度为6X105copies ml/1。其它与试验1相同。
[0044] 三、由DS菌株进行氧化分解：，向血清瓶内注入Na2S04溶液，使Na 2S04的浓度 为2. 0mmol/L，接入硫酸还原菌株（Desulfobacterium sp.，简称DS)，硫酸还原菌株的16s rRNA基因拷贝浓度为105copies mL_1，继续在30°C的培养箱中培养，每隔2天从血清瓶中取 样，检测其中的物质种类及浓度，在第28天时，检测到容器内苯酚的浓度降为0. 04 μ mol/ L，完成细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚。
[0045] 本试验中，接入DS菌株和NaS04之后，苯酚开始分解。大约32天后，苯酚浓度降 低为零。根据 14C-苯酚示踪试验计算，32天后2, 4, 6-TBP矿化到C02的百分比为93. 7%。
【权利要求】
1. 一种细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征在于该方法按以下步骤进 行： 一、 制造厌氧条件：将厌氧培养基加入到容器中，吹入氮气驱除容器内的氧气，然后将 容器密封，进行灭菌处理，再向灭菌后容器内注入Na 2S溶液和Titanium(III)-NTA溶液，把 容器内的厌氧培养基还原至无氧状态，得到厌氧容器； 二、 由厌氧发酵菌株和还原脱氯菌群中Dehaloabacter菌在厌氧条件下对2, 4, 6-三 溴苯酚进行还原脱溴：将待处理的污染物2, 4, 6-TBP、蛋白胨、葡萄糖依次注入到步骤一 得到的厌氧容器中，再接入活性厌氧发酵菌株和Dehaloabacter菌，将厌氧容器放在温 度为30?35°C的培养箱中培养，取样检测，当其中的苯酚的物质的量大于等于污染物 2, 4, 6-TBP的物质的量的80%时，还原脱溴过程完成； 三、 由硫酸还原菌进行氧化分解：向厌氧容器内注入Na2S04溶液，接入硫酸还原菌株， 继续在30?35°C的培养箱中培养8?15天，完成细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚。
2. 根据权利要求1所述的一种细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征在于 步骤一中的厌氧培养基每 l〇〇〇mL 由 lg NH4C1、0. 05g CaCl22H20、0. lg MgCl26H20、0. 4gKH2P04、 200mmol3-(N-吗啉）丙磺酸、lg刃天青盐、lmL维他命储备液、lmL SLelO微量元素溶液和余 量的水组成，pH值为7. 0?7. 2。
3. 根据权利要求1或2所述的一种细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特 征在于维他命储备液每l〇〇〇mL由20mg蛋白生物素、20mg叶酸、100mg维生素 B6、50mg硫胺 素、50mg维生素 B2、50mg泛酸盐、50mg维生素 B12、50mg对氨基苯甲酸、50mg硫辛酸、50mg 烟酰胺、50mg类脂酸、50mg氯高铁血红素、50mgl，2-萘醌、50mg维他命K2和余量的水组成。
4. 根据权利要求1或2所述的一种细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其 特征在于所述的SLelO微量元素溶液每1000mL由10mL质量百分浓度为25%的HC1、 1. 5gFeCl3 · 4Η20、0· 07g ZnCl2、0. lg MnCl4 · 4Η20、0· 19g CoCl2 · 6H20、2m CUC12 · 2H20 g、0. 02g NiCl2 · 2H20、0. 04g Na2Mo04 · H20 和余量的水组成。
5. 根据权利要求1或2所述的一种细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征 在于步骤一中，灭菌处理是在温度为121°C、压力为0. 2MPa的灭菌锅灭菌处理15?30min。
6. 根据权利要求1或2所述的一种细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征 在于步骤二中，蛋白胨的添加量为0. 01?lmg/L。
7. 根据权利要求1或2所述的一种细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征 在于步骤二中，葡萄糖的浓度控制在0. 5?2. 5mmol/L之间。
8. 根据权利要求1或2所述的一种细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征 在于步骤二中，接入活性厌氧发酵菌株后，厌氧发酵菌的初始16S rRNA基因拷贝数为102? 105copies/mL〇
9. 根据权利要求1或2所述的一种细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征 在于步骤二中，接入Dehaloabacter菌的初始16S rRNA基因拷贝数大于8 X 103copies/mL。
10. 根据权利要求1或2所述的一种细菌复合厌氧矿化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特 征在于步骤三中接种的活性硫酸还原菌的初始16S rRNA基因拷贝数大于104copies ml/1。
【文档编号】C12P39/00GK104059960SQ201410317146
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年7月4日 优先权日:2014年7月4日
【发明者】李智灵, 王爱杰, 孙凯, 南军, 程浩毅, 梁斌, 林小秋 申请人:哈尔滨工业大学