一种以核桃粕为原料制备降压肽的方法
【专利摘要】本发明涉及一种降压肽的制备方法，具体为一种核桃降压肽的制备方法。是通过以下制备方法得到的：以核桃粕为原料，经过醇洗后调溶液的pH10-11，离心，取上清液调pH4-5，离心，收集沉淀水洗至中性。用缓冲溶液将其配制成质量浓度为10%-20%的核桃蛋白溶液，搅拌均匀，调节pH8.0-9.0，然后加碱性蛋白酶在35-65℃中水解1-4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液于 90-95℃灭酶10min。然后调节酶解液pH5.5-7.5，再加风味蛋白酶，在35-65℃中水解1-4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液于90-95℃灭酶10min，然后离心，取上清液，调节pH为中性，酶解液通过超滤再经过大孔树脂处理后得ACE抑制率达73.91%，最后经冷冻干燥得到核桃降压肽。属于核桃粕的综合开发利用，实现了废物利用的目的。
【专利说明】一种以核桃粕为原料制备降压肽的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种降压肽的制备方法，具体为一种核桃降压肽的制备方法。特指以核桃柏为原料，利用分步酶解技术提取降压肽方法，属于核桃柏的综合开发利用。
【背景技术】
[0002]高血压是一种常见的心脑血管疾病，会引起心血管、大脑、肾脏的病变。降压肽是一种ACE抑制剂，通常用于高血压患者的治疗。目前，对高血压患者的治疗通常使用化学合成的药物，然而，这些合成药物有一些副作用，包括咳嗽和皮瘆。
[0003]食源性降压肽来源于天然植物，无副作用，易被人体吸收，且食物蛋白来源丰富，方便易得，用食物蛋白来生产活性肽，成本较低、安全性高、适合大规模生产。来源于食品的降压肽只对高血压患者起到降压的作用，对血压正常者无降压作用，不会产生降压过度的问题。这些肽是用食用级的酶在温和条件下制得的，其安全性极高，无毒副作用。除了有降压的功能外，食品降压肽还同时具有抗氧化、促消化、降血糖、抗血小板凝集、增强人体免疫力等作用，此外，还具有较高的热稳定性、水溶性等优点，可作为功能因子添加到饮料、食品中去，市场前景极好。
[0004]目前，关于核桃柏为原料制备的降压肽尚未见报道。我国核桃的种植和产量居世界首位。核桃柏是核桃经过提取油后的副产物，含有29.65%蛋白质，提油后的核桃柏多数被用作饲料或丢弃，资源造成了一定的浪费，核桃降压肽的制备可以促进核桃的深加工，实现资源的综合利用。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种原料来源广泛、制造成本低、高附加值、降血压性高的核桃降压肽的制备方法。
[0006]为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施:
一种以核桃柏为原料制备降压肽的方法，其步骤如下:
1、以核柏为原料，按照5?10%(W/V)比例加入95%乙醇，搅拌，过滤，把滤饼烘干挥除溶剂。滤饼按照1:10-1:30 (W/V)的料液比加水配制蛋白质溶液，用氢氧化钠溶液调节蛋白液的 pH 值到 10.0-11.0，保温 500C -53。。，搅拌 1.0-1.5h 后于 5000-7000r/min 离心10_15min，取上清液，调节 pH 至 4.0-5.0，揽拌 1-1.5h，于 5000-7000r/min 离心 10_15min，收集沉淀并水洗，调节pH至中性后冻干；
2、用缓冲溶液配制成底物质量浓度为10-20g/L的核桃蛋白溶液，搅拌均匀，调节PH8.0-9.0，然后加碱性蛋白酶4000-10000U/g，控制溶液温度为35_65°C水解l_4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液采用90-95°C加热煮沸lOmin，然后调节pH5.5-7.5，然后加风味蛋白酶4000-10000U/g，控制溶液温度35-65°C水解l_4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液采用90?95°C煮沸灭酶lOmin，然后于5000-8000r/min离心10_15min，取上清液，调节pH为中性； 3、将上述滤液先用孔径为0.45um的微孔滤膜进行过滤，然后用l_3KDa超滤膜对过滤好的酶解液进行超滤，将滤液用DA201-C大孔树脂脱盐后浓缩，最后干燥。
[0007]本发明所使用的碱性蛋白酶和风味蛋白酶的活力分别为:7.1XlO4 U/g,
2.0XlO4 U/g ο
[0008]与现有技术相比，本发明方法的优点和有益效益如下:
1、原料为一种食品工业副产物核桃柏，酶解后其应用价值和加工性能大大增加，可以提高核桃的附加值；
2、实施设备简便且经济，适合规模化工业生产；
3、采用本发明的膜分离技术，对液态物料进行分离、浓缩和纯化，均在常温下操作、无相态变化、高效节能，并且生产过程中不产生污染；
4、本发明生产周期短、成本低、不产生任何有毒有害物质，安全，无毒副作用，可广泛用于化妆品、食品、药品等领域。
【具体实施方式】
[0009]以下结合实施例对本发明的具体实施作进一步说明，但本发明的实施和保护范围不限于此:
实施例1
称取2g的核桃蛋白，用硼酸-硼砂缓冲溶液调节其pH为8.5，定容到100ml，搅拌均匀，按加酶量3600U/g添加碱性蛋白酶，在55°C水浴锅中水解2h，并保持pH恒定，酶解液于水浴锅中90°C 1min处理，然后调节pH为6.5按加酶量2400U/g添加风味蛋白酶，保持溶液50°C水解3h，并保持pH恒定，酶解液于90°C加热lOmin，酶解液的ACE抑制率为64.06%。
[0010]实施例2
称取1g的核桃蛋白，用硼酸-硼砂缓冲溶液调节其pH为8.5，定容到500ml，搅拌均匀，按加酶量5000U/g添加碱性蛋白酶，保持溶液温度为55°C下水解3h，并保持pH恒定，酶解液在90°C煮沸15min，然后调节pH为6.5，加酶量3000U/g添加风味蛋白酶，保持溶液温度为50°C水解3.5h，并保持pH恒定，酶解液于90°C加热lOmin，酶解液的ACE抑制率为69.91%o
[0011]实施例3
称取4g的核桃蛋白，用硼酸-硼砂缓冲溶液调节其pH为8.5，定容到100ml，搅拌均匀，按加酶量2000U/g添加一种蛋白酶，保持溶液温度为55°C水解2h，并保持pH恒定，酶解液在沸水加热1min灭酶，然后调节pH为6.5，按加酶量4500U/g添加另一种蛋白酶，保持溶液温度为50°C水解3h，并保持pH恒定，酶解液于90°C加热lOmin，酶解液的ACE抑制率为71.72%。
[0012] 申请人:声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细特征以及方法，但本发明并不局限于上述详细特征以及方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细特征以及方法才能实施。所属【技术领域】的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用材料和步骤的等效替换以及辅助材料和步骤的增加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
【权利要求】
1.一种以核桃柏为原料制备降压肽的方法，其特征在于包括如下步骤: (1)核桃柏经粉碎后过60目筛，加入一定量的正己烷搅拌均匀后抽滤，取滤渣重复用正己烷提取至滤液无色透明时收集滤渣，然后挥除溶剂； (2)滤饼加入一定量的95%乙醇溶液搅拌均匀后过滤，将滤饼中的溶剂挥干；取一定量的滤饼加水搅拌均匀，调节蛋白液的pH值到10-11.0，于50-53°C搅拌1.0-1.5h后于室温下5000-7000r/min离心15min，取上清液，调节溶液pH至4.0-5.0，搅拌1-1.5h，于室温下5000-7000r/min离心15min，收集沉淀并水洗至中性，然后冻干； (3)将上述冻干粉用缓冲溶液配制成质量浓度为10-20g/L的核桃蛋白溶液，搅拌均匀，调节pH8.0-9.0，然后加碱性蛋白酶4000-10000U/g，保持35_65°C水解l_4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液采用90-95°C煮沸灭酶lOmin，然后调节pH5.5-7.5，再加风味蛋白酶4000-10000U/g，保持35-65°C水解l_4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液采用90_95°C煮沸灭酶lOmin，然后5000-8000r/min离心10_15min，取上清液，调节pH为中性； (4)将上述酶解液用孔径为0.45um的微孔滤膜进行过滤，将滤液在经过DA201-C大孔树脂脱盐，然后经冻干得到核桃降压肽。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述的碱性蛋白酶和风味蛋白酶的活力分别为:7.1XlO4 U/g,2.0XlO4 U/go
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(I)中，溶剂正己烷与核桃柏按l:5-l:10(ff/V)的料液比加入。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中，95%乙醇按照滤饼质量的5-10% (W/V)加入。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中，滤饼与水按照1:10-1:30(W/V)的料液比加入。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(4)中，微孔滤膜的孔径为1-3KD。
【文档编号】A23J3/34GK104489239SQ201510004326
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2015年1月6日 优先权日:2015年1月6日
【发明者】毛晓英, 吴庆智, 卢娣 申请人:石河子大学