适用于刺参的免提dna的pcr快速扩增方法

文档序号:505366阅读:299来源:国知局
适用于刺参的免提dna的pcr快速扩增方法
【专利摘要】本发明是一种刺参免提DNA的 PCR快速扩增方法,其步骤是:将刺参处死后用微量注射器肌肉内抽取体液0.02-1μL入200μL PCR管中,置于冰浴备用;当不能立即PCR时将其置-20℃下保存,1周内有效;一步法PCR:以上述PCR管的体液为模板,进行25μL体系下的PCR扩增:反应条件为普通PCR条件,扩增程序为:94 ℃预变性4 min;94 ℃变性40 s,50-60 ℃退火40 s,72 ℃延伸40 s,共35个循环;72 ℃延伸6 min,4 ℃保存;再按照常规的琼脂糖凝胶电泳检测。本发明方法设计简便合理,可操作性强,无需经过DNA抽提过程,即可获得理想的扩增效果。
【专利说明】适用于刺参的免提DNA的PCR快速扩增方法

【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种PCR快速扩增方法,特别是一种适用于刺参的免提DNA的PCR快 速扩增方法。

【背景技术】
[0002] 刺参属低等海洋生物。常规的PCR技术是建立在成功提取刺参的高质量DNA为 前提的。目前,常用的方法就是剪取刺参肉刺,用新鲜样品进行DNA提取,之后在获得DNA 后再进行下一步的分子研究,如最常用的PCR。这一过程往往所要时间较长,从提取DNA到 完成PCR至少要半天时间,且DNA提取的过程所使用的常规药品如苯酚、氯仿、SDS对人体 和环境具有潜在的危害。因此,开发一种不需提取DNA的PCR技术,将具有很大的技术优势 和应用前景。


【发明内容】

[0003] 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足,提供一种新的、方法简单合 理、操作方便的适用于刺参的免提DNA的PCR快速扩增方法。
[0004] 本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种适用 于刺参的免提DNA的PCR快速扩增方法,其特点是,其步骤如下 : (1) 取体液:将刺参处死后用微量注射器肌肉内抽取体液〇.〇2-WL入20〇μ? PCR管中, 置于冰浴备用;当不能立即PCR时将其置-20°C下保存,1周内有效; (2) -步法PCR :以上述PCR管的体液为模板,进行25μ?体系下的PCR扩增: 25μ?体系: 体液 0.02-?μ? 2 X Taq PCR MasterMix 12. 5? 引物2μ?,上下游混合引物,浓度均为2. 5Mffl〇l/L ; CldH2O 补足至 25μ? 反应条件:普通PCR条件,扩增程序为:94 °C预变性4 min;94 °C变性40 s,50-60 °C 退火40 s,72 °C延伸40 s,共35个循环;72 °C延伸6 min, 4 °C保存; (3) PCR产物检测:按照常规的琼脂糖凝胶电泳检测。
[0005] 本发明所述的刺参免提DNA的PCR快速扩增方法,进一步地,在步骤(1)中,用于 取体液的刺参的个体重量优选在2g以上。在步骤(2)-步法PCR中,体液量优选为0. 2μ?。 在步骤(2)所述的引物优选自:

【权利要求】
1. 一种刺参免提DNA的PCR快速扩增方法,其特征在于,其步骤如下, 取体液:将刺参处死后用微量注射器肌肉内抽取体液〇. 02-1ML入200ML PCR管中,置 于冰浴备用;当不能立即PCR时将其置_20°C下保存,1周内有效; 一步法PCR :以上述PCR管的体液为模板,进行25ML体系下的PCR扩增: 25ML体系: 体液 0.02-1ML 2. Taq PCR MasterMix 12. 5|^L 引物2ML,上下游混合引物,浓度均为2. 5Mffl〇l/L ; CldH2O 补足至 25ML 反应条件:普通PCR条件,扩增程序为:94 °C预变性4 min;94 °C变性40 s,50-60 °C 退火40 s,72 °C延伸40 s,共35个循环;72 °C延伸6 min,4 °C保存; (3) PCR产物检测:按照常规的琼脂糖凝胶电泳检测。
2. 根据权利要求1所述的刺参免提DNA的PCR快速扩增方法,其特征在于,在步骤(1) 中,用于取体液的刺参的个体重量在2g以上。
3. 根据权利要求1或2所述的刺参免提DNA的PCR快速扩增方法,其特征在于,在步 骤(2) -步法PCR中,体液量为0. 2ML。
4. 根据权利要求1或2所述的刺参免提DNA的PCR快速扩增方法,其特征在于,在步 骤(2)所述的引物选自:
【文档编号】C12N15/10GK104498479SQ201510019776
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2015年1月15日 优先权日:2015年1月15日
【发明者】董志国, 陈百尧, 张庆起, 赵帅, 伏光辉, 安健, 张立祥 申请人:淮海工学院, 连云港市高公岛黄窝捕捞养殖公司, 连云港赣榆佳信水产开发有限公司, 连云港市海洋与水产科学研究所
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