本发明属于酵素领域，具体涉及一种元宝枫翅果活菌酵素原液的制备方法。
背景技术：
：元宝枫为槭树科槭树属落叶乔木，因翅果酷似古代元宝而得名，其为单叶、对生，纸质、常五裂，在我国分布较广。研究发现元宝枫叶中含有糖、氨基酸、蛋白质、黄酮、有机酸、单宁、萜烯等各类化学物质。其中，黄酮类、蛋白质、单宁、神经酸的应用价值较高，具有预防冠心病、心绞痛、血液循环障碍性疾病以及抗病毒、消炎利胆、消除人体自由基等功效。元宝枫翅果种子含油率较高，可以达到45-48％，而且元宝枫油中富含神经酸。神经酸又名鲨鱼酸，化学名顺-15-二十四碳烯酸，因最早发现于哺乳动物的神经组织，故命名为神经酸，是生物膜的重要组成成分，参与生物膜有关的多种特殊生理功能。元宝枫油脂脂肪酸组成中含有约5-6％的神经酸，含神经酸的植物在自然界分布较少，国际市场上神经酸主要来自于深海鱼类，而与深海鱼类相比，元宝枫是可持续利用的神经酸资源，神经酸已经成为各国科学家一致公认的世界上唯一能够修复受损神经的神奇物质。依据目前的科研研究，神经酸具有以下三大功效：其一，神经酸是大脑神经纤维和神经细胞的核心天然成分：神经酸是大脑发育、维持功能的必须营养物质，对促进大脑发育、改善记忆力、提高脑神经活跃度，防止脑神经的衰老；其二，神经酸能完整透过血脑屏障，直接作用于神经纤维，让受损、脱落的神经纤维保护鞘再生，修复受损的神经纤维，并溶解神经纤维中堵塞的坏死组织，提高传导速度和保证信息传导的完整性，恢复各种神经信息传到的通道畅通；其三，促使修复后的神经再生，重新产生新的分支和侧芽，并大量增殖分化，数量不断增多，恢复病人在语言、记忆、感觉和肢体等方面的部分或全部功能。所以用元宝枫翅果制成的酵素原液具有很高的保健价值。酵素现在的定义由中国生物发酵协会酵素分会把经微生物发酵得到的具有初始生物活性的一类产品统称为酵素。但由于许多制作者多关注加入不同水果，不注意发酵微生物和一些常见的功能性材料的使用，而且制成的产品的益生菌的活菌数亦不够，酵素产品的开发和应用受到其副作用和功能性不强的影响。技术实现要素：为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种元宝枫翅果活菌酵素原液的制备方法，解决了现有酵素生产过程中不能保证无病原菌的污染，发酵时间过长，以及无法最大限度地保留活性物质等问题。为达到上述目的，本发明是通过以下的技术方案来实现的。一种元宝枫翅果活菌酵素原液的制备方法，包括以下步骤：1）挑选材料：选择成熟的、饱满的元宝枫翅果作为发酵的主要原料；2）材料的处理：将捡练的元宝枫翅果先用纯净水洗两遍，最后再用1-3%（w/w）NaCl溶液冲洗一遍，起低温杀菌作用，翅果沥干，装入已经灭菌的发酵容器中，再加入蜂蜜和纯净水，其中各组分按重量比为元宝枫翅果：蜂蜜：纯净水=20~50：1~3：20~70，即得元宝枫翅果发酵原液待用；3）菌种培养：将菌种活化扩培并制备成发酵菌液：菌种采用的是商业生产用食品目录中可添加的食用益生菌菌种乳酸菌一类，即植物乳杆菌，嗜酸乳杆菌，干酪乳杆菌，鼠李糖乳杆菌：（1）分别取上述四种甘油管保存的菌种一环在平板上划线，在培养箱中30℃培养24小时；（2）分别取MRS固体培养基平板上的纯菌落一环接入装有300ml种子培养液的500ml规格的三角瓶中，置于摇床，培养条件：转速80rpm，温度30℃，恒温培养24小时，然后将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌的菌液按体积比3-4：3-4：1-2：1-2的比例混合，即为发酵菌液备用；（3）上述种子培养液制备：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7]2.0g，葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g，吐温801.0mL乙酸钠（CH3COONa·3H2O）5.0g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）2.0g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.58g硫酸锰（MnSO4·H2O）0.25g，加蒸馏水定容至1000mL，调节pH至6.2-6.4；（4）接种发酵：按发酵原液体积的1~5%将发酵菌液加入到发酵体系中，发酵温度为25~35℃，发酵时间8~16d。（5）发酵液处理：发酵完成后的发酵液经粗过滤，过滤筛目数为20~32目；再细过滤，过滤筛目数为80~100目，滤液即为元宝枫翅果活菌酵素原液。有益效果：与现有技术相比，本发明的优点在于：1）利用盐溶液消毒杀菌、严格控制发酵温度，接入益生菌种，有效的降低了酵素营养成分的损失，最大限度保留了酵素活性；2）接入了益生菌乳酸菌一类，优势菌株抑制了其他杂菌滋生，保证了产品的质量稳定；3）发酵的总时间为8-16d，时间短避免不饱和脂肪酸的过多氧化，有利于保留元宝枫翅果本身含有的活性物质，以及本身的风味物质。具体实施方式下面结合实例对本发明作进一步的详细说明。实施例1一种元宝枫翅果活菌酵素原液的制备方法，包括以下步骤：1）挑选材料：选择成熟的、饱满的元宝枫翅果作为发酵的主要原料；2）材料的处理：将捡练的元宝枫翅果称量20份，先用纯净水洗两遍，最后再用1%（w/w）NaCl溶液冲洗一遍，盐溶液消毒杀菌，翅果沥干，装入已经灭菌的发酵容器中，再加入1份的蜂蜜和70份的纯净水，即得元宝枫翅果发酵原液待用；3）菌种培养：将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌分别活化扩培并制备成发酵菌液：（1）取甘油管保存菌种一环在平板上划线，在培养箱中30℃培养24小时；（2）取MRS固体培养基平板菌落一环接入装有300ml种子培养液的500ml规格的三角瓶中，置于摇床，培养条件：转速80rpm，温度30℃，恒温培养24小时，然后将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌的菌液按体积比3：3：2：2的比例混合，即为发酵菌液备用；（3）上述种子培养液制备：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7]2.0g，葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g，吐温801.0mL乙酸钠（CH3COONa·3H2O）5.0g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）2.0g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.58g硫酸锰（MnSO4·H2O）0.25g，加蒸馏水定容至1000mL，调节pH至6.2-6.4；4）接种发酵：按发酵原液体积的2%比例将发酵菌液混合（其中植物乳杆菌：嗜酸乳杆菌：干酪乳杆菌：鼠李糖乳杆菌的比例（v/v）为3份：3份：2份：2份）加入到发酵体系中，发酵温度为25℃，发酵时间16d；5）发酵液处理：发酵完成后的发酵液经粗过滤，过滤筛目数为20~32目；再细过滤，过滤筛目数为80~100目，滤液即为元宝枫翅果活菌酵素原液，pH值3.5，乳酸菌总菌数达3.6×108cfu/ml。实施例2一种元宝枫翅果活菌酵素原液的制备方法，包括以下步骤：1）挑选材料：选择成熟的、饱满的元宝枫翅果作为发酵的主要原料；2）材料的处理：将捡练的元宝枫翅果称量50份，先用纯净水洗两遍，最后再用2%（w/w）NaCl溶液冲洗一遍，盐溶液消毒杀菌，翅果沥干，装入已经灭菌的发酵容器中，再加入2份的蜂蜜和60份的纯净水，即得元宝枫翅果发酵原液待用；3）菌种培养：将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌分别活化扩培并制备成发酵菌液：（1）取甘油管保存菌种一环在平板上划线，在培养箱中30℃培养24小时；（2）取MRS固体培养基平板菌落一环接入装有300ml种子培养液的500ml规格的三角瓶中，置于摇床，培养条件：转速80rpm，温度30℃，恒温培养24小时，然后将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌的菌液按体积比3：4：1：2的比例混合，即为发酵种子菌液备用；（3）种子培养液制备：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7]2.0g，葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g，吐温801.0mL乙酸钠（CH3COONa·3H2O）5.0g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）2.0g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.58g硫酸锰（MnSO4·H2O）0.25g，加蒸馏水定容至1000mL，调节pH至6.2-6.4；4）接种发酵：按发酵原液体积的5%比例将发酵菌液混合（其中植物乳杆菌：嗜酸乳杆菌：干酪乳杆菌：鼠李糖乳杆菌的比例（v/v）为3份：4份：1份：2份）加入到发酵体系中，发酵温度为30℃，发酵时间12d；5）发酵液处理：发酵完成后的发酵液经粗过滤，过滤筛目数为20~32目；再细过滤，过滤筛目数为80~100目，滤液即得到元宝枫翅果活菌酵素原液，pH值3.2，乳酸菌总菌数达7.2×108cfu/ml。实施例3一种元宝枫翅果活菌酵素原液的制备方法，包括以下步骤：1）挑选材料：选择成熟的、饱满的元宝枫翅果作为发酵的主要原料；2）材料的处理：将捡练的元宝枫翅果称量40份，先用纯净水洗两遍，最后再用3%（w/w）NaCl溶液冲洗一遍，盐溶液消毒杀菌，翅果沥干，装入已经灭菌的发酵容器中，再加入3份的蜂蜜和20份的纯净水，即得元宝枫翅果发酵原液待用；3）菌种培养：将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌分别扩培并制备成发酵菌液：（1）取甘油管保存菌种一环在平板上划线，在培养箱中30℃培养24小时；（2）取MRS固体培养基平板菌落一环接入装有300ml种子培养液的500ml规格的三角瓶中，置于摇床，培养条件：转速80rpm，温度30℃，恒温培养24小时，然后将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌的菌液按体积比4：3：2：1的比例混合，即为发酵种子菌液备用；（3）种子培养液制备：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7]2.0g，葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g，吐温801.0mL乙酸钠（CH3COONa·3H2O）5.0g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）2.0g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.58g硫酸锰（MnSO4·H2O）0.25g，加蒸馏水定容至1000mL，调节pH至6.2-6.4；4）接种发酵：按发酵原液体积的4%比例将发酵菌液混合（其中植物乳杆菌：嗜酸乳杆菌：干酪乳杆菌：鼠李糖乳杆菌的比例（v/v）为4份：3份：2份：1份）加入到发酵体系中，发酵温度为35℃，发酵时间10d；5）发酵液处理：发酵完成后的发酵液经粗过滤，过滤筛目数为20~32目；再细过滤，过滤筛目数为80~100目，滤液即为元宝枫翅果活菌酵素原液，pH值3.4，乳酸菌总菌数达5.6×108cfu/ml。实施例4一种元宝枫翅果活菌酵素原液的制备方法，包括以下步骤：1）挑选材料：选择成熟的、饱满的元宝枫翅果作为发酵的主要原料；2）材料的处理：将捡练的元宝枫翅果称量30份，先用纯净水洗两遍，最后再用3%（w/w）NaCl溶液冲洗一遍，盐溶液消毒杀菌，翅果沥干，装入已经灭菌的发酵容器中，再加入3份的蜂蜜和40份的纯净水，即得元宝枫翅果发酵原液待用；3）菌种培养：将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌分别扩培并制备成发酵菌液：（1）取甘油管保存菌种一环在平板上划线，在培养箱中30℃培养24小时；（2）取MRS固体培养基平板菌落一环接入装有300ml种子培养液的500ml规格的三角瓶中，置于摇床，培养条件：转速80rpm，温度30℃，恒温培养24小时，然后将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌的菌液按体积比3：4：2：1的比例混合，即为发酵种子菌液备用；（3）种子培养液制备：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7]2.0g，葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g，吐温801.0mL乙酸钠（CH3COONa·3H2O）5.0g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）2.0g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.58g硫酸锰（MnSO4·H2O）0.25g，加蒸馏水定容至1000mL，调节pH至6.2-6.4；4）接种发酵：按发酵原液体积的1%比例将发酵菌液混合（其中植物乳杆菌：嗜酸乳杆菌：干酪乳杆菌：鼠李糖乳杆菌的比例（v/v）为3份：4份：2份：1份）加入到发酵体系中，发酵温度为35℃，发酵时间8d；5）发酵液处理：发酵完成后的发酵液经粗过滤，过滤筛目数为20~32目；再细过滤，过滤筛目数为80~100目，滤液即为元宝枫翅果活菌酵素原液，pH值3.5，乳酸菌总菌数达2.6×108cfu/ml。为了体现本发明方法的有效性，另做一组按传统方法不加菌种自然发酵的对比试验，具体步骤如下：1）挑选材料：选择成熟的、饱满的元宝枫翅果作为发酵的主要原料：2）材料的处理：将捡练的元宝枫翅果称量30份，先用纯净水洗两遍，最后再用3%（w/w）NaCl溶液冲洗一遍，盐溶液消毒杀菌，翅果沥干，装入已经灭菌的发酵容器中，再加入3份的蜂蜜和40份的纯净水，即得元宝枫翅果发酵体系发酵；5）发酵液处理：发酵完成后的发酵液经粗过滤，过滤筛目数为20~32目；再细过滤，过滤筛目数为80~100目，即得自然发酵滤液。下表是将本发明实施例与对比例的检测结果：项目实施例1实施例2实施例3实施例4对比pH3.53.23.43.55.5乳酸菌总菌数(cfu/ml)3.6×1087.2×1085.6×1082.6×1081.2×103神经酸含量(%)0.0050.0090.0080.0050.001本发明按照上述实施例进行了说明，应当理解，上述实施例不以任何形式限定本发明，凡采用等同替换或等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。当前第1页1 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