一种生物法利用海蓬子制备石斑鱼免疫增强剂的方法与流程

文档序号:11078582阅读:875来源:国知局

本发明涉及一种生物法利用海蓬子制备石斑鱼用免疫增强剂的方法,属于饲料添加剂领域。



背景技术:

石斑鱼属暖水性底栖生活鱼类,主要生活在热带、亚热带海域的岩礁洞穴及近海大陆架的珊湖礁海区,少数生活于温带水域,在我国主要分布于南海和东海南部地区。石斑鱼多以群居生活,其种类繁多,我国己记录的有45种。石斑鱼个体较大、肉质鲜美,富含多不饱和脂肪酸,其食用价值和保健价值都很高,被认为是一种优良的海洋经济鱼类。目前,石斑鱼在东亚、中东和东南亚等国家深受欢迎,市场需求日益增加,随着自然资源大幅下降,石斑鱼养殖成为保障消费者石斑鱼需求的重要手段,逐渐发展为我国南方最重要的海水养殖对象之一。近些年来,由于高密度水产养殖业的迅速发展,导致疾病频发,消毒剂和抗生素的广泛使用,不仅引起动物的内源性感染或二重感染,而且导致动物出现抗药性及免疫功能下降。随着研究的深入,一种新型的绿色添加剂—免疫增强剂得到广泛研究。免疫增强剂,主要是作用于非特异性免疫因子来达到防病、抗病目的。虽然其不在鱼体内产生免疫记忆,但能够在短时期内显著提高机体的抗病能力。因此,日益受到国际养殖业的重视,成为水产保护学领域研究的热点。

为了满足不断增长的水产品的需求,解决因水产养殖规模不断扩大和生长周期缩减而导致的生理机能紊乱、疾病频发成为水产养殖的重点问题,也是水产饲料产业发展的关键。在此背景下,抗生素类饲料添加剂受到热捧,被广泛应用于饲料业中,在一定程度上促进了水产养殖业的发展,但是抗生素带来的高残留、高污染和抗药性等问题愈发的严重。目前已经陆续开发出微生态制剂、中草药免疫增强剂等环保型饲料添加剂,但仍存在作用功效不确定、受外界环境影响较大等弊端,特别是对于海水养殖鱼类,中草药免疫增强剂存在适口性差、水污染严重等弊端,因此基于海洋或碱性资源开发新型免疫增强剂将有利于进一步推进石斑鱼生态养殖业的发展。

海蓬子又称海芦笋、海鹿茸、海虫草、富贵菜等,属于莉科植物,海蓬子属,在盐生植物分类中,属于茎肉质化真盐生植物,多见于沼泽地、盐湖旁和及海滩。海蓬子其干燥植株含纤维素5~20%,蛋白质9.0%,富含人体必需的8种氨基酸、微量元素和维生素,其中胡萝卜素含量超过普通蔬菜的40倍,还含有天然的植物保健盐和天然的植物碱(微角皂苷),具有降低胆固醇、降压等功效。海蓬子的种植对改善我国盐碱环境具有重要应用价值,但目前海蓬子的综合开发利用程度较低,制约着海蓬子加工产业经济效益,也直接影响了海蓬子的种植推广,因此,如果将海蓬子进行高值化综合开发利用,将对环境和经济做出重要贡献。



技术实现要素:

本发明的目的在于根据现有技术中存在的上述不足,基于循环经济的发展理念,采用现代生物技术开发利用陆生盐碱植物资源海蓬子制备石斑鱼用免疫增强剂,可显著提高石斑鱼的机体免疫力、改善动物生长性能,降低饲料系数,减少抗生素大量使用造成的养殖业污染,且原料来源广,价格低廉,是一种绿色、环保、高效的饲料添加剂,研制开发一种生物法利用海蓬子制备的石斑鱼用免疫增强剂。

本发明上述目的是通过以下技术方案予以实现的:

一种生物法利用海蓬子制备的石斑鱼用免疫增强剂,其特征在于由以下质量比的原料制成:海蓬子粉30~50份、山药粉15~20份、杜仲8~12份、绞股蓝8~12份、神曲6~8份、金银花3~5份、川芎6~8份、甘草6~8份、白花蛇舌草3~5份、穿心莲5~7份、蓝莓3~5份。

一种生物法利用海蓬子制备的石斑鱼用免疫增强剂,其特征在于所述原料组成优选为:海蓬子粉40份、山药粉18份、杜仲10份、绞股蓝10份、神曲7份、金银花4份、川芎7份、甘草7份、白花蛇舌草4份、穿心莲6份、蓝莓4份。

本发明提供一种生物法利用海蓬子制备石斑鱼免疫增强剂的工艺,所述海蓬子粉预处理工艺如下:

(1)粉碎浸泡:将去除杂质的海蓬子茎杆粉碎,过100目筛,加入海蓬子质量比5%的海藻,然后加入2倍质量比纯净水浸泡3~5h;

(2)蒸煮:将浸泡后的海蓬子悬浮液蒸煮1~2h,然后在密封条件下降温至室温;

(3)分离:将蒸煮液进行固液分离,得海蓬子茎杆粉,分离后的水进入步骤(1)进行循环利用;

(4)自然腐熟:控制海蓬子茎杆粉含水量40~50%,控温30~50℃,自然腐熟30~50d;

(5)二步发酵酶解:自然腐熟结束后,加入海蓬子质量比2%的纤维素酶和1%的低聚木糖酶,并接种海蓬子质量比2~3%的耐盐嗜碱芽孢杆菌,在28~35℃条件下发酵3~5d,12小时搅拌一次;发酵结束后即得海蓬子发酵粉。

上述海藻是浒苔、海带、马尾藻、鼠尾藻中的一种或几种的混合物。

本发明提供一种生物法利用海蓬子制备石斑鱼免疫增强剂的工艺,其特征在于包括如下步骤:

(1)混合粉碎:将各原料按比例混合,然后粉碎过100目筛;加入原料质量3倍的纯净水;

(2)酶解:加入中草药原料质量比3~5%的纤维素酶、2~3%的低聚木糖酶,在40~60℃条件下控温酶解4~8h,每隔0.5h搅拌一次;

(3)过滤分离:过滤酶解液,得到酶解液和酶解残渣;

(4)超声波辅助浸提:向酶解残渣中加入3~5倍的纯净水,在超声波辅助作用下,100℃条件下回流浸提20~30min,超声功率400w,频率25kHz;超声功率400w,频率25kHz;

(5)过滤分离:过滤浸提液,得到浸提液和浸提残渣;

(6)发酵液制备:向步骤(5)中的浸提残渣中加入5倍质量比的纯净水,并加入残渣质量比3.0~5.0%葡萄糖、2.0~3.0%酵母膏、0.3~0.5%磷酸二氢钾、0.02%MgSO4、0.01%CaCl2,pH调至7.0~7.2;

(7)好氧发酵:选用液体发酵罐,装液量体积比为60~70%,接种地衣芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌,接种量分别为2~4%、1~2%,控制发酵温度28~37℃,转速150~300rpm;在此发酵条件下发酵12~24h;

(8)厌氧发酵:好氧发酵结束后,接种乳酸杆菌和两歧双歧杆菌,接种量均为2~4%,发酵温度28~37℃,控温厌氧发酵12~24h;

(9)合并:将步骤(3)中的酶解液、步骤(5)中的浸提液和步骤(8)中的发酵液合并;

(10)低温浓缩:在低温条件下将步骤(9)合并后的增强剂溶液进行浓缩;

(11)吸附干燥:浓缩后用1~1.5倍质量比的麸皮吸附,在40~60℃鼓风干燥机中干燥,水分控制在8~10%;

(12)粉碎:将干燥后的产品用粉碎机60目过筛粉碎,即得石斑鱼用免疫增强剂。

本发明提供一种生物法利用海蓬子制备的石斑鱼用免疫增强剂,具有预防、保健、治疗和调节免疫等多种功效,是替代抗生素药物的理想、绿色、环保、安全、新型饲料添加剂。该发明免疫增强剂一是可以高效调理石斑鱼肠道健康,标本兼治,固本培元,保持肠道微生态平衡和最佳免疫状态,提高营养物质的消化吸收率,提高动物机体免疫力;二是可抑制和阻止病原大肠菌、梭状芽孢杆菌、沙门氏菌等有害菌的发生,增加肠道益生菌,维持健康的肠道菌群;三是增强免疫作用,通过刺激肠道内免疫系细胞,增加局部抗体的形成,增加巨噬细胞活性;四是免疫增强剂进入肠内抵制有害菌,降低恶臭及有害成分形成,使排出的粪便消除恶臭,在保护养殖环境的同时提高石斑鱼肉质品质。

本发明提供一种生物法利用海蓬子制备的石斑鱼用免疫增强剂,所述石斑鱼用免疫增强剂产品在水产饲料全价料中使用的质量比例为0.1~0.5%:或所述的饲料添加剂在预混料、浓缩料以全价料中所需的比例添加使用。

本发明提供一种生物法利用海蓬子制备的石斑鱼用免疫增强剂,其优势在于:一是按照中草药君臣佐使的配伍原则,以陆生盐碱植物海蓬子为君药,辅以山药粉、杜仲、绞股蓝为臣药,以神曲、金银花、川芎、白花蛇舌草、穿心莲、蓝莓为佐药,以甘草为使药,共行相辅相成之功效;尤其是海蓬子富含天然的植物保健盐和天然的植物碱(微角皂苷),对海水养殖鱼类较传统中草药保健功效更佳;二是免疫增强剂制备过程中采用了“酶解提取+超声波辅助浸提+多菌种好氧厌氧发酵二步发酵”的生产工艺,与现有的中草药饲料添加剂产品相比作用效果更显著;三是免疫增强剂具有海蓬子、中草药和益生菌等的多重优点,可以高效调理石斑鱼肠道健康,标本兼治,固本培元,保持肠道微生态平衡和最佳免疫状态,提高营养物质的消化吸收率,提高动物机体免疫力,提高养殖收益,降低养殖风险;四是该产品可替代抗生素使用,对石斑鱼无不良影响,使用安全,不存在药物残留和耐药性等问题,有着广阔的市场前景。

具体实施方式

实施例1:

一种生物法利用海蓬子制备的石斑鱼用免疫增强剂,具体制备步骤如下:

(1)粉碎浸泡:将去除杂质的海蓬子茎杆粉碎,过100目筛,加入海蓬子质量比5%的浒苔,然后加入2倍质量比纯净水浸泡4h;

(2)蒸煮:将浸泡后的海蓬子悬浮液蒸煮1.5h,然后在密封条件下降温至室温;

(3)分离:将蒸煮液进行固液分离,得海蓬子茎杆粉,分离后的水进入步骤(1)进行循环利用;

(4)自然腐熟:控制海蓬子茎杆粉含水量40~50%,控温30~50℃,自然腐熟40d;

(5)二步发酵酶解:自然腐熟结束后,加入海蓬子质量比2%的纤维素酶和1%的低聚木糖酶,并接种海蓬子质量比2.5%的耐盐嗜碱芽孢杆菌,在28~35℃条件下发酵4d,12小时搅拌一次;发酵结束后即得海蓬子发酵粉;

(6)混合粉碎:将各原料按海海蓬子粉40份、山药粉18份、杜仲10份、绞股蓝10份、神曲7份、金银花4份、川芎7份、甘草7份、白花蛇舌草4份、穿心莲6份、蓝莓4份比例混合,然后粉碎过100目筛;加入原料质量3倍的纯净水;

(7)酶解:加入中草药原料质量比4%的纤维素酶、2.5%的低聚木糖酶,在40~60℃条件下控温酶解6h,每隔0.5h搅拌一次;

(8)过滤分离:过滤酶解液,得到酶解液和酶解残渣;

(9)超声波辅助浸提:向酶解残渣中加入4倍的纯净水,在超声波辅助作用下,100℃条件下回流浸提25min,超声功率400w,频率25kHz;超声功率400w,频率25kHz;

(10)过滤分离:过滤浸提液,得到浸提液和浸提残渣;

(11)发酵液制备:向步骤(10)中的浸提残渣中加入5倍质量比的纯净水,并加入残渣质量比4.0%葡萄糖、2.5%酵母膏、0.4%磷酸二氢钾、0.02%MgSO4、0.01%CaCl2,pH调至7.0~7.2;

(12)好氧发酵:选用液体发酵罐,装液量体积比为60~70%,接种地衣芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌,接种量分别为3%、1.5%,控制发酵温度28~37℃,转速150~300rpm;在此发酵条件下发酵18h;

(13)厌氧发酵:好氧发酵结束后,接种乳酸杆菌和两歧双歧杆菌,接种量均为3%,发酵温度28~37℃,控温厌氧发酵18h;

(14)合并:将步骤(8)中的酶解液、步骤(10)中的浸提液和步骤(13)中的发酵液合并;

(15)低温浓缩:在低温条件下将步骤(14)合并后的增强剂溶液进行浓缩;

(16)吸附干燥:浓缩后用1~1.5倍质量比的麸皮吸附,在40~60℃鼓风干燥机中干燥,水分控制在8~10%;

(17)粉碎:将干燥后的产品用粉碎机60目过筛粉碎,即得石斑鱼用免疫增强剂。

实施例2:

一种生物法利用海蓬子制备的石斑鱼用免疫增强剂,具体制备步骤如下:

(1)粉碎浸泡:将去除杂质的海蓬子茎杆粉碎,过100目筛,加入海蓬子质量比5%的海带,然后加入2倍质量比纯净水浸泡5h;

(2)蒸煮:将浸泡后的海蓬子悬浮液蒸煮2h,然后在密封条件下降温至室温;

(3)分离:将蒸煮液进行固液分离,得海蓬子茎杆粉,分离后的水进入步骤(1)进行循环利用;

(4)自然腐熟:控制海蓬子茎杆粉含水量40~50%,控温30~50℃,自然腐熟30d;

(5)二步发酵酶解:自然腐熟结束后,加入海蓬子质量比2%的纤维素酶和1%的低聚木糖酶,并接种海蓬子质量比3%的耐盐嗜碱芽孢杆菌,在28~35℃条件下发酵5d,12小时搅拌一次;发酵结束后即得海蓬子发酵粉;

(6)混合粉碎:将各原料按海蓬子粉50份、山药粉15份、杜仲12份、绞股蓝8份、神曲8份、金银花3份、川芎8份、甘草6份、白花蛇舌草5份、穿心莲5份、蓝莓5份比例混合,然后粉碎过100目筛;加入原料质量3倍的纯净水;

(7)酶解:加入中草药原料质量比5%的纤维素酶、3%的低聚木糖酶,在40~60℃条件下控温酶解4h,每隔0.5h搅拌一次;

(8)过滤分离:过滤酶解液,得到酶解液和酶解残渣;

(9)超声波辅助浸提:向酶解残渣中加入5倍的纯净水,在超声波辅助作用下,100℃条件下回流浸提20min,超声功率400w,频率25kHz;超声功率400w,频率25kHz;

(10)过滤分离:过滤浸提液,得到浸提液和浸提残渣;

(11)发酵液制备:向步骤(10)中的浸提残渣中加入5倍质量比的纯净水,并加入残渣质量比5.0%葡萄糖、2.0%酵母膏、0.5%磷酸二氢钾、0.02%MgSO4、0.01%CaCl2,pH调至7.0~7.2;

(12)好氧发酵:选用液体发酵罐,装液量体积比为60~70%,接种地衣芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌,接种量分别为4%、2%,控制发酵温度28~37℃,转速150~300rpm;在此发酵条件下发酵12h;

(13)厌氧发酵:好氧发酵结束后,接种乳酸杆菌和两歧双歧杆菌,接种量均为4%,发酵温度28~37℃,控温厌氧发酵12h;

(14)合并:将步骤(8)中的酶解液、步骤(10)中的浸提液和步骤(13)中的发酵液合并;

(15)低温浓缩:在低温条件下将步骤(14)合并后的增强剂溶液进行浓缩;

(16)吸附干燥:浓缩后用1~1.5倍质量比的麸皮吸附,在40~60℃鼓风干燥机中干燥,水分控制在8~10%;

(17)粉碎:将干燥后的产品用粉碎机60目过筛粉碎,即得石斑鱼用免疫增强剂。

实施例3:

一种生物法利用海蓬子制备的石斑鱼用免疫增强剂,具体制备步骤如下:

(1)粉碎浸泡:将去除杂质的海蓬子茎杆粉碎,过100目筛,加入海蓬子质量比5%的马尾藻,然后加入2倍质量比纯净水浸泡3h;

(2)蒸煮:将浸泡后的海蓬子悬浮液蒸煮1h,然后在密封条件下降温至室温;

(3)分离:将蒸煮液进行固液分离,得海蓬子茎杆粉,分离后的水进入步骤(1)进行循环利用;

(4)自然腐熟:控制海蓬子茎杆粉含水量40~50%,控温30~50℃,自然腐熟50d;

(5)二步发酵酶解:自然腐熟结束后,加入海蓬子质量比2%的纤维素酶和1%的低聚木糖酶,并接种海蓬子质量比2%的耐盐嗜碱芽孢杆菌,在28~35℃条件下发酵5d,12小时搅拌一次;发酵结束后即得海蓬子发酵粉;

(6)混合粉碎:将各原料按海蓬子粉30份、山药粉20份、杜仲8份、绞股蓝12份、神曲6份、金银花5份、川芎6份、甘草8份、白花蛇舌草3份、穿心莲7份、蓝莓3份比例混合,然后粉碎过100目筛;加入原料质量3倍的纯净水;

(7)酶解:加入中草药原料质量比3%的纤维素酶、2%的低聚木糖酶,在40~60℃条件下控温酶解8h,每隔0.5h搅拌一次;

(8)过滤分离:过滤酶解液,得到酶解液和酶解残渣;

(9)超声波辅助浸提:向酶解残渣中加入3倍的纯净水,在超声波辅助作用下,100℃条件下回流浸提30min,超声功率400w,频率25kHz;超声功率400w,频率25kHz;

(10)过滤分离:过滤浸提液,得到浸提液和浸提残渣;

(11)发酵液制备:向步骤(10)中的浸提残渣中加入5倍质量比的纯净水,并加入残渣质量比3.0%葡萄糖、3.0%酵母膏、0.3%磷酸二氢钾、0.02%MgSO4、0.01%CaCl2,pH调至7.0~7.2;

(12)好氧发酵:选用液体发酵罐,装液量体积比为60~70%,接种地衣芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌,接种量分别为2%、1%,控制发酵温度28~37℃,转速150~300rpm;在此发酵条件下发酵24h;

(13)厌氧发酵:好氧发酵结束后,接种乳酸杆菌和两歧双歧杆菌,接种量均为2%,发酵温度28~37℃,控温厌氧发酵24h;

(14)合并:将步骤(8)中的酶解液、步骤(10)中的浸提液和步骤(13)中的发酵液合并;

(15)低温浓缩:在低温条件下将步骤(14)合并后的增强剂溶液进行浓缩;

(16)吸附干燥:浓缩后用1~1.5倍质量比的麸皮吸附,在40~60℃鼓风干燥机中干燥,水分控制在8~10%;

(17)粉碎:将干燥后的产品用粉碎机60目过筛粉碎,即得石斑鱼用免疫增强剂。

以下以验证试验说明本申请取得的技术效果:

表1试验分组表

表2试验结果

上述试验结果表明,本申请免疫增强剂取得了显著的技术效果,较现有市售中草药免疫增强剂差异显著(P<0.01),且试验结果表明改变原料组成会显著降低产品效果(P<0.01)。

以上实施例仅用于说明本发明的技术方案,而非对其进行限制;尽管参照前述实施例对被发明进行了详细的说明,但对于本领域的普通技术人员来说,依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而对这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

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