本发明涉及一种鱼类配合饲料，具体涉及一种具有抗氧化功能的高效鱼类配合饲料，属于水产养殖技术领域。
背景技术：
近年来，随着人们生活水平的提高和健康意识的增强，具有一定保健作用的n-3系列不饱和脂肪酸越来越引起人们的普遍关注，富含α-亚麻酸的水产品为众多消费者所青睐。目前，我国水产品增量主要来自于水产养殖业，当前我国水产品养殖产量已占到总产量的72％。随着水产养殖业的快速发展，饲料原料的需求量越来越大。我国是蛋白质资源紧缺的国家，饲料蛋白源供应不足尤为突出，每年都有2500万吨以上的蛋白原料缺口，尤其是近几年，豆粕、鱼粉等常规蛋白原料市场价格持续上涨，极大地提高了饲料成本。
橡胶籽是橡胶树的种子，是橡胶种植业一种重要的副产物。橡胶籽由壳、仁两部分组成，橡胶籽壳约占干基的45％，橡胶籽仁约占干基的55％(籽仁中含油45％～52％)。因此，加工后橡胶籽可分为三部分：橡胶籽油、橡胶籽饼、橡胶籽壳。一般情况下，橡胶籽饼含粗蛋白25～30％(必需氨基酸比例均衡)、粗脂肪12～16％(不饱和脂肪酸含量达82％，亚油酸和α-亚麻酸达60％以上)，富含钙磷等矿物元素(见表1)。在橡胶籽饼/油的脂肪酸组成中，n-3系列不饱和脂肪酸(α-亚麻酸)含量高达18-20％，是大豆油和菜籽油的3-4倍；n-6系列不饱和脂肪酸(亚油酸)含量为34-38％，n-3/n-6比值为1/2，是一种典型的富含n-3不饱和脂肪酸的植物饲料原料。橡胶籽在我国是一种资源量较大、种植面积和产量仅次于核桃和油茶籽的木本油料。2013年我国橡胶籽年产量约93万吨，云南省橡胶籽年产量约70万吨；同时，云南省所在的澜沧江-湄公河流域集中了全世界三分之二的资源，年产橡胶籽640万吨。因此，橡胶籽饼不仅可作为常规蛋白原料的替代品，也是一种潜在的n-3不饱和脂肪酸供应源，具有很高的营养价值，可以考虑将其作为豆粕、鱼粉等蛋白原料的替代品。
表1、橡胶籽饼常规营养组成
现有技术中，专利cn103284018a、cn103300222a、cn103300223a、cn103300255a、cn103300256a涉及利用橡胶籽饼作为鱼类饲料的蛋白原料；专利cn104719637a、cn104719678a、cn104719679a涉及利用橡胶籽油作为鱼类饲料的油脂原料。然而，橡胶籽饼/油中富含不饱和脂肪酸，高含量橡胶籽饼/油摄入易导致油脂/饲料氧化变质，产生醛、酮等有害物质。此外，氧化油脂/饲料饲喂鱼类，会阻碍鱼类生长；引起肌肉萎缩、肌纤维排列混乱，并发生透明和颗粒降解；降低生物膜的流动性，进而破坏细胞膜结构的完整性；引起肝脏肿大和肝细胞坏死。因此，一般在油脂/饲料中添加化学抗氧化剂(如乙氧基喹啉)以防止或减缓油脂的氧化反应。然而，研究证实乙氧基喹啉等化学抗氧化剂对鱼类免疫有一定副作用，长期使用含有乙氧基喹啉的饲料可使鱼体抗病力下降。此外，乙氧基喹啉可通过饲料进入动物体内，其代谢产物—乙氧基喹啉醌具有遗传毒性。因此，2017年2月6日，欧盟委员会发布通告，将实施条例草案暂停在所有动物饲料添加剂中使用乙氧基喹啉。因此，寻找安全可靠的天然抗氧化剂具有十分重要的意义。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明提供了一种具有抗氧化功能的高效鱼类配合饲料，本发明在一个合理的范围内，充分利用橡胶种植业中的副产物—橡胶籽饼部分取代豆粕或鱼粉，既节约了豆粕或鱼粉这一紧缺饲料蛋白源，降低了鱼类配合饲料成本；又提供了丰富的n-3不饱和脂肪酸，满足了鱼类对α-亚麻酸等必需脂肪酸的需要，提高了水产品品质；同时，添加天然抗氧化剂—番茄红素配制成一种具有抗氧化功能的鱼类配合饲料，克服了橡胶籽饼这一优质饲料蛋白源的缺点，充分释放了番茄红素生物抗氧化活性，还增强了鱼类的抗氧化能力和免疫力，进而提高了饲料性价比和鱼类养殖效益。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
利用橡胶籽饼部分取代豆粕或鱼粉作为饲料蛋白源，并在饲料配方中添加番茄红素。
一种具有抗氧化功能的高效鱼类配合饲料，包括豆粕、橡胶籽饼、蛋氨酸、赖氨酸、组氨酸、大豆油、大豆卵磷脂、番茄红素、次粉、草粉、α-淀粉、磷酸二氢钙、维生素c磷酸酯、食盐、氯化胆碱、维生素预混料、矿物质预混料，其中各种原料的重量百分比为：豆粕38～47％、橡胶籽饼9～36％、蛋氨酸0.5～0.6％、赖氨酸0.4～0.7％、组氨酸0.2～0.3％、大豆油0.1～6％、大豆卵磷脂0.5～1.0％、番茄红素0.01～0.03％、次粉18～35％、草粉3～5％、α-淀粉0～3％、磷酸二氢钙0.7～1.2％、维生素c磷酸酯0.02～0.05％、食盐0.2～0.3％、氯化胆碱0.2～0.3％、维生素预混料0.5～0.8％、矿物质预混料0.8～1.0％；所有原料的重量百分比之和为100％。
番茄红素(lycopene)又称ψ-胡萝卜素，属于异戊二烯类化合物，是天然抗氧化剂的一种。
番茄红素通过物理和化学方式猝灭单线态氧或捕捉过氧化自由基，番茄红素还能通过与其他形式的活性氧的化学反应消除氧化自由基(如过氧化氢、亚硝酸根等氧化自由基)。番茄红素清除自由基的功效远胜于其他类胡萝卜素和维生素e，其淬灭单线态氧速率常数是维生素e的100倍。目前，番茄红素是自然界植物中被发现的最强抗氧化剂之一，可应用于饲料添加剂中。
番茄红素是一种脂溶性物质，需要溶解在基础油中，其品质好坏直接关系到番茄红素的功效发挥和整体质量。
番茄红素可有效地清除动物体内的自由基，保持细胞正常代谢，提高动物的抗氧化能力和机体免疫力。
本发明的有益效果：
⑴充分利用橡胶种植业中的副产物—橡胶籽饼，作为鱼类配合饲料中的蛋白原料替代部分豆粕或鱼粉，节约了豆粕或鱼粉这一紧缺蛋白原料，降低了鱼类饲料成本；
⑵橡胶籽饼中还富含n-3不饱和脂肪酸，既满足了鱼类对α-亚麻酸等必需脂肪酸的需要，又提高了水产品品质；
⑶于配合饲料中添加番茄红素作为天然抗氧化剂，既克服了橡胶籽饼这一优质饲料蛋白源的缺点，又充分释放了番茄红素生物抗氧化活性，还增强了鱼类的抗氧化能力和免疫力，进而提高了饲料性价比和鱼类养殖效益。
具体实施方式
下面将结合具体实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
以豆粕和橡胶籽饼作为饲料蛋白源，大豆油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉配制的复合饲料调和油作为脂肪源，按照常规饲料配比方案，配制了6种等氮等能饲料(如表2所示)，其中，实例1饲料中未添加橡胶籽饼，作为对照组；实例2～5饲料中橡胶籽饼添加量为9～36％以替代豆粕，配制成含不同比例n-3/n-6不饱和脂肪酸的配合饲料。实例1～5饲料中添加番茄红素作为抗氧化剂，实例6饲料中以乙氧基喹啉作为抗氧化剂。
表2、各实例饲料配方(％，干物质基础)
注：矿物质预混料(g/kg)：mgso4·7h2o，180；ki，1；feso4·h2o，260；znso4·h2o，180；cuso4·5h2o，25；na2se2o3，0.01；mnso4·h2o，180；cocl2·6h2o，0.75；维生素预混料(g/kg)：维生素a，2；维生素d3，0.03；维生素e，30；维生素k，3；盐酸硫胺，8；核黄素，11；盐酸吡哆醇，8；维生素b12，0.02；抗坏血酸，50；叶酸，1；生物素，0.1；烟酸，30；泛酸钙，32；肌醇，25。
所有饲料原料经过粉碎机粉碎，且全部过60目筛，将所有粉碎好的饲料原料按表2饲料配方将除大豆油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉配制的饲料调和油以外的其他原料混合均匀，然后加入大豆油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉(大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉先溶于大豆油中)，混合均匀，最后再加入大约30％蒸馏水使粉状饲料形成硬团，置于颗粒饲料机中将饲料挤压成直径1.0mm的条状，并在40℃鼓风烘箱中干燥12小时，使其水分含量降至12％以下。经检测，本发明的各实例饲料配方的营养成分如表3所示。
表3、各实例饲料营养成分
试验用草鱼为人工培育的同一批苗种，由本地某养殖场提供。试验前，草鱼先用商业饲料暂养2周以适应养殖环境。试验开始前草鱼禁食24h。选择大小均匀(约5.8g)、体格健壮的草鱼，随机分配于18个养殖桶(6个试验处理组，每组3个重复)，每桶40尾。每天早晚投饵2次(07:00，18:00)，达饱食水平。养殖用水为曝气除氯的自来水。试验共进行10周，整个养殖试验期间均采用24h连续充氧，自然光照，水温始终保持在22～26℃。
养殖试验结束后，停止喂食24h，称量每桶鱼体总重并记录鱼体个数，计算草鱼生长率和成活率。此外，采集草鱼血液、肠道和肝脏等组织样品，并分析测定消化酶、抗氧化力和免疫力等指标。各指标的分析测试均采用国内外研究中使用的成熟方法。所有数值均表示为平均值±标准误
表4～6为试验数据和试验结果。
表4、各实例草鱼生长性能结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(p<0.05)；
由表4可知：随着饲料中橡胶籽饼替代豆粕比例的提高，草鱼末重、体增重和日增重系数均呈逐渐下降的趋势；使用实例1～4饲料饲喂的草鱼，其饲料系数和蛋白质效率均无显著性差异。饲料中添加36％橡胶籽饼显著降低了草鱼生长性能，但添加9～27％对饲料利用率无明显负面影响。
再次对比实例1～5饲料饲喂的草鱼数据，可以发现实例2饲料饲喂组饲料系数和蛋白质效率明显优于其他实例饲料饲喂组。当橡胶籽饼添加量为9％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1:4.28)，效果最佳。
此外，由表4可知，使用实例3饲料饲喂的草鱼，其末重、体增重和日增重系数均显著高于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为鱼类配合饲料的抗氧化剂，其改善草鱼生长性能效果明显优于乙氧基喹啉。
表5、各实例草鱼胃肠道消化酶活性结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(p<0.05)；
由表5可知：随着饲料中橡胶籽饼替代豆粕比例的提高，草鱼肠道胰蛋白酶和淀粉酶活性均呈先上升后下降的趋势；其中，使用实例2饲料饲喂的草鱼，其肠道胰蛋白酶和淀粉酶活性最高，显著高于实例5饲料饲喂组。随着饲料中橡胶籽饼替代豆粕比例的提高，草鱼肠道脂肪酶和二糖酶活性均呈逐渐下降的趋势；其中，使用实例1～2饲料饲喂的草鱼，其肠道脂肪酶和二糖酶活性无显著性差异。饲料中添加9～18％橡胶籽饼对草鱼肠道消化酶活性无明显负面影响；但当添加量达到36％时，草鱼肠道消化酶活性受到明显抑制。
再次对比实例1～5饲料饲喂的草鱼数据，可以发现实例2饲料饲喂组草鱼肠道胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性明显高于其他实施例饲料饲喂组。当橡胶籽饼添加量为9％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1:4.28)，效果最佳。
此外，由表5可知，使用实例3饲料饲喂的草鱼，其肠道胰蛋白酶和脂肪酶活性显著高于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为鱼类配合饲料的抗氧化剂，其改善草鱼肠道消化酶活性效果明显优于乙氧基喹啉。
表6、各实例草鱼肝脏抗氧化能力指标结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(p<0.05)；
由表6可知：随着饲料中橡胶籽饼替代豆粕比例的提高，草鱼肝脏过氧化氢酶和过氧化物酶呈先上升后下降的趋势；其中，使用实例2饲料饲喂的草鱼，其肝脏过氧化氢酶活性显著高于其他实施例饲料饲喂组；使用实例2饲料饲喂的草鱼，其肝脏过氧化物酶显著高于实例5饲料饲喂组。随着饲料中橡胶籽饼替代豆粕比例的提高，草鱼肝脏谷胱甘肽还原酶、总抗氧化力和碱性磷酸酶活性均呈逐渐下降的趋势；其中，使用实例1～3饲料饲喂的草鱼，其肝脏谷胱甘肽还原酶和总抗氧化力活性显著高于实例4～5饲料饲喂组；使用实例5饲料饲喂的草鱼，其肝脏碱性磷酸酶活性显著低于实例1饲料饲喂组。相反，随着饲料中橡胶籽饼替代豆粕比例的提高，草鱼肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性呈先下降后上升的趋势；其中，使用实例5饲料饲喂的草鱼，其肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于实例1饲料饲喂组。饲料中添加9～18％橡胶籽饼对草鱼抗氧化力无明显负面影响，但添加27～36％橡胶籽饼明显降低了草鱼抗氧化能力。
再次对比实例1～5饲料饲喂的草鱼数据，可以发现实例2饲料饲喂组草鱼肝脏过氧化氢酶和过氧化物酶活性明显高于其他实例饲料饲喂组。当橡胶籽饼添加量为9％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1:4.28)，效果最佳。
此外，由表6可知，使用实例3饲料饲喂的草鱼，其肝脏过氧化氢酶、过氧化物酶和总抗氧化力活性显著高于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为鱼类配合饲料的抗氧化剂，其改善草鱼抗氧化能力效果明显优于乙氧基喹啉。
综上所述，草鱼配合饲料中添加9～18％橡胶籽饼对饲料利用率、草鱼肠道消化酶活性和抗氧化力无明显不良影响；且当添加量为9％时，饲料利用率、草鱼肠道消化酶活性和抗氧化能力得以改善；但当添加量达到27～36％时，草鱼生长性能、饲料利用率、肠道消化酶活性和抗氧化力明显下降。因此，草鱼配合饲料中橡胶籽饼添加量为9～18％时，为最佳配比，此时配合饲料中n-3:n-6不饱和脂肪酸比例为1:3.06～4.28，既不会对草鱼消化酶活性、饲料利用率和抗氧化能力产生不良影响，又可以实现水产品品质和养殖效益的最优化。
本发明结合草鱼生理特性，针对草鱼生长性能、饲料利用率、肠道消化酶活性和抗氧化力进行设计，利用橡胶种植业中的副产物—橡胶籽饼部分取代豆粕，既节约了豆粕这一紧缺饲料蛋白源，降低了草鱼配合饲料成本；又提供了丰富的n-3不饱和脂肪酸，满足了草鱼对α-亚麻酸等必需脂肪酸的需要，提高了水产品品质；同时，添加天然抗氧化剂—番茄红素配制成一种具有抗氧化功能的草鱼配合饲料，克服了橡胶籽饼这一优质饲料蛋白源的缺点，充分释放了番茄红素的生物抗氧化活性，还增强了草鱼的抗氧化能力和免疫力，进而提高了饲料性价比和草鱼养殖效益。
实施例二
以鱼粉和橡胶籽饼作为饲料蛋白源，鱼油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉配制的复合饲料调和油作为脂肪源，按照常规饲料配比方案，配制了6种等氮等能饲料(如表7所示)，其中，实例1饲料中未添加橡胶籽饼，作为对照组；实例2～5饲料中橡胶籽饼添加量为15～60％以替代鱼粉，配制成含不同比例n-3/n-6不饱和脂肪酸的配合饲料。实例1～5饲料中添加番茄红素作为抗氧化剂，实例6饲料中以乙氧基喹啉作为抗氧化剂。
表7、各实例饲料配方(％干物质基础)
注：矿物质预混料(g/kg)：mgso4·7h2o，180；ki，1；feso4·h2o，260；znso4·h2o，180；cuso4·5h2o，25；na2se2o3，0.01；mnso4·h2o，180；cocl2·6h2o，0.75；维生素预混料(g/kg)：维生素a，2；维生素d3，0.03；维生素e，30；维生素k，3；盐酸硫胺，8；核黄素，11；盐酸吡哆醇，8；维生素b12，0.02；抗坏血酸，50；叶酸，1；生物素，0.1；烟酸，30；泛酸钙，32；肌醇，25。
所有饲料原料经过粉碎机粉碎，且全部过60目筛，将所有粉碎好的饲料原料按表7饲料配方将除鱼油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉配制的饲料调和油以外的其他原料混合均匀，然后加入鱼油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉(大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉先溶于鱼油中)，混合均匀，最后再加入大约30％蒸馏水使粉状饲料形成硬团，置于颗粒饲料机中将饲料挤压成直径3.0mm的条状，并在40℃鼓风烘箱中干燥12小时，使其水分含量降至12％以下。经检测，本发明的各实例饲料配方的营养成分如表8所示。
表8、各实例饲料营养成分
试验用罗非鱼为人工培育的同一批苗种，由本地某养殖场提供。试验前，罗非鱼先用商业饲料暂养2周以适应养殖环境。试验开始前罗非鱼禁食24h。选择大小均匀(约65.3g)、体格健壮的罗非鱼，随机分配于18个养殖桶(6个试验处理组，每组3个重复)，每桶30尾。每天早晚投饵2次(07:00，18:00)，达饱食水平。养殖用水为曝气除氯的自来水。试验共进行10周，整个养殖试验期间均采用24h连续充氧，自然光照，水温始终保持在27～29℃。
养殖试验结束后，停止喂食24h，称量每桶鱼体总重并记录鱼体个数，计算罗非鱼生长率和成活率。此外，采集罗非鱼血液、肠道和肝脏等组织样品，并分析测定消化酶、抗氧化力和免疫力等指标。各指标的分析测试均采用国内外研究中使用的成熟方法。所有数值均表示为平均值±标准误
表9～11为试验数据和试验结果。
表9、各实例罗非鱼生长性能结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(p<0.05)；
由表9可知：随着饲料中橡胶籽饼替代鱼粉比例的提高，罗非鱼末重、体增重和日增重系数均呈逐渐下降的趋势；使用实例1～4饲料饲喂的罗非鱼，其末重无显著性差异；使用实例1～2饲料饲喂的罗非鱼，其体增重和日增重系数均无显著性差异；使用实例1～4饲料饲喂的罗非鱼，其饲料效率和蛋白质效率均无显著性差异。饲料中添加15～45％橡胶籽饼对罗非鱼生长性能和饲料利用率无明显负面影响。
此外，由表9可知，使用实例3饲料饲喂的罗非鱼，其末重、体增重和日增重系数均显著高于实例6饲料饲喂组；反之，实例3饲料饲喂组饲料系数明显低于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为鱼类配合饲料的抗氧化剂，其改善罗非鱼生长性能效果明显优于乙氧基喹啉。
表10、各实例罗非鱼肠道消化酶活性结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(p<0.05)；
由表10可知：随着饲料中橡胶籽饼替代鱼粉比例的提高，罗非鱼肠道蛋白酶活性呈先上升后下降的趋势；使用实例2饲料饲喂的罗非鱼，其肠道胰蛋白酶活性显著高于实例4～5饲料饲喂组。随着饲料中橡胶籽饼替代鱼粉比例的提高，罗非鱼肠道脂肪酶和二糖酶活性呈逐渐下降的趋势；使用实例1饲料饲喂的罗非鱼，其肠道脂肪酶和二糖酶活性显著高于实例4～5饲料饲喂组。由此可见：饲料中添加15～30％橡胶籽饼对罗非鱼肠道消化酶活性无明显负面影响；但当添加量达到45～60％时，罗非鱼肠道消化酶活性受到一定的抑制。
再次对比实例1～5饲料饲喂的罗非鱼数据，可以发现实例2饲料饲喂组罗非鱼肠道胰蛋白酶活性明显优于其他实施例饲料饲喂组。当橡胶籽饼添加量为15％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1:0.52)，效果最佳。
此外，由表10可知，使用实例3饲料饲喂的罗非鱼，其肠道胰蛋白酶和脂肪酶活性显著高于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为鱼类配合饲料的抗氧化剂，其改善罗非鱼肠道消化酶活性效果明显优于乙氧基喹啉。
表11、各实例罗非鱼血浆和肝脏抗氧化能力指标结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(p<0.05)；
由表11可知：随着饲料中橡胶籽饼替代鱼粉比例的提高，罗非鱼血浆过氧化氢酶活性和丙二醛含量呈逐渐下降的趋势；其中，使用实例5饲料饲喂的罗非鱼，其血浆过氧化氢酶活性显著低于实例1饲料饲喂组；使用实例2和4饲料饲喂的罗非鱼，其血浆丙二醛含量显著低于实例1饲料饲喂组；使用实例1～5饲料饲喂的罗非鱼，其血浆溶菌酶、碱性磷酸酶、过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化物酶和总抗氧化力活性均无显著性差异。
由表11可知：随着饲料中橡胶籽饼替代鱼粉比例的提高，罗非鱼肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性呈逐渐下降的趋势；其中，使用实例1～2饲料饲喂的罗非鱼，其肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于实例5饲料饲喂组；使用实例1～5饲料饲喂的罗非鱼，其肝脏过氧化氢酶、过氧化物酶和总抗氧化力活性及丙二醛含量均无显著性差异。饲料中添加15～45％橡胶籽饼对罗非鱼抗氧化力和免疫力无明显负面影响。
再次对比实例1～5饲料饲喂的罗非鱼数据，可以发现实例2饲料饲喂组罗非鱼血浆丙二醛含量明显低于实例1饲料饲喂组，而肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性却略高于实例1饲料饲喂组。当橡胶籽饼添加量为15％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1:0.52)，效果最佳。
此外，由表11可知，使用实例3饲料饲喂的罗非鱼，其血浆过氧化物酶、过氧化氢酶和总抗氧化力活性及肝脏过氧化氢酶活性显著高于实例6饲料饲喂组；反之，实例3饲料饲喂组血浆和肝脏丙二醛含量显著低于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为鱼类配合饲料的抗氧化剂，其改善罗非鱼抗氧化能力效果明显优于乙氧基喹啉。
综上所述，罗非鱼配合饲料中添加15～45％橡胶籽饼对罗非鱼生长性能、饲料利用率、抗氧化力及免疫力指标无明显不良影响；且当添加量为15％时，罗非鱼肠道胰蛋白酶活性和抗氧化力指标得以改善；但当添加量达到60％时，罗非鱼生长性能、饲料利用率和抗氧化力明显下降。因此，罗非鱼配合饲料中橡胶籽饼适宜添加量为15～45％，配合饲料中n-3:n-6不饱和脂肪酸比例为1:0.52～1.00。
实施例三
以鱼粉和橡胶籽饼作为饲料蛋白源，鱼油、大豆油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉配制的复合饲料调和油作为脂肪源，按照常规饲料配比方案，配制了5种等氮等能饲料(如表12所示)，其中，实例1饲料中未添加橡胶籽饼，作为对照组；实例2～4饲料中橡胶籽饼添加量为15～45％以替代鱼粉，配制成含不同比例n-3/n-6不饱和脂肪酸的配合饲料；实例1～4饲料中添加番茄红素作为抗氧化剂，实例5饲料中以乙氧基喹啉作为抗氧化剂。
表12、各实例饲料配方(％，干物质基础)
注：矿物质预混料(g/kg)：mgso4·7h2o，180；ki，1；feso4·h2o，260；znso4·h2o，180；cuso4·5h2o，25；na2se2o3，0.01；mnso4·h2o，180；cocl2·6h2o，0.75；维生素预混料(g/kg)：维生素a，2；维生素d3，0.03；维生素e，30；维生素k，3；盐酸硫胺，8；核黄素，11；盐酸吡哆醇，8；维生素b12，0.02；抗坏血酸，50；叶酸，1；生物素，0.1；烟酸，30；泛酸钙，32；肌醇，25。
所有饲料原料经过粉碎机粉碎，且全部过60目筛，将所有粉碎好的饲料原料按表12饲料配方将除大豆油、鱼油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉配制的饲料调和油以外的其他原料混合均匀，然后加入大豆油、鱼油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉(大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉先溶于大豆油/鱼油中)，混合均匀，最后再加入大约30％蒸馏水使粉状饲料形成硬团，置于颗粒饲料机中将饲料挤压成直径1.0mm的条状，并在40℃鼓风烘箱中干燥12小时，使其水分含量降至12％以下。经检测，本发明的各实例饲料配方的营养成分如表13所示。
表13、各实例饲料营养成分
试验用丝尾鳠为人工培育的同一批苗种，由本地某养殖场提供。试验前，丝尾鳠先用商业饲料暂养2周以适应养殖环境。试验开始前丝尾鳠禁食24h。选择大小均匀(约1.2g)、体格健壮的丝尾鳠，随机分配于15个养殖桶(5个试验处理组，每组3个重复)，每桶40尾。每天早晚投饵2次(07:00，18:00)，达饱食水平。养殖用水为曝气除氯的自来水。试验共进行8周，整个养殖试验期间均采用24h连续充氧，自然光照，水温始终保持在27～29℃。
养殖试验结束后，停止喂食24h，称量每桶鱼体总重并记录鱼体个数，计算丝尾鳠生长率和成活率。此外，采集丝尾鳠血液、肠道和肝脏等组织样品，并分析测定消化酶、抗氧化力和免疫力等指标。各指标的分析测试均采用国内外研究中使用的成熟方法。所有数值均表示为平均值±标准误
表14～17为试验数据和试验结果。
表14、各实例丝尾鳠生长性能结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(p<0.05)；
由表14可知：随着饲料中橡胶籽饼替代鱼粉比例的提高，丝尾鳠末重、体增重、日增重系数和蛋白质效率均呈先上升后下降的趋势；使用实例1～3饲料饲喂的丝尾鳠，其末重、体增重、日增重系数和蛋白质效率均无显著性差异；使用实例1～4饲料饲喂的丝尾鳠，其饲料系数无显著性差异。饲料中添加15～30％橡胶籽饼对丝尾鳠生长性能和饲料利用率无明显负面影响。
再次对比实例1～4饲料饲喂的丝尾鳠数据，可以发现实例2饲料饲喂组丝尾鳠末重、体增重、日增重系数、饲料系数和蛋白质效率明显优于其他实例饲料饲喂组。当橡胶籽饼添加量为15％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1.15:1)，效果最佳。
此外，由表14可知，使用实例2饲料饲喂的丝尾鳠，其末重、体增重和日增重系数均显著高于实例5饲料饲喂组；反之，实例2饲料饲喂组饲料系数明显低于实例5饲料饲喂组。番茄红素作为鱼类配合饲料的抗氧化剂，其改善丝尾鳠生长性能效果明显优于乙氧基喹啉。
表15、实施例丝尾鳠胃肠道消化酶活性结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(p<0.05)；
由表15可知：使用实例1～4饲料饲喂的丝尾鳠，其胃蛋白酶和肠道脂肪酶活性均无显著性差异；使用实例1～2饲料饲喂的丝尾鳠，其肠道胰蛋白酶和淀粉酶活性也无显著性差异；使用实例3～4饲料饲喂的丝尾鳠，其肠道胰蛋白酶活性显著低于实例1饲料饲喂组；然而，使用实例4饲料饲喂的丝尾鳠，其肠道淀粉酶活性显著高于实例3饲料饲喂组。饲料中添加15％橡胶籽饼对丝尾鳠胃肠道消化酶活性无明显负面影响；但当添加量达到30～45％时，丝尾鳠肠道消化酶活性受到一定的抑制。
此外，由表15可知，使用实例2饲料饲喂的丝尾鳠，其肠道胰蛋白酶和脂肪酶活性显著高于实例5饲料饲喂组。番茄红素作为鱼类配合饲料的抗氧化剂，其改善丝尾鳠肠道消化酶活性效果明显优于乙氧基喹啉。
表16、各实例丝尾鳠血浆和肝脏抗氧化能力指标结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(p<0.05)；
由表16可知：随着饲料中橡胶籽饼替代鱼粉比例的提高，丝尾鳠血浆丙二醛含量呈先下降后上升的趋势；其中，使用实例4饲料饲喂的丝尾鳠，其血浆丙二醛含量显著高于实例3饲料饲喂组；使用实例1饲料饲喂的丝尾鳠，其血浆igm水平显著低于实例2～4饲料饲喂组；使用实例1～4饲料饲喂的丝尾鳠，其血浆碱性磷酸酶活性无显著性差异。
由表16可知：使用实例1～3饲料饲喂的丝尾鳠，其肝脏过氧化氢酶活性显著高于实例4饲料饲喂组；使用实例3饲料饲喂的丝尾鳠，其肝脏乳酸脱氢酶活性显著高于实例1～2饲料饲喂组；使用实例1饲料饲喂的丝尾鳠，其肝脏一氧化氮含量显著高于实例2、4饲料饲喂组；使用实例1～4饲料饲喂的丝尾鳠，其肝脏超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶、过氧化物酶和碱性磷酸酶活性均无显著性差异。饲料中添加15～30％橡胶籽饼对丝尾鳠抗氧化力和免疫力无明显负面影响。
再次对比实例1～4饲料饲喂的丝尾鳠数据，可以发现实例2～3饲料饲喂组丝尾鳠血浆丙二醛含量明显低于实例1饲料饲喂组，而血浆igm含量明显高于实例1饲料饲喂组。当橡胶籽饼添加量为15～30％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1.15～1.18:1)，效果最佳。
此外，由表16可知，使用实例2饲料饲喂的丝尾鳠，其血浆丙二醛含量显著低于实例5饲料饲喂组；反之，实例2饲料饲喂组肝脏超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶活性显著高于实例5饲料饲喂组。番茄红素作为鱼类配合饲料的抗氧化剂，其改善丝尾鳠抗氧化能力效果明显优于乙氧基喹啉。
表17、各实例1-4饲料成本分析
由表17可知：丝尾鳠配合饲料中橡胶籽饼添加剂量为15～45％时，每公斤丝尾鳠增重节约饲料成本0.41～0.60元。以养殖效益作为参考依据，丝尾鳠配合饲料中橡胶籽饼添加剂量为15～45％较为合适。
此外，由表17可知，相对于实例5饲料饲喂组，实例2饲料饲喂组每公斤丝尾鳠增重节约饲料成本0.27元。以养殖效益作为参考依据，丝尾鳠配合饲料中使用番茄红素作为抗氧化剂优于乙氧基喹啉。
综上所述，丝尾鳠配合饲料中添加15～30％橡胶籽饼对丝尾鳠生长性能、饲料利用率、抗氧化力及免疫力指标无明显不良影响；且当添加量为15％时，丝尾鳠生长性能、饲料利用率、抗氧化力和免疫力指标得以改善；但当添加量达到45％时，丝尾鳠生长性能、饲料利用率和抗氧化力明显下降。因此，丝尾鳠配合饲料中橡胶籽饼添加量为15～30％时，为最佳配比，此时配合饲料中n-3:n-6不饱和脂肪酸比例为1.15～1.18:1，既不会对丝尾鳠生长性能和抗氧化能力产生不良影响，又可以实现水产品品质和养殖效益的最优化。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。