1.本发明属于中药活性成分提取技术领域，具体涉及一种从荨麻中提取生物碱的方法及其作为促生长类添加剂的应用。
背景技术：
2.生物碱(alkaloid)是具有碱性和明显生理活性的一类含氮杂环的天然有机化合物，在自然界中广泛存在于多种植物中，是许多中草药及药用植物的有效成分。目前为止，多种生物碱从植物中分离出来用于临床，如长春碱、喜树碱、益母草碱、秋水仙碱、麻黄碱等，基于生物碱具有抗肿瘤、低毒、抗癌、低成本的特点，其提取、分离纯化方法和工艺的研究成为人们关注的焦点。
3.荨麻科植物是传统的可药食两用的野生植物，药用历史悠久，具有祛风除湿、平肝定惊、解毒等多种功效。国内外文献报道，荨麻中含大量有效的活性成分，如类黄酮、有机酸、生物碱等，目前，多采用适宜的溶剂如酸水、酸醇及碱醇等，利用浸渍、渗漉、煎煮、回流、超声等技术将生物碱类成分提取出来，然后进一步地去粗取精、纯化精制进行提取，但是，由于生物碱在荨麻中的相对含量较低和结构复杂，提取时势必引入大量的杂质成分。如大量的淀粉、树胶、果胶、粘液质、色素等，不易于后续去粗取精、纯化精制工序的进行。
4.专利cn102327303a公开了一种苦木生物碱的高效分离方法，采用超临界萃取技术结合超临界流体逆向萃取结晶技术对苦木生物碱进行提取、纯化，具有分离纯化时间短、分离效率高、工艺简单的优点。相较于热回流提取、有机溶剂萃取、色谱柱纯化等复杂、耗能、耗时的工艺，具有工业化意义。
5.张海悦等(“大孔树脂吸附和分离狭叶荨麻中生物碱的研究”，张海悦等，中国酿造，2012年第31卷第1期)采用醇提法提取了狭叶荨麻全草中的生物碱，使用85％的乙醇回流提取后经石油醚萃取，继而使用弱极性的ab
‑
8大孔吸附树脂进行初步分离纯化。研究结果表明，ab
‑
8大孔吸附树脂对生物碱有较好的吸附能力；40％vol乙醇洗脱时解吸效果最好，通过流出曲线和解吸曲线得出上样量和洗脱液用量为1：2时效果最佳。
6.基于此，为了克服从荨麻中提取生物碱存在的提取方法、分离纯化方法存在的众多问题，开发一种简单、快速、降低能耗和生产成本的提取纯化方法，并提高荨麻中生物碱的纯度是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现要素：
7.为了克服现有技术的不足，本发明提供一种从荨麻中提取生物碱的方法，该提取方法工艺简单、高效快速、安全环保、收率和纯度高，并且发现了生物碱具有促进动物生长的效果，可作为促生长类添加剂应用于动物的生长繁殖，所述从荨麻中提取生物碱的方法包括荨麻预处理、超临界n2o提取、去粗取精、纯化精制的步骤。
8.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案，一种从荨麻中提取生物碱的方法，
包括以下步骤：
9.步骤1.将荨麻全草洗净晾干粉碎后，过100
‑
200目标准筛得到荨麻粉末，加入荨麻粉末重量1
‑
2倍的碱性预处理液，超声处理10
‑
30min后，过滤晾干得到预处理的荨麻粉末；
10.步骤2.将步骤1得到的预处理的荨麻粉末与碱性物质按照重量比100：3
‑
5混合均匀，加入荨麻粉末重量10％
‑
15％的夹带剂，进行超临界n2o提取，提取工艺为：压力为25
‑
35mpa，温度为40
‑
60℃，n2o流量为2
‑
5l/h，萃取时间60
‑
80min，将提取物浓缩后得到浓缩液；
11.步骤3.将步骤2得到的浓缩液用盐酸溶解过滤后，将过滤液用氨水调节ph值为9
‑
10，用氯仿萃取3
‑
4次，合并萃取液后旋蒸得到粗提物；
12.步骤4.将步骤3得到的粗提物用水分散，得到浓度为0.1
‑
0.2g/ml的分散液，调节ph值为5
‑
6，选用大孔吸附树脂进行上柱分离，上柱流速为3
‑
7bv/h，然后，用水洗脱1
‑
3bv除去杂质，再用30
‑
50wt％的乙醇洗脱4
‑
10bv，洗脱流速2
‑
5bv/h，收集洗脱液，浓缩干燥，即制备得到荨麻生物碱。
13.进一步，所述荨麻为异株荨麻、麻叶荨麻、狭叶荨麻、藏荨麻、裂叶荨麻、小果荨麻、粗根荨麻的一种。
14.所述碱性预处理液由20
‑
30wt％的氨水、甲醇和水按照重量比30
‑
60：10
‑
20：40
‑
50混合而成。
15.所述碱性物质选自氢氧化钙、碳酸钠、碳酸钾的一种或多种。所述夹带剂选自95wt％的乙醇，或95wt％的甲醇的一种。
16.所述步骤3中的盐酸浓度为0.05
‑
0.2mol/l，所述非极性大孔吸附树脂选自d
‑
101、x
‑
5、hpd
‑
100、d3520、ab
‑
8的一种。
17.所述步骤4中选用30
‑
50wt％的乙醇和20
‑
30wt％的氨水按照重量比100：5
‑
10的混合物作为洗脱液。
18.本发明的另一个目的在于提供一种荨麻生物碱的应用，将所述方法制备得到的荨麻生物碱加入常规辅料，制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、缓释剂，用作促生长类添加剂，应用于动物的饲料中，例如：猪、鸡、羊、鱼等。
19.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
20.本发明提供了一种从荨麻中提取生物碱的方法，操作简单，产率较高，且提取用的n2o作为流体可循环使用，无溶剂残留，且可提供惰性环境，有效避免产物氧化，不会使生物碱有效组分变性，有效的保证了提取得到的生物碱的品质和活性。制备得到的生物碱能够作为促生长类添加剂添加到动物饲料中，促进动物的生长。
具体实施方式
21.为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为了进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制。本发明所有原料，对其来源没有特别限制，在市场上购买的或按照本领域技术人员熟知的常规方法制备的即可。
22.实施例1
23.一种从荨麻中提取生物碱的方法，包括以下步骤：
24.步骤1.将异株荨麻全草洗净晾干粉碎后，过200目标准筛得到荨麻粉末，加入荨麻粉末重量2倍的碱性预处理液，超声处理1min后，过滤晾干得到预处理的荨麻粉末；所述碱性预处理液由30wt％的氨水、甲醇和水按照重量比60：10：50混合而成；
25.步骤2.将步骤1得到的预处理的荨麻粉末与碱性物质氢氧化钙按照重量比100：3混合均匀，加入荨麻粉末重量15％的95wt％的乙醇作为夹带剂，进行超临界n2o提取，提取工艺为：压力为35mpa，温度为40℃，n2o流量为4l/h，萃取时间80min，，将提取物浓缩后得到浓缩液；
26.步骤3.将步骤2得到的浓缩液用0.1mol/l的盐酸溶解过滤后，将过滤液用氨水调节ph值为10，用氯仿萃取4次，合并萃取液后旋蒸得到粗提物；
27.步骤4.将步骤3得到的粗提物用水分散，得到浓度为0.2g/ml的分散液，调节ph值为6，选用大孔吸附树脂d
‑
101进行上柱分离，上柱流速为7bv/h，然后，用水洗脱3bv除去杂质，再用50wt％的乙醇洗脱8bv，洗脱流速2bv/h，收集洗脱液，浓缩干燥，即制备得到荨麻生物碱。
28.实施例2
29.一种从荨麻中提取生物碱的方法，包括以下步骤：
30.步骤1.将狭叶荨麻全草洗净晾干粉碎后，过150目标准筛得到荨麻粉末，加入荨麻粉末重量1.5倍的碱性预处理液，超声处理20min后，过滤晾干得到预处理的荨麻粉末；所述碱性预处理液由25wt％的氨水、甲醇和水按照重量比50：15：50混合而成；
31.步骤2.将步骤1得到的预处理的荨麻粉末与碱性物质碳酸钠按照重量比100：4混合均匀，加入荨麻粉末重量12％的95wt％的甲醇作为夹带剂，进行超临界n2o提取，提取工艺为：压力为30mpa，温度为50℃，n2o流量为3.5l/h，萃取时间70min，，将提取物浓缩后得到浓缩液；
32.步骤3.将步骤2得到的浓缩液用0.2mol/l盐酸溶解过滤后，将过滤液用氨水调节ph值为9，用氯仿萃取3次，合并萃取液后旋蒸得到粗提物；
33.步骤4.将步骤3得到的粗提物用水分散，得到浓度为0.15g/ml的分散液，调节ph值为5.5，选用大孔吸附树脂x
‑
5进行上柱分离，上柱流速为4bv/h，然后，用水洗脱2bv除去杂质，再用40wt％的乙醇洗脱10bv，洗脱流速2.5bv/h，收集洗脱液，浓缩干燥，即制备得到荨麻生物碱。
34.实施例3
35.一种从荨麻中提取生物碱的方法，包括以下步骤：
36.步骤1.将裂叶荨麻全草洗净晾干粉碎后，过100目标准筛得到荨麻粉末，加入荨麻粉末重量2倍的碱性预处理液，超声处理25min后，过滤晾干得到预处理的荨麻粉末；所述碱性预处理液由20wt％的氨水、甲醇和水按照重量比60：20：40混合而成
37.步骤2.将步骤1得到的预处理的荨麻粉末与碱性物质碳酸钾按照重量比100：5混合均匀，加入荨麻粉末重量11％的95wt％的乙醇作为夹带剂，进行超临界n2o提取，提取工艺为：压力为25mpa，温度为60℃，n2o流量为5l/h，萃取时间80min，，将提取物浓缩后得到浓缩液；
38.步骤3.将步骤2得到的浓缩液用0.1mol/l盐酸溶解过滤后，将过滤液用氨水调节ph值为10，用氯仿萃取4次，合并萃取液后旋蒸得到粗提物；
39.步骤4.将步骤3得到的粗提物用水分散，得到浓度为0.1g/ml的分散液，调节ph值为6，选用大孔吸附树脂ab
‑
8进行上柱分离，上柱流速为5bv/h，然后，用水洗脱3bv除去杂质，再用35wt％的乙醇洗脱8bv，洗脱流速4bv/h，收集洗脱液，浓缩干燥，即制备得到荨麻生物碱。
40.实施例4
41.一种从荨麻中提取生物碱的方法，包括以下步骤：
42.步骤1.将粗根荨麻全草洗净晾干粉碎后，过200目标准筛得到荨麻粉末，加入荨麻粉末重量2倍的碱性预处理液，超声处理15min后，过滤晾干得到预处理的荨麻粉末；所述碱性预处理液由30wt％的氨水、甲醇和水按照重量比30：10：50混合而成
43.步骤2.将步骤1得到的预处理的荨麻粉末与碱性物质氢氧化钙按照重量比100：3.5混合均匀，加入荨麻粉末重量12％的95wt％的甲醇作为夹带剂，进行超临界n2o提取，提取工艺为：压力为28mpa，温度为55℃，n2o流量为4l/h，萃取时间70min，，将提取物浓缩后得到浓缩液；
44.步骤3.将步骤2得到的浓缩液用0.05mol/l的盐酸溶解过滤后，将过滤液用氨水调节ph值为10，用氯仿萃取4次，合并萃取液后旋蒸得到粗提物；
45.步骤4.将步骤3得到的粗提物用水分散，得到浓度为0.15g/ml的分散液，调节ph值为6，选用大孔吸附树脂d3520进行上柱分离，上柱流速为6bv/h，然后，用水洗脱2bv除去杂质，再用40wt％的乙醇和20wt％的氨水按照重量比100：10的混合物作为洗脱液洗脱7bv，洗脱流速3bv/h，收集洗脱液，浓缩干燥，即制备得到荨麻生物碱。
46.对比例1
47.选择使用超临界co2流体提取替换超临界n2o流体提取，其余步骤和工艺与实施例3完全一致。
48.对比例2
49.步骤2中不添加碱性物质碳酸钾，其余步骤和工艺与实施例3完全一致。
50.对比例3
51.将步骤3得到的粗提物用水分散，得到浓度为0.1g/ml的分散液，调节ph值为7，其余步骤和工艺与实施例3完全一致。
52.经过测试，实施例1
‑
4和对比例1
‑
3得到的荨麻生物碱的收率和纯度见表1。
53.表1
54.编号实施例1实施例2实施例3实施例4对比例1对比例2对比例3收率/％1.35％1.46％1.42％1.39％1.03％1.25％1.32％纯度/％79.3％80.2％82.4％81.2％81.5％80.4％78.3％
55.从表1的实验数据可以发现，本发明提供的从荨麻中提取生物碱的方法，能够获得纯度和收率高的生物碱，且超临界n2o流体较超临界co2流体更适合从荨麻中提取生物碱，以及在提取过程中施加碱性物质能够提高生物碱的收率。
56.测试荨麻生物碱作为促生长类添加剂的效果，选择健康猪300头，随机分成3组(a、b、c三组，每组100头)，对照组a组喂食普通饲料，试验组b组和c组分别在普通饲料中添加实施例1和实施例3制备得到的荨麻生物碱，所述荨麻生物碱与玉米芯粉按照重量比1：10混合制备颗粒剂，用量为20kg/吨(饲料)，喂食30天后测试，结果见表2。
57.表2
58.测试项目料肉比日增重/g眼积面积/cm2肌内脂肪/％发病率/％a组3.281539.21.813b组2.8990848.32.32c组2.9391348.62.23
59.从表2的试验数据可以发现，荨麻生物碱能够促进猪的生长，降低猪的发病率，可以用作促生长类添加剂使用。
60.本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。