专利名称：虫草菌丝发酵生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种采用人工分离培养方法得到的冬虫夏草菌丝进行深层发酵培养的生产工艺，具体指蝙蝠蛾拟青霉新种Paecilomyces Hepiai Chen et Dai，sp.nov.的深层发酵工艺。
冬虫夏草为名贵中药材，性味甘温，具有滋肺补肾功能。因为它生长在高塞地区，受到气候、地理位置的限制，产量低，采集困难，资源奇缺，价格昂贵，不便于推广应用。近年国内对冬虫夏草菌丝发酵工艺进行了大量的研究，并以发酵工程方法生产虫草菌丝代替天然虫草。从1985年开始广东省微生物研究所、青海省畜牧兽医科学院、浙江省中药研究所先后就冬虫夏草人工培养方法及发酵工艺申请了专利，如中国专利CN85102231A，CN85101971A，CN1031393A。以上专利的不足之处在于药理活性不够广泛，疗效欠佳。
本发明的目的在于提供一种冬虫夏草菌丝深层发酵培养的生产工艺，为研制新药提供一种新的原料药，解决冬虫夏草资源不足问题。
本工艺方法为1.将新鲜的虫草清洗干净后用抗菌素消毒，在灭菌条件下切取薄片置斜面或平板培养基上，在适宜温度下培养，获得菌丝后经多次纯化培养，直到获得纯菌种。将分离得到的纯菌种在冰箱内保存备用。为扩大菌种供液体培养使用，采用灭菌操作将菌种接入茄子瓶斜面培养基上，置培养箱内培养。斜面培养基配方重量百分比为葡萄糖1～3%，蛋白胨0.5～2%，蚕蛹0.5～2%，奶粉0.5～2%，磷酸氢二钾0.1～0.2%，磷酸氢二钠0.05～0.15%，琼脂2～4%，水85～95%。
2.一级发酵或一级种子制备将菌种接入三角瓶内丰富液体培养基中，置往返式摇床振荡培养，培养基成分为葡萄糖、蚕蛹、蛋白胨、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠。
3.二级发酵或二级种子制备一级种子经质检合格后，将其接入种子罐内培养，培养基同上。
4.三级发酵或深层发酵二级种子经质量检查合格后，将其接入三级发酵罐内发酵，接种量5～10%，培养基同上。
5.发酵终止，放罐。当三级发酵到达发酵时间时取样检查，符合发酵终止标准后放罐，过滤将菌丝切片烘干贮存备用。
本发明的特点是1.使用的菌种为蝙蝠蛾拟青霉新种。2.发酵产品的药理活性广泛，药理实验证明使用本工艺生产的菌丝原料药制成口服液经临床实验证明对慢性乙型肝炎、艾滋病等均有较好的疗效。3.培养基中加入蚕蛹，菌丝生长茂盛，不加蚕蛹则不长。
实施例本发明发酵工艺为三级发酵工艺，其流程是1.斜面菌种制备取葡萄糖20克，蚕蛹10克，蛋白胨10克、奶粉10克，琼脂20克，水1000毫升，配制成斜面培养基再接入菌种，在培养箱内于26℃下培养15天制成斜面菌种。
2.摇床培养按上述培养基配方(除牛奶、琼脂外)，制成液体培养基装入500ml三角瓶内，接入菌种，在摇床上振荡培养。
3.发酵培养培养基同摇床，接种量8%，发酵条件温度26℃，罐压0.4kg/cm，空气流量1∶0.5～1，搅拌速度220转/分。发酵时间种子罐50小时，深层发酵罐84小时，经检查达到终止发酵标准时出罐。
4.发酵物的处理将出罐的菌丝体发酵液通过板框过滤，将滤出的菌丝块切片烘干。经检查合格后的干菌丝可作天然虫草代用品。这种发酵虫草菌丝可作营养保健品及药品的原料。
成品的主要化学成分与天然早草基本一致，菌丝为灰褐色或棕褐色干燥薄片，味微苦有香味，PH值4.5～5.5，含水量不超过6.5%，灰分不超过6%，水溶性浸出物不低于30%，尿苷不低于0.06%，腺嘌呤不低于0.003%，尿嘧啶不低于0.02%，甘露醇不低于5%。
权利要求
1.一种采用人工培养的冬虫夏草菌丝蝙蝠蛾拟青霉新种深层发酵的生产工艺，其特征在于菌种发酵培养基中加入了蚕蛹0.5～2%，经摇床培养、种子罐、大罐共三级发酵完成，二、三级发酵接种量为5～10%，质量控制指标为PH值、水分、灰分、尿苷、腺嘌呤、尿嘧啶、甘露醇、水溶性浸出物。
2.根据权利要求1所述的发酵工艺，其特征在于菌种培养的培养基配方重量百分比为葡萄糖1～3%，蛋白胨0.5～2%，蚕蛹0.5～2%，奶粉0.5～2%，Na2HPO40.05～0.15%，K2HPO40.1～0.2%，琼脂2～4%，水85～95%。
3.根据权利要求1所述的发酵工艺，其特征在于一级发酵摇床培养温度为24～28℃，培养时间为60～72小时，摇床转速为110～250转/分。
4.根据权利要求1所述的发酵工艺，其特征在于罐温为24～28℃，罐压为0.5～1kg/cm，空气流量为1∶0.5～1，搅拌速度为200～220转/分，二级发酵时间为48～60小时，三级发酵时间为72～96小时。
5.根据权利要求1所述的发酵工艺，其特征在于发酵菌丝主要化学成分与天然虫草一致，PH值4.5～5.5，含水量小于6.5%，灰分小于6%，水溶性浸出物含量大于30%，尿苷含量大于0.6%，腺嘌呤大于0.003%，尿嘧啶大于0.02%，甘露醇大于5%。
全文摘要
本发明是一种采用人工培养方法对冬虫夏草菌丝进行深层三级发酵的生产工艺。它使用的菌种为蝙蝠娥拟青霉新种Paecilomyees hepiai Chen etDai，sp.nov.发酵工艺为从虫草蝙蝠娥幼虫体上分离得到拟青霉新种的菌丝进行斜面培养→摇床培养(一级发酵)→种子罐培养(二级培养)→大罐三级发酵。发酵条件为罐压0.3～0.5kg/cm
文档编号C12N1/14GK1095103SQ93104709
公开日1994年11月16日 申请日期1993年5月7日 优先权日1993年5月7日
发明者戴如琴, 兰江丽, 李晓明, 邵爱娟, 陈敏, 吴志刚 申请人:中国中医研究院