专利名称：一种枯草芽孢杆菌菌株、制法、制剂及应用的制作方法
技术领域：
本发明首次发现了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的菌株，称作XM16菌株。其制剂属于微生物农药领域，是一种枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisXM16菌株的活菌制剂，用于苹果霉心病、枝干病害等其他病害的防治。
“绿色食品”的生产与消费是世界食品发展的总趋势。我国粮食和果品生产的根本出路是开发大批名优绿色食品满足国民的消费需要，以及打入国际市场。目前高档绿色果品和其它绿色食品在国内外均已经受到越来越多的人们的重视，消费者在不断追求优质绿色食品，因此生产高档绿色食品已经具备了良好的开发背景，与之配套的生产技术，特别是无公害农药的研究开发，就显得越来越重要。其中优良的微生物颉颃菌产品就是其中最重要的方面之一。
本发明的目的在于提供一种对人、蓄无毒，保护生态环境，对苹果霉心病、枝干病害等作物病害有良好防治效果的微生物菌种及其农药产品。1菌株特征XM16菌株属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，来源于(分离部位)苹果果实表面，经中国科学院微生物研究所鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，菌株编号为XM16，菌株菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC No.0372；菌株主要特征是革兰氏染色为阳性、细胞为杆状、细胞直径小于1微米、形成芽孢且位置中生—亚端生、不产生伴孢晶体、接触酶阳性、氧化酶阴性、不利用葡萄糖产气、利用葡萄糖和木糖和L—阿拉伯糖和甘露醇、还原硝酸盐、甲基红试验为阴性、VP试验阳性、VP小于PH6为荫性而大于PH7为阳性、厌氧下不生长、可利用柠檬酸盐、不利用丙酸盐、40-50度能生长、PH5.7生长、在7％的氯化钠液中生长、水解淀粉、液化明胶、分解干洛素和洛氨酸。2菌株的培养方法菌株原种的分离培养培养基配方为蛋白冻2-10克、蔗糖20-30克、琼脂15-20克、无离子水1000毫升；液体培养配方为培养基配方为蛋白冻2-10克、蔗糖20-30克、无离子水1000毫升；培养条件为PH值6-8，温度25-30度，培养时间为72小时。生产菌种的培养淀粉和蔗糖为主要原料，配比为淀粉85-95份、蔗糖15-5份配制成培养基，在25-35度下发酵培养3天。3菌株的制剂粉剂经发酵培养的生产菌种，干燥后粉碎成粉；可湿性粉剂按重量比原菌粉1-99份、加入99-1份的膨润土和高岭土(重量比为10-90∶90-10)，配制而成。4菌株对植物病害的防治应用为表明本发明菌株的制剂产品，对苹果霉心病和枝干病害等植物病害的防治效果，按常规的植物病害防治方法进行了室内和田间的药效试验，下面对病害应用的试验结果。4.1 XM16菌株的制剂产品对苹果霉心病等病害病原的抑制作用为了测定枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的XM16菌株，对苹果霉心病等真菌病原的抑制效果，采用室内PDA(马铃薯200克、蔗糖30克、琼脂15克、水1000毫升)的常规生物检测方法，即把XM菌株加入40度的PDA培养基中，接种4-5mm大小的病原菌体块，27度下培养5天，测量菌落生长情况。计算抑菌效果。试验结果表明，在含有枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的XM16菌株的培养基上，所有测定的病原菌丝体均无任何生长，菌落直径为0mm，而不含XM16菌株的空白对照的病原，生长良好，菌落直径为40-50mm。因此，室内测定XM16菌株对苹果霉心病主要病原Alternaria alternata、Trichothecium roseum和Fusarium sp.的抑制率均为100％；对苹果轮纹病Physalospora piricola or(Macrophoma kuwatsukai)、腐烂病Valsa mali和干腐病Botryosphaerla ribis病原的抑制作用也为100％；其它病原还有腐霉病菌(Pythium sp.)、番茄(马铃薯)早疫病(Alternaria solani)、苹果斑点病害(Alternaria mali)、梨黑斑病(Alternaria kikuchiana)、棉花腐病(瓜类猝倒病)(Pythium aphanidermatum)、棉立枯(Rhizoctoniasolani)、疫病(Phytophthora sp.)、枯萎病(Fusarium sp.)、小麦赤霉病(Gibberella zeae or Fusarium graminearum)、小麦全蚀病(Ophiobolusgraminis)、番茄灰霉病(Botrytis cinerea)、青霉菌(Penicillum)、黑根霉菌(Rhizopus)，XM16菌株及其制剂产品对上述病原的抑制效果均为100％。4、2对苹果霉心病的防治效果1997年在莱阳农学院教学农场果园进行了小区试验；1998年在上一年试验的基础上，在莱阳市七里地沟村和莱州市农业局农场果园分别设立了试验防治基地，根据对苹果霉心病发生规律的研究，进一步制定了利用XM16菌株的粉剂处理花粉粒，进行人工授粉，以及幼果期喷使XM16菌株的可湿性粉剂的处理方案(CL1)；设于花期和幼果期对应使用多效灵500倍液为CL2；同时设不处理的空白对照(CL3或ck)。随机取3株10年生的树体，每株分东、西两部分，各为一个处理，重复4次。通过定期对处理果实的随机取样检测，调查病果率和潜带病菌果率，确定防治效果。并在全省建立了6个试验示范基地，进行推广试验。
1997年小区试验结果表明，XM16菌株处理的元帅系和北斗，果实成熟期的病果率分别为8.5％和9.8％，均低于10％，而空白对照的分别为45.5％和48.0％，化学防治的发病率分别为31.7％和37.5％。
1998年试验后，每隔30d左右对莱阳市和莱州市两点的试验结果分别进行调查，结果发现两点的试验结果基本一致。其中采用XM16生物防治处理(CL1)的元帅系和北斗，果实成熟期的病果率分别为3.0％、5.5％和9.6％、8.1％，而空白对照的分别为39.5％、40.2％和44.1％、41.4％。表1为4个试验基地大田防治的试验结果。
表1苹果霉心病生物防治多点试验的结果
4、3对苹果枝干病害的防治于1997年的3月中旬，采用XM16菌株的可湿性粉剂产品，涂抹或喷雾10年生红富士树体发生轮纹病的枝干、腐烂病病斑。设清水对照。每处理6株树，重复3次。处理后连续观察到12月份，记录试验结果。
试验结果表明，各处理的树干的轮纹病病斑数量明显少于空白对照。其中到12月份调查的病瘤数为23.5个，而对照为160.5个，防治效果为89.1％。对苹果腐烂病的防治，处理的病斑全部治愈，防治效果为100％，而对照的发生严重。
表2为XM16菌株对苹果枝干轮纹病的防治结果
>4、4对小麦白粉病的防治效果于1998年5月上旬，采用XM16菌株可湿性粉剂喷雾小麦苗，以20％三唑酮(粉锈宁)可湿性粉剂和喷清水为对照。每小区面积为60平方米，每处理5个小区，共15个小区，随机排列。用药后10天每处理随机调查50株，调查病情指数，计算防治效果。
XM16菌株处理的小麦小区，白粉病发生轻微，且麦苗叶片浓绿，植株健壮；而粉锈宁药剂处理小麦白粉病发生也较轻，但麦苗叶片淡黄，生长势较差；空白对照的白粉病发生严重。其病情指数分别为10.0、6.9和66.4，XM16菌株的防治效果为84.9％，而粉锈宁的防治效果为89.6％，两个处理的防治效果近似。
表3 XM16对小麦白粉病的防治效果
综上所述，XM16菌株及其制剂对苹果霉心病的主要病原，以及多种植物病害的病原的抑制效果均良好；田间利用XM16菌株及其产品对苹果霉心病防治的病果率可控制在7.5％以下，因此可控制苹果霉心病的发生与危害；对苹果枝干病害和小麦白粉病的防治效果也非常理想；应尽快进行XM16菌株产品的开发和推广应用。
权利要求
1.一种枯草芽孢杆菌菌株，其特征在于XM16菌株属于枯草芽孢杆菌，分离部位为苹果果实表面，由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCC No.0372。
2.一种枯草芽孢杆菌菌株的制法，其特征在于通过蛋白冻2-10克、蔗糖20-30克、琼脂15-20克、无离子水1000毫升，进行分离培养；或蛋白冻2-10克、蔗糖20-30克、无离子水1000毫升，进行液体发酵；培养条件为PH6-8，温度25-30度，培养时间为72小时；以淀粉和蔗糖为主要原料，配比为淀粉85-95份、蔗糖15-5份配制成培养基，在25-35度下发酵培养3天，进行菌株原菌粉的生产。
3.一种枯草芽孢杆菌菌株的制剂，其特征在于生产菌株的培养物粉碎后为粉剂；原菌粉1-99份与99-1份膨润土和高岭土(重量比为10-90∶90-10)，配制成可湿性粉剂；其中枯草芽孢杆菌XM16菌株原菌粉中的活菌数不低于100亿个孢子/克。
4.一种枯草芽孢杆菌菌株的应用，其特征在于用于防治苹果霉心病、枝干病害等植物真菌病害的防治。
全文摘要
一种枯草芽孢杆菌菌株、制法、制剂及应用,菌株来源于苹果果实表面,为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),编号为XM16,菌种保藏编号为CGMCC No.0372;以蛋白质、淀粉和蔗糖为主要原料,进行分离培养和菌体生产;原菌培养物粉碎后即为粉剂,或原菌粉1—99份与99—1份膨润土及高岭土混合,配制成可湿性粉剂;用于苹果霉心病和枝干病害等作物真菌病害的防治;本发明原料易得,成本低,易于实施,可大批量生产和推广应用。
文档编号C12N1/20GK1255541SQ98124889
公开日2000年6月7日 申请日期1998年12月3日 优先权日1998年12月3日
发明者辛玉成 申请人:辛玉成