一种抗氧化的组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种抗氧化的组合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 人体衰老是一个生物学变化过程，由遗传基因和复杂的内外环境等多种因素相互 作用引起，是生命周期中按照自然发展的规律发生在人体内、器官、组织细胞的形态和功能 的变化过程，表现为一系列随时间增龄而显示的全身整体性、渐进性、衰退性和不可逆的集 体变化和功能紊乱。研宄认为，机体的衰老是生理性的，是机体生理学和解剖学方面出现衰 退变化以及对体内外环境的适应能力下降和代偿力减退。
[0003] 自由基学说认为：机体氧化衰老的原理之一，机体抗氧化防御系统中的各种抗氧 化酶和小分子非酶抗氧化剂与自由基的产生在正常情况下处于动态平衡状态，研宄发现机 体随年龄的增长，自由基过剩或抗氧化剂缺乏时细胞膜中的不饱和脂肪酸被产生的自由基 损害，引起脂质过氧化反应并对生物膜造成极大的破坏，使生物膜不饱和脂肪酸过氧化和 膜功能受损双层结构得到破坏以及细胞器功能产生障碍，继而损伤蛋白质、脂质等生物大 分子。在衰老有氧代谢过程中，由于自由基水平不断增加使机体的抗氧化能力下降，细胞毒 性不同程度增加造成结构瞬间的不可逆改变损伤，环境外界刺激及线粒体、脂肪酸均可产 生超氧阴离子、过氧化氢、羟自由基等各种过氧化因子，可以触发生理性信号通路，诱导细 胞内过氧化和细胞凋亡，加速推进衰老进程。最终，氧化衰老和细胞凋亡共同导致机体产生 衰老相关的退行性疾病。
[0004] 越来越多的研宄显示抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或氧化剂会将细 胞和组织分解，影响代谢功能，并会引起不同的健康问题。如果能够消除过多的氧化自由 基，对于许多自由基引起的及老化相关疾病都能够预防。例如：医学研宄已经发现氧化应激 与临床上许多疾病的发生、发展相关而与年龄无关的渐进性退变。例如：常见的癌症、动脉 硬化、糖尿病、白内障、心血管病、老年痴呆、关节炎等，这些疾病都被认为与自由基相关。
[0005] 现有的抗氧化剂主要有SOD、原花青素等，其中：超氧化物歧化酶 Orgotein (Superoxide Dismutase, SOD)，别名肝蛋白，是一种源于生命体的活性物质，能消 除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效 果。葡萄籽提取物的主要功效成分为"原花青素0PC"，具有良好的抗氧化效果，是维生素C 和维生素E的50~70倍。超强的抗氧化效率具有清除自由基、提高人体免疫力的强力效 果。但是，这些抗氧化剂作为保健品服用后效果却不甚显著。
【发明内容】
[0006] 有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种抗氧化的组合物及其制备方 法。本发明提供的组合物具有显著的抗氧化功能。
[0007] 本发明提供了一种抗氧化组合物，包括苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡 萄籽提取物。
[0008] 其中，苹果干细胞具有良好的抗氧化功能，本发明将苹果干细胞冻干粉、超氧化物 歧化酶与葡萄籽提取进行复配后能够具有显著的抗氧化功能，实验表明，本发明提供的组 合物的抗氧化效果显著优于单独使用超氧化物歧化酶或葡萄籽提取物，经为期3个月的人 体试食试验研宄，使用本发明组合物的人体内过氧化脂质下降4. 96%、谷胱甘肽过氧化物 酶升高12. 97%，其效果显著优于单独使用SOD或葡萄籽提取物。
[0009] 在本发明实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量 比为（10 ~20) : (8 ~15) : (8 ~15)。
[0010] 在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比 为 5 :4 :4〇
[0011] 在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比 为 10 :8 :15〇
[0012] 在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比 为 10 :15 :8〇
[0013] 在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比 为 2 :3 :3〇
[0014] 在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比 为 5 :2 :2〇
[0015] 在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比 为 20 :8 :15。
[0016] 在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比 为 20 :15 :8。
[0017] 在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比 为 4 :3 :3〇
[0018] 本发明采用的葡萄籽提取物可为自制也可为市场直接购得，本发明对其不做限 定，其实施皆在本发明的保护范围之内。
[0019] 作为优选，葡萄籽提取物中原花青素的含量不低于95%。
[0020] 本发明采用的苹果干细胞冻干粉可为市场购得也可采用本发明提供的方法制备， 其实施皆在本发明的保护范围之内。作为优选，苹果干细胞冻干粉以本发明提供的方法制 得，该方法以苹果新生枝条为原料，经诱导形成愈伤组织后增殖培养并扩大培养获得苹果 干细胞，再冻干后制得。该苹果干细胞冻干后直接用于本发明提供组合物的制备，该冻干粉 中黄酮和多酚类物质含量丰富。
[0021] 苹果干细胞冻干粉的制备方法包括以下步骤：
[0022] 步骤1 :苹果新生枝条杀菌、去除木质部和髓后，接种于诱导培养基，诱导培养获 得形成层细胞；
[0023] 步骤2 :所述形成层细胞经继代培养，接入增殖培养基，摇床培养获得单细胞；
[0024] 步骤3 :将所述单细胞接种于增殖培养基经扩大培养，获得苹果干细胞；
[0025] 步骤4 :将所述苹果干细胞反复冻融后冻干、粉碎，获得苹果干细胞冻干粉；
[0026] 所述诱导培养基为含有NAA、BA和水解酪蛋白的MS固体培养基；
[0027] 所述增殖培养基为含有2, 4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的MS液体培养基。
[0028] 在本发明的实施例中，杀菌包括以下步骤：
[0029] 步骤1 :将苹果新生枝条以水冲洗后，以浓度为10~1000mg/L的L-抗坏血酸溶 液浸泡；
[0030] 步骤2 :以体积分数为60 %~95 %的乙醇水溶液浸泡后以无菌水冲洗；
[0031 ] 步骤3 :以体积分数为10%~100%的过氧化氢水溶液浸泡后以无菌水冲洗。
[0032] 作为优选，苹果新生枝条的长度为10cm。
[0033] 作为优选，L-抗坏血酸的浓度为120mg/L。
[0034] 优选的，步骤1中所述浸泡的时间为Imin。
[0035] 作为优选，乙醇水溶液中乙醇的体积分数为75%。
[0036] 优选的，步骤2中所述浸泡的时间为Imin。
[0037] 作为优选，步骤2中无菌水的体积为2L。
[0038] 作为优选，过氧化氢水溶液中过氧化氢的体积分数为30%。
[0039] 优选的，步骤3中所述浸泡的时间为20min。
[0040] 优选的，步骤3中所述冲洗的时间为IOmin。
[0041] 以本发明提供的杀菌方法对苹果新生枝条进行杀菌能够充分的杀除苹果新生枝 条上所携带的真菌、细菌或病毒。以便保证苹果新生枝条在培养过程中不被干扰，从而保证 苹果新生枝条上的细胞更加快速的去分化。而实验表明，本发明提供的方法能够有效将苹 果新生枝条细胞去分化，经诱导和扩大培养，48天左右即可获得大量的苹果干细胞。
[0042] 在本发明实施例中，NAA、BA和水解酪蛋白的质量比为0.5 :2 :1。
[0043] 优选的，诱导培养基中NAA的浓度为0. 5mg/L。
[0044] 优选的，诱导培养基中BA的浓度为2. Omg/L。
[0045] 优选的，诱导培养基中水解酪蛋白的浓度为1.0 mg/L。
[0046] 作为优选，诱导培养基为固体培养基，其中琼脂的质量分数为1%。
[0047] 作为优选，诱导培养基的pH值为6. 0。
[0048] 在本发明的实施例中，步骤1中所述的接种为，每g去除木质部和髓的苹果新生枝 条接种于IOcm 2的诱导培养基。
[0049] 在一些实施例中，诱导培养为暗培养；温度为25°C ;时间为10天。
[0050] 经诱导培养后，形成层组织为均一生长的平板状组织，而其他组织则为不规则的 聚集生长物。
[0051] 在一些实施例中，继代培养为暗培养；温度为25°C ;时间为10天。
[0052] 在本发明的实施例中，继代培养采用遇到培养基，每g形成层细胞接种于IOcm2的 诱导培养基。
[0053] 经10天的继代培养，形成层细胞形成愈伤组织，每IOcm2的诱导培养基上约有愈 伤组织20. 8g。
[0054] -些实施例中，增殖培养基中，2, 4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的质量比为 2:1:1:1〇
[0055] 优选的，增殖培养基中2, 4-D的浓度为2. 0mg/L。
[0056] 优选的，增殖培养基中BA的浓度为I. 0mg/L。
[0057] 优选的，增殖培养基中水解酪蛋白的浓度为I. 0mg/L。
[0058] 优选的，增殖培养基中活性炭的浓度为I.Omg/L。
[0059] 作为优选，增殖培养基的pH值为6. 0。
[0060] 在本发明的实施例中，每g愈伤组织接入20mL增殖培养基。
[0061] 作为优选，摇床培养时，增殖培养基中还添加经灭菌