一种利用冷冻浓缩方式脱除花生粕蛋白肽色素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种多肤提纯方法，具体设及一种利用冷冻浓缩方式脱除花生巧蛋白 肤色素的方法。
【背景技术】
[0002] 多肤一般指由多个氨基酸用肤键互相连接构成的长链物质，是蛋白质水解的中间 产物，不仅具有优良的吸收机制，同时也具有蛋白质或氨基酸所没有的生理功能，如抗氧化 和降高血压等特性。
[0003] 近年来发现，几乎所有生命科学的重大理论，如免疫防御、生殖控制、肿瘤病变、抗 衰防老等都设及有关的活性肤。一般来说多肤在人体处于一种平衡状态，若活性肤减少后， 人体的机能可能会发生不良变化，因此需要补充肤的摄入。目前多肤的制备方法主要有提 取法、合成法和水解法。直接提取法多适用于实验室在进行理论研究时的定性研究手段。合 成法包括了化学合成、DNA重组和酶合成，该法产物纯度较高，但成本高、副反应多，难W实 现大规模生产。水解法分为化学水解法和生物酶水解法，生物酶解法因具有生产条件溫和， 水解过程可控，肤得率高W及安全的优势，逐渐取代了传统的化学法，成为制备多肤的常用 方法。
[0004] 饮食上，蛋白质主要存在于瘦肉、蛋类、豆类及鱼类中。而蛋白粉作为重要的营养 补充剂其全球销售额于2010年已经突破180亿美元大关，在膳食营养剂中占有重要的地 位。在我国，蛋白质属于紧缺物质，主要蛋白质原料仍然依靠进口，如鱼粉约70%需要进口， 生产豆巧的大豆约70 %需要进口，构成蛋白质的基本单元一一合成氨基酸50 %W上需要进 P。
[0005] 相比于糖类、油脂等其他营养素，蛋白质不仅需求量巨大而且来源相对较少、提取 工艺相对复杂，因此其生产成本普遍较高。从来源来讲，蛋白质可W分为动物蛋白和植物蛋 白，动物蛋白主要来源于禽、畜、鱼类和昆虫等的肉、蛋、奶；植物蛋白主要来源于豆类、谷物 类植物中。一般说，植物蛋白和动物蛋白主要存在氨基酸组成和数量上的不同，植物蛋白普 遍存在限制性氨基酸，导致了植物蛋白的营养不均衡性。但是植物蛋白具有来源广泛、提取 方法简单等优势，可W通过人为添加限制性氨基酸来弥补植物蛋白的劣势，因此合理开发 植物蛋白可W有效缓解蛋白质供不应求局面、降低蛋白生产成本。
[0006] 例如，市面上常见的乳清蛋白和酪蛋白属于动物蛋白，在牛奶中只占0.7%和 2. 8%，是从牛奶中分离提取出来的珍贵蛋白；植物蛋白主要为大豆蛋白、花生蛋白、玉米蛋 白和面筋蛋白等，来源广泛且蛋白含量可W高达30~50%，主要通过碱溶酸沉提取，工艺 相对简单高效。
[0007] 花生是全球最重要的四大油料作物之一，我国50-60%的花生用于棒油，棒油后所 得花生巧为富含蛋白质的营养基料，其蛋白含量高达40-50%，氨基酸组成比较合理，接近 联合国粮农组织（FA0)和世界卫生组织（WHO)的推荐值。目前我国用于棒油的花生仁基本 不去衣，而花生衣中含有较多的色素，所W棒油后的花生巧呈黄褐色，导致利用此类花生巧 生产出来的多肤普遍呈深褐色，从而限制了其利用和发展。
【发明内容】
[0008] 为了克服现有的花生巧蛋白多肤颜色普遍偏深的缺陷，本发明的目的在于提供一 种利用冷冻浓缩方式脱除花生巧蛋白肤色素的方法，该方法采用蛋白酶和纤维素酶的联合 作用释放花生巧多肤，再结合冷冻法和超滤手段高效制备色泽较浅的、高品质的花生蛋白 肤产品。
[0009] 本发明的目的通过下述技术方案实现：
[0010] 一种利用冷冻浓缩方式脱除花生巧蛋白肤色素的方法，包括W下步骤：
[0011] (1)花生巧酶解产物的制备：按重量取1份花生巧和5-10份去离子水揽拌混合， 并过胶体磨得到花生巧浆液；然后加入蛋白酶和纤维素酶，在50~60°C的条件下进行酶 解，当水解度达到20-25%时，灭酶，离屯、分离，收集上清液得到花生巧酶解产物；
[0012] (2)蛋白肤色素的脱除：真空浓缩花生巧酶解产物至固形物含量为30-50%，在低 溫条件下静置冷冻，花生巧酶解产物自然分层，去除表面色素层，取下部蛋白层解冻，再通 过膜通量为10000化的超滤膜，收集透过液，进行喷雾干燥，得到色泽较浅的高品质花生巧 蛋白肤广品；
[0013] 步骤（1)所述花生巧为油脂含量不超过10%的高溫压棒和/或溶剂提油后的带衣 花生饼/巧；
[0014] 步骤（1)所述的蛋白酶为W下的一种：
[0015] A、为中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、Alcalase2.化或碱性蛋白酶中的一 种W上，酶解体系初始抑值为6. 0~8. 0 ;
[0016] B、为胃蛋白酶，酶解体系初始抑值为2. 0~4. 0 ;
[0017] C、所述的蛋白酶由米曲霉发酵产生；
[0018] 蛋白酶总添加量为花生巧质量的0. 5~1. 5% ;
[0019] 所述的纤维素酶为食品级纤维素酶或复合植物水解酶，添加量为花生巧质量的 1.0-2.0% ；
[0020] 步骤似所述的低溫为-18°CW下；所述的冷冻是冷冻24小时W上；
[0021] 步骤（2)所述超滤流量不超过70血/min,进口压力不超过lOpsi，出口压力不超过 7psi;
[0022] 本发明所述的离屯、采用常溫离屯、，一般为5000-8000r/min保持15-30min。
[0023] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0024] (1)本发明通过现代生物酶解技术降解花生巧蛋白，通过对水解酶具体选择和水 解的控制，实现可控酶解，提高原料利用率，降低生产成本，最大程度释放花生巧中的多肤 组分。
[0025] (2)本发明采用静置冷冻法和超滤法联合作用，可W高效去除花生蛋白肤产品中 色素，在高效分离提纯花生巧多肤的同时，也廉价获得浓缩的花生衣色素。
[00%] (3)本发明工艺操作简单、生产成本低、没有任何污染、蛋白回收率高，所得蛋白多 肤类物质，可广泛应用于食品领域中。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0028] 实施例中的有关试验指标测定方法如下：
[0029] 粗蛋白的测定：
[0030] 凯氏定氮法测定/GB5009. 5-85。
[0031] 游离氨态氮含量的测定：
[0032] 采用甲醒电位滴定法测定样品的游离氨态氮含量，W蒸馈水为空白对照，取0. 5g 样品，加入蒸馈水至80g，W0.Imol/L的化OH滴定至抑8. 2,加入10血甲醒，继续滴定至 pH9.2,得空白对照组和样品加入甲醒后消耗的化0H体积V。及Vi。产物的游离氨态氮含 量为：
[0033] 游离氨态氮含量=(Vi-Vo)XO. 7
[0034] 肤含量的测定：
[0035]取2ml酶解液（蛋白含量约20mg/ml)，加入等体积的10 %的TCA溶液，混合均匀 后静置30min，然后4000r/min条件下离屯、lOmin，取上清液分别测定总氮含量和游离氨氮 含量。则肤含量为：
[0036] 肤含量=(酸溶蛋白含量-游离氨基酸）/总蛋白含量X100% (GB/T22492-2008)
[0037] 总黄酬的测定： 阳03引用浓度为0.Imol/L的化0H溶液配制Img/ml的蛋白样品溶液，充分振荡混匀，lOOOOg离屯、15min，于328皿处测定吸光度（总多酪）。多酪含量芦下当量/100样 品"为单位，通过W芦下为标样的标准曲线进行换算。
[0039] 0RAC的测定： W40] 0RAC反应在75mmol/L憐酸盐缓冲液（pH= 7.4)环境中进行，FL(巧光素钢 盐）、AAPH(自由基产生剂）、标准抗氧化物质TroloxW及待测样品均用该缓冲液溶解和 稀释。具体测定操作为：在96孔板各微孔中分别加入待测样品20y1后添加缓冲溶液 20y1及化(70nmol/L)20yL在37°C下预置15min后，用多道移液器迅速在各孔中加入 AAPH(12. 8mmol/L) 140yL启动反应，并将微孔板置于巧光分析仪中在37°C下W激发波长 485nm，发射波长528nm进行连续测定，每2min测定一次各孔巧光强度，测定lOSmin，巧光 强度分别记为f。，fi，f2…片4。将记录的各微孔不同时间点的绝对巧光强度数据与初始 巧光强度f。相比，折算成相对巧光强度，并根据W下公式统计巧光焰灭曲线下面积（AUC sample)值。
[0041] 色差值的测定： 阳0创定量移取2血酶解液用于测定L*，a*，b*值，W水做空白对照。S次测定取平均 值。按如下公式计算相应参数：
[0043] 总色差AE= (AL*2+Aa*2+Ab*2) 1/2
[0044] 饱和度C