一种增加茶叶及其加工产品中egcg含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及茶叶加工的技术领域，尤其设及一种增加茶叶及其加工产品中EGCG含 量的方法。
【背景技术】
[0002] 茶叶在植物分类系统中属于山茶科，是一种重要的饮料作物，与咖啡、可可并称为 世界=大饮料。茶叶中含有多种人体必需的营养成分如茶多酪、咖啡碱、氨基酸、茶色素、茶 多糖等，运些成分具有较高的营养价值、药用作用及保健功能。其中，茶多酪是茶叶中的一 组多酪类化合物，约占茶叶干重的20 %~38%，组成成分包括黄烧醇类化合物、缩酸及缩酪 类物质等。W儿茶素为主的黄烧醇类化合物占茶多酪总量的70~95%。其中EGCG(表没食子 儿茶素没食子酸醋）是儿茶素类化合物中的一种主要醋型儿茶素（约占儿茶素类总量的 50 %~60 % )，是茶叶中茶多酪的主要组成成分，是儿茶素中活性最高、含量最多的功能成 分。如，研究表明，EGCG是清除自由基、抗氧化能力最强的一种儿茶素。茶叶中儿茶素抗氧化 活性强度的顺序依次为:66〔6〉6606〔6〉6。此外，66〔6能够预防和治疗屯、脑血管疾病;能够 增强免疫系统功能;抑制肝脂和胆固醇的增长;抑制肿瘤的生长;对频疾、伤寒、金黄色葡萄 球菌等细菌也有极强的抑制作用。现已被列为潜在的抗癌药物在中美等国被研究。
[0003] 在茶叶及其提取物加工过程中，加热、氧化、酶分解和微生物发酵等常引起茶叶中 EGCG的含量大量减少。Bra壯iel加开究发现，茶叶经过长时间高溫作用，其所含的EGCG会发 生差向异构化作用，生成GCG; Yoku研究发现，用pH在6~8的水溶液提取绿茶，其EGCG含量显 著降低，C、GCG等反式异构体增加。另外，茶叶中的EGCG在单宁酶作用下可发生水解而生成 EGC和GA,在漆酶作用下EGCG发生氧化反应而降低。有鉴于此，本发明人研究和设计了一种 增加茶叶及其加工产品中EGCG含量的方法，本案由此产生。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种增加茶叶及其加工产品中EGCG含量的方法，通过向茶 叶或其提取物中添加酶进行反应而增加其EGCG的含量。
[0005] 为实现上述目的，本发明解决其技术问题的技术方案是：
[0006] -种增加茶叶及其加工产品中EGCG含量的方法，包括W下步骤：
[0007] 步骤一、培养基的制备:所述培养基按W下质量百分百的组分组成:0.5~70%的 碳源，0.05%的氯化钟，0.0 l %的屯水合硫酸儀，0.1 %的巧樣酸=钢二水合物，0.1 %的无 水巧樣酸，0.1 %的酵母提取物，0.1 %的干酪素水解物，用IM的HCl把抑调到4.0;每个250mL 锥形瓶中加入25mL培养基，121°C高压蒸汽灭菌20min;
[000引步骤二、发酵制备酶液:培养基冷却后接种曲霉抱子悬液，所述抱子悬液抱子含量 为1 X IO8个/ml，在30°C条件下培养4~6天，提取酶液;对于液态发酵，发酵液直接过滤去除 菌体即可得到粗酶液;对于固体培养基，发酵后向培养基中加入pH 7.0的憐酸盐缓冲液，在 20°C条件下，振荡速度18化pm浸提化，过滤去除菌体得到粗酶液；
[0009] 步骤=、用酶处理茶叶或者茶叶提取物：向茶叶或者茶叶提取物中加入所述酶液， 在固水比为1:5~1:30,溫度10°C~70°C下进行酶反应；
[0010] 步骤四、测定EGCG含量变化:采用液相色谱-质谱联用仪测定茶样品中EGCG的含 量;其中，色谱柱NucIeodur PFP规格为250 X 4.6mm;柱溫35 °C ;流动相A: 0.1 %甲酸水溶液； 流动相B:0.1 %甲酸乙腊溶液，洗脱梯度:O-Imin，95%A和5%的B，l-6min，85%A和15%的 B，6-20min，70 %A和30 % 的B，20-25min，95 %A和5 % 的B;进样量5.0化，色谱流速0.5ml/ min;质谱所用的离子源为Agilent Jet Stream ESI,负离子模式采集;干燥气溫度300°C， 干燥气流速101/min，雾化气压力45psi，銷气溫度350°C，銷气流速121/min，毛细管电压 3000V，喷嘴电压500V。
[0011] 作为实施例的优选方式，所述碳源为果胶，所述果胶的质量百分含量为0.5%~ 2%。
[0012] 作为实施例的优选方式，所述碳源为麦教，所述麦教的质量百分含量为2%~ 70%。
[0013] 作为实施例的优选方式，所述碳源为薦糖，所述薦糖的质量百分含量为1%~4%。
[0014] 本发明采用上述技术方案后，采用的培养基虽为常规培养基，但原料易得，成本 低，结合本发明的酶处理工艺，可显著提高茶叶及其提取物中EGCG的含量，相对于现有技术 的加工方法，做到了真正"物美价廉"的有益效果。
【具体实施方式】
[0015] 本发明实施例中W黑曲霉进行发酵制备酶液提高茶叶中EGCG的含量为例说明本 发明的工艺，但本发明不仅限用于增加茶叶中EGCG的含量，也适用于茶叶或添加了茶叶或 其提取物的加工产品。
[0016] 采用液相色谱-质谱联用仪测定茶样品中EGCG的含量；其中，色谱柱Nucleodur PFP(250 X 4.6mm，5皿，Macher巧-nage 1);柱溫35°C ;流动相A: 0.1 %甲酸水溶液；流动相B: 0.1%甲酸乙腊溶液，洗脱梯度：0-lmin，95%A和5%的B，l-6min，85%A和15%的B，6-20min，70 % A和30 % 的B，20-25min，95 %A和5 % 的B;进样量5.0化，色谱流速0.5ml/min。质 谱所用的离子源为Agilent Jet S化earn ESI，负离子模式采集;干燥气溫度300°C，干燥气 流速101/min，雾化气压力45psi，銷气溫度350°C，銷气流速121/min，毛细管电压3000V，喷 嘴电压500V。
[0017]实施例1:
[001引步骤一、制备0.5 %果胶培养基：培养基组成为:0.5 %的果胶，0.05 %的氯化钟， 0.01 %的屯水合硫酸儀，0.1 %的巧樣酸=钢二水合物，0.1 %的无水巧樣酸，0.1 %的酵母 提取物，0.1 %的干酪素水解物，用IM的肥1把抑调到4.0。每个250mL锥形瓶中加入25血培养 基，121°C高压蒸汽灭菌20min。
[0019] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL黑曲霉抱子悬液（1 X IO8个/ml)， 在30°C条件下(振荡速度18化pm)培养4天，过滤去除菌体得到粗酶液。
[0020] 步骤S、酶反应:称取lg(±lmg)粉状乌龙茶样品（过20目筛），加入5mL上述酶液W 及35mL水(对照茶样品加入5mL灭活的酶液及35mL水)振荡摇匀；10 °C水浴下反应60min，沸 水浴5min，过滤茶汤，并洗涂茶渣，定容至50mL。
[0021] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 520.3mg/L，对照茶样品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[0022] 实施例2:
[0023] 步骤一、制备1 %果胶培养基：培养基组成为：1.0 %的果胶，0.05 %的氯化钟， 0.01 %的屯水合硫酸儀，0.1 %的巧樣酸=钢二水合物，0.1 %的无水巧樣酸，0.1 %的酵母 提取物，0.1 %的干酪素水解物，用IM的肥1把抑调到4.0。每个250mL锥形瓶中加入25血培养 基，121°C高压蒸汽灭菌20min。
[0024] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL黑曲霉抱子悬液（1 X IO8个/ml)， 在30°C条件下(振荡速度18化pm)连续培养4天，过滤去除菌体可得到粗酶液。
[0025] 步骤S、酶反应:称取lg(± Img)粉状乌龙茶样品（过20目筛），加入IOmL上述酶液 W及30mL水（对照茶样品加入IOmL灭活的酶液及30mL水），振荡摇匀；25°C水浴下反应 60min，反应结束后沸水浴5min，过滤茶汤，并洗涂茶渣，定容至50mL。
[0026] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 568.7mg/L，对照样茶品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[0027] 实施例3:
[002引步骤一、制备1.5 %果胶培养基：培养基组成为：1.5 %的果胶，0.05 %的氯化钟， 0.01 %的屯水合硫酸儀，0.1 %的巧樣酸=钢二水合物，0.1