一种复合益生菌培养物及其制备方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种复合益生菌，具体地说是一种复合益生菌培养物及其制备方法，属于复合益生菌领域。
【背景技术】
[0002]作为优质膳食蛋白质来源，牛奶及其制品在我国的消费量一直保持较高速度增长，而我国奶牛养殖业在规模和水平上也得到不断的发展与提高。但是，在奶牛单产、养殖成本等方面与畜牧业发达国家相比还存在相当大的差距，提高奶牛产奶量、降低每千克牛奶成本成为我国各型牧场的普遍需求。奶牛养殖中饲料成本占总成本的60%以上，因此通过改善奶牛消化机能，提高其采食量与饲料消化率，成为提高奶牛产奶量、降低生产成本的有效方式。
[0003]瘤胃是奶牛及其他反刍动物最主要的消化器官，其中的瘤胃微生物真正起到消化作用，瘤胃微生物的组成、数量与活性均直接影响饲料的采食和消化。通过促进瘤胃内氧气消耗、改善瘤胃PH、补充瘤胃微生物生长必需的生长因子，可有效的促进瘤胃微生物特别是纤维降解菌和乳酸利用菌的数量和活性、减少瘤胃内氨态氮，提高奶牛对饲料中能量和粗蛋白的利用率，提高奶牛产奶量，降低养殖成本。因此，发明一种具有上述功能，且绿色、安全、成本相对低廉的奶牛用饲料添加剂产品，对提高奶牛养殖场养殖效益，乃至促进我国奶牛养殖业的发展具有积极意义。
【发明内容】
[0004]为了解决上述问题，本发明设计了一种复合益生菌培养物及其制备方法，能够提高奶牛饲料消化率、提高产奶量、降低养殖成本。
[0005]本发明的技术方案为:
一种复合益生菌培养物，由以下重量份数的原料制备而成:
豆柏粉3.7-5.0kg，玉米蛋白粉2.5-3.5kg，玉米粉9.0-10.5kg,麸皮16.0-19.5kg,次粉
9.0-11.5kg，糖蜜 4.5-6.5kg，复合益生菌菌液 3.4-5.2kg，水36.0-55.0kg。
[0006]优选地，由以下重量份数的原料制备而成:豆柏粉4.5kg，玉米蛋白粉3kg，玉米粉1kg，麸皮18kg，次粉10.5kg，糖蜜5kg，混合益生菌液4kg，水45kg。
[0007]豆柏粉提供微生物生长所需氮源，作用是促进益生菌体生长和繁殖，多种氮源组合是为了达到氨基酸均衡，增加氮源利用效率;玉米蛋白粉提供微生物生长所需速效氮源；玉米粉与次粉提供碳源，作用是提供能量，也可以促进益生菌代谢产物的产生;糖蜜提供速效碳源，作用是促进益生菌前期生长;麸皮既提供氮源也作为载体起到支持作用，作用是既有利于原料中存留少量空气，促进益生菌增殖，也有利于后期产品的处理，使产品不会太黏;混合益生菌液提供发酵菌种，作用是原料的生物降解与转化，使最终产品具有其独特作用;添加水使产品中具有一定的含水量，作用是为益生菌生长与繁殖所需营养提供溶剂，提高益生菌活性。
[0008]其中，所述混合益生菌液包括酿酒酵母菌液2.5-4.0kg，枯草芽孢杆菌菌液0.6-1.5kg，奚肠球菌菌液0.5_1.5kg。
[0009]优选地，所述混合益生菌液包括酿酒酵母菌液2.6kg，枯草芽孢杆菌菌液0.8kg，粪肠球菌菌液0.6kg。
[0010]所述复合益生菌中包括酿酒酵母、枯草芽孢杆菌与粪肠球菌。三种菌种为目前益生菌制剂中应用最为广泛、功效受到普遍认可的益生菌菌种，且这三种益生菌已被列入《饲料添加剂品种目录(2013)》，其使用安全性已得到权威部门的确认。
[0011 ]上述复合益生菌培养物的制备方法，包括以下步骤:
(I)混合益生菌的制备 1.1酿酒酵母菌液的制备
1.1.1摇瓶种子制备:将活化后的酿酒酵母菌种接种于摇瓶内液体培养基，进行液体培养，制备摇瓶种子;培养条件为:温度30°c，100转每分(印111)震荡，培养时间12h ；
1.1.2种子发酵:将制备的摇瓶种子接种于种子发酵罐中，发酵获得酿酒酵母液体种子液;种子发酵参数为:接种量3%，温度30 0C，通气量0.90L/(L.min)，发酵时间12h;
其中，酿酒酵母液体培养基配方为重量份数:胰蛋白胨0.5%;葡萄糖1%;酵母浸粉0.3%;麦芽膏0.3%;氯霉素0.0025%;
1.2枯草芽孢杆菌菌液的制备
1.2.1摇瓶种子制备:将活化后的枯草芽孢杆菌菌种接种于摇瓶内液体培养基，进行液体培养，制备摇瓶种子;培养条件为:温度37 °C，90rpm震荡，培养时间12h ；
1.2.2种子发酵:将制备的摇瓶种子接种于种子发酵罐中，发酵获得枯草芽孢杆菌液体种子液;种子发酵参数为:接种量1%，温度37°C，通气量0.80L/(L.min)，发酵时间12h;
其中，枯草芽孢杆菌液体培养基配方为重量份数:胰蛋白胨0.5%;葡萄糖1%;酵母浸粉
0.5%;磷酸二氢钾0.4%;
1.3粪肠球菌菌液的制备
1.3.1摇瓶种子制备:将活化后的粪肠球菌菌种接种于摇瓶内液体培养基，进行液体培养，制备摇瓶种子;培养条件为:温度37 °C，培养时间12h ；
1.3.2种子发酵:将制备的摇瓶种子接种于种子发酵罐中，获得粪肠球菌液体种子液；种子发酵参数为:接种量1%，温度37°C，发酵时间12h;
其中，粪肠球菌液体培养基配方为重量份数:大豆蛋白胨1%;葡萄糖2%;酵母浸粉0.5%;磷酸氢二钾0.4%;牛肉膏0.5% ；柠檬酸三铵0.2% ； Tween-80 0.1%;乙酸钠0.5% ；
1.4制备混合益生菌
(1)将上述步骤1.1-1.3制备的酿酒酵母菌液、枯草芽孢杆菌菌液、粪肠球菌菌液按照上述比例配置而成，混合后搅拌均匀，即可；
(2)按照上述重量配比称量各原料;然后将豆柏粉、玉米蛋白粉、玉米粉、麸皮、次粉、糖蜜和水，混匀，加入旋转蒸球0.1-0.12MPa，杀菌20min，冷却至35°C以下后迅速加入步骤(I)制备的复合益生菌菌液，装入发酵筒中，密封发酵，25-28°C发酵120-150h;
(3)发酵结束后，将步骤(2)得到的发酵饲料压实装入避光包装袋中，密封保存，置于恒温库中30-32 °C保存50-60h，即得到本发明复合益生菌培养物产品。
[0012]本发明将复合益生菌种接种到由豆柏粉、玉米蛋白粉、玉米粉、麸皮、次粉、糖蜜、水组成的发酵培养基中，经两阶段固体发酵，发酵结束即得复合益生菌培养物。
[0013]本发明的优点在于:运用微生物与发酵工程，经过复合发酵菌种的增殖与代谢，获得丰富益生菌菌体及其代谢产物，得到的培养物能够有效改善反刍动物瘤胃及肠道环境、促进消化、提高奶牛的生产性能、提高抗病能力、增加产奶量和降低饲料成本，对我国奶牛养殖业的发展具有促进作用。
[0014]下面结合实施例对本发明作进一步说明。
【具体实施方式】
[0015]以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0016]除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为重量份数。
[0017]本发明所用原料均符合我国农业部《饲料原料目录》与《饲料添加剂品种目录(2013)》标准。
[0018]实施例1
一种复合益生菌培养物，其成分包括:豆柏粉4.5kg，玉米蛋白粉3kg，玉米粉1kg，麸皮18kg，次粉10.5kg，糖蜜5kg，混合益生菌液4kg，水45kg。
[0019]其中复合益生菌菌液组成为:酿酒酵母菌液2.6kg，枯草芽孢杆菌菌液0.8kg，粪肠球菌菌液0.6kg ο
[0020]制备上述复合益生菌培养物的方法，包括以下步骤:
1.液体培养基制备:
(1).酿酒酵母液体培养基:胰蛋白胨5g，葡萄糖10g，酵母浸粉3g，麦芽膏3g，氯霉素
0.025g，lmol/L NaOH溶液调节pH=6.0，蒸馈水定容至 1000ml，121 °C灭菌30min，备用；
(2).枯草芽孢杆菌液体培养:胰蛋白胨5g，葡萄糖10g，酵母浸粉5g，磷酸二氢钾4g，lmol/L NaOH溶液调节pH=7.5，蒸馈水定容至1000ml，121°C灭菌30min，备用；
(3).奠肠球菌液体培养:大豆蛋白胨1g，葡萄糖20g，酵母浸粉5g，磷酸氢二钾4g，牛肉膏5g，梓檬酸三钱2g，Tween-80 lg，乙酸钠5g，lmol/L盐酸溶液调节pH=6.0，蒸馈水定容至1000ml，121 °C灭菌30min，备用。
[0021]2.复合益生菌菌液的制备:
(I).在超净工作台中将活化的酿酒酵母种子挑取接种三角瓶中酿酒酵母液体培养基，300C，10rpm震荡培养12h制备摇瓶种子;其后将摇瓶种子按3%接种量接种种子发酵罐，300C，通气量0.90L/(L.min)，发酵时间12h，获得酿酒酵母菌液。
[0022](2).在超净工作台中将活化的枯草芽孢杆菌种子挑取接种三角瓶中的枯草芽孢杆菌液体培养基，37°C，90rpm震荡培养12h制备摇瓶种子;其后将摇瓶种子按1%接种量接种种子发酵罐，37°(:，通气量0.8017(1^1^11)，发酵时间1211，获得枯草芽孢杆菌菌液。
[0023](3).在超净工作台中将活化的粪肠球菌种子挑取接种三角瓶中的粪肠球菌液体培养基，37°C