调控鱼海水酸化应激的饲料的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种调控鱼海水酸化应激的饲料，包括基础饲料部分和添加剂部分；基础饲料部分包括：蛋白源物质780?820、大豆磷脂9?11、淀粉60?90、鱼油45?55、矿物质混合物13?17和维生素混合物13?17；添加剂部分包括：杜仲粉25?75、壳寡糖3?12、茶树油0.05?0.15、丙氨酰?谷氨酰胺2.5?10、维生素E 0.01?0.05。添加剂部分还有下列组分：柠檬酸3?12、硒0.0002?0.001。本发明加入了丙氨酰谷氨酰胺和维生素E，有效调控鱼的消化、吸收、代谢、抗氧化、免疫等功能，缓解海水酸化应激反应，提高防御、抗病、生长和发育能力。本发明还添加了柠檬酸、硒的一种或两种，进一步加强调节鱼的神经、内分泌、代谢、抗氧化、免疫等功能，降低鱼的海水酸化应激反应，减少对鱼的损害，保障鱼之可持续生长发育。
【专利说明】
调控鱼海水酸化应激的饲料
技术领域
[0001]本发明涉及鱼饲料领域。更具体地说，本发明一种调控鱼海水酸化应激的饲料。
【背景技术】
[0002]自工业革命以来，由于人类活动和工农业发展，大气中的二氧化碳水平以前所未有的速度上升，水体吸收二氧化碳的量不断增加，导致水体酸化，水体PH下降。水体酸化导致鱼类等水生动物酸应激反应，严重影响其酸碱平衡、新陈代谢、激素分泌、骨骼发育和免疫功能等，甚至威胁水生动物的生存、群落和生态，因此亟需研究一种调控鱼类酸应激代谢、缓解酸应激对鱼类的损伤的饲料。
【发明内容】
[0003]本发明的一个目的是解决至少上述问题或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
[0004]本发明还有一个目的是提供一种调控鱼海水酸化应激的饲料，其在基础饲料中加入了丙氨酰谷氨酰胺和维生素E，有效调控鱼的新陈代谢，缓解酸应激反应对鱼类的损伤。
[0005]本发明还有一个目的是提供一种调控鱼海水酸化应激的饲料，其在基础饲料中加入了杜仲粉、壳寡糖和茶树油，增强鱼的体质，增长速度和免疫能力，以提高鱼的海水酸应激性。
[0006]本发明还有一个目的是提供一种调控鱼海水酸化应激的饲料，其在基础饲料中加入柠檬酸和砸，提高抗氧化能力、免疫能力以及防护能力。
[0007]为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种调控鱼海水酸化应激的饲料，其中，包括基础饲料部分和添加剂部分；
[0008]其中所述基础饲料部分主要包括以下组分:蛋白源物质780-820、大豆磷脂9_11、淀粉60-90、鱼油45-55、矿物质混合物13-17和维生素混合物13-17;
[0009]所述添加剂部分主要包括以下组分:杜仲粉25-75、壳寡糖3-12、茶树油0.Οδ-Ο.15、丙氨酰-谷氨酰胺 2.5-10、维生素 E 0.01-0.05ο
[0010]优选的是，所述的调控鱼海水酸化应激的饲料中，所述添加剂部分还包括下列组分中的一种或是几种:柠檬酸3-12、砸0.0002-0.001。
[0011]优选的是，所述的调控鱼海水酸化应激的饲料中，所述蛋白源物质主要包含下列组分中的一种或是几种:白鱼粉550-570、酪蛋白40-55及大豆160-210。
[0012]优选的是，所述的调控鱼海水酸化应激的饲料中，所述维生素混合物包含下述组分中的一种或几种:维生素A 60-100、维生素D3 30-50、维生素K3 0.1-0.15、维生素B1 0.1-0.2、维生素B2 0.2-0.4、维生素B6 0.2-0.4、维生素B12 0.001-0.003、烟酸0.01-0.02、泛酸钾0.5-0.8、叶酸0.02-0.05、生物素0.001-0.003、肌醇1-3、维生素C 0.08-0.12以及氯化胆碱8-12;
[0013]所述的调控鱼海水酸化应激的饲料中，所述矿物质混合物包含下述组分中的一种或几种:硫酸亚铁120-200、硫酸锌500-700、氯化锰30-50、硫酸铜150-260、碘8-12、氯化镁150-260、硫酸钴15-25及钼酸钠15-25。
[0014]优选的是，所述的调控鱼海水酸化应激的饲料中，每千克干饲料中主要包括以下组分:
[0015]白鱼粉560g、酪蛋白50g、大豆160g、大豆磷脂9g、淀粉75g、鱼油50g、矿物质混合物15g、维生素混合物15g、杜仲粉50g、壳寡糖6g、茶树油0.05g、丙氨酰-谷氨酰胺5g、维生素E0.02g、柠檬酸 6g、砸粉0.0009g。
[0016]优选的是，所述的调控鱼海水酸化应激的饲料中，每千克干饲料中主要包括以下组分:
[0017]白鱼粉556g、酪蛋白45g、大豆180g、大豆磷脂10g、淀粉85g、鱼油45g、矿物质混合物14g、维生素混合物14g、杜仲粉25g、壳寡糖12g、茶树油0.lg、丙氨酰-谷氨酰胺7.5g、维生素E 0.038、柠檬酸98、砸粉0.00068。
[0018]优选的是，所述的调控鱼海水酸化应激的饲料中，每千克干饲料中主要包括以下组分:
[0019]白鱼粉551g、酪蛋白40g、大豆170g、大豆磷脂llg、淀粉70g、鱼油48g、矿物质混合物13g、维生素混合物13g、杜仲粉75g、壳寡糖3g、茶树油0.15g、丙氨酰-谷氨酰胺3g、维生素E 0.048、柠檬酸38、砸粉0.00038。
[0020]优选的是，所述的调控鱼海水酸化应激的饲料中，所述壳寡糖的分子量为500-550，聚合度为4-5 ；所述砸为粒径为500-600nm的纳米砸。
[0021]本发明至少包括以下有益效果:
[0022]首先，本发明所述的能调控鱼海水酸化应激的饲料，其在基础饲料中添加杜仲叶粉、壳寡糖、茶树油、丙氨酰谷氨酰胺和维生素E，基础饲料能够为鱼提供充足的营养成分，添加剂能够有效调控鱼的新陈代谢，提高鱼抗氧化、免疫和修复能力，缓解酸应激反应对鱼类的损害，使鱼健康发育成长。
[0023]杜仲含有绿原酸、桃叶珊和松脂醇二葡萄糖试等药用成分，以及蛋白质、维生素和矿物元素等营养成分，具有补肝肾、强筋骨、抗肿瘤、消炎杀菌等诸多神奇的功效，杜仲能显著改善动物体的免疫功能，增强机体的防御能力，对细胞免疫具有双向调节作用。选用杜仲叶更能降低饲料的生产成本。
[0024]壳寡糖可以促进动物生长、提高免疫力、降血脂、抗菌、抗炎和抗癌等。在饲料中添加适量壳寡糖可以显著提高鱼的生长速度和抗嗜水气单胞菌感染的能力。壳寡糖还可以不同程度地提高血淋巴的过氧化物酶活性。用壳寡糖可以使血液中免疫球蛋白数量增加，提高了机体免疫力。壳寡糖还能降血糖，且无毒副作用，是一种无污染、无残留的饲料添加剂。壳寡糖添加剂能显著促进青鱼幼鱼肝和肠IL-2、IL-8和IL-1Om RNA的表达，促炎症因子IL-
2、IL-8和抗炎症因子IL-10的表达同时提高，可有效提升机体的抗炎水平，并不会对机体产生不利因素，其理由是:IL_2是T细胞生长因子，可促进T细胞免疫反应，能活化T细胞和巨噬细胞的表达，促进多种细胞反应，促进淋巴因子激活的杀伤细胞分化和分泌免疫球蛋白(lg); IL-8是典型的促炎症因子，也是一种重要的趋化因子，还有很强的促血管生成作用，IL-8调节炎症反应，对感染组织有一定的恢复作用；IL-10具有抗炎、抗肿瘤作用，参与炎症反应并能缓解炎症，对机体具有保护作用，在硬骨鱼中具有免疫调节作用，IL-1OmRNA的表达增加可抑制炎症反应，缓解炎症疾病，有助于治疗炎症。同时，壳寡糖显著降低了青鱼幼鱼血清中乳酸脱氢酶(LDH)的活性。该酶活性的降低有利于保护鱼机体组织，维持LDH平衡。壳寡糖还能显著降低青鱼幼鱼血清中甘油三酯的含量，血清甘油三酯降低使血脂减少，有益于心血管健康和发挥生理功能。
[0025]茶树油是一类植物源性饲料添加剂，其主要成分为香精泊。茶树油可以通过对细菌选择性抑制从而有利于消化道菌群的生态平衡，改善动物肠道微生物环境，保证肠道健康，提高动物对营养成分的吸收利用;茶树油还具有抗炎抗菌和提高免疫力的作用，具有抗真菌和保鲜作用，茶树油还具有缓解腹泻，促进生长的作用，并且茶树油可以在动物产卵期间使用，无残留，不会对动物造成不良影。
[0026]维生素E(VE)具有许多生理功能，其中最重要的是影响机体免疫、抗氧化、生长和繁殖等，能保护高度不饱和脂肪酸(HUFAs)免受氧化和维持重要的信号转换所需的HUFAs浓度。VE具有特殊的膜功能，对多种酶活性、信号转换和VE反应基因表达等进行调节。但VE是机体不能合成的必需微量营养素和抗氧化剂，只能通过食物摄取。添加VE可提高鱼的吞噬细胞活性，显著增强鱼白细胞的吞噬能力，显著增加超氧化物歧化酶(SOD)和降低脂过氧化物一丙二醛(MDA) JE还能抑制细胞凋亡，增加其存活率等。
[0027]添加丙氨酰谷氨酰胺(AGD)可显著改善鱼的防御能力，提高非特异性免疫力。AGD是机体外源性谷氨酰胺(Gln)的主要来源。由于Gln的溶解度低和性质不稳定，故用AGD代替Gln ο用Affl)安全有效，与Gln的生理作用无异，而且摄入的A⑶于体内经二肽酶水解还可同时释放出Gln和丙氨酸供组织代谢用。Gln是机体应激、受伤、疾病时的条件必需氨基酸。在应激、受伤、疾病等状态下，机体对Gln的需要量大增，而自身合成供不应求，必须增加外源Gln;适时适量地补充Gln可改善病体。在日粮中添加Gln可促进鱼的生长、肠的发育和功能完善，增加谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)的含量，提高消化酶、Na+A+-ATPase和SOD的活性，降低脂过氧化物一丙二醛(MDA)和饲料系数。Gln还能减少促炎症细胞因子的表达，改善肠屏障功能，提高应激反应能力，改进免疫细胞功能和降低死亡率;Gln是细胞凋亡的抑制剂。在饲料中添加Gln，可提高鱼的抗毒能力，增加存活率。Gln可调节鱼与代谢相关的基因表达、信号转导、细胞防御和修复，还可激活细胞内信号路径。Gln在多种器官和组织细胞具有独特而重要的代谢功能，并可维持肠道结构和屏障功能，减轻内毒素等对肠道的损伤，增强热休克蛋白70 (HSP70)基因的表达。HSP70是机体于应激反应中广生的蛋白质，其大量表达可提尚细胞的应激能力，抵御各种有害因素的损伤。Gln不仅是活细胞新陈代谢的燃料之一，而且是核酸及蛋白质等生物合成的前体。因此，Gln对细胞的增殖具有重要的作用。Gln作为免疫细胞分裂增殖的必需物质之一，能改善机体B细胞功能，促进B细胞分泌抗体，增强肠道和全身免疫，增强肌体防御能力。
[0028]杜仲叶粉、壳寡糖、茶树油、丙氨酰谷氨酰胺和维生素E可互补作用，协同增效。Gln是鱼类重要营养素之一，可生成抗氧化剂GSH JE是脂溶性断链抗氧化剂，它影响GSH氧化还原、氧化剂和抗氧化剂之间的平衡。联用Gln和VE，一方面可清除单线态氧(1O)和超氧阴离子(02—)，另一方面可与谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)协同作用，阻断脂质过氧化链，保护膜结构和脂蛋白的生物活性。因此Gln和VE在抗氧化应激方面密切相关，可互补和协同增效。Gln和VE对鱼类的生长、发育、抗氧化和免疫都具有促进作用，二者共用可协同降低鱼细胞应激反应，提高细胞生存发育能力。
[0029]其次，本发明所述的能调控鱼酸应激的饲料，还添加了柠檬酸和砸。
[0030]砸(Se)通过消化道被生物吸收后发挥重要的生化生理作用，主要功能可概述为:
(I)抗氧化作用；(2)免疫作用；(3)防护、保健作用。
[0031]柠檬酸(CA)影响鱼类的酶、代谢、健康、生长、发育和成活。CA对海洋生物的酶系发挥重要影响，并对其消化吸收、代谢、免疫和生长发挥重要作用。在日粮中添加CA可大大提高鱼类的生长、发育和存活，其主要机理可能是CA降低鱼胃pH，激活胃蛋白酶，促进营养物质的消化、吸收和利用。CA是机体线粒体三羧酸循环的关键物质，参与并激活线粒体中三羧酸循环和氧化磷酸化，为机体产生更多的三磷酸腺苷(ATP)XA的抗氧化作用，一方面CA作为抗氧化的协同剂，促进相应抗氧化剂的抗氧化活性；另一方面CA可以螯合起促氧化剂作用的金属离子，形成没有氧化活性的螯合物，切断金属离子引发的脂质氢过氧化物自由基链式反应。
[0032]此外，VE与Se除分别发挥重要生理功能外，能互补和协同增效。VE与Se能协同抗氧化和抗应激反应。如在饲料中添加VE和纳米Se，能提高动物血清中GPx酶活性和总抗氧化能力(T-AOC)，降低MDA和活性氧簇(ROS)水平，减少热应激对动物的氧化损伤。VE能维持体内Se的活性，防止Se的排出和膜脂氧化，减少过氧化物的生成，从而节约GPx和SOD用于清除过氧化物;VE还能增强Se的作用，预防DNA破坏和致癌。VE和Se能够增加机体血清抗氧化活力，特别显著增强过氧化氢酶(CAT)、GPx和谷胱甘肽还原酶(GR)的活力，抵抗氧化损害。VE与Se能协同提高免疫力和抗病力。适量添加Se和VE，能明显提高自然杀伤细胞(NK细胞)活性和T淋巴细胞转化率。Se和VE能协同提高机体抗体水平、噬菌细胞和淋巴细胞的功能，增强抗病力。VE和Se分别在胞外和胞内发挥免疫抗氧化作用。两者互补，协同作用。
[0033]CA和VE也能协同抗氧化增效。CA能螯合金属离子而抑制其催化脂质氧化，减少产生自由基，从而减少清除自由基所消耗的VE，保护和提高VE的抗氧化效果。联用VE和CA可显著增加机体免疫细胞的数量，大大提高免疫力，显著地提高机体的抗氧化能力。CA为VE提供适宜发挥作用的酸性环境，VE在酸性环境稳定，能更好地发挥抗氧化作用。CA使VE再生，而VE保护CA。
[0034]将砸制成粒径为500-600nm的纳米颗粒可以有效提高砸的吸收率。
[0035]最后，使用本发明所述的能调控鱼的海水酸化应激的饲料后，鱼的增重率(BffG% )、特定生长率(SGR% )、T-A0C、GPx、CAT和SOD含量或活性均最高，而脂质过氧化物一丙二醛(MDA)最低，所以所述饲料可有效提高鱼类抗氧化能力，促进代谢，缓解海水酸化应激对鱼类的影响。
[0036]本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【具体实施方式】
[0037]下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0038]应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
[0039]实例I
[0040]广品制备:广品A制备:[0041 ] 步骤一、制备基础饲料:将白鱼粉560g、酪蛋白50g、大豆160g、大豆磷脂9g、淀粉75g、鱼油50g、矿物质混合物15g和维生素混合物15g混合搅拌均勾得到基础饲料。其中，矿物质混合物包括:硫酸亚铁120-200、硫酸锌500-700、氯化锰30-50、硫酸铜150-260、碘8-12、氯化镁150-260、硫酸钴15-25及钼酸钠15-25;维生素混合物包括:维生素A 60-100、维生素D3 30-50、维生素K3 0.1-0.15、维生素B1 0.1-0.2、维生素B2 0.2-0.4、维生素B6 0.2-0.4、维生素 B12 0.001-0.003、烟酸 0.01-0.02、泛酸钾0.5-0.8、叶酸 0.02-0.05、生物素0.001-0.003、肌醇1-3、维生素C 0.08-0.12以及氯化胆碱8_12。
[0042]步骤二、加入添加剂部分:杜仲粉0g、壳寡糖0g、茶树油0g、丙氨酰-谷氨酰胺0g、维生素E 0.04g，混合均匀得到本发明所述的具有调控鱼酸应激功能的饲料A。
[0043]产品B制备:在使用同样的基础饲料的基础上，加入添加剂部分为:杜仲粉25g、壳寡糖3g、茶树油0.05g、丙氨酰-谷氨酰胺2.5g、维生素E 0.03g，混合均匀得到本发明所述的具有调控鱼酸应激功能的饲料B。
[0044]产品C制备:在使用在使用同样的基础饲料的基础上，加入添加剂部分为:杜仲粉50g、壳寡糖6g、茶树油0.lg、丙氨酰-谷氨酰胺5g、维生素E 0.02g，混合均勾得到本发明所述的具有调控鱼酸应激功能的饲料C。
[0045]产品D制备:在使用在使用同样的基础饲料的基础上，加入添加剂部分为:杜仲粉75g、壳寡糖12g、茶树油0.15g、丙氨酰-谷氨酰胺7.5g、维生素E 0.0lg，混合均勾得到本发明所述的具有调控鱼酸应激功能的饲料D。
[0046]产品E制备:在使用在使用同样的基础饲料的基础上，加入添加剂部分为:杜仲粉0g、壳寡糖0g、茶树油0g、丙氨酰-谷氨酰胺10g、维生素E 0g，混合均匀得到本发明所述的具有调控鱼酸应激功能的饲料E。
[0047]产品F制备:产品F为基础饲料。
[0048]对比试验:
[0049]本方案研究对象为海水青鏘(Oryzias melastigma)，是新发展的研究海水鱼病理毒理学的理想模型生物。海水青鏘在中国、朝鲜、日本、印度等海域普遍存在，性格温和、产卵率高、生长周期短(约3个月)、体型小(成鱼个体长约3.5-4.0cm)、易于繁育(一年四季均可繁殖)、饲养和观察，对环境变化极其敏感，是进行鱼类酸应激研究的理想模式生物。
[0050]海水青鏘与淡水青鏘(Oryzias latipes)的亲缘关系很近，生长过程相同。淡水青鏘的生物学、营养需求和全部基因测序均已研究清楚，其有关信息可供海水青鏘参考，也可以用淡水青鏘做同样的实验。
[0051 ] 分别利用A-F产品喂养鱼，养鱼条件(盐度30±2，水温为28±2°C，pH为8.10，溶氧量彡6.10mg/L，光暗比为14h:1Oh)和实验操作均相同。每天三次投喂200目饲料，总投喂量为鱼湿体重的5%。每天详细观察和记录仔鱼活动、摄食、畸形、死亡等，8周后随机采集鱼样品，分别称重，存于-80°C冰箱中用于分子、基因、生理和生化测定。结果如下:
[0052]按A-F的顺序；
[0053 ]海水靑鏘仔鱼的信号因子一GPx基因相对表达量(2-顺)分别为1.81、2.01、2.66、2.21、2.04、1.10。随着AGD和VE剂量增加，鱼体内GPx基因表达增加，当AGD和VE的添加量分别为5g/kg和50IU/kg基础饲料时，GPx基因表达量最大。
[0054]海水靑鏘仔鱼的信号因子一 PPARa基因相对表达量(2—^et)分别为1.63、1.75、1.91、1.90、1.84、0.98。随着AGD和VE剂量增加，鱼体内PPARa基因表达也增加，当A⑶和VE的添加量分别为5g/kg和50 IU/kg基础饲料时，PPARa基因表达量最大。
[0055]增重率(8船％)分别为82.09、82.94、87.21、86.54、86.05、81.12。
[0056]特定生长率(561?%)分别为4.28、4.31、4.45、4.43、4.40、4.24。
[0057]丙二醛(MDA)含量分别为I.82、I.67、I.08、I.38、I.51、I.34nmol/mgprot。
[0058]GPx 含量(活性)分别为 120.36、148.68、129.35、125.95、77.13U/mgprot。
[0059]〇八1'含量(活性)分别为2.65、2.84、3.09、2.80、2.78、2.411]/11^口『0七。
[0060]SOD 含量(活性)分别为 9.79、10.95、12.96、10.62、10.50、8.91U/mgprot。
[0061]T-AOC 含量(活性)分别为 1.09、1.13、1.19、1.12、1.10、1.04U/mg。
[0062]总而言之，当每千克基础干饲料中的添加剂含杜仲粉25_75g、壳寡糖3_12g、茶树油0.05-0.15g、AGD 2.5-7.5g和VE 75-25IU(即0.05-0.025g)时，鱼的增重率(BWG% )、特定生长率(361?%)、6?1、041\300和1^\0(:含量或活性均最高，而脂质过氧化物一丙二醛(1?^)最低，说明本发明所述的饲料可有效提高鱼类抗氧化能力，促进代谢，缓解酸应激对鱼类的影响。
[0063]实例2
[0064]广品制备:广品a制备:
[0065]步骤一、制备基础饲料:将白鱼粉560g、酪蛋白50g、大豆160g、大豆磷脂9g、淀粉75g、鱼油50g、矿物质混合物15g和维生素混合物15g混合搅拌均勾得到基础饲料。其中，矿物质混合物包括:硫酸亚铁120-200、硫酸锌500-700、氯化锰30-50、硫酸铜150-260、碘8-12、氯化镁150-260、硫酸钴15-25及钼酸钠15-25;维生素混合物包括:维生素A 60-100、维生素D3 30-50、维生素K3 0.1-0.15、维生素B1 0.1-0.2、维生素B2 0.2-0.4、维生素B6 0.2-0.4、维生素 B12 0.001-0.003、烟酸 0.01-0.02、泛酸钾0.5-0.8、叶酸 0.02-0.05、生物素0.001-0.003、肌醇1-3、维生素C 0.08-0.12以及氯化胆碱8_12。
[0066]步骤二、加入添加剂部分:将杜仲粉50g、壳寡糖6g、茶树油0.lg、丙氨酰-谷氨酰胺5g、维生素E 0.03g、柠檬酸0g、砸粉Og后混合均匀得到本发明所述的具有调控鱼酸应激功能的饲料a。
[0067]产品b制备:在使用同样的基础饲料的基础上，加入添加剂部分为:杜仲粉50g、壳寡糖6g、茶树油0.1g、丙氨酰-谷氨酰胺5g、维生素E 0.03g、梓檬酸3g、砸粉0.0003g混合均匀得到本发明所述的具有调控鱼酸应激功能的饲料b。
[0068]产品c制备:在使用在使用同样的基础饲料的基础上，加入添加剂部分为:杜仲粉50g、壳寡糖6g、茶树油0.lg、丙氨酰-谷氨酰胺5g、维生素E 0.03〖、梓檬酸6〖、砸粉0.0005区，混合均匀得到本发明所述的具有调控鱼酸应激功能的饲料C。
[0069]产品d制备:在使用在使用同样的基础饲料的基础上，加入添加剂部分为:杜仲粉50g、壳寡糖6g、茶树油0.lg、丙氨酰-谷氨酰胺5g、维生素E 0.03〖、梓檬酸9〖，砸粉0.0008混合均匀得到本发明所述的具有调控鱼酸应激功能的饲料d。
[0070]产品e制备:在使用在使用同样的基础饲料的基础上，加入添加剂部分为:柠檬酸12g，砸粉0.001混合均匀得到本发明所述的具有调控鱼酸应激功能的饲料e。
[0071]广品f制备:广品f为基础伺料。
[0072]对比试验:
[0073]本方案研究对象为海水青鏘是新发展的研究海水鱼病理毒理学的理想模型生物。海水青鏘在中国、朝鲜、日本、印度等海域普遍存在，性格温和、产卵率高、生长周期短(约3个月)、体型小(成鱼个体长约3.5-4.0cm)、易于繁育(一年四季均可繁殖)、饲养和观察，对环境变化极其敏感，是进行鱼类酸应激研究的理想模式生物。
[0074]海水青鏘与淡水青鏘的亲缘关系很近，生长过程相同。淡水青鏘的生物学、营养需求和全部基因测序均已研究清楚，其有关信息可供海水青鏘参考，也可以用淡水青鏘做同样的实验。
[0075]本实验用海水青鏘鱼种由香港城市大学友情赠送，已在本实验室繁殖三代以上，可为实验提供充足的实验仔鱼数量。本室已积累在可控实验生态系统中，成功孵化、养殖和研究海水青鏘应对酸应激的生理、病理毒理与调控的经验和实验技巧。
[0076]分别利用a-f产品喂养鱼，养鱼条件(盐度30±2，水温为28±2°C，pH为8.10，溶氧量彡6.10mg/L，光暗比为14h:1Oh)和实验操作均相同。每天三次投喂200目饲料，总投喂量为鱼体重的5%。每天详细观察和记录仔鱼活动、摄食、畸形、死亡等，6周后随机采集鱼样品，分别称重，存于-80°C冰箱中用于分子、基因、生理和生化测定。结果如下:
[0077]海水靑鏘仔鱼的信号因子一GPx基因相对表达量(2-顺)分别为2.18、2.31、2.86、2.91、2.4、1.10ο
[0078]海水靑鏘仔鱼的信号因子一 PPARa基因相对表达量(2—^et)分别为1.83、1.95、2.11、2.20、1.94、0.98。
[0079]增重率(8船％)分别为84.01、85.94、87.21、88.54、86.05、81.12。
[0080]特定生长率(561?%)分别为4.38、4.51、4.65、4.73、4.43、4.24。
[0081 ]丙二醛(MDA)含量分别为I.23、I.21、I.18、I.15、I.21、I.34nmol/mgprot0
[0082]GPx含量(活性)分别为130.36、138.68、149.35、135.95、77.13U/mgprot。
[0083]〇八1'含量(活性)分别为2.85、2.94、3.29、3.20、2.88、2.411]/11^口『0七。
[0084]SOD 含量(活性)分别为 10.79、11.95、13.96、13.92、10.95、8.91U/mgproto
[0085]T-AOC 含量(活性)分别为 1.19、1.23、1.39、1.32、1.25、1.04U/mg。
[0086]总而言之，当每千克基础干饲料中各组分的添加量杜仲粉25_75g、壳寡糖3_12g、茶树油0.05-0.15g、丙氨酰-谷氨酰胺2.5-7.5g、维生素E 0.01-0.05g、柠檬酸3_9g、砸
0.0002-0.001 g时，鱼的增重率(BWG % )、特定生长率(SGR% )、GPx、CAT、SOD和T-AOC含量或活性均最高，而脂质过氧化物一丙二醛(MDA)最低，说明本发明所述的饲料可有效提高鱼类抗氧化能力，促进代谢，缓解酸应激对鱼类的影响。
[0087]尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用。它完全可以被适用于各种适合本发明的领域。对于熟悉本领域的人员而言，可容易地修改他用。因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实例。
【主权项】
1.一种调控鱼海水酸化应激的饲料，其中，包括基础饲料部分和添加剂部分； 其中所述基础饲料部分主要包括以下组分:蛋白源物质780-820、大豆磷脂9-11、淀粉60-90、鱼油45-55、矿物质混合物13-17和维生素混合物13-17; 所述添加剂部分主要包括以下组分:杜仲粉25-75、壳寡糖3-12、茶树油0.05-0.15、丙氨酰-谷氨酰胺2.5-10、维生素E 0.01-0.05。2.如权利要求1所述的调控鱼海水酸化应激的饲料，其中，所述添加剂部分还包括下列组分中的一种或是几种:柠檬酸3-12、砸0.0002-0.001。3.如权利要求2所述的调控鱼海水酸化应激的饲料，其中，所述蛋白源物质主要包含下列组分中的一种或是几种:白鱼粉550-570、酪蛋白40-55及大豆160-210。4.如权利要求3所述的调控鱼海水酸化应激的饲料，其中，所述维生素混合物包含下述组分:维生素A 60-100、维生素D3 30-50、维生素K3 0.1-0.15、维生素B1 0.1-0.2、维生素B2.0.2-0.4、维生素B6 0.2-0.4、维生素B12 0.001-0.003、烟酸0.01-0.02、泛酸钾0.5-0.8、叶酸0.02-0.05、生物素0.001-0.003、肌醇1-3、维生素C 0.08-0.12以及氯化胆碱8_12; 所述矿物质混合物包含下述组分:硫酸亚铁120-200、硫酸锌500-700、氯化锰30-50、硫酸铜150-260、碘8-12、氯化镁150-260、硫酸钴15-25及钼酸钠15-25。5.如权利要求4所述的调控鱼海水酸化应激的饲料，其中，每千克干饲料中主要包括以下组分: 白鱼粉560g、酪蛋白50g、大豆160g、大豆磷脂9g、淀粉75g、鱼油50g、矿物质混合物15g、维生素混合物15g、杜仲粉50g、壳寡糖6g、茶树油0.05g、丙氨酰-谷氨酰胺5g、维生素E.0.02g、柠檬酸 6g、砸粉0.0009g。6.如权利要求4所述的调控鱼海水酸化应激的饲料，其中，每千克干饲料中主要包括以下组分: 白鱼粉556g、酪蛋白45g、大豆180g、大豆磷脂10g、淀粉85g、鱼油45g、矿物质混合物14g、维生素混合物14g、杜仲粉25g、壳寡糖12g、茶树油0.lg、丙氨酰-谷氨酰胺7.5g、维生素E 0.038、柠檬酸98、砸粉0.00068。7.如权利要求4所述的调控鱼海水酸化应激的饲料，其中，每千克干饲料中主要包括以下组分: 白鱼粉551g、酪蛋白40g、大豆170g、大豆磷脂Hg、淀粉70g、鱼油48g、矿物质混合物13g、维生素混合物13g、杜仲粉75g、壳寡糖3g、茶树油0.15g、丙氨酰-谷氨酰胺3g、维生素E.0.048、柠檬酸38、砸粉0.00038。8.如权利要求2所述的调控鱼海水酸化应激的饲料，其中，所述壳寡糖的分子量为500-.550，聚合度为4-5 ；所述砸为粒径为500-600nm的纳米砸。
【文档编号】A23K20/142GK105961922SQ201610420315
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年6月15日
【发明人】许友卿, 丁兆坤, 刘永强, 张茜, 唐旎
【申请人】广西大学