一种微生物饲料添加剂的制备方法及其产品和应用

文档序号:10599603阅读:639来源:国知局
一种微生物饲料添加剂的制备方法及其产品和应用
【专利摘要】本发明提供了一种微生物饲料添加剂的制备方法,所述制备方法利用自主开发的啤酒酵母菌、干酪乳杆菌和沼泽红假单胞菌复合同步发酵技术,生产工艺中每级发酵都含有主要代谢产物,使产品中有益活菌、活性酶等的含量达到最大化。本发明还提供了采用上述制备方法制得的一种用于减少大菱鲆养殖过程中药剂使用的微生物饲料添加剂及其应用,所述微生物饲料添加剂含有丰富的微生物多糖、有益菌,并含有多种活性酶及小肽等活性代谢物质,在饲喂大菱鲆后,可形成动物机体良性生态环境,显著提高了大菱鲆的抗病能力,有利于获得健康绿色的大菱鲆产品。
【专利说明】
一种微生物饲料添加剂的制备方法及其产品和应用
技术领域
[0001 ]本发明涉及微生物发酵领域,尤其涉及一种微生物饲料添加剂的制备方法,该制备方法制得的产品,以及该产品在养殖大菱鲆中的应用。【背景技术】
[0002]大菱鲆是世界公认的优质比目鱼之一,也称为多宝鱼,其胶质蛋白含量高,味道鲜美,营养丰富,具有很好的滋润皮肤和美容的作用,且能补肾健脑,助阳提神;经常食用,可以滋补健身,提高人的抗病能力。中国的食用方法为清蒸、清炖,也是做生鱼片的好材料,其鱼头、骨、皮、鳍也可以做汤。当今著名菜肴有:剁椒豆豉蒸多宝鱼、清蒸多宝鱼等。
[0003]我国现已是欧洲之外的大菱鲆最大生产国,约占世界总产量的25-30%,而且工厂化养殖规模仍在继续扩大。随着消费者对大菱鲆认识的加深和深海比目鱼高营养价值品牌效益的传播,我国将很快成为世界上鲜活大菱鲆的最大消费市场。由于我国的地价和劳力低廉,地下咸水资源丰富,养殖成本显著低于欧美国家。然而,当今养殖病害日益严重,由于目前我国大菱鲆养殖场家的进苗质量参差不齐,部分设备简陋,许多采用开发式流水养殖而影响大环境质量;更有甚者,部分场家直接投喂自己加工的冰鲜杂鱼饲料,导致养殖卫生状况较差,加之管理不科学,病害感染机会增多,疾病发生率和死亡率每年呈上升趋势,造成了巨大损失。据不完全统计,国产鱼苗的成活率仅为70-80%,而进口鱼苗的养殖成活率可达90%以上。
[0004]由此可见,大菱鲆产品质量安全问题尤为突出,加上目前国内尚无专用配合饲料供应,许多养殖场采用了大量自制的配合饲料的营养成分,其卫生水平更加令人堪忧;而且,在大菱鲆的养殖过程中滥用抗生素,甚至使用违禁添加剂的养殖场大有人在。
[0005]由于大菱鲆本身抗病能力较差,不法养殖户往往大量使用抗生素之类的违禁药物,用以预防和治疗鱼病,导致大菱鲆药物残留超标。例如,一些养殖户为防止大菱鲆吃撑了消化不良,就在养殖过程中非法添加一种名为“呋喃西林”的兽药,鱼类服用这种药鱼后最快需2年才能彻底排泄掉,而人类食用服药的鱼类后则会残留在体内并在体内累积,极其难以代谢;如果长期食用含有呋喃西林的多宝鱼可诱发各种疾病,甚至致癌或致畸胎。
[0006]上海市食品药品监督管理局从批发市场、连锁超市、宾馆饭店采集了 30件冰鲜或鲜活大菱鲆,并对禁用渔药、限量渔药残留、重金属等指标进行了检测。30件大菱鲆样品全部被检出硝基呋喃类代谢物,部分样品还被检出孔雀石绿、恩诺沙星、环丙沙星、氯霉素、红霉素等多种禁用渔药残留。有专家指出,硝基呋喃类药物、氯霉素、环丙沙星等在国际国内均属于禁用渔药;尽管不会产生急性、亚急性危害,但人体长期大量摄入硝基呋喃类化合物,则存在致癌的可能性。
[0007]此外,由于大菱鲆集约化养殖,饲养环境的改变,易引起疫病威胁、温度、营养等应激现象,诱导其体内氧自由基的大量产生,致使体内自身存在的清除自由基酶系统(S0D、 CAT、GSH)发生失衡。氧自由基可使生物蛋白质聚合、核酸主键断裂,引起细胞结构和功能的破坏,造成机体组织损害和器官退行性变化。在人工饲养的过程中,配合饲料广泛应用,尤其是微量元素(Fe、Cu等)和抗生素等药物的添加,在最大程度上满足了大菱鲆的营养等各方面需要,但是同时也在大菱鲆体内诱发产生了大量的氧自由基。超量自由基会攻击机体细胞膜富含的脂质和蛋白质,产生脂质过氧化反应,导致脂质过氧化物累积;超量自由基还攻击生物膜及DNA键,破坏其机构,使其功能丧失;超量自由基还攻击酶邻近特定氨基酸残基,使酶失活,并使机体抗氧化功能减弱,最终引起免疫力下降。因此,尤其是在各种应激条件下细胞严重受损更加严重,更加容易造成疾病传播。
[0008]因此,为了防止大菱鲆养殖过程中滥用违禁药物,避免上述乱象严重影响到消费者的食用安全和我国对外贸易的实施,为此而建立养殖过程的质量安全保障体系迫在眉睫。进一步地,研发并提供一种微生物饲料添加剂,以提高大菱鲆机体抗应激能力和非特异性免疫力,是当今养殖领域研发人员的研究重点之一。
【发明内容】

[0009]为了能够克服上述现有技术中存在的问题,本发明的第一方面,提供了一种微生物饲料添加剂的制备方法,包括以下步骤:
[0010](1)从啤酒酵母菌、干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌菌种中分离出各自的单菌株;
[0011](2)对啤酒酵母菌单菌株、干酪乳杆菌单菌株、沼泽红假单胞菌单菌株分别进行增殖培养,再混合配制得到复合微生物菌群原液;其中,得到的所述复合微生物菌群原液包含啤酒酵母菌30-50wt%,干酪乳杆菌10-30wt%,沼泽红假单胞菌20-40wt% ;
[0012](3)取所述复合微生物菌群原液接种于发酵培养基与水的混合物中,于30°C的培养温度下在PH5.5的条件下厌氧发酵7天,制得复合菌种液;其中,所述复合微生物菌群原液:所述发酵培养基:所述水的比例为10_30wt%:60-80wt%:10-15wt% ;
[0013](4)将所述复合菌种液在无菌条件下接种到发酵培养基中,进行发酵36-42小时, 接着将发酵液高速离心,得到高浓度的菌液;[〇〇14](5)将所述高浓度的菌液置入低温干燥箱内进行干燥,得到水分含量小于12wt%的粗广品;
[0015](6)将所述粗产品放入粉碎机内进行粉碎,过筛后再次粉碎,最终制得所述微生物饲料添加剂。
[0016]其中,啤酒酵母菌、干酪乳杆菌和沼泽红假单胞菌是从中国农业微生物菌种保藏管理中心购买的。[〇〇17]优选地,在上述制备方法的步骤(2)中对啤酒酵母菌单菌株进行的增殖培养为:将分离出的啤酒酵母菌单菌株接种于含有l〇wt %糖蜜,2.5wt %硫酸铵,0.25wt %磷酸二氢钾的初始PH5.5的培养基中进行增殖培养。
[0018]优选地,在上述制备方法的步骤(2)中对沼泽红假单胞菌单菌株进行的增殖培养为:将分离出的沼泽红假单胞菌单菌株接种于含有〇.5wt %葡萄糖,0.2wt %乙酸钠, 0 ? 2wt %NH4C1,0 ? 15wt %酵母膏的初始pH7-8 ? 5的培养基中,在25-35°C进行耗氧黑暗培养。 [〇〇19]优选地,在上述制备方法的步骤(2)中对干酪乳杆菌单菌株进行的增殖培养为:将分离出的干酪乳杆菌单菌株接种于含有2.5wt %豆柏,lwt %葡萄糖,lwt %酵母浸膏, 0.05wt %七水硫酸镁,0.02wt %磷酸二氢钾的初始pH5.0的培养基中进行增殖培养。
[0020]进一步优选地,上述制备方法的步骤(4)为:将所述复合菌种液在无菌条件下于35-40°C接种到发酵培养基中,进行发酵36-42小时;其中,发酵过程中的搅拌转速为200r/ min-240r/min,通气量为1:1;接着将发酵液在3000-5000r/min的转速下高速离心,得到高浓度的菌液。[〇〇21]更进一步优选地,上述制备方法中,所述发酵培养基包括:豆饼粉、玉米粉、玉米淀粉、尿素、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、米糠粉、麦麸中的至少五种。[〇〇22] 最优选地,上述制备方法中,所述发酵培养基包括:5_15wt %豆饼粉,10_20wt %玉米粉,O-lOwt %玉米淀粉,0-lwt %尿素,0-lwt %硫酸铵,0 ? 05-0 ? lwt %磷酸二氢钾,0 ? 1-0 ? 5wt %磷酸氢二钠,〇-〇 ? 4wt %硫酸镁,40-84 ? 85wt %米糠粉以及0-12wt %麦麸。[〇〇23]更进一步优选地,上述制备方法的步骤(5)为:将所述高浓度的菌液置入30_45°C 的低温干燥箱内干燥6-10h,得到水分含量小于12wt%的粗产品。
[0024]本发明的第二方面,提供了一种用于减少大菱鲆养殖过程中药剂使用的微生物饲料添加剂,所述微生物饲料添加剂根据本发明第一方面所述的制备方法制得,并且所述微生物饲料添加剂所含活菌数为50亿/g。
[0025]本发明的第三方面,提供了根据本发明第二方面所述的微生物饲料添加剂在养殖大菱鲆中的应用。
[0026]本发明利用微生物技术以增强大菱鲆的自身免疫力,并提供了一种能够提高大菱鲆机体抗应激能力和非特异性免疫力的微生物饲料添加剂;本发明所述的制备方法利用自主开发的复合同步发酵技术,生产工艺中每级发酵都含有主要代谢产物,使产品中有益活菌、活性酶等的含量达到最大化。所述微生物饲料添加剂中含有丰富的微生物多糖、有益菌,并含有多种活性酶及小肽等活性代谢物质,在饲喂大菱鲆后,可形成动物机体良性生态环境,显著提高了大菱鲆的抗病能力,有利于获得健康绿色的大菱鲆产品。【具体实施方式】[〇〇27]下面结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述,但本发明并不限于以下实施方式。[〇〇28] 实施例1
[0029](1)从啤酒酵母菌、干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌菌种中分离出各自的单菌株;
[0030](2)将分离出的啤酒酵母菌单菌株接种于含有10wt %糖蜜,2.5wt %硫酸铵, 0.25wt%磷酸二氢钾的初始pH5.5的培养基中进行增殖培养;将分离出的沼泽红假单胞菌单菌株接种于含有0.5wt%葡萄糖,0.2wt%乙酸钠,0.2wt%NH4Cl,0.15wt%酵母膏的初始 PH8的培养基中,在25°C进行耗氧黑暗培养;将分离出的干酪乳杆菌单菌株接种于含有 2 ? 5wt %豆柏,lwt %葡萄糖,lwt %酵母浸膏,0 ? 05wt %七水硫酸镁,0 ? 02wt %磷酸二氢钾的初始pH5.0的培养基中进行增殖培养;
[0031]接着,将以上分别增殖培养的微生物混合配制得到复合微生物菌群原液;其中,得到的所述复合微生物菌群原液包含啤酒酵母菌30wt%,干酪乳杆菌10wt%,沼泽红假单胞菌20wt% ;[〇〇32](3)取所述复合微生物菌群原液接种于发酵培养基与水的混合物中,于30°C的培养温度下在PH5.5的条件下厌氧发酵7天,制得复合菌种液;其中,所述复合微生物菌群原液:所述发酵培养基:所述水的比例为20wt%:60wt%: 10wt% ;
[0033](4)将所述复合菌种液在无菌条件下于35°C接种到发酵培养基中,进行发酵42小时;其中,发酵过程中的搅拌转速为200r/min,通气量为1:1;接着将发酵液在5000r/min的转速下高速离心,得到高浓度的菌液;[〇〇34] 其中,所述发酵培养基包括:5wt %豆饼粉,10wt %玉米粉,7 ? 2wt %玉米淀粉, 0 ? 75wt %尿素,0 ? 5wt %硫酸铵,0 ? 05wt %磷酸二氢钾,0 ? lwt %磷酸氢二钠,0 ? lwt %硫酸镁,70.3wt%米糠粉以及6wt%麦麸;
[0035](5)将所述高浓度的菌液置入40°C的低温干燥箱内干燥8h,得到水分含量小于 12wt%的粗产品;
[0036](6)将所述粗产品放入粉碎机内进行粉碎,过筛后再次粉碎,最终制得所述微生物饲料添加剂,其所含活菌数为50亿/g。[〇〇37] 实施例2
[0038](1)从啤酒酵母菌、干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌菌种中分离出各自的单菌株;
[0039](2)将分离出的啤酒酵母菌单菌株接种于含有10wt %糖蜜,2.5wt %硫酸铵, 0.25wt%磷酸二氢钾的初始pH5.5的培养基中进行增殖培养;将分离出的沼泽红假单胞菌单菌株接种于含有0.5wt%葡萄糖,0.2wt%乙酸钠,0.2wt%NH4Cl,0.15wt%酵母膏的初始 PH7的培养基中,在35°C进行耗氧黑暗培养;将分离出的干酪乳杆菌单菌株接种于含有 2 ? 5wt %豆柏,lwt %葡萄糖,lwt %酵母浸膏,0 ? 05wt %七水硫酸镁,0 ? 02wt %磷酸二氢钾的初始pH5.0的培养基中进行增殖培养;
[0040]接着,将以上分别增殖培养的微生物混合配制得到复合微生物菌群原液;其中,得到的所述复合微生物菌群原液包含啤酒酵母菌50wt%,干酪乳杆菌25wt%,沼泽红假单胞菌25wt% ;
[0041](3)取所述复合微生物菌群原液接种于发酵培养基与水的混合物中,于30°C的培养温度下在PH5.5的条件下厌氧发酵7天,制得复合菌种液;其中,所述复合微生物菌群原液:所述发酵培养基:所述水的比例为l〇wt%:70wt%: 15wt% ;[〇〇42](4)将所述复合菌种液在无菌条件下于40°C接种到发酵培养基中,进行发酵36小时;其中,发酵过程中的搅拌转速为240r/min,通气量为1:1;接着将发酵液在3000r/min的转速下高速离心,得到高浓度的菌液;[〇〇43] 其中,所述发酵培养基包括:5wt %豆饼粉,1 Owt %玉米粉,2wt %玉米淀粉,lwt % 尿素,0 ? 5wt %硫酸铵,0 ? lwt %磷酸二氢钾,0 ? lwt %磷酸氢二钠,0 ? 3wt %硫酸镁,75wt %米糠粉以及lwt%麦麸;
[0044](5)将所述高浓度的菌液置入30 °C的低温干燥箱内干燥1 Oh,得到水分含量小于 12wt%的粗产品;
[0045](6)将所述粗产品放入粉碎机内进行粉碎,过筛后再次粉碎,最终制得所述微生物饲料添加剂,其所含活菌数为50亿/g。
[0046]以上对本发明的具体实施例进行了详细描述,但是,其只是作为范例,本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言,任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此,在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改,都应涵盖在本发明的范围内。
【主权项】
1.一种微生物饲料添加剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)从啤酒酵母菌、干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌菌种中分离出各自的单菌株;(2)对啤酒酵母菌单菌株、干酪乳杆菌单菌株、沼泽红假单胞菌单菌株分别进行增殖培 养,再混合配制得到复合微生物菌群原液;其中,得到的所述复合微生物菌群原液包含啤酒 酵母菌30_50wt%,干酪乳杆菌10_30wt%,沼泽红假单胞菌20_40wt% ;(3)取所述复合微生物菌群原液接种于发酵培养基与水的混合物中,于30°C的培养温 度下在pH5.5的条件下厌氧发酵7天,制得复合菌种液;其中,所述复合微生物菌群原液:所 述发酵培养基:所述水的比例为10_30wt%:60-80wt%:10-15wt% ;(4)将所述复合菌种液在无菌条件下接种到发酵培养基中,进行发酵36-42小时,接着 将发酵液高速离心,得到高浓度的菌液;(5)将所述高浓度的菌液置入低温干燥箱内进行干燥,得到水分含量小于12wt%的粗 产品;(6)将所述粗产品放入粉碎机内进行粉碎,过筛后再次粉碎,最终制得所述微生物饲料 添加剂。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中对啤酒酵母菌单菌株进行 的增殖培养为:将分离出的啤酒酵母菌单菌株接种于含有l〇wt%糖蜜,2.5wt%硫酸铵, 0.25wt %磷酸二氢钾的初始pH5.5的培养基中进行增殖培养。3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中对沼泽红假单胞菌单菌株 进行的增殖培养为:将分离出的沼泽红假单胞菌单菌株接种于含有〇.5wt %葡萄糖, 0 ? 2wt %乙酸钠,0 ? 2wt %NH4C1,0 ? 15wt %酵母膏的初始pH7-8 ? 5的培养基中,在25-35°C进 行耗氧黑暗培养。4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中对干酪乳杆菌单菌株进行 的增殖培养为:将分离出的干酪乳杆菌单菌株接种于含有2.5wt %豆柏,lwt %葡萄糖, lwt %酵母浸膏,0.05wt %七水硫酸镁,0.02wt %磷酸二氢钾的初始pH5.0的培养基中进行增殖培养。5.根据权利要求2-4中任一项所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)为:将所述复合菌 种液在无菌条件下于35-40°C接种到发酵培养基中,进行发酵36-42小时;其中,发酵过程中 的搅拌转速为200r/min-240r/min,通气量为1:1;接着将发酵液在3000-5000r/min的转速 下高速离心,得到高浓度的菌液。6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述发酵培养基包括:豆饼粉、玉米 粉、玉米淀粉、尿素、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、米糠粉、麦麸中的至少五种。7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述发酵培养基包括:5-15wt%豆饼 粉,10_20wt % 玉米粉,0-10wt % 玉米淀粉,0_lwt % 尿素,0_lwt % 硫酸铵,0 ? 05-0 ? lwt % 磷 酸二氢钾,〇 ? 1-0 ? 5wt %磷酸氢二钠,0-0 ? 4wt %硫酸镁,40-84 ? 85wt %米糠粉以及0-12wt % 麦麸。8.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤(5)为:将所述高浓度的菌液置入 30-45 °C的低温干燥箱内干燥6-1 Oh,得到水分含量小于12wt %的粗产品。9.一种用于减少大菱鲆养殖过程中药剂使用的微生物饲料添加剂,其特征在于,所述 微生物饲料添加剂根据权利要求1-8中任一项所述的制备方法制得,并且所述微生物饲料添加剂所含活菌数为50亿/g。10.根据权利要求9所述的微生物饲料添加剂在养殖大菱鲆中的应用。
【文档编号】A23K10/18GK105961924SQ201610444319
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年6月20日
【发明人】江瀚, 陆瑛
【申请人】上海亨康生物科技有限公司
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