一种含雨生红球藻提取物的植物盐及其制备方法
【专利摘要】本发明提供一种含雨生红球藻提取物的植物盐，包括以下重量份的原料：雨生红球藻提取物2~4份，盐地碱蓬植物盐6~8份，所述雨生红球藻提取物，蛋白质含量为21.2~26.1%，虾青素含量2.7~3.2%，所述盐地碱蓬植物盐，黄酮含量为2.6~2.7mg/g，Ca含量为2600~2700mg/kg；本发明还提供所述含雨生红球藻提取物的植物盐的制备方法，包括超声波提取步骤。本发明制备的含雨生红球藻提取物的植物盐，具有抑制猪油脂质过氧化的能力，能够杀死B16、THP?1、Hacat 和A549癌细胞，对癌细胞的增殖有一定的抑制作用。
【专利说明】
一种含雨生红球藻提取物的植物盐及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种含雨生红球藻提取物的植物盐及其制备方法，属于植物盐提取工 艺技术领域。
【背景技术】
[0002] 雨生红球藻又被叫做湖生红球藻或湖生血球藻，是一种普遍存在的绿藻，属于团 藻目，红球藻科。我们现在知道这种藻在适宜它生长的条件下广泛存在于自然界中。大量研 究表明雨生红球藻对虾青素的积累速率和生产总量较其它绿藻高，而且雨生红球藻所含虾 青素及其酯类的配比（约70%的单酯，25%的双酯及5%的单体)与水产养殖动物自身配比极为 相似，这是通过化学合成和利用红发夫酵母等提取的虾青素所不具备的优势.此外，雨生红 球藻中虾青素的结构以3S-3 'S型为主，与鲑鱼等水产生物体内虾青素结构基本一致;而红 发夫酵母中虾青素结构则为3R-3 R型. 食盐的食用是人类进步的重要阶梯，长期以来人类依靠海水晒盐及井盐、岩盐开采等 方法制造食盐，满足自身需求。但人类长期食用的盐类基本上是无机物，只能满足人体自身 对无机盐的需求，难以适应由于生活水平提升造成的人类对多种功能食物的需求，特别是 目前市场上食盐基本为氯化钠，过高的Na+摄入对人体的血压、血脂等均有明显的负面影 响。
[0003] 基于以上情况，目前印度率先在世界上利用海蓬子生产出植物盐，据报道，这种植 物盐富含钾、钙、镁、铁等微量元素，加工过程中无需添加任何化学物质，因此堪称"天然营 养盐"。
[0004] 盐地碱蓬是一年生草本积盐植物，植物学分类为藜科(chenopodiaceae)碱蓬属 (suaeda forsk. exscop)，主要生长于海滨、湖边、荒漠等处的盐碱荒地，是一种典型的盐碱 地指示植物，在渤海沿岸及新疆、内蒙等地的盐碱地区有着广泛的分布。我国共有碱蓬属植 物20种及1个变种，常见种为灰绿碱蓬（suaeda. glanca bunge)和盐地碱蓬（S. salsa(L.) Pall)，产量最大的是灰绿碱蓬。目前对碱蓬属植物的研究主要集中在灰绿碱蓬、盐地碱蓬 及翅碱蓬。
[0005] 盐地碱蓬是世界上含盐量最高的草本植物之一，全盐量高达4.54%。在阴离子中， Cl-占全盐的47.14%，在阳离子中，Mg2+占全盐的20.04%，此外脂肪、蛋白质外，矿物质、微 量元素和维生素的含量丰富，适于进行植物盐生产开发，但目前相关部门尚未对这一问题 给予充分重视。如天津渤海沿岸地区大部分为高盐碱度的滩涂及湿地，极易适合碱蓬的生 长。长期以来，这些碱蓬自生自灭，一直没有引起人们的足够重视。
[0006] 现有技术存在以下缺陷： (1) 现有植物盐，抑制猪油脂质过氧化的能力作用不明显； (2) 现有植物盐，对B16(小鼠黑色素瘤细胞)癌细胞杀死作用不明显； (3) 现有植物盐，对THP-I(前骨髓性白血病细胞)癌细胞杀死作用不明显； (4) 现有植物盐，对Hacat(人角化细胞的肿瘤样细胞)癌细胞杀死作用不明显； (5) 现有植物盐，对A549(人肺腺癌细胞)癌细胞杀死作用不明显； (6) 现有植物盐的制备方法中，雨生红球藻提取物中提取的虾青素得率低。
【发明内容】
[0007] 本发明为解决以上技术问题，提供一种含雨生红球藻提取物的植物盐及其制备方 法，以实现以下发明目的： (1)本发明制备的含雨生红球藻提取物的植物盐，具有抑制猪油脂质过氧化的能力。
[0008] (2)本发明制备的含雨生红球藻提取物的植物盐，能够杀死B16(小鼠黑色素瘤细 胞)癌细胞，对癌细胞的增殖有一定的抑制作用。
[0009] (3)本发明制备的含雨生红球藻提取物的植物盐，能够杀死THP-I (前骨髓性白血 病细胞），对癌细胞的增殖有一定的抑制作用。
[0010] (4)本发明制备的含雨生红球藻提取物的植物盐，能够杀死HacaU人角化细胞的 肿瘤样细胞)癌细胞，对癌细胞的增殖有一定的抑制作用。
[0011] (5)本发明制备的含雨生红球藻提取物的植物盐，能够杀死A549(人肺腺癌细胞）， 对癌细胞的增殖有一定的抑制作用。
[0012] (6)本发明含雨生红球藻提取物的植物盐制备方法，雨生红球藻提取物的制备方 法中，虾青素得率高。
[0013]为解决以上技术问题，本发明采用的技术方案如下： 一种含雨生红球藻提取物的植物盐，所述植物盐，原料包括雨生红球藻提取物和盐地 碱蓬植物盐。
[0014] 以下是对上述技术方案的进一步改进： 所述植物盐，包括以下重量份的原料：雨生红球藻提取物2~4份，盐地碱蓬植物盐6~8 份。
[0015] 所述雨生红球藻提取物，蛋白质含量为21.2~26.1%，虾青素含量2.7~3.2%。
[0016] 所述盐地碱蓬植物盐，黄酮含量为2 · 6~2 · 7mg/g，Ca含量为2600~2700mg/kg。
[0017] -种含雨生红球藻提取物的植物盐的制备方法，所述雨生红球藻提取物的制备包 括超声波提取步骤，所述超声波提取步骤，提取频率为30~50 KHZ。
[0018] 所述雨生红球藻提取物的制备包括超声波提取步骤，所述超声波提取步骤，提取 功率为60~80W。
[0019] 所述雨生红球藻提取物的制备包括超声波提取步骤，所述超声波提取步骤，声波 提取时间5~13min。
[0020] 所述雨生红球藻提取物的制备还包括稀碱破壁步骤，所述稀碱溶液的浓度为0.04 ~0.3mol/L，浸泡时间为16~20 h。
[0021] 所述雨生红球藻提取物的制备还包括层析步骤，所述层析步骤，洗脱液浓度为40~ 90%，所述洗脱液为低级的醇、酮、酯的一种或几种以任意比例组合的水溶液。
[0022] 所述雨生红球藻提取物的制备还包括干燥步骤，所述干燥步骤，干燥时间为9~ 16h，冷冻温度为-38~-52°C，干燥室真空压力为0~15pa。
[0023] 采用以上技术方案，本发明的有益效果为： (1)本发明制备的含雨生红球藻提取物的植物盐，具有抑制猪油脂质过氧化的能力，连 续7天测定添加有本发明含荔枝核提取物的植物盐的猪油的POV值，空白猪油在75°C促氧化 条件下，经过5天的时间，POV值已经达到了 15.9me〇/kg，对比之下，添加有含荔枝核提取物 的植物盐猪油的POV值5天的POV值在13.6~13.9meo/kg，比空白猪油的低。
[0024] (2)本发明制备的含雨生红球藻提取物的植物盐，能够杀死B16(小鼠黑色素瘤细 胞)癌细胞，具有抑制癌细胞增殖的作用，用含雨生红球藻提取物的植物盐处理癌细胞株培 养液2周，B16的死细胞比例为18.8~21.8%，对照组为0.12%。
[0025] (3)本发明制备的含雨生红球藻提取物的植物盐，能够杀死THP-I (前骨髓性白血 病细胞），具有抑制癌细胞增殖的作用，用含雨生红球藻提取物的植物盐处理癌细胞株培养 液2周，THP-I死细胞比例为20.8~23.5%，对照组为0.26%。
[0026] (4)本发明制备的含雨生红球藻提取物的植物盐，能够杀死HacaU人角化细胞的 肿瘤样细胞)癌细胞，具有抑制癌细胞增殖的作用，用含雨生红球藻提取物的植物盐处理癌 细胞株培养液2周，Hacat死细胞比例为13.1~17.9%，对照组为0.08%。
[0027] (5)本发明制备的含雨生红球藻提取物的植物盐，能够杀死A549(人肺腺癌细胞）， 具有抑制癌细胞增殖的作用，用含雨生红球藻提取物的植物盐处理癌细胞株培养液2周， A549死细胞比例为22.8~28.5%，对照组为0.11%。
[0028] (6)本发明含雨生红球藻提取物的植物盐制备方法，雨生红球藻提取物的制备方 法中，奸青素得率尚，得率为3.3~3.5%。
【具体实施方式】
[0029] 以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用 于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0030] 实施例1 一种含雨生红球藻提取物的植物盐 以重量份计，包括以下原料组分： 雨生红球藻提取物4份、盐地碱蓬植物盐6份。
[0031] 所述雨生红球藻提取物，蛋白质含量为21.2~26.1%，虾青素含量2.7~3.2%，EPA含 量为5.2~5.5%，其中，EPA含量为EPA在总脂肪酸中所占的百分含量。
[0032] 所述盐地碱蓬植物盐，钠含量为15.20~15.30%;钾含量为3.4~3.5%;黄酮含量为 2 · 6~2 · 7mg/g; Ca 含量为 2600~2700mg/kg; Fe 含量为690~700mg/kg。
[0033]实施例2-种含雨生红球藻提取物的植物盐 以重量份计，包括以下原料组分： 雨生红球藻提取物3份、盐地碱蓬植物盐7份。
[0034] 所述雨生红球藻提取物，蛋白质含量为21.2~26.1%，虾青素含量2.7~3.2%，EPA含 量为5.2~5.5%，其中，EPA含量为EPA在总脂肪酸中所占的百分含量。
[0035] 所述盐地碱蓬植物盐，钠含量为15.20~15.30%;钾含量为3.4~3.5%;黄酮含量为 2 · 6~2 · 7mg/g; Ca 含量为 2600~2700mg/kg; Fe 含量为690~700mg/kg。
[0036]实施例3-种含雨生红球藻提取物的植物盐 以重量份计，包括以下原料组分： 雨生红球藻提取物2份、盐地碱蓬植物盐8份。
[0037]所述雨生红球藻提取物，蛋白质含量为21.2~26.1%，虾青素含量2.7~3.2%，EPA含 量为5.2~5.5%，其中，EPA含量为EPA在总脂肪酸中所占的百分含量。
[0038] 所述盐地碱蓬植物盐，钠含量为15.20~15.30%;钾含量为3.4~3.5%;黄酮含量为 2 · 6~2 · 7mg/g; Ca 含量为 2600~2700mg/kg; Fe 含量为690~700mg/kg。
[0039] 实施例4 一种雨生红球藻提取物的制备方法 包括以下步骤： (1)原料粉碎 将原料雨生红球藻去泥沙和表面杂质后放置于烘箱中在50°C下烘焙8h， 用气流式超微粉碎机粉碎，得到雨生红球藻超微粉； 气流式超微粉碎机工作压力为0.5~l.OMPa、系统风量为3m3/min，分级机转速1500~ 3000r/min，加料速度 10kg/h。
[0040] (2)稀碱破壁 将雨生红球藻超微粉进行稀碱处理； 所述稀碱处理是指将雨生红球藻超微粉放入稀碱溶液中浸泡，然后过滤烘干。
[0041] 所述稀碱浸泡的浸泡时间为16~20 h; 所述稀碱溶液的浓度为〇. 04~0.3mol/L; 所述稀碱为石灰水溶液。
[0042] (3)超声波提取： 将经过稀碱处理的雨生红球藻超微粉置于水浴中，将超声波探头插入水浴，在30KHz、 6〇rf进行超声波提取5min，提取的同时进行搅拌，然后按照上述工艺参数重复提取5次，得 提取液。
[0043] (4)层析 将所述PH为4~5的提取液过处理好的聚酰胺树脂柱，所述聚酰胺树脂柱的柱体积 300mL;以600mL水，用盐酸调pH为3后，进行洗脱除杂，除杂流速为300mL/hr; 然后用40~90%的洗脱液洗脱，洗脱流速300mL/hr; 收集洗脱液并在60~80 °C，压强为0.08~0.1 MPa下减压浓缩至含水量小于等于5%; 所述洗脱液为低级的醇、酮、酯的一种或几种以任意比例组合的水溶液； (5)真空干燥 将上述洗脱液用滤膜进行超滤，收集超滤后得到的滤出液，即得雨生红球藻提取物浓 缩液； 经过真空冷冻干燥，得雨生红球藻提取物； 其中，所述的超滤选截留分子量为40~120KD的超滤膜； 所述真空冷冻干燥，冷冻干燥时间为9~16h，冷冻温度为-38~-52°C，干燥室真空压力 为0~15pa; 真空冷冻干燥后，所述雨生红球藻提取物含量水小于2%。
[0044] 下述实施例5~实施例10是对实施例4所述雨生红球藻提取物制备方法的优化，即： 采用实施例4的雨生红球藻提取物的制备方法，只改变(3)超声波提取步骤，对提取频率、提 取功率和超声波提取时间做多因素分析，采用常规方法对提取的雨生红球藻提取物进行各 项具体物质的含量进行测定。
[0045] 表1提取频率、提取功率和超声波提取时间的多因素分析(实施例5~实施例10 )
由上述多因素分析试验可知，实施例7~实施例8是优选实施例，即提取频率为41~45 KHZ、提取功率为74~77W和超声波提取时间11~13min。
[0046] 实施例11 一种含雨生红球藻提取物的植物盐的制备方法 包括以下步骤： 一、雨生红球藻提取物的制备 采用实施例4的雨生红球藻提取物的制备方法，只改变(3)层析步骤，改变提取频率、提 取功率和超声波提取时间三个因素，改变为提取频率为41~45 KHZ、提取功率为74~77W和超 声波提取时间11~13min，得雨生红球藻提取物。
[0047] 二、盐地碱蓬植物盐的提取 (1)超声波水浸提 A、 将碱蓬粉与水按照1:5~10的质量比混匀，加入碱液调节pH为8~10以提取出蛋白质 组分，在50~60 °C下提取40~50min，提取完成后离心分离，取湿残渣； B、 向上述湿残渣中加入湿残渣质量3~10倍的蒸馏水，加酸调节至pH为4~8,制得水溶 性提取液； C、 将上述提取液置于超声波提取器中，超声波功率为150~200w，提取时间为1-30min； D、 提取完毕后离心分离，取上清液，浓缩至原体积的1/4~1/3,得浓缩液。
[0048] (2)酶解工艺 将上清液用无机碱调pH为6.5~7.5，在50 °C~60°C下，加入中性蛋白酶，酶解反应2h~ 6h; 所述的碱蓬粉与中性蛋白酶的质量比为1: 〇. 〇〇 1~1: 〇. 〇 1; 再降温至30 °C~40 °C，用无机碱调pH为7.5~8.5，加入碱性蛋白酶，酶解反应2h~6h， 得酶解液； 所述的碱蓬粉与碱性蛋白酶的质量比为1:0.0 O1~1:0.01; 酶解后经脱色、脱重金属、过滤和干燥步骤后，得到盐地碱蓬植物盐。
[0049] 三、称量 按照配方称量雨生红球藻提取物和盐地碱蓬植物盐。
[0050] 四、混合 将称取好的雨生红球藻提取物和盐地碱蓬植物盐搅拌、混合均匀，制成混合粉末，得含 雨生红球藻提取物的植物盐。
[0051 ]应用效果： 1、本发明含雨生红球藻提取物的植物盐对猪油POV值测定试验及效果 本发明的发明人用实施例1~实施例3所得的含雨生红球藻提取物的植物盐添加到猪油 中，其中，本发明的含雨生红球藻提取物的植物盐的质量百分含量为0.15%，测定猪油的POV 值，并以未添加本发明含雨生红球藻提取物的植物盐的空白猪油作对比，实验结果如表3。 [0052] 弄3 POV倌贿时间的夺化结里（80Γ)
从表3可知，添加有实施例1~实施例3组的含雨生红球藻提取物的植物盐猪油的POV值 比空白猪油低，空白猪油在80°C促氧化条件下，经过5天的时间，POV值已经达到了 15.9meo/ kg，对比之下，添加有0.2%的实施例1~实施例3的含雨生红球藻提取物的植物盐猪油的POV 值5天的POV值在13.6~13.9meo/kg，比空白猪油的低，即添加有实施例1~实施例3的含雨生 红球藻提取物的植物盐猪油具有抑制猪油脂质过氧化的能力。
[0053]、本发明含雨生红球藻提取物的植物盐抑制癌细胞的试验及效果 按常规方法培养附着性癌细胞株，分成4组，对照组和实施例1~实施例3组。实施例1组~ 实施例3组在培养液中添加本发明实施例1~实施例3所述含雨生红球藻提取物的植物盐，添 加量为〇.7mg/ ml，对照组不作处理。培养2周后，用常规方法测定活细胞数，并与对照组比 较，计算培养2周后的死细胞比例。实验处理数据如表4所示。
[0054]表4抑制癌细胞试验的死细胞比例
除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为重量百分数，本发明所述的比例，均为质 量比例。
[0055]最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明， 尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可 以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。 凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的 保护范围之内。
【主权项】
1. 一种含雨生红球藻提取物的植物盐，其特征在于，所述植物盐，原料包括雨生红球藻 提取物和盐地碱蓬植物盐。2. 根据权利要求1所述的一种含雨生红球藻提取物的植物盐，其特征在于，包括以下重 量份的原料:雨生红球藻提取物2~4份，盐地碱蓬植物盐6~8份。3. 根据权利要求1所述的一种含雨生红球藻提取物的植物盐，其特征在于，所述雨生红 球藻提取物，蛋白质含量为21.2~26.1%，虾青素含量2.7~3.2%。4. 根据权利要求1所述的一种含雨生红球藻提取物的植物盐，其特征在于，所述盐地碱 蓬植物盐，黄酮含量为2 · 6~2 · 7mg/g，Ca含量为2600~2700mg/kg。5. -种含雨生红球藻提取物的植物盐的制备方法，其特征在于，所述雨生红球藻提取 物的制备包括超声波提取步骤，所述超声波提取步骤，提取频率为30~50 KHZ。6. 根据权利要求5所述的一种含雨生红球藻提取物的植物盐的制备方法，其特征在于， 所述雨生红球藻提取物的制备包括超声波提取步骤，所述超声波提取步骤，提取功率为60~ 8017. 根据权利要求5所述的一种含雨生红球藻提取物的植物盐的制备方法，其特征在于， 所述雨生红球藻提取物的制备包括超声波提取步骤，所述超声波提取步骤，声波提取时间5 ~13min〇8. 根据权利要求5所述的一种含雨生红球藻提取物的植物盐的制备方法，其特征在于， 所述雨生红球藻提取物的制备还包括稀碱破壁步骤，所述稀碱溶液的浓度为0.0 4~ 0.3mol/L，浸泡时间为16~20 h。9. 根据权利要求5所述的一种含雨生红球藻提取物的植物盐的制备方法，其特征在于， 所述雨生红球藻提取物的制备还包括层析步骤，所述层析步骤，洗脱液浓度为40~90%，所 述洗脱液为低级的醇、酮、酯的一种或几种以任意比例组合的水溶液。10. 根据权利要求5所述的一种含雨生红球藻提取物的植物盐的制备方法，其特征在 于，所述雨生红球藻提取物的制备还包括干燥步骤，所述干燥步骤，干燥时间为9~16h，冷冻 温度为-38~-52°C，干燥室真空压力为0~15pa。
【文档编号】A23L33/105GK105962285SQ201610294010
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年5月3日
【发明人】王胜
【申请人】王胜