一种具有清除体内垃圾、营养机体作用的富有机硒活性水的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种具有清除体内垃圾、营养机体作用的富有机硒活性水，所述活性水是将活性成分溶于水中形成的，所述活性成分包括水溶性有机硒、绞股蓝提取物、石斛水溶性低聚糖。此种活性水含有能够显著清洗体液和血液生理活性的绞股蓝皂苷，还含有能够清除体内垃圾的六角水，二者具有显著的协同清除体内垃圾的功效；此外，含有的绞股蓝多糖、绞股蓝黄酮、石斛水溶性低聚糖在不影响绞股蓝皂苷和六角水功效的前提下，具有平衡机体阴阳、营养机体器官、提高免疫力、延缓衰老的功效。CCTCC NO: M201570820151126 CCTCC NO: M201570620151126
【专利说明】
一种具有清除体内垃圾、营养机体作用的富有机砸活性水
技术领域
[0001] 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种具有清除体内垃圾、营养机体作用的富 有机硒活性水。
【背景技术】
[0002] 据联合国的调查，全球现有超过10亿人缺乏安全的饮用水，近年来，中国瓶装水零 售量与零售额均呈增长趋势。随着中国经济的快速发展和居民生活水平的提高，人们对瓶 装水的消费量也将在未来几年持续稳定地增长。
[0003] 普通的矿泉水和纯净水由15-17个水分子团组成，科学家发现，初生婴儿体内的水 分子都是六角水，随着年龄变化而逐渐减少。六角水的水分子团非常细小活跃，所以能轻易 穿透细胞膜，将氧气、养分、矿物质、微量元素带进细胞，它同时也很容易附着在体内垃圾 上，使体内垃圾排除体外。1991年，获诺贝尔医学奖的德国科学家Dr · Erwineher发现了人8 个以上的水分子团则很难进入细胞内部。如果水分子团大于10个，则需要消耗人体自身能 量才能够吸收和代谢。2000年美国科学家彼得·阿格雷用特殊的显微摄影成功的拍到了世 界第一张细胞膜水通道蛋白的高清晰立体照片，这个通道只允许小分子团水通过。这张照 片揭示了人类细胞因水的交流受阻而过早衰老的原因。它证实了只有人体细胞吸收和生理 活动需要的必须是小分子团水，小分子团水才能被细胞吸收、才能起到物质代谢、能量代 谢、信息代谢的载体功能。
[0004] 研究证明，小分子团水颗粒小，渗透力强，能快速进入人体细胞，30秒融入血液中， 活化细胞，使细胞拥有充足的水，并使细胞内水和细胞外水达到平衡状态，新陈代谢正常进 行。小分子团水进入人体细胞后，使人体各组织和每一个细胞的水都是纯洁、健康的水，从 而使整个人体都处于健康状态。小分子团水溶解力比一般水高30%以上，一是能将把营养 物质分解，输送带入细胞;二是能溶解长期存留在细胞内和血管壁上的残留物一废杂物及 有毒有害物质，并带出体外，提高身体细胞的排毒能力。
[0005] 六角水造水机是在不添加任何化学物质的情况下采用了已被科学认证的方法一 物理磁化的方法将一般的纯净水变成近似体液的弱碱性的磁化六角水。目前将15-17个水 分子团组成的普通的矿泉水和纯净水生产成六角水的设备技术成熟，若放大设备，完全可 生产出工业化大生产需要的设备。
[0006]硒是能中和或转化自由基的物质，抗氧化，从而祛除自由基对人体的损害，有延缓 衰老的作用。硒具有和胰岛素相同的作用，可以不依赖胰岛素来调节体内糖份，可以延缓、 减轻、防止糖尿病并发症的产生。硒是癌细胞的杀伤剂，能减轻放、化疗的毒副作用，降低抗 癌药物对肾、骨髓和肠胃的毒性，缓解患者的病痛。硒与污染食物、蓄积体内的铅、汞、镉等 重金属有很强的亲和力，与其结合形成硒-金属-蛋白质复合物，直接排出体外，起到解毒和 排毒的作用。无机硒强化剂的吸收和利用不是很理想，其生物有效性低，毒性较大，中毒量 与需要量之间范围小，因而被严格限制其使用量。如今，日本、美国等发达国家已经禁止在 食品甚至动物饲料中添加亚硒酸钠等无机硒。有机硒与亚硒酸钠等无机硒相比，具有食用 安全、无毒副作用、吸收利用率高(95%以上）、营养价值高(如高水平的维生素，高质量的蛋 白等)等优点。
[0007] 绞股蓝总皂苷为生理碱性物质，其基本化学结构是达玛烷型四环三萜类，C3位和 C20位羟基上多半连接糖链，主要由β-D-葡萄吡喃糖、β-D-木吡喃糖和α-L-鼠李吡喃糖组 成，亦有少数皂苷的糖链含有α-L-阿吡喃糖。研究已证实绞股蓝含83种皂苷成份，合称为绞 股蓝总皂苷，其中有6种如绞股蓝皂苷m、IV、Vni等就是人参皂苷此1、此3、1?(1、？2、1^3和人参 皂苷元K，且总苷含量是高丽参的3倍。其余77种单体皂苷均为人参皂苷的异构体。现代药理 学研究证明，绞股蓝具有降血脂、降血压、增加冠状动脉和脑血流量、抗衰老、强壮、增强免 疫、护肝、镇静止痛、抗溃疡等作用，对防治动脉硬化、高血压、冠心病、中风、糖尿病、肥胖 症、慢性肝炎、慢性萎缩性胃炎、慢性胆囊炎、溃疡病、支气管炎等多种疾病有较显著疗效。
[0008] 石斛多糖是石斛的主要有效成份，石斛多糖属于活性多糖的一种，具有抗炎、抗病 毒、修复自身提高免疫力、抗肿瘤、抗氧化的功效，具有"延年益寿、健脾开胃、增强体质、清 热解毒、滋养阴精、润养肌肤、调节血糖、抗癌"等功效。
[0009] 目前还没有成熟的可用于工业化生产的富有机硒六角水技术的相关报道。
【发明内容】
[0010] 本发明针对现有的纯净水和矿泉水无显著的清除机体内垃圾功效、无营养机体功 效，仅具补水功能的缺陷，提供一种具有清除体内垃圾、营养机体作用的富有机硒活性水， 该活性水很好地克服了上述缺陷。
[0011] 本发明的技术方案之一是：一种具有清除体内垃圾、营养机体作用的富有机硒活 性水，所述活性水是将活性成分溶于水中形成的，所述活性成分包括水溶性有机硒、绞股蓝 提取物、石斛水溶性低聚糖。
[0012] 优选地，所述绞股蓝提取物选自绞股蓝皂苷、绞股蓝黄酮、绞股蓝多糖中的一种或 多种，优选三种。
[0013] 当选择上述三种绞股蓝提取物时，优选各提取物的重量份为：10-200份绞股蓝皂 苷、5-50份绞股蓝黄酮，200-6000份绞股蓝多糖。此种配比下的绞股蓝提取物添加进水中制 成的活性水具有最佳的协同效果，能够理想地清除机体内的垃圾。
[0014] 优选地，所述活性成分包括如下组分:水溶性有机硒，绞股蓝皂苷、绞股蓝黄酮、绞 股蓝多糖、石斛水溶性低聚糖。进一步优选地，其重量份为:0.01-0.05份硒，10-200份绞股 蓝皂苷、5-50份绞股蓝黄酮，200-6000份绞股蓝多糖，4000-10000份石斛水溶性低聚糖。此 种配比下，各活性成分具有最佳的协同效果，能够理想地发挥各自作用。
[0015] 进一步优选地，各活性成分在水中的浓度为:〇 · 〇卜〇 · 〇5mg/L硒，10-200mg/L绞股 蓝皂苷，5-50mg/L绞股蓝黄酮，0.2-6g/L绞股蓝多糖，4-10g/L石斛水溶性低聚糖。
[0016]本发明所述的水为常用的饮用水，如自来水，矿泉水，纯净水，六角水等。本发明优 选采用六角水为溶剂，所述六角水由纯净水经六角水造水机制得;或由达标的pH值<6.5、 pH值6.5-7.2、pH值>8的含气天然矿泉水、充气天然矿泉水、无气天然矿泉水、脱气天然矿 泉水经过六角造水机制得;或为天然六角水(如含六角水为主的雪水）。
[0017]本发明涉及到的活性水含有能够显著清洗体液和血液生理活性的绞股蓝皂苷，还 含有能够清除体内垃圾的六角水，二者具有显著的协同清除体内垃圾的功效;此外，含有的 绞股蓝多糖、绞股蓝黄酮、石斛水溶性低聚糖在不影响绞股蓝皂苷和六角水功效的前提下， 具有平衡机体阴阳、营养机体器官、提高免疫力、延缓衰老的功效。
[0018] 其中，所述水溶性有机硒主要指硒蛋氨酸、硒代半胱氨酸、硒低聚糖、水溶性硒蛋 白中的一种或多种，水溶性有机硒可通过市购获得，作为有机硒源添加到六角水中，或者采 用如下方法制备：
[0019] 将枯草芽孢杆菌SE201412接种于含硒源的培养基中发酵培养，离心发酵液，取上 清液或将上清液浓缩后取浓缩液或将上清液干燥后取干粉即得，所述枯草芽孢杆菌 (Bacillus Subtilis)SE201412已于2015年11月26日保藏于中国典型培养物保藏中心（简 称CCTCC;地址：中国武汉，武汉大学；邮编:430072)，保藏编号CCTCC No.M2015708。
[0020] 该菌株在发酵中十分耐硒，能在无机硒30000mg/kg浓度的发酵液中正常生长，且 能分泌出5000mg/L-l 2000mg/L水溶性有机硒。
[0021] 所述含硒源的培养基可在本领域常用培养基的基础上加入亚硒酸钠得到。本发明 优选的含硒源培养基为8_12g//L蛋白胨，l-5 g//L牛肉膏，3-7g//L氯化钠，0.5-30g/L亚硒酸 钠，PH7-7.5。本发明进一步优选的含硒源培养基为：10g/L蛋白胨，3 g//L牛肉膏，5g//L氯化 钠，7g/L亚硒酸钠，ρΗ7·2。
[0022] 所述发酵培养的条件可采用本领域常规技术手段或依据本领域常识进行选择。本 发明优选的培养条件为:搅拌速度150-190r/min，溶氧80 %-100 %，温度28-32 °C，发酵时间 18-22h，pH6-7。
[0023] 所述枯草芽孢杆菌SE201412的接种量可采用本领域常规接种量，如1-2.5%，或3-5%，或5-10%〇
[0024] 接入菌种后，在发酵培养过程中每隔2-4小时取样发酵液，用酸度计测定pH并保持 发酵液pH在6.8-7.5之间；同时，用可见光分光光度计测定细菌细胞浓度，当前后两次取样 检测到的细菌细胞浓度在最大吸光值处没有明显增加时，即可认定发酵结束。
[0025]发酵培养结束后，采用固液离心机处理发酵液，取上清液;或浓缩所述上清液取浓 缩液或将上清液浓缩、干燥后取干粉即得水溶性有机硒。对于离心后的沉淀物可采用如下 方法回收利用：向沉淀物中加入纤维素酶酶解，离心酶解液，再将酶解沉淀物用蛋白酶酶解 后离心，合并两次离心液，其内仍含有水溶性有机硒。也可将两次离心液浓缩得浓缩液;或 将浓缩液冻干得干粉。
[0026] 所述绞股蓝提取物可采用普通市售产品或采用本领域常规技术手段对绞股蓝进 行提取即可。
[0027] 本发明提供一种优选的绞股蓝提取物的提取方法:取绞股蓝茎叶，干燥、粉碎，加 入水浸润溶胀后破壁，固液分离后收集破壁液并向所述破壁液中加入澄清剂除杂，固液分 离后收集澄清液;采用2.5万分子超滤膜过滤所述澄清液，透过液经浓缩、干燥即得所述绞 股蓝总有效成分提取物;或者，采用1万分子量超滤膜过滤所述澄清液，透过液继续过1000 分子量纳滤膜，透过1〇〇〇分子纳滤膜的液体继续过500分子量的纳滤膜，透过500分子量的 液体继续过150分子量的反渗透膜。收集分子量大于1万以及分子量大于1000小于1万的液 体，经浓缩干燥即得绞股蓝多糖干粉;收集分子量大于500等于1000的液体，经浓缩干燥即 得绞股蓝皂苷干粉;收集分子量小于150小于500的液体，经浓缩干燥即得绞股蓝黄酮干粉。 [0028]其中，所述浓缩在60_70°C (优选65°C)条件下进行。
[0029] 所述干燥为冷冻干燥，具体条件为-55°C~_65°C，真空度5-15Pa;优选为-60°C， 10Pa〇
[0030] 优选地，所述澄清液的制备方法具体为：取绞股蓝茎叶，干燥、粉碎，过80-100目 筛，按1: (4-6)料液比，向粉碎物中加入水浸润l-3h后破壁，固液分离后收集破壁液，于70-80°C条件下，向破壁液中加入澄清剂并不断搅拌，直至液体澄清，固液分离后取液体即得。
[0031] 其中，所述澄清剂可采用本领域常用试剂，加入量以及处理条件可依据实际情况 进行选择。
[0032]本发明优选的澄清剂包括A剂和B剂，所述A剂是将ZTCl + 1-Π除杂剂中的A澄清剂 加水配制成的浓度0.5 %-1.5 %的溶液；所述B剂是将ZTC1 + 1- Π除杂剂中的B澄清剂加 0.5 %-1.5 %醋酸水溶液配制成的浓度0.5 %-1.5 %的溶液。A剂和B剂的加入方法为:依次 向破壁液中加入所述破壁液重量3-7 %的B剂和等量的A剂。
[0033]优选地，A剂是将ZTC1 + 1- Π除杂剂中的A澄清剂加水配制成的浓度1 %的溶液;所 述B剂是将ZTCl + 1-Π除杂剂中的B澄清剂加1%醋酸水溶液配制成的浓度1%的溶液。其加 入方法为:依次向破壁液中所述破壁液重量5%的B剂和等量的A剂。
[0034]其中，所述浓度(如1 %，5 %等)指的是质量体积浓度，例如，1 %指的是100ml水中 加入lg溶质。
[0035] 此种澄清剂能够理想地去除澄清液中的杂质，处理后的液体透明澄清，质量佳。
[0036] 为了提高提取收率，固液分离后的残渣采用如下方式进一步提取:残渣榨干水分， 将水分合并至破壁液中，榨干水分后的二次残渣加入去离子水吸涨后，超声提取，再固液分 离，液体合并至破壁液中，三次残渣重复上述操作至少一次。
[0037] 优选地，残渣榨干水分，将水分合并至破壁液中，榨干水分后的二次残渣加入7-10 倍重量的水吸涨l_3h后，在超声频率20-30KHZ，超声峰值功率250-350W，45-55°C条件下超 声提取20-30min，再固液分离，液体合并至破壁液中，三次残渣重复上述操作一次。此种处 理后，对残渣中各种活性物质进行检测，发现绞股蓝多糖、绞股蓝黄酮、绞股蓝皂苷的提取 率达到99%，绞股蓝多糖、绞股蓝黄酮、绞股蓝皂苷的收率依次达到82%、84%、92%。
[0038] 优选地，所述绞股蓝皂苷，绞股蓝黄酮，绞股蓝多糖可采用绞股蓝原变种(苦味绞 股蓝）全草提取，或用甘味绞股蓝恩七叶甜新品种全草提取，或用恩五叶密新品种全草提 取，或用日本冲绳2号绞股蓝全草提取。
[0039] 所述石斛水溶性低聚糖可采用普通市售产品或采用本领域常规技术手段制备即 可。本发明优选的制备方法可参照申请号2016100549037,发明名称"小孢根霉C97102734及 应用"记载的方法制备，本发明同时将该专利的内容全文引入本发明。
[0040] 本发明仅示例性地给出一种制备方法:将石斛茎或花切碎，加入水打汁，先向汁液 中加入石斛益生中性β-甘露聚糖酶酶解，后向汁液中接入小孢根霉C97102734发酵，取滤液 或将滤液冷冻干燥后取干粉。
[0041 ]优选地，将石斛茎或花切碎，加入石斛茎或花重量5-8倍的水打汁，按照益生中性 β-甘露聚糖酶用量100000U~300000U/kg石斛，小孢根霉C97102734接种量10亿~30亿个/ kg石斛，先向灭菌后的石斛汁液中接入石斛益生中性β_甘露聚糖酶，于50°C~60°C，pH6~ 7.5条件下对石斛多糖初步酶解3~5h;然后向酶解液中接入小孢根霉C97102734,于25~30 °C，90~100 %溶氧，搅拌速度120~180转/min条件下发酵。
[0042] 所述小抱根霉（Rhizopus microsporus)C97102734已于2015年11月26日保藏于中 国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国.武汉.武汉大学，邮编430072)，保藏编号为 CCTCC No.M2015706。
[0043] 本发明的技术方案之二是：一种具有清除体内垃圾、营养机体作用的富有机硒活 性水的制备方法，将适量的水溶性有机硒、绞股蓝提取物、石斛水溶性低聚糖加入水中，搅 拌均匀、灭菌即得。
[0044] 在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以相互组合，即得本申请各较佳 实施例。
[0045] 本发明具有的优点和有益效果是：
[0046] (1)水溶性低聚糖和水溶性有机硒采用发酵法生产，成本低，且产物品质优；
[0047] (2)本发明提及的绞股蓝提取物提取方法能够同时提取出高纯度的绞股蓝皂苷、 绞股蓝多糖和绞股蓝黄酮；
[0048] (3)采用水溶性低聚糖、水溶性有机硒、绞股蓝提取物协同功效理论进行配方，生 产出了能够清除体内垃圾和营养机体的活性水；
[0049] (4)提高了纯净水、矿泉水的生产技术含量，丰富了纯净水、矿泉水商品品种，满足 市场消费需求。
【附图说明】
[0050] 图1为菌株SE201412显微镜（1000X)观察照片；
[0051 ] 图2为菌株SE201412的平板菌落形态；
[0052] 图3为菌株SE201412进化树；
[0053] 图4为小孢根霉C97102734的菌落图；
[0054]图5为小孢根霉C97102734的电镜照片；
[0055] 图6为小孢根霉C97102734的电镜照片；
[0056] 图7为小孢根霉C97102734的rRNA基因ITS1-5.8ITS2区的序列。
【具体实施方式】
[0057] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。本发明所采用的所有 原料均为已知的市售品，涉及到的检测方法或操作如无特殊说明均为本领域的常规检测方 法或操作。本发明采用GB/T5009.93-2003《食品中硒的测定》、GB/T5009.11-2003《食品中总 砷和无机砷的测定》、GB/T23942-2009化学试剂、电感耦合等离子体原子发射光谱法通则、 杭州市农业标准规范DB3301检测发酵液中的有机硒和重金属含量。
[0058]菌株的鉴定和分离：
[0059](一)枯草芽孢杆菌SE201412菌株的分离和鉴定
[0060] (1)分离:从湖北恩施市盐业复烤厂发酵烟草废弃物中取材料lg，在无菌超净工作 台上，用无菌水振荡稀释Π^-ΠΓ8，用移液管取0. lml-0.2ml移入已灭菌倒有专用培养基 (自来水1000ml，硒（由亚硒酸钠提供)5g、20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化钠、0.5g牛肉膏升、 酵母膏0.25 %、磷酸氢二钾0.1 %、PH 7.5)的培养皿上，用涂布棒涂匀，无菌培养，选取在高 硒培养基上生长旺盛的单菌落。
[0061 ] (2)鉴定:该菌株形态或生理生化特征是:革兰氏染色阳性、细胞杆状、直径<lum、 如图1所示，形成芽孢，不膨大，无伴胞晶体;接触酶、氧化酶阳性，好氧生长，VP试验阳性，VP <PH6试验阳性，VP>PH7试验阴性，甲基红试验阴性，利用葡萄糖、木糖、L-阿拉伯糖、甘露 醇产酸;利用葡萄糖不产气;利用柠檬酸盐，还原硝酸盐，水解淀粉、液化明胶、分解酪素。在 PH6、7%NaCl、70°C 均生长。
[0062]根据细胞形态、生化实验结果和基因序列测定结果，该菌株SE201412鉴定为枯草 芽孢杆菌Baci 1 lus Subti 1 is，已于2015年11月26日保藏于中国典型培养物保藏中心（简称 CCTCC;地址：中国武汉，武汉大学；邮编：430072)，保藏编号CCTCC No.M2015708。
[0063] 该菌株的平板菌落形态和进化树分别如图2和图3所示。表1列出了该菌株16S rRNA基因测序BLAST结果，表2，表3列出了该菌株的生理生化特性，该菌株的16S rRNA基因 序列如SEQ ID No.l所示。
[0064] 表1菌株SE201412 16S rRNA基因测序BLAST结果
[0065]
[0066]
[0067] 表2菌株SE201412生理生化特性-酶活、碳源同化
[0068]
[0070] +:阳性反应;阴性反应[0071] 表3菌株SE201412生理生化特性一利用碳源产酸
[0069]
[0072]
[0073]
[0074] +:阳性反应;-:阴性反应;W:弱阳性 [0075](二)小孢根霉C97102734菌株的分离和鉴定
[0076] (1)分离:是从成都水井坊分离得到的，其分离方法为:孢子繁殖法。
[0077] (2)鉴定:该菌株的形态特征为:菌落长满培养皿，深灰褐色，薄棉絮状匍匐菌丝及 假根褐色;rRNA基因ITSl-5.8ITS2区序列测定结果详见序列表SEQIDN0.2所示，菌株的菌 落照、在电镜下的照片详见图4,图5、图6。
[0078]实施例中涉及到的绞股蓝提取物、水溶性有机硒、石斛水溶性低聚糖的制备方法 如下所示，但本领域技术人员可以理解的是，不局限于特定方式的其他制备方法(尤其是在 本发明所限定范围内的方法)也同样可以实现基本相同的提取效果，可用于实现本发明，对 此不再作特别限定。
[0079]绞股蓝提取物的制备
[0080]绞股蓝提取物的制备方法包括如下步骤：
[0081 ] ⑴将新鲜绞股蓝茎叶干燥、粉碎，过80目筛，按1:5料液比，向粉碎料中加入除离 子水，于25 °C浸润2h，充分溶胀的材料置常温膨化机破壁；
[0082] (2)使用固液离心机分离破壁后的液体，收集破壁液;残渣用压榨机榨干水分，水 分并到破壁液中；榨干水分后的干残渣加入8倍除离子水，吸涨2h，置超声机中，在超声频率 28KHz，超声峰功率300W，50°C条件下超声提取24min，固液离心机分离超声波机提取液并到 破壁液中，残渣用压榨机榨干水分，水分并破壁液中，干残渣加8倍除离子水重复超声波机 提取一次，固液离心机分离浸泡提取液并到破壁液中，残渣用压榨机榨干，收集水分集并到 破壁液中（检验残渣中多糖、黄酮、人参皂苷含量，多糖、黄酮、人参皂苷的提取率达到 99%)；
[0083] (3)将步骤(2)的破壁液转移至除杂罐中，加温到75°C，取ZTCl + 1-Π除杂剂(配好 的A、B澄清剂:将A除杂剂用除离子水配成1%浓度溶解24h;将B除杂剂用1%醋酸水配成1% 浓度溶解24h备用）。除杂提取液用低于65°C离心浓缩机脱水至含水量95%，加热至75°C按 破壁液5 %用量，先B后A的次序加入破壁液中并不断搅拌，待破壁液变很透明时停止加温和 搅拌，上固液离心机离心分离残杂(色素、蛋白质、粘液质、鞣质），得透明总提取液。
[0084] (4)将透明总提取液管道输入2.5万分子超滤机除去少量杂质，透过液置65°C离心 浓缩机浓缩成含水量50%-60%，置冷冻干燥机，温度控制在-60°C，真空度10Pa干燥成干 粉，检测计算绞股蓝干粉中的绞股蓝含量、多糖含量、黄酮含量备用。
[0085]绞股蓝提取物的制备
[0086]绞股蓝提取物的制备方法包括如下步骤：
[0087] (1)将1吨新鲜绞股蓝茎叶干燥、粉碎，过80目筛，向粉碎料中加入5吨除离子水，于 25°C浸润2h，充分溶胀的材料置常温膨化机破壁；
[0088] (2)使用固液离心机分离破壁后的液体，收集破壁液;残渣用压榨机榨干水分，水 分并到破壁液中；榨干水分后的干残渣加入8吨除离子水，吸涨2h，置超声机中，在超声频率 28KHz，超声峰值功率300W，50°C条件下超声提取24min，固液离心机分离超声波机提取液并 到破壁液中，残渣用压榨机榨干水分，水分并破壁液中，干残渣加8吨除离子水重复超声波 机提取一次，固液离心机分离浸泡提取液并到破壁液中，残渣用压榨机榨干，收集水分集并 到破壁液中（检验残渣中多糖、黄酮、人参皂苷含量，多糖、黄酮、人参皂苷的提取率达到 99%)；
[0089] (3)将步骤(2)的20吨破壁液用低于65 °C的离心浓缩机脱水至3吨，将3吨浓缩后的 破壁液转移至除杂罐中，加温到75°C，取0.15吨实施例1的A澄清剂和0.15吨B澄清剂，按先B 后A的次序加入破壁液中并不断搅拌，待破壁液变很透明时停止加温和搅拌，上固液离心机 离心分离残杂(色素、蛋白质、粘液质、鞣质），得透明总提取液；
[0090] (4)将透明总提取液管道输入1万分子量超滤机除去大于1万分子量杂质，透过液 再输入1000分子量纳滤膜机纯化，透过液再输入500分子量纳滤膜机纯化，透过液再输入 150分子量反渗透膜机纯化，收集分子量大于1万以及分子量大于1000小于1万的液体，经浓 缩干燥即得纯度82%绞股蓝多糖干粉;收集分子量大于500等于1000的液体，经浓缩干燥即 得纯度92%绞股蓝皂苷干粉;收集分子量小于150的液体，经浓缩干燥即得纯度84%绞股蓝 黄酮干粉，备用。
[0091] 石斛水溶性低聚糖的制备
[0092] (1)小孢根霉C97102734试管种菌活化培养:取400g马铃薯切成小块置2L烧杯中， 加水0.6L煮沸20~30分钟煮烂，用八层纱布过滤，加热，再加40g琼脂，继续加热搅拌混匀， 待琼脂溶解完后，加入40g葡萄糖，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至2L，分装试管加塞、包 扎，置伽马辐照机2500千拉德辐照灭菌后取出试管摆斜面或者摇匀，冷却后置超净工作台 接种小孢根霉C97102734，接种完毕后，置恒温培养箱27 °C培养4天。
[0093] (2)小孢根霉C97102734种子液培养:取40kg马铃薯切成小块，置200L化糖锅中，加 水60L煮沸20~30分钟煮烂，用八层纱布过滤，继续加热搅拌混勾，加入4kg葡萄糖，搅拌均 勾，稍冷却后再补足水分至200L，置伽马福照机2500千拉德福照灭菌后，用无菌栗和无菌管 道输入200L发酵罐中，在无菌条件下从发酵罐接菌口将100支小孢根霉C97102734活化试管 种接入发酵罐，接种完毕后，在无菌条件下密封接种口，在27°C，100%溶氧、搅拌速度150 转/min，培养8h，即得。
[0094] (3)石斛水溶性低聚糖的制备:将新鲜的180kg的石斛枝条洗净，用变频变速高效 切碎机将石斛鲜条、鲜花切成3mm薄片后送入变频变速打汁机中，向打汁机中加入1260kg 水，打汁机开机后其速度由慢变快打汁，转速控制在10~1000转/min范围，待全部打出汁 后，用栗和管道将石斛汁输送到灭菌室，用伽马辐照机2500千拉德辐照灭菌，将灭菌后的石 斛汁用无菌栗和无菌管道输送到2吨的无菌发酵罐中，并向其中加入0.08kg益生中性β-甘 露聚糖酶，于50°C，pH条件下酶解3.5h;然后向酶解液中加入36kg小孢根霉C97102734种子 液，在27°C，100%溶氧、搅拌速度150转/min条件下培养6h，然后用无菌栗和无菌管道将石 斛液化的低聚糖输送到无菌固液离心机上离心，用无菌栗和无菌管道将无菌的水状透明的 石斛汁液化的低聚糖输送到无菌储藏罐内密封保存。
[0095] 经检测，石斛液化液中石斛低聚糖的含量为2.6%，也可冷冻脱水至石斛低聚糖的 含量达到30%以上。
[0096] 200mg/L水溶性有机硒的制备
[0097] (1)枯草芽孢杆菌SE201412试管种活化培养:将10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g氯化钠溶 于1L蒸馏水中，调节pH为7.2，然后加入琼脂，加温溶解均匀后分装于烧瓶内并用封口膜封 口，置伽马射线辐照机灭菌辐照剂量2.5kGy灭菌，然后置微波器中将培养基加热成流体，即 得培养基;每根试管中倒入l〇ml培养基，摆斜面，冷却，凝固，置超净工作台，接入用冰箱储 藏的益生菌No.M Se2015708，每根试管用接种环接一环，塞上泡沫塞，置28°C~32°C条件下 培养3-5天，用于种子液生产。
[0098] (2)枯草芽孢杆菌SE201412种子液培养:将1000g蛋白胨，300g牛肉膏、500g氯化钠 溶于100L自来水中，调节其pH为7.2，用伽马射线辐照机2.5kGy灭菌后，接入步骤（1)的试管 种，控制搅拌速度150~190转/min，溶氧80%-100%，pH6~7,温度28°C~32°C发酵20h。 [0099] (3)水溶性有机硒制备:将1 OOOOg蛋白胨，3000g牛肉膏，5000g氯化钠，0.3kg亚硒 酸钠溶于1000L自来水中，并调节其pH为7.2，即得发酵培养基;将所述发酵培养基置伽马射 线辐照机2.5kGy灭菌，接入步骤（2)的种子液100L，控制搅拌速度150~190转/min，溶氧 80%-100%，pH6~7，温度28°C~32°C发酵20h，即得200mg/L有机硒菌液体。
[0100] 300mg/L水溶性有机硒的制备
[0101] (1)枯草芽孢杆菌SE201412试管种活化培养:同实施例4;
[0102] (2)枯草芽孢杆菌SE201412种子液培养:同实施例4;
[0103] (3)水溶性有机硒制备：同实施例4，其区别仅在于培养基中亚硒酸钠量为0.5kg。 发酵结束得300mg/L有机硒菌液体，用离心浓缩机浓缩成30000mg/L有机硒菌液体。
[0104] 5000mg/L水溶性有机硒的制备
[0105] (1)枯草芽孢杆菌SE201412试管种活化培养:同实施例4;
[0106] (2)枯草芽孢杆菌SE201412种子液培养:同实施例4;
[0107] (3)水溶性有机硒制备：同实施例4,其区别仅在于培养基中亚硒酸钠量为 9.843kg。发酵结束得5000mg/L有机硒菌液体。
[0108] 实施例1
[0109] -种具有清除体内垃圾、营养机体作用的富有机硒活性水，所述活性水是将活性 成分溶于水中形成的，各活性成分的用量为:有机硒〇. 〇5mg/L，绞股蓝皂苷100mg/L，绞股蓝 黄酮50mg/L，绞股蓝多糖2g/L，石斛低聚糖10g/L(l%)。
[0110] 实施例2
[0111] -种具有清除体内垃圾、营养机体作用的富有机硒活性水，所述活性水是将活性 成分溶于水中形成的，各活性成分的用量为:有机硒0. 〇4mg/L，绞股蓝皂苷150mg/L，绞股蓝 黄酮30mg/L，绞股蓝多糖4g/L，石斛低聚糖5g/L(0.5 % )。
[0112] 实施例3
[0113] 该实施例提供实施例1所述活性水的制备方法，具体包括如下步骤：
[0114] (1)用质量合格的普通15-17个水分子团组成的矿泉水经过六角水磁化机生产出 小水分子团的六角水；
[0115] (2)取1000mg/L水溶性有机硒溶液50ml，纯度92%的绞股蓝总皂苷108.7g，纯度 84 %的绞股蓝黄酮59.52g，纯度82 %的绞股蓝多糖243.9g，纯度2.6 %的水溶性石斛低聚糖 384.62L，再加步骤（1)的六角水615.4L，搅拌均匀，管道输送到无菌灌装机上灌装，自动封 盖，输送带送入伽马射线辐照机2.5kGy灭菌，包装，成含有机硒0.05mg/L绞股蓝总皂苷 100mg/L、绞股蓝黄酮50mg/L、绞股蓝多糖200mg/L、水溶性石斛低聚糖l%(10g/L)的销售饮 料商品。
[0116] 实施例4
[0117] 该实施例提供实施例2所述活性水的制备方法，其制备方法同实施例6，区别仅在 于:加入2000mg/L水溶性有机硒溶液120ml，纯度90 %的绞股蓝皂苷1000g，纯度80 %的绞股 蓝黄酮225g，纯度75 %的绞股蓝多糖3200g，纯度5 %的水溶性石斛低聚糖600L，再加5.4吨 六角水。
[0118]虽然实施例1-2列举了两种活性水，但本领域技术人员可以理解的是，在本发明 所限定的各组分用量范围内，同样可以采用实施例3-4所述的方法制备其他活性水，并可实 现基本相同的效果。
[0119] 效果实验
[0120] 实验方法:在人群中选择100名有便秘史，年龄在55-56岁的女性患者，每天早中晚 各喝300ml实施例1的活性水，每隔7天统计一次效果，共统计12次，每次按便秘症状消失、便 秘症状明显减轻、便秘症状有减轻、便秘症状无改善进行归类统计。
[0121] 统计结果如表4所示：
[0122] 表4本申请活性水对治疗便秘的效果
[0123]
[0124] 中医认为，便秘病位主要在大肠，与肺、脾、肾关系密切。病因多为年老体弱、久病 产后、素体虚弱，长期的便秘秘会诱发乳腺疾病、早老性痴呆症。
[0125] 从上述实验结果可以看出：本发明的活性水对便秘有很好的疗效，推测原因可能 在于：（1)本发明的活性水是小分子团水，它将13-17个水分子抱成一团的普通矿泉水、纯 净水改造成为6个水分子抱成一团的"六角水"，这种水运动速度快、渗透性好、溶解力强，喝 下后能够快速被人体吸收，比大分子团水(如矿泉水、山泉水、自来水、纯净水等)更好地溶 解代谢产物，起到有效清除体内垃圾的作用；（2)本发明活水中含绞股蓝总皂苷具有降血 月旨、降血糖、抗肿瘤、抗衰老、保护肝脏及增强肌体免疫功能等作用，尤其是绞股蓝总皂苷中 含有28种抗溃疡因子，可直接修复胃溃疡、十二指溃疡，肠绒毛损伤，增强肠蠕动能力；（3) 活水中含有的绞股蓝总多糖具有抗肿瘤，抗氧化、提高免疫力，修复器官组织细胞膜，提高 肠代谢的能力；（4)李时珍在《本草纲目》中评价石斛"强阴益精，厚肠胃，补内绝不足，平胃 气，长肌肉，益智除惊，轻身延年"，具有滋阴润肺，益胃补肾，建脑明目，降火良药，并具生津 止渴，补五脏虚劳，清肺止咳，防感冒，抗疲劳的保健功效，而从石斛中提取的水溶性石斛多 糖是它最主要的有效成分，本活性水中含的石斛低聚糖活性功效更直接，它直接改善身体 各器官代谢，减轻便秘；（5)本活水中含的有机硒具有1.提高人体免疫力;2、抗氧化、延缓衰 老;3、保护修复细胞;4、参与糖尿病的治疗;5、防癌抗癌6.保护眼睛;7、提高红细胞的携氧 能力;8、防治心脑血管疾病;9、解毒、防毒、抗污染;10、保护肝脏的功效。
[0126] 本发明的活性水，含有上述各有效成分，各有效成分对恢复肠功能具有很好的协 同功能，因此能够显著改善便秘。
[0127] 虽然，上文中已经用一般性说明、【具体实施方式】及试验，对本发明作了详尽的描 述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见 的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的 范围。
【主权项】
1. 一种具有清除体内垃圾、营养机体作用的富有机硒活性水，其特征在于:所述活性水 是将活性成分溶于水中形成的，所述活性成分包括水溶性有机硒、绞股蓝提取物、石斛水溶 性低聚糖。2. 根据权利要求1所述的富有机硒活性水，其特征在于:所述绞股蓝提取物包括绞股蓝 皂苷、绞股蓝黄酮、绞股蓝多糖中的一种或多种。3. 根据权利要求2所述的富有机硒活性水，其特征在于:所述绞股蓝提取物包括绞股蓝 皂苷、绞股蓝黄酮、绞股蓝多糖； 优选地，其重量份为：10-200份绞股蓝皂苷、5-50份绞股蓝黄酮，200-6000份绞股蓝多 糖。4. 根据权利要求1-3任一项所述的富有机硒活性水，其特征在于:所述活性成分包括如 下组分:水溶性有机硒，绞股蓝皂苷、绞股蓝黄酮、绞股蓝多糖、石斛水溶性低聚糖； 优选地，其重量份为:0.01-0.05份硒，10-200份绞股蓝皂苷、5-50份绞股蓝黄酮，200-6000份绞股蓝多糖，4000-10000份石斛水溶性低聚糖。5. 根据权利要求1-4任一项所述的富有机硒活性水，其特征在于：所述活性水中含有 0 · 01-0 · 05mg/L硒，10_200mg/L绞股蓝阜苷，5_50mg/L绞股蓝黄酮，0 · 2_6g/L绞股蓝多糖，4-10g/L石斛水溶性低聚糖。6. 根据权利要求1-5任一项所述的富有机硒活性水，其特征在于:所述水为六角水。7. 根据权利要求1-6任一项所述的富有机硒活性水，其特征在于:所述绞股蓝提取物的 提取方法如下:取绞股蓝茎叶，干燥、粉碎，加入水浸润溶胀后破壁，固液分离后收集破壁液 并向所述破壁液中加入澄清剂除杂，固液分离后收集澄清液； 采用2.5万分子超滤膜过滤所述澄清液，透过液经浓缩、干燥即得所述绞股蓝提取物； 或者，采用1万分子量超滤膜过滤所述澄清液，透过液过1000分子量纳滤膜，透过1000分子 纳滤膜的液体过500分子量的纳滤膜，透过500分子量的液体过150分子量的反渗透膜;收集 分子量大于1万以及分子量大于1000小于1万的液体，经浓缩干燥即得绞股蓝多糖干粉;收 集分子量大于500等于1000的液体，经浓缩干燥即得绞股蓝皂苷干粉;收集分子量小于150 的液体，经浓缩干燥即得绞股蓝黄酮干粉。8. 根据权利要求7所述的富有机硒活性水，其特征在于:所述澄清液的制备方法为：取 绞股蓝茎叶，干燥、粉碎，过80-100目筛，按1: (4-6)料液比，向粉碎物中加入水浸润1 -3h后 破壁，固液分离后收集破壁液，于70-80 °C条件下，向破壁液中加入占所述破壁液重量3-7 % 的澄清剂并不断搅拌，直至液体澄清，固液分离后取液体即得。9. 根据权利要求7或8所述的富有机硒活性水，其特征在于:所述澄清剂包括A剂和B剂， 所述A剂是将ZTC1+1-Π 除杂剂中的A澄清剂加水配制成的浓度0.5%-1.5%的溶液;所述B 剂是将ZTC1 + 1- Π 除杂剂中的B澄清剂加0.5 %-0.15 %醋酸水溶液配制成的浓度0.5 % -1.5 %的溶液;A剂和B剂的加入方式为:先向破壁液中加入占所述破壁液重量3-7 %的B剂， 后加入与B剂等量的A剂； 优选地，所述A剂是将ZTC1 +1 - Π 除杂剂中的A澄清剂加水配制成的浓度1 %的溶液;所 述B剂是将ZTC1+1-Π 除杂剂中的B澄清剂加1 %醋酸水溶液配制成的浓度1 %的溶液;A剂和 B剂的加入方式为：先向破壁液中加入占所述破壁液重量5%的B剂，后加入与B剂等量的A 剂。10.根据权利要求1-9任一项所述的富有机硒活性水，其特征在于:所述石斛水溶性低 聚糖的制备方法如下:将石斛茎或花切碎，加入水打汁，先向汁液中加入石斛益生中性β-甘 露聚糖酶酶解，后向汁液中接入小孢根霉C97102734发酵，取滤液或将滤液冷冻干燥后取干 粉;所述小孢根霉C97102734的保藏编号为CCTCC ΝΟ.Μ2015706; 优选地，将石斛茎或花切碎，加入石斛茎或花重量5-8倍的水打汁，按照益生中性β-甘 露聚糖酶用量100000U~300000U/kg石斛，小孢根霉C97102734接种量10亿~30亿个/kg石 斛，先向灭菌后的石斛汁液中接入石斛益生中性β-甘露聚糖酶，于50°C~60°C，pH6~7.5条 件下对石斛多糖初步酶解3~5h;然后向酶解液中接入小孢根霉C97102734,于25~30°C，90 ~100%溶氧，搅拌速度120~180转/min条件下发酵。
【文档编号】A23L33/125GK105995322SQ201610338412
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月19日
【发明人】刘金龙, 郑威, 刘欋霄, 郑倬, 温亮, 戴光忠, 杨军, 孙志国
【申请人】湖北民族学院, 湖北省农业科学院农业经济技术研究所, 湖北省富硒产业研究院