一种灵芝提取物及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明公开了一种灵芝提取物的制备方法，该方法包括以下步骤：(1)将灵芝菌种注入培养基中，在温度25～30℃，湿度70～95％的条件下培育45?60天得到培养体；(2)将培养体在60～90℃条件下烘干至含水量为12％以下，再将烘干后的培养体粉碎，过20～60目筛，得到灵芝粉；(3)向灵芝粉中加入水和中性蛋白酶，40～55℃条件下酶解6～24h；(4)将酶解的灵芝粉通过板框过滤器过滤，真空浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥得到灵芝提取物。本发明将廉价易得的蚕蛹、鸡蛋、黄粉虫，蚯蚓等作为培养基，快速培育出灵芝菌丝及子实体，通过酶解?过滤?浓缩?干燥制得灵芝提取物，其营养价值获得了极大的提高，保健功能明显提升。
【专利说明】
_种灵芝提取物及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明涉及生物和酶工程技术领域，具体涉及灵芝培育、灵芝精华物质的制备方 法及其应用。
【背景技术】
[0002] 灵芝属于自然界分布的一类真菌生物，是传统名贵中药材之一，药食兼用。古今药 理与临床研究均证明，灵芝确有防病治病、延年益寿之功效，具有广泛的药理作用，如抗肿 瘤作用、免疫调节作用、抗放射与抗化疗作用，镇静作用、强心及抗心肌缺血作用、调节血脂 作用、降血糖作用、平喘作用、保肝作用、抗缺氧作用和抗衰老作用等。
[0003] 经化学分析，灵芝中含有多种多糖、多肽、氨基酸、三萜类、核苷等，具有广阔的市 场前景。但为数众多的灵芝品种中，只有赤灵芝、紫芝、云芝等具有较高的药用价值，野生灵 芝的数量远远不能满足人们对药用灵芝的需求。而且，目前人们利用灵芝的方式多为直接 食用或制成饮品，大部分营养成分未能被人体所吸收。因此，亟需一种高效制备灵芝精华物 质的方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种灵芝提取物及其制备方法和应用，用以解决灵芝难以 大规模生产，以及灵芝中的营养成分难以被人体充分吸收的问题。
[0005] 为实现上述目的，本发明第一方面提供了一种灵芝提取物的制备方法。具体地，该 方法包括如下步骤：
[0006] (1)将灵芝菌种注入培养基中，在温度25~30°C，湿度70~95%的条件下培育45~ 60天得到培养体，即灵芝菌丝、灵芝子实体和培养基的混合物；
[0007] (2)将所述培养体在60~90°C条件下烘干至含水量为12%以下，再将烘干后的培 养体粉碎，过20~60目筛，得到灵芝粉；
[0008] (3)向所述灵芝粉中加入水和中性蛋白酶，40~55°C条件下酶解6~24h;
[0009] (4)将酶解的灵芝粉通过板框过滤器过滤，真空浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥得到灵 芝提取物；
[0010]其中，所述培养基为蚕蛹、鸡蛋、黄粉虫，蚯蚓，蚂蚁，蝉中的一种或多种。
[0011 ] 优选地，所述菌种的接种量为10~30%。
[0012] 优选地，所述中性蛋白酶为木瓜酶、胰蛋白酶、枯草芽孢杆菌蛋白酶中的一种或多 种。
[0013] 优选地，所述步骤(3)中加入水的质量为灵芝粉质量的1~10倍，加入中性蛋白酶 的质量为灵芝粉质量的〇. 1~1 %。
[0014] 优选地，步骤（3)中酶解时还加入脂肪酶，所述脂肪酶的添加量为灵芝粉质量的 0.1 ~0.5%〇
[0015] 优选地，灵芝精华提取物粒径小于800nm。
[0016] 优选地，所述灵芝精华提取物制成冲剂、片剂或胶囊。
[0017] 本发明第二方面提供了一种灵芝提取物，所述灵芝提取物是本发明第一方面提供 的一种灵芝提取物的制备方法制得的。优选地，所述灵芝提取物含有灵芝多肽20~60%、三 萜1~5%、灵芝多糖1~10%、氨基酸10~30%、核苷1~3%、生物碱0.1~3%、灰分1~5%、 其余为水分。
[0018] 本发明第三方面提供了一种根据本发明第二方面提供的灵芝提取物的应用，所述 灵芝提取物用于食品、保健或医药领域。
[0019] 本发明方法具有如下优点：
[0020] 1、本发明利用蚕蛹、鸡蛋、黄粉虫，蚯蚓，蚂蚁，蝉为培养基，操作方法简单，材料易 于取得，具有低成本、高产出、易于大规模推广的特点。
[0021] 2、本发明中的培养体的培育条件易于控制，具有菌丝生长速度快，生物量高，培育 周期短，成本低的优点。
[0022] 3、本发明中的灵芝精华提取物具有易溶于水的特点，可根据需要制成各种水溶性 制剂，使用方便。
[0023] 4、本发明中的灵芝精华提取物蛋白含量比普通方法培育出的灵芝蛋白含量提高 了 6倍，营养价值大大提高。
[0024] 5、本发明中的灵芝精华提取物灵芝三萜和灵芝多糖含量比普通方法培育出的灵 芝三萜和灵芝多糖含量提高了 2~3倍，抗肿瘤，抗血栓，抗氧化，抗衰老，抗辐射，保肝，降血 糖，降血脂，调节免疫，调节核酸，增强体液免疫功能的作用明显提升。
【具体实施方式】
[0025] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0026] 实施例1
[0027] 本实施例灵芝提取物的制备方法，按以下步骤进行：
[0028] (1)将8g灵芝菌种注入50g蝉中，在温度为25 °C，湿度95 %的条件下培育50天得到 培养体(即灵芝菌丝、灵芝子实体和培养基的混合物）；
[0029] (2)将培养体在90°C条件下烘干至含水量为12%以下，再将烘干后的培养体粉碎， 过25目筛得到灵芝粉；
[0030] (3)向灵芝粉中加入质量为灵芝粉质量的6倍的水和质量为灵芝粉质量的1 %的胰 蛋白酶，54°C条件下酶解6h;
[0031] (4)将酶解的灵芝粉通过板框过滤器过滤，真空浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥得到灵 芝提取物(灵芝精华提取物粒径小于800nm)。
[0032] 实施例2
[0033]本实施例灵芝提取物的制备方法，按以下步骤进行：
[0034] (1)将18g灵芝菌种注入120g蚯蚓中（即菌种的接种量为15%)，在温度为29°C，湿 度90 %的条件下培育45天得到培养体；
[0035] (2)将培养体在85°C条件下烘干至含水量为12%以下，再将烘干后的培养体粉碎， 过30目筛得到灵芝粉；
[0036] (3)向灵芝粉中加入质量为灵芝粉质量的7倍的水和质量为灵芝粉质量的0.8%的 酶为木瓜酶，40 °C条件下酶解12h;
[0037] (4)将酶解的灵芝粉通过板框过滤器过滤，真空浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥得到灵 芝提取物。
[0038] 实施例3
[0039] 本实施例灵芝提取物的制备方法，按以下步骤进行：
[0040] (1)将14.4g灵芝菌种注入80g黄粉虫中，在温度26°C，湿度80%的条件下培育47天 得到培养体；
[0041] (2)将培养体在75°C条件下烘干至含水量为12%以下，再将烘干后的培养体粉碎， 过40目筛得到灵芝粉；
[0042] (3)向灵芝粉中加入质量为灵芝粉质量的1倍的水和质量为灵芝粉质量的0.7%的 枯草芽孢杆菌蛋白酶以及质量为灵芝粉质量的0.1%的脂肪酶，53°C条件下酶解14h;
[0043] (4)将酶解的灵芝粉通过板框过滤器过滤，真空浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥得到灵 芝提取物。
[0044] 实施例4
[0045] 本实施例灵芝提取物的制备方法，按以下步骤进行：
[0046] (1)将48g灵芝菌种注入160g鸡蛋中，在温度27°C，湿度72%的条件下培育48天得 到培养体；
[0047] (2)将培养体在80°C条件下烘干至含水量为12%以下，再将烘干后的培养体粉碎， 过45目筛得到灵芝粉；
[0048] (3)向灵芝粉中加入质量为灵芝粉质量的2倍的水和质量为灵芝粉质量的0.4%的 木瓜酶和枯草芽孢杆菌蛋白酶，52 °C条件下酶解8h;
[0049] (4)将酶解的灵芝粉通过板框过滤器过滤，真空浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥得到灵 芝提取物。
[0050] 实施例5
[0051] 本实施例灵芝提取物的制备方法，按以下步骤进行：
[0052] (1)将25g灵芝菌种注入100g蚂蚁中，在温度28°C，湿度70%的条件下培育58天得 到培养体；
[0053] (2)将培养体在65°C条件下烘干至含水量为12%以下，再将烘干后的培养体粉碎， 过60目筛得到灵芝粉；
[0054] (3)向灵芝粉中加入质量为灵芝粉质量的8倍的水和质量为灵芝粉质量的0.2%的 木瓜酶和胰蛋白酶，42 °C条件下酶解20h;
[0055] (4)将酶解的灵芝粉通过板框过滤器过滤，真空浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥得到灵 芝提取物。
[0056] 实施例6
[0057] 本实施例灵芝提取物的制备方法，按以下步骤进行：
[0058] (1)将30g灵芝菌种注入150g蚕蛹中，在温度30°C，湿度75%的条件下培育60天得 到培养体；
[0059] (2)将培养体在60°C条件下烘干至含水量为12%以下，再将烘干后的培养体粉碎， 过50目筛得到灵芝粉；
[0060] (3)向灵芝粉中加入质量为灵芝粉质量的9倍的水和质量为灵芝粉质量的0.1 %的 木瓜酶、胰蛋白酶和枯草芽孢杆菌蛋白酶以及质量为灵芝粉质量的0.5%的脂肪酶，50°C条 件下酶解21h;
[0061] (4)将酶解的灵芝粉通过板框过滤器过滤，真空浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥得到灵 芝提取物。
[0062] 实施例7
[0063]本实施例灵芝提取物的制备方法，按以下步骤进行：
[0064] (1)将24g灵芝菌种注入200g干蚕蛹中，在温度25 °C，湿度89 %的条件下培育52天 得到培养体；
[0065] (2)将培养体在63°C条件下烘干至含水量为12%以下，再将烘干后的培养体粉碎， 过20目筛得到灵芝粉；
[0066] (3)向灵芝粉中加入质量为灵芝粉质量的3倍的水和质量为灵芝粉质量的0.5%的 胰蛋白酶和枯草芽孢杆菌蛋白酶，48 °C条件下酶解24h;
[0067] (4)将酶解的灵芝粉通过板框过滤器过滤，真空浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥得到灵 芝提取物。
[0068] 实施例8
[0069] 本实施例灵芝提取物的制备方法，按以下步骤进行：
[0070] (1)将18g灵芝菌种注入180g干蚂蚁中，在温度28°C，湿度92%的条件下培育56天 得到培养体；
[0071] (2)将培养体在70°C条件下烘干至含水量为12%以下，再将烘干后的培养体粉碎， 过35目筛得到灵芝粉；
[0072] (3)向灵芝粉中加入质量为灵芝粉质量的10倍的水和质量为灵芝粉质量的0.6% 的酶为木瓜酶、胰蛋白酶和枯草芽孢杆菌蛋白酶以及质量为灵芝粉质量的0.2%的脂肪酶， 55°C条件下酶解22h;
[0073] (4)将酶解的灵芝粉通过板框过滤器过滤，真空浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥得到灵 芝提取物。
[0074] 本申请实施例1~8中培养基以温度25~30°C，湿度70~95%的条件下培育，不仅 可以促进子实体的均衡生长，而且可以避免子实体的僵化。在一个实施例中，可以在培养基 培育过程中，在晚间或清晨开窗门1~2次，每次1~2小时，或全天长缓气流通风，以促进子 实体的正常发育。其次，子实体发育过程中，还可以增加光照，光照强度在4000~6000LX下 对子实体进行照射，使菌柄粗壮，菌盖厚大。
[0075]表1实施例1~8灵芝提取物产出率
[0077]从表1中可以看出，实施例1~8制得的灵芝提取物产出率均在9.3%左右。实施例1 ~8中的蚕蛹培养基、鸡蛋培养基、黄粉虫培养基，蚯蚓培养基，蚂蚁培养基，蝉培养基灵芝 提取物产出率大体相同，且本实施例中的活体培养基和干培养基的灵芝提取物产出率，都 明显高于现有产品中产出率的8.2%。本发明实施例1~8制得的灵芝提取物粒径小于 800nm，且易溶于水，使用时可根据需要制成各种水溶性制剂。
[0078] 表2实施例1~8培养体菌丝生物量
[0080]从表2中可以看出，实施例1~8的培养体菌丝生物量均达到了 6mg/g以上，高于现 有产品的4.7mg/g。实施例1~8中的培养体培养天数均在45-60天，所需培养条件为温度25 ~30 °C，湿度70~95%，具有培育条件易于控制，菌丝生长速度快，生物量高，培育周期短， 成本低的优点。
[0081]另外，本实施例中的培养体可以采用活体的蚕蛹、鸡蛋、黄粉虫，蚯蚓，蚂蚁，蝉等， 也可以采用干蚕蛹、干黄粉虫、干蚯蚓、干蚂蚁、干蝉等，材料易于取得，具有低成本、高产 出、易于大规模推广的特点。
[0082]表3实施例1~8制得的灵芝提取物灵芝蛋白、灵芝三萜及灵芝多糖的含量
[0084] 从表3中可以看出，实施例1~8制得的灵芝提取物中灵芝蛋白、灵芝三萜和灵芝多 糖与普通方法培育出的灵芝中的灵芝蛋白、灵芝三萜和灵芝多糖相比有了明显的提高。本 实施例1~8制得的灵芝提取物中的灵芝蛋白含量与普通方法培育出的灵芝中的灵芝蛋白 含量提高了 6倍;本实施例1~8制得的灵芝提取物中的灵芝三萜含量与普通方法培育出的 灵芝中的灵芝三萜含量提高了 2~3倍;本实施例1~8制得的灵芝提取物中的灵芝多糖含量 与普通方法培育出的灵芝中的灵芝多糖含量提高了 2~3倍。
[0085] 此外，灵芝中灵芝多糖是一种非特异性免疫增强剂，不仅能增强细胞免疫作用，而 且能够增强体液免疫作用，促进巨噬细胞的吞噬能力，直接地产生抗肿瘤作用;灵芝三萜类 是灵芝菌丝体一、二级代谢产物，是灵芝发挥抗炎、镇痛、镇静、抗衰老、毒杀肿瘤细胞、抗缺 氧等作用的主要功效成分;灵芝中含有18种氨基酸，其中人体必需氨基酸的相对含量高于 50%，为一般食用菌的2~3倍。
[0086]虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本 发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此， 在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1. 一种灵芝提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤： (1) 将灵芝菌种注入培养基中，在温度25~30°C，湿度70~95%的条件下培育45-60天 得到培养体，即灵芝菌丝、灵芝子实体和培养基的混合物； (2) 将所述培养体在60~90°C条件下烘干至含水量为12%以下，再将烘干后的培养体 粉碎，过20~60目筛，得到灵芝粉； (3) 向所述灵芝粉中加入水和中性蛋白酶，40~55 °C条件下酶解6~24h; (4) 将酶解的灵芝粉通过板框过滤器过滤，真空浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥得到灵芝提 取物； 其中，所述培养基为蚕蛹、鸡蛋、黄粉虫，蚯蚓，蚂蚁，蝉中的一种或多种。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述菌种的接种量为10~30%。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述中性蛋白酶为木瓜酶、胰蛋白酶、枯草 芽孢杆菌蛋白酶中的一种或多种。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中酶解时加入水的质量为灵 芝粉质量的1~10倍，加入中性蛋白酶的质量为灵芝粉质量的0.1~1%。5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中酶解时还加入脂肪酶，所述脂肪 酶的添加量为灵芝粉质量的0.1~0.5%。6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述灵芝精华提取物粒径小于800nm。7. 根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述灵芝精华提取物制成冲 剂、片剂或胶囊。8. -种灵芝提取物，其特征在于，所述灵芝提取物是利用权利要求1中的方法制得的。9. 根据权利要求8所述的灵芝提取物，其特征在于，所述灵芝提取物含有灵芝多肽20~ 60%、三萜1~5%、灵芝多糖1~10%、氨基酸10~30%、核苷1~3%、生物碱0.1~3%、灰分 1~5 %、其余为水分。10. -种权利要求8所述的灵芝提取物的应用，其特征在于，所述灵芝提取物用于食品、 保健或医药领域。
【文档编号】A23L31/00GK106072632SQ201610424911
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月15日
【发明人】钱卫文, 钱容
【申请人】钱卫文