专利名称：高效止血药三七素的合成制备方法
技术领域：
本发明为一种止血药物的合成制备方法。
三七，又名田七，为五加科人参属植物三七的干燥根，具有止血散瘀、消肿定痛、舒经活络等作用，其中尤以止血功能称著。《本草纲目》称三七为“止血之神药”；《本草拾遗》称“三七止血活血，止血不伤新”。历版《中华人民共和国药典》对三七的主治功能均界定其“止血散瘀，活血生肌”的特点。数百年来，历代医家将三七广泛用于跌打损伤、内伤出血等内外出血症。现代科学研究更是对其活血化瘀成份作了深入的探索，对其多种有效成份作了详细的阐述。但其止血活性成份和止血机理则很少报道。
本发明专利申请人据此对三七作了进一步的研究，发现了其中所含止血活性物质为单体化合物β-N-乙二酰基-L-α，β二氨基丙酸。而且根据实验结果已知这种物质在大量使用的情况下，将显示神经毒作用，但在少量使用时，则不显示神经毒的作用而显示出强力的止血及血小板增加作用，用1-2mg即可充分显示治疗效果。
β-N-乙二酰基-L-α，β二氨基丙酸，在现代科学(印度)第32卷153页(1963年)、生物化学第3卷第三期432页(1964年)及生物化学第11卷第22期4053页(1972年)等文献中是作为山黎豆属sativus种子中的神经毒而报道的。1980年日本学者小营卓夫首先从三七中分离出β-N-乙二酰基-L-α，β二氨基丙酸，正式命名为三七素(dencichine)。
本发明的目的是提供止血药三七素的合成制备方法。
三七素的化学结构式为 本发明制备三七素β-N-乙二酰基-L-α，β二氨基丙酸的方法包括以下步骤先将化合物 溶于浓度为20～70％的甲醇中，再以强碱为催化剂，使其与草酸单钾酯于10～30℃下反应10～30小时，即得止血药三七素。本发明方法中所用的化合物 有市售商品可用，也可以自行制备。按本发明方法制备β-N-乙二酰基-L-α，β二氨基丙酸，收率不低于70％。
本发明优化的方法包括以下步骤先将化合物 溶于浓度为40～60％的甲醇中，再以强碱为催化剂，使其与草酸单钾酯于15～25℃下反应15～25小时，即得止血药三七素。
本发明进一步优化的方法包括以下步骤先将化合物 溶于浓度为48～52％的甲醇中，再以LiOH为催化剂，使其与草酸单钾酯于18～22℃下反应18～22小时，即得止血药三七素。
本发明的最佳方法是按以下步骤进行的将L-天冬素与苯磺基卤化物进行反应，再作霍夫曼重排得到 然后将此化合物用苯酚+30～42％氢溴酸／醋酸水解得到 将其溶于浓度为48～52％的甲醇中，再以LiOH为催化剂，使其与草酸单钾酯于18～22℃下反应18～22小时，即得止血药三七素。
草酸单钾酯的重量最好为 重量的1．5-2．2倍。
本发明的积极效果是根据β-N-乙二酰基-L-α，β二氨基丙酸这种化合物的结构，采用化学合成方法合成了该化合物，纯度可达90％以上。该化合物药理、药效与天然提取物完全一致，而且化学合成比提取相对简单，反应条件温和，操作简便，且原料易得，使得成本更加低廉，有利于工业生产；不像提取须用Sephadex LH-20凝胶树脂和CMSephadex C-25离子交换树脂分离，价格较为昂贵，限制了大规模生产，不利于工业化生产。
下面用实施例来对本发明做进一步的说明。
实施例1 步骤取12g L-α，β二氨基丙酸，溶于60ml 50％甲醇，加入4．8g氢氧化锂，在搅拌状态下缓慢加入含21．6g草酸单钾酯的50％甲醇70ml，室温下搅拌18小时后过滤沉淀物，依次用50％甲醇，甲醇，丙酮洗涤，干燥，再将其溶解于50ml蒸馏水中，用2NHCl调节PH为2．1～2．2，得白色无定形沉淀，依次用冰水，甲醇，丙酮洗涤，干燥，得10．1g目的产物，即β-N-乙二酰基-L-α，β二氨基丙酸。
m．p．206℃(分解)[α]27D-28．4°(c=2，0．5NHCl)元素分析值(设定C5H8N2O5)C N H理论值34．0915．94．57实际值34．1515．54 4．63实施例2 步骤把40g L-天冬素溶解于800ml蒸馏水中，加入40g氧化镁，冰浴冷却至0℃，在激烈搅拌下加入76g P-甲苯磺酰氯，反应3小时，室温搅拌过夜。滴加浓HCl调节PH为2～3，过滤沉淀，甲醇重结晶得49gN-(P-Ts)-L-天冬素晶体。
取NaOH 38g，溶解于288ml蒸馏水中，冰浴冷却至0℃，滴加10ml Br2；将38．2g N-(P-Ts)-L-天冬素溶解于112ml 10％ NaOH溶液，滴加到上述溶液中，反应15分钟，迅速升温至75℃，反应2小时，冷至室温，加浓HCl调节PH为7，过滤得21g白色沉淀，用10％水合乙酸重结晶得15．2g白色晶体，为α-N-(P-Ts)-L-α，β二氨基丙酸。
把5g α-N-(P-Ts)-L-α，β二氨基丙酸溶解于100ml HBr／HAc中，加入5g苯酚，于85℃回流8小时，冷却至室温，加蒸馏水稀释至2000ml上强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂(003×7，国产)，用0．5 N HCl 500ml冲洗，水洗至中性，1000ml乙醇冲洗，再以乙醇∶氨水=9∶1洗脱，收集洗脱液，浓缩至20ml，用6NHCl调节PH为2．2～2．4，过滤沉淀，用80％甲醇，甲醇，丙酮依次洗涤，得2．1g L-α，β二氨基丙酸的盐酸盐。
取2g L-α，β二氨基丙酸的盐酸盐，溶于10ml 50％甲醇，加入0．8g氢氧化锂，在搅拌状态下缓慢加入含3．6g草酸单钾酯的50％甲醇12ml，搅拌18小时后过滤沉淀物，依次用50％甲醇，甲醇，丙酮洗涤，干燥，再将其溶解于10ml蒸馏水中，用2NHCl调节PH为2．1～2．2，得白色无定形沉淀，依次用冰水，甲醇，丙酮洗涤，干燥，得1．2g目的产物，即β-N-乙二酰基-L-α，β二氨基丙酸。
m．p．206℃(分解)[α]27D-28．7°(c=2，0．5NHCl)[α]24D-17°(c=2，4NHCl)元素分析值(设定C3H8N2O5)C N H理论值34．0915．9 4．57实际值34．1215．6 4．71
取6g L-α，β二氨基丙酸的盐酸盐，溶于30ml 50％甲醇，加入2．4氢氧化锂，在搅拌状态下缓慢加入含10．8g草酸单钾酯的50％甲醇35ml，搅拌18小时后过滤沉淀物，依次用50％甲醇，甲醇，丙酮洗涤，干燥，再将其溶解于25ml蒸馏水中，用2NHCl调节PH为2．1～2．2，得白色无定形沉淀，依次用冰水，甲醇，丙酮洗涤，干燥，得3．9g目的产物，即β-N-乙二酰基-L-α，β二氨基丙酸。
m．p．206℃(分解)[α]27D-28．8°(c=2，0．5NHCl)元素分析值(设定C5H8N2O5)C N H理论值34．0915．94．57实际值34．2015．72 4．49以下内容是测定由以上实施例得到的β-N-乙二酰基-L-α，β二氨基丙酸的止血作用及增加血小板数量作用。
1．止血作用将生理盐水注入体重18-22g小鼠腹腔内，30分钟后断尾取血，分别采用玻片法和毛细管法，每隔15秒钟，观察有无凝血，测量凝血时间，作为对照组的止血时间。
将β-N-乙二酰基-L-α，β二氨基丙酸溶于蒸馏水中，注入小鼠腹腔内，与对照组一样，测量凝血时间。
与对照组的凝血时间的差，即为出血缩短时间。结果如下实验用化合物／生理对照组试验组缩短出血时间盐水(mg／ml)1mg／ml 6′30″ 1′09″5′24″6′21″ 1′03″5′18″0．5mg／ml6′10″ 2′48″3′22″6′19″ 2′54″3′25″0．25mg／ml 6′13″ 3′28″2′45″6′25″ 3′34″2′51″
2．血小板增加作用将本发明方法制得的化合物β-N-乙二酰基-L-α，β二氨基丙酸1mg溶解于0．5ml生理盐水中，注入体重为18-22g小鼠腹腔中，30分钟后摘除一侧眼球并采血，然后用直接法测量血小板数量。
对照组以0．5ml生理盐水腹腔注射。
结果如下血小板增加数目(万个／ml)对照组 54．6±3．52试验组 68．5±7．61试验组血小板约比对照组增加30％。
通过实验证明，本发明方法制得的化合物能够有效缩短出血时间和增加血小板数量。
以上实施例仅为了对本发明作进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。
权利要求
1.一种高效止血药三七素的合成制备方法，其特征是包括以下步骤先将化合物 溶于浓度为20～70％的甲醇中，再以强碱为催化剂，使其与草酸单钾酯于10～30℃下反应10～30小时，即得止血药三七素。
2.如权利要求1所说的高效止血药三七素的合成制备方法，其特征是包括以下步骤先将化合物 溶于浓度为40～60％的甲醇中，再以强碱为催化剂，使其与草酸单钾酯于15～25℃下反应15～25小时，即得止血药三七素。
3.如权利要求2所说的高效止血药三七素的合成制备方法，其特征是包括以下步骤先将化合物 溶于浓度为48～52％的甲醇中，再以LiOH为催化剂，使其与草酸单钾酯于18～22℃下反应18～22小时，即得止血药三七素。
4.如权利要求3所说的高效止血药三七素的合成制备方法，其特征是按以下步骤将L-天冬素与苯磺基卤化物进行反应，再作霍夫曼重排得到 然后将此化合物用苯酚+30～42％氢溴酸／醋酸水解得到 将其溶于浓度为48～52％的甲醇中，再以LiOH为催化剂，使其与草酸单钾酯于18～22℃下反应18～22小时，即得止血药三七素。
5.如权利要求1至4所说的高效止血药三七素的合成制备方法，其特征是草酸单钾酯的重量为 重量的1．5-2．2倍。
全文摘要
本发明为一种止血药物的合成制备方法,包括以下步骤:先将化合物溶于浓度为20～70%的甲醇中,再以强碱为催化剂,使其与草酸单钾酯于10～30℃下反应10～30小时,即得止血药三七素。产品纯度可达90%以上,药理、药效与天然提取物完全一致,能够有效缩短出血时间和增加血小板数量。化学合成比提取相对简单,反应条件温和,操作简便,且原料易得,使得成本低廉,有利于工业生产。
文档编号A61P7/04GK1292377SQ0010999
公开日2001年4月25日 申请日期2000年8月10日 优先权日2000年8月10日
发明者蓝桂华, 方松, 陈蓬, 蓝锋 申请人:昆明南国生物资源开发研究所