儿茶素用于治疗或预防冠脉再狭窄的应用的制作方法

专利名称：儿茶素用于治疗或预防冠脉再狭窄的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及儿茶素用于治疗或预防冠脉再狭窄的应用。
已报道的儿茶素类化合物具有如下特性抑制过氧-酯类化合物活性(Kinura等，J.Jpn.Soc.Nutr.Food Sci.，37，223-232(1984))；对于脂肪和脂肪油的抗氧化剂活性(Okuda，T.等，Chem.Pharmacol.Bull.，31，1625-1631(1983))；抗高血压活性；抗真菌活性；抗高血糖活性；抑制高胆固醇血症活性；抗溃疡活性；和抗癌活性(Fukuyo，M.等，J.Jpn.Soc.Nutr.FoodSci.，39，495-500(1986))。
经皮的冠状动脉血管再建法(PTCA)已被广泛地用于治疗缺血性心脏病。但是，经PTCA后，冠脉再狭窄以不能接受的30％-50％的高频率发生(Popma，J.J.等，Circulation，84，1426-1436(1991)；和Gruentzig，A.R.等，N Engl JMed，316，1127-1132(1987))。
根据临床和实验研究，再狭窄是通过如下步骤进行的弹性回缩；结缔组织的血栓形成和构成；内膜增生；和血管壁变形(Mintz，G.S.等，Circulation 94，35-43(1996)；Kagan，S.A.，Surg Clin North Am，78，481-500(1998)；McBride，W.等，N Engl J Med 318，1734-1737(1988)；Califf，R.M.等，J Am Coll Cardiol 17，2B-13B(1991)；Schwartz，S.M.等，Mayo Clin Proc，68，54-62(1993)；和Schwartz，R.S.等，Mayo Clin Proc，68，54-62(1993))。内膜增生特别是由与细胞外基质相连的脉管光滑的肌细胞(VSMCs)的生长和移动引起的，VSMCs由从受损的血管释放的物质和由有活性的血小板产生的刺激生长的物质联合作用所诱导。
已报道，向冠状动脉中的支架填补法(stent enthesis)可有效地防止弹性回缩和血管壁变形，由此可将再狭窄的频率降低至约10％(Serruys，P.W.等，N Engl J Med，331，496-501(1988)；和Fischman，D.L.et.al.，N Engl JMed，331，496-501(1994))。但是，支架填补法可产生很严重的内膜增生，由此在支架中形成再狭窄。
因此，为防止冠脉再狭窄，采用先进的PTCA设备进行了各种尝试，例如动脉粥样硬化斑切除术，使用激光的血管成形术，rotablator，采用切割气囊的冠状血管的血管成形术，和照射处理。此外，还尝试采用抗血小板剂，抗血栓形成剂，血管舒张剂，细胞抑制剂，改善脂质新陈代谢的制剂或抗氧化剂进行系统或局部药物治疗(Califf，R.M.等，J Am CollCardiol，17，2B-13B(1991)；Popma，J.J.等，Circulation 84，1426-1436(1991)；和Herrman，J.P.R.等，Drugs，46，18-22(1991))；并也尝试了使用基因进行治疗(De Young，M.B.等，Circ Res，82，306-313(1998)；Baek，S.H.等，CircRes，82，295-305(1998)；Libby，P.，Circ Res，82，404-406(1998)；Nikol，S.，Heart，78，426-428(1997)；Morishita，R.等，Circ Res，82，1023-1028(1998)；和George，S.J.等，Hum Gene Ther，9，867-877(1998))。其中，发现在动物试验中有效的系统药物治疗，因为发生了不希望的副作用，在临床试验中对于防止冠脉再狭窄是失败的。随着冠状动脉的局部PTCA点产生再狭窄，向该点释放高浓度药物的局部药物治疗比系统药物治疗更合适。对于这种局部药物释放，现在已开发各种方法，其采用这样的设备，例如双气囊导管，分配器，微孔气囊(Brieger D.等，Cardiovasc Res，35，405-413(1997)；Yla-Herttuala S.，Curr Opin Lipidol，8，72-76(1997)；和Laitinen，M.等，Pharmacol Res，37，251-254(1998))，缓释微球和涂覆一层药物的支架。但是，这些方法局限于它们的效力。因此，需要开发一种在PTCA之后防止冠脉再狭窄的有效方法。
根据本发明的一个方面，提供了儿茶素在哺乳动物中预防或治疗冠脉再狭窄的应用。
在本说明书中使用的术语“GTC”是指由绿茶得到的萃取物，其含有不同量的EGCG，ECG，EGC，EC，GCG和C，和其它组分，例如咖啡因。优选GTC中所有儿茶素的含量为80％(重量)或更高，更优选以儿茶素类化合物的总量计，GTC中EGCG的含量为25-85％(重量)，EGC的含量为6-20％(重量)，ECG的含量为2-15％(重量)。
可由任何常规萃取方法，例如公开于韩国专利号97-11555，EP Raid-Open No.547370 A2，JP Raid-Open Nos.2-22755和7-179353和美国专利号5,107,000中的方法，由绿茶制备GTC。典型的萃取方法包括用水或水与低级醇的混合物萃取绿茶叶子；过滤和/或离心分离萃取物以除去非极性物质；将滤液或上层清液进行柱色谱分析。可选择的萃取方法包括用乙醇萃取绿茶叶子；减压浓缩萃取物；用水稀释浓缩物；离心稀释溶液以沉淀固体物质；用氯仿洗涤上层清液；用有机溶剂如乙酸乙酯萃取水层；并减压浓缩和干燥有机部分。这样得到的1克GTC相当于10克干燥的绿茶叶子。
儿茶素类化合物在抑制VSMCs生长和neointimal形成中是有活性的。因此，儿茶素类化合物可用于预防或治疗冠脉再狭窄的药物组合物中，所述冠脉再狭窄是在采用气囊，支架填补法(stent enthesis)，冠状动脉支路接枝或动静脉吻合流术进行冠状动脉血管成形术之后出现的。长期的绿茶消耗及急性毒性实验的结果证明儿茶素类化合物是安全的，其在5g/kg或更低的GTC剂量下是没有毒性的。
在实施本发明时，GTC或其活性组分可以与适合药用的载体组合给药。适于在本发明中使用的药物配方可以用任何常规的程序制备。在制备配方时，活性组分优选与载体混合或用载体稀释，或装在载体内，所述载体可以是胶囊，小袋或其它容器的形式。当载体用作稀释剂时，其可以是固体，半固体或液体物质，担当活性组分的载体，赋形剂或介质。所以，该配方可以是片剂，丸剂，粉末，小袋，酏剂，悬浮液，乳液，溶液，糖浆，气雾剂，软和硬的凝胶胶囊，无菌注射溶液，无菌包装的粉末等形式。
合适的载体，赋形剂和稀释剂的实例有乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露醇，淀粉，阿拉伯树胶，藻酸盐，凝胶，磷酸钙，硅酸钙，纤维素，甲基纤维素，微晶纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，水，羟基苯甲酸甲酯，羟基苯甲酸丙酯，滑石，硬脂酸镁和矿物油。该配方还可以包括填充剂，抗凝集剂，润滑剂，湿润剂，调味剂，乳化剂，防腐剂等。本发明的组合物可以采用任何本领域众所周知的程序进行配制，使得在向哺乳动物给药后可提供活性组分的快速释放，持续释放或延迟释放。
本发明的药物配方可通过各种路径给药，包括口服，经皮，皮下，静脉和肌肉注射。对于人而言，典型的儿茶素的日剂量为约6-20mg/kg体重，并可以一次或分次服用。
然而，应该理解，实际服用的活性组分的量应该考虑到各种相关因素，包括治疗条件，所选的给药路径，患者个体的年龄，性别和体重，及患者病症的严重程度；因此，上述剂量应该不是以任何方式对本发明范围的限制。
下面的实施例的目的是进一步说明本发明，而不是对其范围的限制。
而且，除非以其它方式特别指出，下面的固体混合物中的固体，液体混合物中的液体，液体中的固体的百分比分别以wt/wt，vol/vol和wt/vol给出。参照例1GTC的制备首先在约87℃用10升70％的乙醇萃取1000克绿茶(Theae sinensis L.，Theaceae-var.bohea(yabugida)，Geju-do of Republic of Korea)3小时，然后用5升相同的溶剂萃取。将合并后的萃取物用真空旋转干燥机浓缩至体积为1升。向该浓缩物中加入2升水，然后在14,000rpm下离心20分钟以分离固体物质。用1.2倍体积的氯仿洗涤上层清液，水层用乙酸乙酯萃取4遍，每次用1.2倍体积的乙酸乙酯。合并乙酸乙酯部分，并在减压下蒸发溶剂。残余物溶解在少量水中并冷冻干燥，得到GTC粉末。参照例2GTC的定量分析(1)GTC中所有儿茶素含量的定量分析向25毫克在参照例1中得到的GTC粉末中加入80毫升热水，然后将得到的混合物置于水浴中，在80℃保持30分钟。将得到的混合物冷却到室温，然后向其中加入水，直至最终体积为100毫升。过滤得到的混合物。弃去最初的20毫升滤液，剩下的滤液在下面的程序中用作样品溶液。
在两个25毫升烧瓶中的每一个中加入5毫升水和5毫升样品溶液，向其中依次加入5毫升酒石酸亚铁试剂和磷酸盐缓冲溶液(PBS)，直至最终体积为25毫升。彻底混合得到的溶液。酒石酸亚铁试剂是通过将0.1克硫酸亚铁(7水合物)和酒石酸钾溶解在水中，直至最终体积为100毫升来制备的，而PBS是通过混合0.066M磷酸氢二钠和0.66M磷酸二氢钾，并调节pH至7.5制备的。
在540nm测定这样得到的混合物的光密度，并基于标准曲线来确定其儿茶素浓度，所述标准曲线是采用含有各种浓度五倍子酸乙酯(C9H10O5，M.W.198.17，Tokyo Kasei Kogyo Co.，LTD)的标准溶液的光密度得到的。然后根据下列公式确定样品的儿茶素含量。
含量(％)＝C×1.5(100/样品的重量(mg))×100其中C是由标准曲线推论出的五倍子酸乙酯的浓度(mg/ml)；系数1.5代表1mg五倍子酸乙酯的光密度。
上述分析显示，GTC含有约88％(w/w)儿茶素。GTC粉末的其它分析显示，其含有1％(w/w)咖啡因，4％(w/w)水，和约7％灰分。
(2)GTC中EGCG，EGC和ECG含量的定量分析将25mg在参照例1中得到的GTC粉末置于50ml棕色烧瓶中，向其中加入甲醇和6％乙酸(15∶85(v/v))的混合物(一种流动相溶剂)，直至最终体积为50ml，得到样品溶液。同时，通过向25ml棕色烧瓶中分别加入2或3mg EGCG，EGC和ECG(纯度分别为95％或更高，98％或更高和98％或更高，Sigma)，并向其中加入流动相溶剂，直至最终体积为25ml来制备标准溶液。如下，对3mL一份的样品和标准溶液进行HPLC<HPLC>
仪器HP 1050型(Hewlett-Packard)分离柱Hypersil BDS C18(250×4mm，5μm)温度40℃波长280nm
流动相甲醇和6％乙酸(15∶85(v/v))的混合物保留时间15分钟EGCG，EGC，ECG标准溶液和GTC样品溶液的HPLC扫描图分别示于

图1，2，3和4。
采用下列公式确定样品的EGCG，EGC和ECG含量含量(％)＝样品溶液的浓度(mg/ml)×(样品溶液的峰面积/标准溶液的峰面积)×(50/样品的量(mg))×标准品的纯度(％)由此发现，基于儿茶素类化合物的总量计，GTC粉末中含有37.5％(w/w)EGCG，12.5％(w/w)EGC，5.7％(w/w)ECG，余量为其它儿茶素类。参照例3大鼠VSMCs的原代培养在试验中使用7周大的Sprague-Dawley雄性大鼠(Korean ExperimentalAnimal Center Ltd.)和12-14周大的Fisher 344雄性大鼠(Charles River，Japan)。用CO2使每只大鼠窒息，对其胸腔进行消毒并切开以除去主动脉。所有手术器械和玻璃制品都用高压锅消过毒，并且所有手术都是在清洁的操作台上进行的。将主动脉浸渍在生理盐水溶液(PSS)中，并除去其脂肪组织。在维持在37℃的培养箱中用0.2％胶原酶处理该得到的主动脉30分钟。除去其内皮和外膜，并将得到的主动脉碾碎。向其中加入含有0.2％胶原酶的完全DMEM(DMEM中含有10％FBS，一种抗生素和谷氨酰胺)，并将得到的混合物在37℃保持4小时，同时用定轨摇床摇动。
在1,500xg下将得到的混合物离心5分钟以除去胶原酶，并将细胞沉淀物悬浮在适当量的完全DMEM中。将该细胞悬浮液分别加入到各培养皿中，并在维持在37℃和5％CO2的培养箱中进行培养。
通过向每份培养物中加入锥虫蓝，并用血球计在显微镜下对细胞计数来确定细胞数量。
在下面的实施例中，数值用平均值±标准偏差的形式来表示，并且其意义经检测与不成对的斯氏t检验一致。每个试验重复3次或更多次，并认为具有小于0.05的P值的结果在统计学上有意义。实施例1GTC的急性毒性试验以0.2-5g/kg的不同剂量，对16只6-7周大的beegle犬(8只雄性，每只重7-9kg，雌性每只重6-8kg)中的每只口服在参照例1中得到的GTC。没有试验动物在24小时内死亡。实施例2用GTC抑制VSMC生长为检验GTC抑制VSMC生长的活性，采用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷如下进行DNA掺入测试。
将在参考实施例3中得到的25,000个VSMC分配到24孔培养板的孔中，并培养24小时。用不含血清的介质，即Hunger介质(Gibco)洗涤各孔2次，并向其中加入新鲜的Hunger介质。将在参考实施例1中得到的GTC的1，10，30和100μg/ml溶液分别加入到指定的孔中，并培养24小时，以将细胞循环固定在G0阶段。各培养物用PBS洗涤，然后用含有50ng/mlPDGF-BB的Hunger介质处理20小时，以诱导细胞分裂。将10μl的3H-胸腺嘧啶脱氧核苷溶液(1-2μCi/ml)加入到各孔中，然后将得到的培养物在保持在37℃和5％CO2条件下的孵化器中孵化4小时。弃去介质以除去未反应的3H-胸腺嘧啶脱氧核苷，并用500μl冰冷的PBS洗涤各孔3次。将500μl的10％的TCA加入到各孔中，将得到的混合物在冰上保持20分钟。用TCA洗涤各孔3次，然后用500μl的乙醇-乙醚(1∶1)混合物洗涤3次。将250μl的0.5M的NaOH加入到各孔中，并将得到的混合物在冰上保持25分钟。取最终的反应混合物中的50μl进行蛋白质量化分析。另外，取最终的反应混合物中的100μl，加入到5ml的鸡尾酒溶液中，以测量放射性，由此确定结合进细胞中的3H-胸腺嘧啶脱氧核苷的量。重复该程序，但是不用GTC处理，得到对照样。
另外，为检验在没有PDGF-BB存在时GTC抑制VSMC生长的活性，重复上述程序，但是不用PDGF-BB处理。结果列于表I和表II，及图5A和5B。
表I在PDGF-BB存在下GTC对VSMC生长的影响
表II在PDGF-BB不存在时GTC对VSMC生长的影响
图5A显示了在PDGF-BB存在下GTC抑制VSMC生长的活性，而图5B显示了在PDGF-BB不存在下GTC抑制VSMC生长的活性。
上述结果首次表明，如对照样数据所显示的那样，PDGF-BB极大地促进VSMC的生长。如从表I和图5A中可以看到的那样，GTC抑制了用PDGF促进的VSMC的生长，这种抑制作用依赖于浓度。
同时，表II和图5B显示，在PDGF-BB不存在时，GTC在10μg/ml或更高浓度下可抑制VSMC的生长。
由于GTC在细胞循环的S阶段抑制DNA的合成，据信GTC阻断了G0向G1，或G1向S阶段的转化。实施例3分裂素活化的蛋白质激酶的磷酸化为检验用GTC抑制VSMC生长的机理，测定GTC对用分裂素活化的蛋白质激酶p44/p42(分裂素活化的蛋白质激酶MAPK)的影响，已知分裂素在真核细胞的生长和分化中是必需的。众所周知，通过对MAPK的第204位的酪氨酸残基进行磷酸化，可以增加MAPK的活性。
将VSMC在标准介质中培养，直到融合，并用含有10或50μg/ml参考实施例1得到的GTC的不含血清的Hunger介质代替标准介质。得到的培养物孵化24小时。向其中加入50ng/ml的PDGF-BB，并保持5分钟。重复上述程序，但是不用GTC和PDGF-BB处理，得到空白样；不用GTC处理，得到对照样。还重复上述程序，但是不用PDGF-BB处理。
将VSMC溶解，并用VSMC细胞溶解物(其量相当于70μg蛋白质)进行SDS-PAGE。将在凝胶上分开的蛋白质转移到硝化纤维膜，并且该膜用含有3％乳蛋白的Tris缓冲盐水(TBS)饱和。将苏氨酸和酪氨酸残基磷酸化的用作催化活化的p44mapk/p42mapk的原代抗体(Promega，稀释比为1∶5,000)加入到其中，并保持过夜。所述膜用含有0.05％Tween 20的TBS洗涤3次。使所述膜与山葵过氧化物酶共轭的抗-IgG二代抗体反应，并使用Amersham ECL试剂盒显影。使用标准p42，一种重组体，活化的MAPK(Upstate Biotechnology)，并连续稀释的动脉组织匀浆，来检验MAPK浓度-ECL信号间的线性关系。使用Molecular Dynamics个体激光显像密度计，量化X-射线胶片上的条纹。
图6重现了蛋白质印记分析结果，该结果显示GTC对大鼠VSMC中p44mapk/p42mapk的酪氨酸(第204残基)的磷酸化作用。如从图6可以看到的那样，PDGF-BB处理的细胞与空白相比，显示了密度提高的磷酸化p44mapk/p42mapk条纹，同时，GTC处理的细胞显示了依浓度降低的磷酸化p44mapk/p42mapk条纹密度。因此，GTC通过抑制MAPK而抑制了VSMC生长。
将图6中条纹的密度量化，结果示于表3和图7。
表III
*p＜0.01，**p＜0.05如从表III和图7可以看到的那样，p44mapk条纹的密度在用PDGF-BB处理时增加，而其在用GTC处理时降低。另外，p44mapk条纹的密度被PDGF-BB提高，但是当用10μg/ml或更高的浓度的GTC处理时降低。实施例4用GTC预防受伤的颈动脉的再狭窄(步骤1)受伤大鼠颈动脉的手术给13个Fisher344大鼠中的每一个肌肉注射50mg/kg氯胺酮和6.7mg/kg甲苯噻嗪，并切开其右侧颈以剥离主颈动脉(CCA)及其支动脉，即外颈动脉和内颈动脉。在CCA大动脉的起点和内动脉的末梢位置插入微脉管夹，以暂时堵塞血流，然后切开外动脉。将2F forgarthy导管(BaxterHealthcare Corporation，USA)通过切开的位置插入到CCA中，并扩张到比CCA直径更大的尺寸。然后，来回移动导管5次以除去内皮细胞，并用PBS洗涤CCA的内侧。将100μg/ml参考实施例1中得到的GTC注射到右CCA并保持20分钟，使GTC与受损的动脉壁反应。移去微脉管夹，恢复血流，并缝合切开的位置。对于对照样，使用10个大鼠重复上述程序，但不用GTC处理，而这些鼠的左侧未受损的CCA作为正常颈动脉。(步骤2)颈动脉血管造影术在步骤1的手术2周后，将各大鼠进行全身麻醉，并切开其腹部。将4F脉管套管在腹大动脉插入，并放置在胸部下行胸大动脉。向大鼠注射4～6ml非离子对照介质(Hexabrix，Schering，Germany)，同时进行血管活动摄影术。使用计算机分析系统DCI videodensitometry(Phillips，The Netherlands)分析这样得到的数据，以确定受损的右侧CCA的最窄区域的直径(Dobs)和正常的左侧CCA的直径(Dcon，10任意单位)。用Dobs对Dcon的百分比表示狭窄度。
图8A和图8B分别显示了对照组和GTC处理组颈动脉的血管活动摄影术的结果。如从图8A和图8B中可以看到的那样，对照组的受损的颈动脉显示出狭窄受损的动脉具有比正常颈动脉窄的内径，而GTC处理的动脉显示出比对照样更大的内径。
当正常颈动脉的内径定义为10时，用100μg/ml GTC处理组(n＝13)的颈动脉的最窄内径为5.67±1.15，而对照组(n＝10)的最窄内径更高，达4.22±1.37(p，0.05)。
图8C显示，对照组的颈动脉狭窄为50.4±13.2％，而GTC处理组显著低，为30.5±10.4％。实施例5组织病理学试验在实施例4的步骤2的颈动脉血管造影术后，采用120mmHg的压力，用10％福尔马林灌注颈动脉5分钟或更长时间，将颈动脉剥离并固定在10％福尔马林中。在颈动脉的中间区域取3mm长度，植入石蜡中，切成一系列的横截面，然后用苏木精-曙红染色。扫描显示最窄的脉管内腔的横截面，然后使用Scion Image Analysis software(version 1.1)进行定量形态测量学分析。在该分析中，采用内膜壁厚度，内膜面积，中壁厚度，中壁面积，内膜和中间面积的面积比，和狭窄，作为分析因数。
图9A，图9B，和图9C分别显示了正常颈动脉，对照颈动脉，和GTC处理大鼠的颈动脉的横截面的显微镜照相结果(x40)。如从图9A，图9B，和图9C可以看到的那样，对照的颈动脉比正常的颈动脉窄，表现出提高的新内膜形成能力，而GTC处理大鼠的动脉比对照样宽。这说明，GTC抑制了新内膜的形成，并在治疗再狭窄中是有效的。
图10A，图10B，和图10C分别显示了正常颈动脉，对照组颈动脉，和GTC处理组颈动脉的横截面的显微镜照相结果(x40)。如从图10A，图10B，和图10C可以看到的那样，与正常颈动脉相比，对照组显示了显著增加的新内膜形成，而GTC处理组没有发展形成严重的新内膜。这说明GTC在治疗再狭窄中是有效的。
从图10b和图10c评价内膜壁厚度(Tintima)，中间壁厚度(Tmedia)，内膜面积(Aintima)，内膜和中间面积的面积比(Aintima/media)，和狭窄(％)，结果概括于表IV。
表IV
从表IV可以看到，GTC处理组在与对照组比较时，除中间壁厚度外，在其他方面的数值都显示了统计学上的显著性差异。
尽管已就上述具体实施方案描述了本发明，但是应该认识到，本领域的技术人员可以对本发明做各种修改和改变，这些也落入到由后附的权利要求所限定的本发明范围内。
权利要求
1.儿茶素在制备用于预防或治疗哺乳动物冠脉再狭窄的药物组合物中的应用。
2.权利要求1的应用，其中所述哺乳动物为人。
3.权利要求1的应用，其中所述儿茶素选自表棓儿茶素-3-五倍子酸酯，表棓儿茶素，表儿茶素-3-五倍子酸酯，表儿茶素，棓儿茶素-3-五倍子酸酯，棓儿茶素，儿茶素及其混合物。
4.权利要求3的应用，其中所述混合物是绿茶萃取物。
5.权利要求4的应用，其中基于绿茶萃取物的重量，绿茶萃取物中总儿茶素的含量为80％或更高。
6.权利要求3的应用，其中基于混合物的总重量，混合物中表棓儿茶素-3-五倍子酸酯的含量为25％或更高。
7.权利要求6的应用，其中基于混合物的重量，混合物中表棓儿茶素-3-五倍子酸酯的含量范围为25～85％，表棓儿茶素的含量范围为6～20％，表儿茶素-3-五倍子酸酯的含量范围为2～15％。
8.权利要求4或5的应用，其中绿茶萃取物的制备包括如下步骤用乙醇萃取绿茶；减压浓缩萃取物；用水稀释浓缩物；离心稀释的溶液以除去固体物质，得到上层清液；用氯仿洗涤上层清液，得到水层；用有机溶剂萃取水层；和除去有机溶剂。
9.权利要求1～7的任意一项的应用，其中冠脉再狭窄是由采用气囊，支架填补法(stent enthesis)，冠状动脉支路接枝或动静脉吻合流术进行冠状动脉血管成形术所引起的。
全文摘要
通过给哺乳动物服用一种包括有效量的儿茶素的药物组合物,可以预防或治疗哺乳动物的冠脉再狭窄。
文档编号A61P9/00GK1362882SQ01800357
公开日2002年8月7日 申请日期2001年2月28日 优先权日2000年2月29日
发明者安熙悦, 曹明灿, 金英奎, 尹汝杓, 朴钟凡 申请人:三亚药品株式会社