用于预防或改善多危因素综合征的组合物的制作方法

专利名称：用于预防或改善多危因素综合征的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于预防或改善多危因素综合征(multiple risk factorsyndrome)包括内脏脂肪型肥胖、糖尿病、高脂血和高血压的组合物。
背景技术：
目前，不良生活习惯(例如营养过多和锻炼太少)引起的生活方式相关疾病是人们普遍关注的问题。生活方式相关疾病包括多种疾病，例如肥胖、糖尿病、高脂血和高血压，这些疾病作为多危因素综合征引起了人们的高度重视，它可能是动脉粥样硬化的潜在疾病。而且，这不仅是关系到人类的问题，还涉及动物宠物，例如狗和猫。
肥胖大致分为由皮下脂肪蓄积引起的皮下脂肪型肥胖和腹内脂肪蓄积引起的内脏脂肪型肥胖。
内脏脂肪型肥胖多伴有高脂血、葡萄糖耐受异常和高血压，并且具有很强的胰岛素耐受性特征，因此被广泛视为多危因素综合征。而且，内脏脂肪蓄积不仅在肥胖个体中发现，在正常体重范围内的人中也有发现，还可能伴有上述的多危因素(BIO Clinica，September，2000 expanded issue，16-55)。因此，内脏脂肪蓄积引起胰岛素耐受性、糖尿病、高脂血和高血压等，Matsuzawa等为此疾病造了“内脏脂肪综合征”一词(Diabetes/MetabolismReviews，13，3-13，1997)，G.M.Reaven建议用“综合征X”(Diabetes，37，1595-1607，1988)、N.M.Kaplan建议用“致命四重奏”(Archives of InternalMedicine，149，1514-1520，1989)和R.A.DeFronzo提出的“胰岛素耐受性综合征”(Diabetes Care，14，173-194，1991)表示相同的疾病。
肥胖的治疗一般包括饮食疗法和运动疗法，肥胖严重时用药物疗法。但是医疗机构给患者推荐或使用这些疗法，但没用于所谓的潜在侯选患者。食欲抑制剂、能源糖和脂肪的消化和吸收抑制剂和能量消耗促进剂可以称为抗肥胖剂。但是，食欲抑制剂和消化吸收抑制剂不能明确减少内脏脂肪的，能量消耗促进剂不能特异地减少内脏脂肪。
JP-平-11-187843公开了联合应用有脂肪吸收抑制作用的豆茶决明(Cassia nomame)提取物以及有糖类吸收抑制作用的Morus bombycis提取物，可以抑制体重增加，减少皮下脂肪和内脏脂肪。其它来自自然界的物质中，公知的有来自鱼油和植物油等高度不饱和油类的物质，例如亚麻仁油和紫苏油(JP-平-10-231495)或共轭异构的高度不饱和脂肪酸(JP2000-144170)具有降低蓄积内脏脂肪的功能；来自小麦的淀粉酶抑制剂(JP-平-09-194390)抑制内脏脂肪的蓄积，D-木糖和/或L-阿拉伯糖(JP-平-07-309765及JP-平-07-242551)抑制机体脂肪蓄积(皮下脂肪和内脏脂肪)。
糖尿病的主要症状是胰岛素活性不足导致的慢性高血糖症，90％以上的糖尿病患者为II型糖尿病(非胰岛素依赖性糖尿病，NIDDM)。日本的糖尿病患者数量已从1993年的157万剧增到1996年的218万(厚生省的患者调查)。并且，根据厚生省于1997年11月的糖尿病调查报告，糖尿病高度疑似患者(包括正在接受治疗的患者)为690万，加上不能排除患有糖尿病可能性的个体数量，患者总数估计在1370万。因此，除了糖尿病患者急剧增长的数据外，潜在的和未接受医疗机构治疗的个体数量还要大得多，这是值得严重关注的问题。
糖尿病的治疗包括饮食疗法和运动疗法，当这些疗法疗效不足时，再加上药物疗法。药物疗法包括胰岛素疗法和服用口服降血糖(hypoglycemic)药物。口服降血糖药物可以列举出磺酰脲衍生物(例如甲糖宁和格列本脲)、双胍类(例如丁二胍和二甲双胍)、α-糖甙酶抑制剂(例如阿卡波糖和伏格列波糖(voglibose))和胰岛素耐受性改善药物(例如曲格列酮和吡格列酮)。
在饮食疗法中，建议患者避免过量饮食，坚持合理的热量摄取量。当患者肥胖时，指导其努力减至标准体重。作为饮食疗法所用的食品，公知的有厚生省批准的特别用于糖尿病患者饮食的多样混合食品。但是，这些顶多只是所谓的低热营养平衡食物，对糖尿病并没有实质上的疗效。
另外，医疗机构将这些疗法用于糖尿病患者，但并没有用于所谓的潜在糖尿病患者，而这些患者的数量远远超过糖尿病患者。因此，需要能有效预防或改善糖尿病的食品/饮料形式的组合物，例如健康食品(健康专用食品和营养要求食品)或保健食品，或无需医生指导而任何人都易于获得的药物(包括准药物)。
家畜或宠物的糖尿病发病率也在稳步上升，因此有待开发能有效预防或改善家畜或宠物糖尿病的组合物。
JP-平-01-233217公开了一种含有姜黄烯酮(姜(Zingiberaceae)科郁金(Curcuma aromatica)提取物)作为活性成分的抗糖尿病组合物。JP-平-06-192086公开了一种含有(4S，5S)-(+)-吉马酮-4，5-环氧化物(郁金提取物)作为活性成分的抗糖尿病组合物。郁金是一种生药，但其作为食品添加剂的应用尚不清楚。
甘草及其水提取物用作生药具有镇痛/抗惊厥和祛痰作用，或者用作食品。因为其主成分甘草酸的甜度是蔗糖的200倍，用水或碱性水介质提取甘草而得的甘草提取物也用作食品添加剂——甜味剂(Annotated List ofAdditives in Available Books，第163页，Japanese Food Additives Association，1999)，其目前已知的生理作用有肾上腺皮质电解质(adrenocortical electrolyte)或糖皮质激素样作用、雌激素样作用、睾酮生成抑制作用、止咳作用、抗炎作用、抗过敏作用、解毒作用、高脂血改善作用、胃粘膜细胞环腺苷单磷酸浓度提高作用、实验肝脏损伤预防或改善作用、抗病毒作用、干扰素诱导作用、防龋齿作用、肿瘤促进剂抑制作用、胞质Ca2+减少作用、磷脂酶A2抑制作用、LTB4和PGE2生成抑制作用、血小板活性因子生成抑制作用等。并且，甘草是传统中药Byakko-ka-Ninjin-To的成分之一，该药用来治疗糖尿病相关的强烈口干、饮水过多症(polyposia)和多尿症，其它配方为石膏、知母(anemarrhena)和人参。据报道，甘草水提取物有降血糖作用(I.Kimura等，Phytotheraphy Research，13，484-488，1999)。
已知用水或碱性水介质提取甘草酸后所剩的甘草残渣有肝脏滋补(肝脏保护剂)作用和/或抗感染作用(JP-平-09-143085)、免疫增强作用(JP-平-05-262658)和抗病毒作用(JP-平-01-175942)。另外，将甘草残渣水洗后用乙醇、丙酮或己烷提取所得的“甘草油浸物”是一种抗氧剂，用作食品添加剂(Annotated Lists of Additives in Available Books，第164页，Japanese FoodAdditives Association，1999)。已知甘草油浸物对幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)具有抗菌活性(JP-平-10-130161，JP-平-08-119872)。但是，还不知提取甘草酸后的所述甘草残渣或所述的甘草油浸物有内脏脂肪减少作用、降血糖作用、脂类代谢改善作用或血压升高抑制作用。
另外，很早就知道过量摄取或长期使用甘草引起假醛甾酮增多症(pseudoaldosteronism)，包括高血压、水肿和低钾血。这是由甘草主要成分甘草酸引起的。还有报道指出甘草酸的水解产物——甘草次酸(glycyrrhetinicacid)可能引起高血压(H.Siguruonsdottir等，Journal of Human Hypertension，15，549-552，2001)。因此，包含甘草亲水部分、主要由甘草酸组成的甘草提取物导致高血压。
已知起源于热带亚洲(Tropical Asian)姜科姜黄属热带植物有树种，例如姜黄、郁金、莪术(Curcuma Zedoaria)和Curcuma xanthorrhiza。其中，姜黄通称为“姜黄(turmeric)”，已知其为咖喱粉的香料成分之一。它不仅被用作食品，而且，由于姜黄的基本成分——姜黄色素是一种黄色染料(自然色)，姜黄或其提取物(姜黄色素)还用作染料或着色剂(食品添加剂)。传统疗法中的草药，例如中国的中药、印度的Ayur-Veda和印尼的Jamu，很早就知道姜黄有止血、健胃、抗菌和抗炎作用，实际上它还作为药物使用。另外，姜黄的效果及其基本成分姜黄色素(curcumin)引起了人们的注意，并且已经发现其有多种生理活性，例如抗氧作用、利胆作用(促胆汁分泌作用)、内脏(肝脏、胰腺)功能增强作用、抗肿瘤作用、脂类代谢改善作用和皮肤增亮作用。
另外，姜黄或其提取物的内脏脂肪减少作用、血糖降低作用或血压升高抑制作用还不为人所知。
丁香是桃金娘(Myrtaceae)科Syzygium aromaticumi或石竹番樱桃(Eugenia caryophyllata)的花蕾、叶或花，公知其为一种香料。由于抗菌/杀菌作用和止痛/麻醉作用，长期以来，在生药和草药(Kampo medicine)领域，丁香不仅被周作增香剂(breath sweetener)或止牙痛剂，还被用作健胃药。另外，丁香提取物作为抗氧剂已用作食品添加剂，但是，丁香或其提取物的内脏脂肪减少作用、降血糖作用、脂类代谢改善作用或血压升高抑制作用还不为人所知。
桂皮是樟(Lauraceae)科肉桂属的肉桂(Cinnamomum cassia)、锡兰肉桂(C.zeylanicum)或C.loureirii的皮。桂皮有抗菌和抗氧化作用，长久以来作为一种调味品使用，其树皮已药用。但是，桂皮或其提取物的内脏脂肪减少作用、血糖降低作用、脂类代谢改善作用或血压升高抑制作用还不为人所知。
发明概述本发明的目的在于提供一种用于预防或改善多危因素综合征的、没有副作用或其它安全问题的组合物，所述综合征包括内脏脂肪型肥胖、糖尿病、高脂血和高血压。
本发明人假定多危因素综合征的原因是内脏脂肪型肥胖，认为可以通过减少蓄积内脏脂肪来预防或改善多危因素综合征。
因此，为了达到上述目的，本发明人认真研究了多种可能的方法，结果发现甘草疏水性提取物、姜黄提取物、丁香提取物和桂皮提取物都有蓄积内脏脂肪降低作用、血糖升高抑制作用、血糖降低作用、脂类代谢改善作用和血压升高抑制作用。在上述结果的基础上提出本发明。
因此，本发明涉及一种用于预防或改善多危因素综合征的组合物，其含有选自甘草疏水性提取物、姜黄提取物、丁香提取物和桂皮提取物中的至少一种。根据本发明，用于预防或改善多危因素综合征的该组合物可以是用于预防或改善内脏脂肪型肥胖的组合物、用于预防或改善糖尿病的组合物、用于预防或改善高脂血的组合物或用于预防或改善高血压的组合物。
本发明还涉及预防或改善多危因素综合征的方法，其包括给人、家畜或宠物服用或使用含有选自甘草疏水性提取物、姜黄提取物、丁香提取物和桂皮提取物中至少一种的组合物。
另外，本发明涉及选自甘草疏水性提取物、姜黄提取物、丁香提取物和桂皮提取物中的至少一种在制备组合物中的应用，该组合物用于预防或改善多危因素综合征。
发明详述下面详细说明本发明。
本发明的组合物含有选自甘草疏水性提取物、姜黄提取物、丁香提取物和桂皮提取物中的至少一种。上述提取物属于食品类物质，并且已被批准用作食品添加剂，因此没有副作用和其它安全性问题。
本发明的组合物有内脏脂肪降低作用，确切而言，其能预防或改善多危因素综合征，即内脏脂肪型肥胖、糖尿病、高脂血和高血压。因此，除所述内脏脂肪降低作用外，本发明组合物还有血糖升高抑制作用、血糖降低作用、脂类代谢改善作用和血压升高抑制作用。所述脂类代谢改善作用是指血清中总胆固醇降低作用、甘油三酯降低作用或游离脂肪酸降低作用。
多危因素综合征中的糖尿病是葡萄糖耐受异常引起的II型糖尿病(非胰岛素依赖性糖尿病)。另外，多危因素综合征中高脂血的特征是脂类代谢异常引起血清总胆固醇、甘油三酯或游离脂肪酸水平升高。
内脏脂肪的降低作用可以通过测定腹内脂肪的蓄积量来确定。例如实验动物生殖器官(附睾、子宫)周围的脂肪、肾周脂肪、肠系膜脂肪和网膜脂肪等。本方法所用的实验动物优选高脂饲养的饮食肥胖模型动物(M.Rebuffe-Scrive等，Metabolism，42，1405-1409，1993)或遗传肥胖模型动物，例如KK小鼠、KK-Ay小鼠、ob/ob小鼠、db/db小鼠、Zucker肥胖大鼠和OLETF大鼠。可以从实验动物(C.S.Hun等，Biochemical and BiophysicalResearch Communications，259，85-90，1999)和人(K.Tokunaga等，International Journal of Obesity，7，437-445，1983)的腹部CT扫描图像中内脏脂肪面积的减少来评价内脏脂肪降低作用，但用腰围减少量评价更方便。
另外，因为本发明组合物有内脏脂肪降低作用，能预防或改善多危因素综合征，包括内脏脂肪型肥胖、糖尿病、高脂血和高血压。因此，通过减少内脏脂肪，降低机体脂肪百分含量，从而预防或改善肥胖。并且，脂肪减少后，脂肪细胞的多种生理活性物质(脂肪细胞因子)分泌量减少，例如leptin、TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、游离脂肪酸、脱辅蛋白E、血管紧张肽原和PAI-1(纤溶酶原活化因子抑制剂-1)等。因此，内脏脂肪减少使胰岛素耐受性改善，葡萄糖耐量损伤缓解，从而使与TNF-α相关的胰岛素耐受性减少，血糖水平降低，这有助于预防或改善糖尿病。另外，与脂类转运相关的游离脂肪酸和脱辅蛋白E减少，脂类异常改善，从而降低血脂水平这有助于预防或改善高脂血。与血压调节有关的血管紧张肽原和与血栓形成有关的PAI-1减少，血压下降，这有助于预防或改善高血压或动脉粥样硬化症。
本发明所用甘草疏水性提取物的原材料——甘草包括豆(Leguminosae)科甘草(Glycyrrhiza)属的洋甘草(Glycyrrhiza glabra)、甘草(G.uralensis)和G.inflata。甘草是一种具有数百年历史的食物，它还被用作食品添加剂和生药。
可以用有机溶剂提取甘草或其粉末的活性成分获得本发明所用的甘草疏水性提取物。另一种方法包括预先用水或碱性水溶液提取甘草的亲水性成分，然后在干燥或不干燥的情况下用有机溶剂提取甘草残渣。本方法所用的有机溶剂优选已被许可用于药品、食品和食品添加剂生产和加工的溶剂，包括丙酮、乙醇、甘油、乙酸乙酯、乙醚、环己烷、丁醇、丙醇、丙二醇、己烷和甲醇等，还可以用油类(例如可食用油)。也可用两种或两种以上的上述溶剂的混合物和任意一种上述溶剂与水的混合物。另外，为了用单一溶剂能高效率地提取甘草的疏水性成分，优选用乙酸乙酯、丙酮或乙醇。将提出疏水性成分中所得的甘草提取物或已除去提取物溶剂的提取物定义为甘草疏水性提取物。另外，除非含有药品或食品中的有害(objectionable)杂质，本发明还可使用粗提取物或半纯化提取物。
本发明所用的姜黄提取物的原材料——姜黄根是姜科姜黄属多年生植物姜黄的根或根茎。姜黄作为香料已有数百年的历史。姜黄染料是用有机溶剂(例如乙醇、己烷或丙酮)提取姜黄根而得的，已被许可用作着色食品添加剂，安全性高。
可以用水或有机溶剂提取姜黄根中的活性成分来获得本发明所用的姜黄提取物。本方法所用的有机溶剂优选已被许可用于药品、食品和食品添加剂生产和加工的溶剂，包括丙酮、乙醇、甘油、乙酸乙酯、乙醚、环己烷、丁醇、丙醇、丙二醇、己烷和甲醇等，还可以用油类(例如可食用油)，也可用两种或两种以上的上述溶剂的混合物和任意一种上述溶剂与水的混合物。将上述提取方法中所得的提取物或已除去提取物溶剂的提取物定义为姜黄提取物。另外，除非含有药品或食品中的有害杂质，本发明还可使用粗提取物或半纯化提取物。
本发明所用丁香提取物的原材料——丁香是桃金娘(Myrtaceae)科Syzygium aromaticumi或石竹番樱桃(Eugenia caryophyllata)的花蕾、叶或花，丁香作为调料食品已有几百年的历史，丁香提取物已被许可作为抗氧剂用作食品添加剂，安全性高。
可以用水或有机溶剂提取丁香或其粉末中的活性成分来获得本发明所用的丁香提取物。本方法所用的有机溶剂优选已被许可用于药品、食品和食品添加剂生产和加工的溶剂，包括丙酮、乙醇、甘油、乙酸乙酯、乙醚、环己烷、丁醇、丙醇、丙二醇、己烷和甲醇等。还可以用油类(例如可食用油)，也可用两种或两种以上的上述溶剂的混合物和任意一种上述溶剂与水的混合物。将上述提取方法中所得的提取物或已除去提取物溶剂的提取物定义为丁香黄提取物。另外，除非含有药品或食品中的有害杂质，本发明还可使用粗提取物或半纯化提取物。
本发明所用的肉桂提取物的原材料——肉桂是樟科肉桂属的肉桂(Cinnamomum cassia)、锡兰肉桂(C.zeylanicum)或C.loureirii。肉桂作为调料食品已有数百年的历史且其没有副作用或其它安全性问题。
可以用水或有机溶剂提取肉桂或其粉末中的活性成分来获得本发明所用的肉桂提取物。本方法所用的有机溶剂优选已明确用于药品、食品和食品添加剂生产和加工的溶剂，包括丙酮、乙醇、甘油、乙酸乙酯、乙醚、环己烷、丁醇、丙醇、丙二醇、己烷和甲醇等。还可以用油类(例如可食用油)，也可用两种或两种以上的上述溶剂的混合物和任意一种上述溶剂与水的混合物。将上述提取方法中所得的提取物或已除去提取物溶剂的提取物定义为肉桂黄提取物。另外，除非含有药品或食品中的有害杂质，本发明还可使用粗提取物或半纯化提取物。
本发明的组合物是用于预防或改善多危因素综合征的组合物。条件是该组合物含有上述甘草疏水性提取物、姜黄提取物、丁香提取物和肉桂提取物中的至少一种，其形式不受限制，可以用作食品/饮料，例如营养健康食品(健康专用食品和营养功能食品)或保健食品，或用作医药品、化妆品或准药品。
用作食品/饮料时，可以直接摄取的制品，或用公知的摄取用载体或辅剂等将其制成方便摄取的制品，例如胶囊、片剂和颗粒等。在这些制剂中，每一种提取物的含量可以为0.1～100％重量，优选10～90％重量，并且可以将其混入各种食品和饮料产品的原料中，例如口香糖、巧克力、糖果、果冻、饼干、饼干(crackers)等；糖果，冰淇淋、冰冻糖果(ice candies)等冷冻甜食；茶、不含酒精的饮料、营养饮料、美容饮料等饮料，日本小麦面条、中国面条、意大利面条和方便面等面条；碎鱼和蒸鱼(kamaboko)、鱼肠(chikuwa)和碎肉(hannpen)等鱼糊食物；调味品、蛋黄酱、酱油等调料，人造奶油、黄油和色拉油等油质品，面包房制品，火腿，汤，熏蒸(retort)食品和冷冻食品等。摄取上述食品或饮料组合物时，提取物成分的成人推荐日摄取量为0.1～1,000mg/kg，更优选1～100mg/kg。上述组合物也可用作家畜和宠物的饲料或宠物食品，在这些应用中，提取物成分的推荐日摄取量优选0.1～1,000mg/kg。
当用作药品时，对剂型无特别限制，包括胶囊、片剂、颗粒、注射剂、栓剂和贴剂。上述剂型可以用合适的可药用配方原料制备，例如赋形剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂、抗氧剂、着色剂、抗凝剂(aggregation inhibitor)、吸收促进剂、增溶剂和稳定剂等。上述制剂中，提取物成分的成人日剂量为0.1～1,000mg/kg，优选1～100mg/kg，该剂量可以一天一次服用，也可分成几次在一天内服用。上述组合物也可以作为家畜和宠物用药品，在此应用中，提取物成分的日剂量优选0.1～1,000mg/kg。
用作化妆品或准药物时，上述组合物能以下列形式使用特别是软膏、擦剂、气雾剂、乳膏、肥皂、面部清洗剂、身体清洗剂、花露水、洗剂和沐浴剂。
本发明的组合物可用于所有动物，包括鱼类、爬行动物、两栖动物、鸟类和哺乳动物。对所述哺乳动物的种类无特殊限制，包括人、猴、犬、猫、牛、马、猪、羊、小鼠、大鼠和豚鼠等。
发明的最佳实施方案用下列实施例进一步详细举例说明本发明，但本发明不限于这些实施例。
甘草疏水性提取物(制备实施例1)甘草疏水性提取物-1的制备用玻璃容器将500g甘草粉末(Kaneka Sun Spice Co.，Ltd.)浸泡于5倍体积的乙酸乙酯中，室温避光放置一周，偶尔搅拌。周滤纸(ADVANTEC No.2)将混合物过滤两次除去粉末，回收提取液。减压浓缩提取液除去溶剂，得33.91g甘草疏水性提取物。
(参考实施例1)甘草疏水性提取物中的甘草酸含量参照M.A.Raggi等的方法(Boll.Chim.Farmaceutico.，133，704-708，1994)，用HPLC法定量测定制备实施例1中所得的甘草疏水性提取物中甘草酸的含量。色谱柱COSMOSIL 5C18-AR，4.6×250mm(Nacalai Tesque，Inc.)；柱温40℃；流动相乙腈∶蒸馏水∶乙酸(35∶65∶0.5，v/v)；流速1ml/min。在251nm处观察吸收峰，用甘草酸铵(Wako Pure ChemicalIndustries，Ltd.；食品添加剂分析级)作为甘草酸标准物，在1～20μg/ml浓度范围内绘制校正曲线，然后进行测定。
结果表明，1mg/ml甘草疏水性提取物中的甘草酸为4μg/ml，即提取物中的甘草酸含量为0.4％。因为甘草酸的含量一般在甘草粉末中不低于2.5％，在水提取物中不低于4.5％，在热水提取物中不低于6.0％，因此发现甘草疏水性提取物中的甘草酸含量极低。
(检测实施例1)内脏脂肪降低作用给予C57BL/6J小鼠(雌性，10周龄)高脂、高糖食物(Oriental Yeast Co.产品；见表1)，任意饲养4～8周建立饮食肥胖动物模型。将小鼠分成6～8组，用正常食物(Oriental Yeast Co.产品，表1)作为基础饮食，设立非治疗组(对照组)和饮食中补充制备实施例1所得的甘草疏水性提取物组。两组小鼠均自由进食4周，禁食隔夜后在乙醚麻醉下剖开腹腔，通过腹主动脉放血将小鼠处死，然后切除子宫周脂肪和肾周脂肪，称重，子宫周脂肪与肾周脂肪重量之和计为腹内脂肪量。数据如表2所示。
表1

表2

由表2可知，与非治疗组(对照组)相比，虽然食耗量和体重无差别，但饮食中补充甘草疏水性提取物组腹内脂肪量明显较少。因此，很明显摄取含有甘草疏水性提取物的食物减低了由摄取高脂、高糖食物引起的内脏脂肪蓄积。
(检测实施例2)对II型糖尿病模型小鼠-1的糖尿病预防效果用患有遗传性肥胖且即将出现II型糖尿病的KK-Ay小鼠模型评价制备实施例1中所得的甘草疏水性提取物的糖尿病预防效果，以抗糖尿病药物曲格列酮作为阳性对照。
将KK-Ay小鼠(雌性，6周龄)分成3组(每组5只)，用正常食物(OrientalYeast Co.，见表1)作为基础饮食，设立非治疗组(对照组)、曲格列酮组和甘草疏水性提取物，所有组的小鼠均自由进食4周。在玛瑙研钵中将曲格列酮(Noscal Tab.200，每片含200mg曲格列酮，Sankyo Co.，Ltd.)研磨成粉，将其加到正常食物中，使最终浓度达到0.2％。将制备例1中所得的甘草疏水性提取物加到正常食物中，使最终浓度达到0.15％。
在饲养期间，每周从小鼠尾静脉取少量血样，用简易血糖测定法NovoAssist Plus(Novo Nordisk Pharma Ltd.)测定血糖。
在饲养期末，使小鼠禁食隔夜后在乙醚麻醉下剖开腹腔。从腹主动脉放血，切除肝脏，称重。另外，委托Sogo Ikagaku Kenkyusho Co.，Ltd.测定血清总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)、GOT、GPT、LAP、胆碱酯酶(ChoE)、总蛋白(TP-S)、白蛋白(ALB-S)和A/G比率。
表3

*(p＜0.05)小鼠体重值如表3所示。曲格列酮组小鼠平均体重比非治疗组(对照组)略微增加且4周以后显著增加。甘草疏水性提取物与非治疗组(对照组)无显著差别。
表4

*(p＜0.05)，**(p＜0.01)血糖数据如表4所示。饲养开始时的血糖水平为145～157mg/dl，所有组都没有高血糖。一周后，非治疗组(对照组)的血糖水平超过390mg/dl，表明糖尿病的开始。与非治疗组(对照组)相比，曲格列酮组显示出明显的血糖升高抑制作用，表明曲格列酮抑制血糖升高。通过小鼠体重和食耗量算出此时间点的曲格列酮剂量约为270mg/kg/天。另一方面，甘草疏水性提取物组在两周后显示明显的血糖升高抑制作用，表明甘草疏水性提取物抑制血糖升高。通过小鼠体重和食耗量算出此时间点的甘草疏水性提取物剂量约为190mg/kg/天。
表5

*(p＜0.05)，**(p＜0.01)肝脏重量和血检数据如表5所示。与非治疗组(对照组)相比，曲格列酮组TG和NEFA明显降低，表明曲格列酮有脂类代谢改善作用。但是，曲格列酮组的肝脏重量明显增加，GPT显著升高(13％)，但GOT在统计学上没有明显升高，表明肝脏受损。另一方面，甘草疏水性提取物组T-CHO和NEFA明显降低(35％)，但TG在统计学上没有明显下降，表明甘草疏水性提取物有脂类代谢改善作用。另外，甘草疏水性提取物组肝功能指标(例如肝脏重量、GOT和GPT)无明显变化。表明甘草疏水性提取物无肝脏毒性。
由上述结果可知，与阳性对照药物曲格列酮一样，甘草疏水性提取物具有血糖升高抑制作用和脂类代谢改善作用。
(制备实施例2)甘草疏水性提取物-2的制备用玻璃容器将300g甘草粉末(Kaneka Sun Spice Co.，Ltd.)浸泡于10倍体积的温水中(约40℃)，避光搅拌隔夜(约18小时)。用滤纸(ADVANTEC No.2)将混合物过滤两次，干燥(约60℃)所得残渣，回收265g水提取残渣，将其浸泡于5倍体积的乙醇中，室温避光放置一周，偶尔搅拌。用滤纸(ADVANTEC No.2)将混合物过滤两次除去粉末，回收提取液。减压浓缩提取液除去溶剂，得23.62g甘草疏水性提取物。
(检测实施例3)对II型糖尿病模型小鼠-2的糖尿病预防效果用检测实施例2的相同方法评价制备实施例2所得的甘草疏水性提取物预防糖尿病的效果。在甘草疏水性提取物组中，将制备实施例2所得的甘草疏水性提取物加到正常食物中，使最终浓度为0.2％。以抗糖尿病药物吡格列酮作为阳性对照。在玛瑙研钵中将吡格列酮(Actosl Tab.30，每片含30mg吡格列酮，Takeda Chemical Industries，Ltd.)研磨成粉，将其加入到正常食物中，使吡格列酮的最终浓度达到0.04％。用简易血糖测定法GlutestAce(Sanwa Kagaku Kenkyusho Co.，Ltd.)测定血糖。
表6

小鼠体重值如表6所示。吡格列酮组和甘草疏水性提取物组小鼠体重的时间进程与非治疗组(对照组)无明显差别。
表7

**(p＜0.01)血糖数据如表7所示。非治疗组(对照组)的血糖水平在一周后升高，表明糖尿病的开始。相反，吡格列酮组的血糖升高明显被抑制，表明吡格列酮有抑制血糖升高的作用。通过小鼠体重和食耗量算出此时间点的吡格列酮剂量约为50mg/kg/天。甘草疏水性提取物组的血糖升高也被明显抑制，表明甘草疏水性提取物有抑制血糖升高的作用。通过小鼠体重和食耗量算出此时间点的甘草疏水性提取物剂量约为260mg/kg/天。
由上述结果可知，甘草疏水性提取物与阳性对照药物吡格列酮一样抑制血糖升高，表明甘草疏水性提取物对糖尿病有预防效果。
(检测实施例4)对II型糖尿病模型小鼠糖尿病的改善作用用KK-Ay小鼠评价制备实施例2所得的甘草疏水性提取物的糖尿病改善效果，以抗糖尿病药物吡格列酮作为阳性对照。
将KK-Ay小鼠(雌性，15周龄)分成3组(每组4只)，用正常食物作为基础饮食，设立非治疗组(对照组)、吡格列酮组和甘草疏水性提取物组，小鼠自由进食7天。将吡格列酮加到正常食物中，使最终浓度为0.02％。将制备实施例2中制备的甘草疏水性提取物加到正常食物中，使最终浓度为0.2％。用简易血糖测定法Glutest Ace(Sanwa Kagaku Kenkyusho Co.，Ltd.)测定血糖。
表1

表1中所示为高频信号通过外部端子电极2时的损耗，该损耗用边缘角θ为17度时作为1.00的相对值表示。
表1中所示为高频信号通过外部端子电极2时的损耗，该损耗用边缘角θ为17度时作为1.00的相对值表示。
根据表1可知，为了减小损耗，希望要更增大边缘角θ。


图11所示为图9所示的层叠型陶瓷电子元器件1中分别与2个通孔导体6连接的相邻的2个外部端子电极2的剖视图。
参照图11，由于例如多层陶瓷基片构成的层叠型陶瓷电子元器件1的小型化而且高密度化，或者具有复合功能，导致外部端子电极2的数量增加，随之相邻外部端子电极2之间的间距9不断减小，例如达到0.1mm～0.4mm那样。在这种情况下，若外部端子电极2的边缘角θ较小，则在该边缘尖端电场集中，在相邻的外部端子电极2之间容易有电流流过，耐压性能降低。例如，对于通信机的发送系统或汽车用元器件等大电流流过的用途，在采用层叠型陶瓷电子元器件1时，上述的问题将特别严重。
图12所示为图9所示的层叠型陶瓷电子元器件1安装在安装基板10上的状态。
在图12中，简要画出层叠型陶瓷电子元器件1中具有的元器件本体4，另外还简要画出安装基板10。在元器件本体4上装有片载元器件11，另外为了覆盖片载元器件11，在元器件本体4上装有金属罩12。
在层叠型陶瓷电子元器件1面向高频用途的情况下，在将它安装时，加强接地对于提高电气特性是很重要的。因此，在层叠型陶瓷电子元器件1上，在<p>在开始上述治疗之前的当天及治疗的第7天、第14天和第21天，用无损伤自动血压计(BP-97A，Softron Co.，Ltd.)测量尾动脉血压。血压测量在每次给与样品前进行。
表9

SHRs体重如表9所示。各组体重的时间进程相比，几乎没有显著差别。
表10

*(p＜0.05)，**(p＜0.01)血压数据如表10所示。给药前的血压为111～113mmHg，因此各组都没有高血压。载体对照组血压在第7天开始上升，表明高血压的开始。与载体对照组相比，甘草疏水性提取物组的血压升高受抑制，在第7天和第21天出现明显差异。抗高血压药物马来酸依那普利组在第7天及以后血压升高受到明显抑制。
由上述结果可知，甘草疏水性提取物能有效预防或改善高血压。
(实施例1)制备含有甘草疏水性提取物的片剂甘草疏水性提取物 45重量份乳糖 35重量份结晶纤维素15重量份脂肪酸蔗糖酯 5重量份根据以上配方，以现有的方法制备用于食品/饮料或医用的含有甘草疏水性提取物的片剂。
(实施例2)制备含有甘草疏水性提取物的软胶囊甘草疏水性提取物 40重量份芝麻油55重量份脂肪酸甘油酯 5重量份根据以上配方，以现有的方法制备用于食品/饮料或医用的含有甘草疏水性提取物的软胶囊。
(实施例3)制备含有甘草疏水性提取物的饼干甘草疏水性提取物 1重量份软面粉(soft flour)120重量份食盐 1重量份发酵粉2重量份黄油 30重量份水40重量份根据以上配方，以现有的方法制备含有甘草疏水性提取物的饼干。
(实施例4)制备含有甘草疏水性提取物的面条甘草疏水性提取物 1重量份硬面粉(hard flour)100重量份软面粉100重量份食盐 10重量份水100重量份根据以上配方，以现有的方法制备含有甘草疏水性提取物的面条。
(实施例5)制备含有甘草疏水性提取物的调味品甘草疏水性提取物 10重量份橄榄油80重量份醋60重量份食盐 3重量份胡椒粉1重量份柠檬汁5重量份根据以上配方，以现有的方法制备含有甘草疏水性提取物的调味品。
姜黄提取物
(制备实施例4)姜黄提取物-1的制备用玻璃容器将400g姜黄粉末(Kaneka Sun Spice Co.，Ltd.)浸泡于5倍体积的乙醇中，室温避光放置一周，偶尔搅拌。用滤纸(ADVANTEC No.2)将混合物过滤两次除去粉末，减压除溶剂，回收得43.71g姜黄取物。
(检测实施例6)内脏脂肪降低作用任意给予C57BL/6J小鼠(雌性，10周龄)高脂、高糖的食物(Oriental YeastCo.产品，表1)4～8周，建立饮食肥胖模型。将小鼠分成6～8组，用正常食物(Oriental Yeast Co.产品，表1)作为基础饮食，设立非治疗组(对照组)和食物中补充制备实施例4所得姜黄提取物组。两组小鼠都自由进食4周，禁食隔夜后在乙醚麻醉下剖开腹腔，通过腹主动脉放血将小鼠处死。然后切除子宫周脂肪和肾周脂肪，称重，子宫周脂肪与肾周脂肪的重量和计为腹内脂肪量。数据如表11和12所示。
表11

表12

由表11和12可知，与非治疗组(对照组)相比，姜黄提取物组的食耗量和体重无差别，但腹内脂肪量显著减少。由此可知，摄取补充有姜黄提取物的食物降低了由摄取高脂、高糖食物导致的内脏脂肪蓄积。
(制备实施例5)姜黄提取物-2的制备用玻璃容器将793g姜黄粉末(Kaneka Sun Spice Co.，Ltd.)浸泡于4,000ml乙醇中，室温避光放置一周，偶尔搅拌。用滤纸(ADVANTEC No.2)将混合物过滤两次除去粉末，回收提取液。减压浓缩提取液，得79.48g姜黄取物。
(检测实施例7)对II型糖尿病模型小鼠的疗效用患有遗传性肥胖且即将出现II型糖尿病的KK-Ay小鼠作为动物模型评价姜黄提取物的效果，以抗糖尿病药物吡格列酮作为阳性对照。
将KK-Ay小鼠(雌性，6周龄)分成3组(每组5只)，用正常食物(OrientalYeast Co.，表1)作为基础饮食。设立非治疗组(对照组)、吡格列酮组和姜黄提取物组，随意饲养4周。在玛瑙研钵中将吡格列酮(Actos Tab.30，每片含吡格列酮30mg，Takeda Chemical Industries，Ltd.)研磨成粉，将其加入正常食物中，使吡格列酮的终浓度为0.04％。将制备实施例5制备的姜黄提取物加到正常食物中，使终浓度为0.5％。
在饲养期间，每周从小鼠尾静脉取少量血样，用简易血糖测定法GlutestAce(Sanwa Kagaku Kenkyusho Co.，Ltd.)测量血糖水平。
表13

小鼠体重如表13所示。吡格列酮组和姜黄提取物组与非治疗组(对照组)体重的时间进程大致相同，无显著差别。
表14

**(p＜0.01)血糖数据如表14所示。饲养开始时血糖水平为142～151mg/dl，没有高血糖组。非治疗组(对照组)血糖水平在一周后升高，表明糖尿病的开始。与非治疗组(对照组)相比，姜黄提取物组和抗糖尿病药物吡格列酮组血糖升高受到明显抑制，表明姜黄提取物具有降血糖作用。通过小鼠体重和食耗量算出此时间点的姜黄提取物剂量约为670mg/kg/天。由上述结果可知，姜黄提取物能有效预防或改善糖尿病。
(实施例6)制备含有姜黄提取物的片剂姜黄提取物45重量份乳糖 35重量份结晶纤维素15重量份脂肪酸蔗糖酯 5重量份根据以上配方，用现有方法制备用于食品/饮料或医用的含有姜黄提取物的片剂。
(实施例7)制备含有姜黄提取物的软胶囊姜黄提取物40重量份芝麻油55重量份脂肪酸甘油酯 5重量份根据以上配方，用现有方法制备用于食品/饮料或医用的含有姜黄提取物的软胶囊。
(实施例8)制备含有姜黄提取物的饼干姜黄提取物1重量份软面粉120重量份食盐 1重量份发酵粉2重量份黄油 30重量份水40重量份根据以上配方，用现有方法制备含有姜黄提取物的饼干。
(实施例9)制备含有姜黄提取物的面条姜黄提取物 1重量份硬面粉100重量份软面粉 100重量份食盐 10重量份水 100重量份根据以上配方，用现有方法制备含有姜黄提取物的面条。
(实施例10)制备含有姜黄提取物的调味品姜黄提取物 10重量份橄榄油 80重量份醋 60重量份食盐 3重量份胡椒粉 1重量份柠檬汁 5重量份根据以上配方，用现有方法制备含有姜黄提取物的调味品。
丁香提取物(制备实施例6)丁香提取物-1的制备用玻璃容器将600g丁香粉末(Kaneka Sun Spice Co.，Ltd.)浸泡于5倍体积的乙酸乙酯中，室温避光放置一周，偶尔搅拌。用滤纸(ADVANTEC No.2)将混合物过滤两次除去粉末，回收提取液。减压浓缩提取液除去溶剂，得47.59g丁香提取物。
(检测实施例8)内脏脂肪降低作用给予C57BL/6J小鼠(雌性，10周龄)高脂、高糖的食物(Oriental Yeast Co.产品，表1)，任意饲养4～8周，建立饮食肥胖模型。将小鼠分成6～8组，用正常食物(Oriental Yeast Co.产品，表1)作为基础饮食，设立非治疗组(对照组)和食物中补充制备实施例6所得丁香提取物组。两组小鼠都自由进食4周，禁食隔夜后在乙醚麻醉下剖开腹腔，通过腹主动脉放血将小鼠处死。然后切除子宫周脂肪和肾周脂肪，称重，子宫周脂肪与肾周脂肪的重量和计为腹内脂肪量。数据如表15所示。
表15

从表15可知，与非治疗组(对照组)相比，丁香提取物组的食耗量和体重无差别，但腹内脂肪量明显减少。由此可知，摄取补充丁香提取物的食物减少了由摄取高脂、高糖食物引起的内脏脂肪蓄积。
(制备实施例7)丁香提取物-2的制备用玻璃容器将2kg丁香粉末(Kaneka Sun Spice Co.，Ltd.)浸泡于10L乙醇中，室温避光放置一周，偶尔搅拌。用滤纸(ADVANTEC No.2)将混合物过滤两次除去粉末，回收提取液。减压浓缩提取液除去溶剂，得217g丁香提取物。
(检测实施例9)对II型糖尿病模型小鼠的疗效用患有遗传性肥胖且即将出现II型糖尿病的KK-Ay小鼠模型评价丁香提取物的效果，以抗糖尿病药物吡格列酮作为阳性对照。
将KK-Ay小鼠(雌性，6周龄)分成3组(每组5只)，用正常食物(OrientalYeast Co.，表1)作为基础饮食。设立非治疗组(对照组)、吡格列酮组和丁香提取物组，随意饲养3周。在玛瑙研钵中将吡格列酮(Actos Tab.30，每片含吡格列酮30mg，Takeda Chemical Industries，Ltd.)研磨成粉，将其加入正常食物中，使吡格列酮的终浓度为0.02％。将制备实施例7制备的丁香提取物加到正常食物中，使终浓度为0.5％。
在饲养期间，每周从小鼠尾静脉取少量血样，用简易血糖测定法GlutestAce(Sanwa Kagaku Kenkyusho Co.，Ltd.)测定血糖。
表16

小鼠体重如表16所示。吡格列酮组和丁香提取物组与非治疗组(对照组)体重的时间进程大致相同，无显著差别。
表17

*(p＜0.05)，**(p＜0.01)血糖数据如表17所示。饲养开始时血糖水平为156～171mg/dl，没有高血糖组。非治疗组(对照组)血糖水平在一周后升高，表明糖尿病的开始。与非治疗组(对照组)相比，丁香提取物组和抗糖尿病药物吡格列酮组血糖升高受到明显抑制，表明丁香提取物具有降血糖作用。通过小鼠体重和食耗量算出此时间点的丁香提取物剂量约为660mg/kg/天。
(实施例11)制备含有丁香提取物的的片剂丁香提取物 45重量份乳糖35重量份结晶纤维素 15重量份脂肪酸蔗糖酯5重量份根据以上配方，用现有方法制备用于食品/饮料或医用的含有丁香提取物的片剂。
(实施例12)制备含有丁香提取物的软胶囊丁香提取物 40重量份芝麻油 55重量份脂肪酸甘油酯5重量份根据以上配方，用现有方法制备用于食品/饮料或医用的含有丁香提取物的软胶囊。
(实施例13)制备含有丁香提取物的饼干丁香提取物 1重量份软面粉 120重量份食盐1重量份发酵粉 2重量份黄油30重量份水 40重量份根据以上配方，用现有方法制备含有丁香提取物的饼干。
(实施例14)制备含有丁香提取物的面条丁香提取物 1重量份硬面粉 100重量份软面粉 100重量份食盐10重量份水 100重量份根据以上配方，用现有方法制备含有丁香提取物的面条。
(实施例15)制备含有丁香提取物的调味品丁香提取物 10重量份橄榄油 80重量份醋 60重量份食盐3重量份胡椒粉 1重量份柠檬汁 5重量份根据以上配方，用现有方法制备含有丁香提取物的调味品。
桂皮提取物(制备实施例8)桂皮提取物的制备用玻璃容器将1,000g桂皮粉末(Kaneka Sun Spice Co.，Ltd.)浸泡于5倍体积的乙酸乙酯中，室温避光放置一周，偶尔搅拌。用滤纸(ADVANTEC No.2)将混合物过滤两次除去粉末，回收提取液。减压浓缩提取液除去溶剂，得59.57g桂皮提取物。
(检测实施例10)内脏脂肪降低作用给予C57BL/6J小鼠(雌性，10周龄)高脂、高糖的食物(Oriental Yeast Co.产品，表1)，任意饲养4～8周，建立饮食肥胖模型。将小鼠分成6～8组，用正常食物(Oriental Yeast Co.产品，表1)作为基础饮食，设立非治疗组(对照组)和食物中补充制备实施例8所得桂皮提取物组。两组小鼠都自由进食4周，禁食隔夜后在乙醚麻醉下剖开腹腔，通过腹主动脉放血将小鼠处死。然后切除子宫周脂肪和肾周脂肪，称重，子宫周脂肪和肾周脂肪的重量和计为腹内脂肪量。数据如表18所示。
表18

从表18可知，与非治疗组(对照组)相比，桂皮提取物组的食耗量和体重无差别，但腹内脂肪量明显减少。由此可知，摄取补充桂皮提取物的食物减少了由摄取高脂、高糖食物引起的内脏脂肪蓄积。
(实施例16)制备含有桂皮提取物的片剂桂皮提取物 45重量份乳糖35重量份结晶纤维素 15重量份脂肪酸蔗糖酯5重量份根据以上处方，用现有方法制备用于食品/饮料或医用的含有桂皮提取物的片剂。
工业适用性如上组成的本发明，提供一种用于预防或改善多危因素综合征组合物，所述综合征包括内脏脂肪型肥胖、糖尿病、高脂血和高血压。摄取本发明的组合物能减少蓄积的内脏脂肪，由此预防或改善由内脏脂肪蓄积引起的生活方式相关疾病，例如肥胖、糖尿病、高脂血和高血压。
权利要求
1.一种用于预防或改善多危因素综合征的组合物，其含有选自甘草疏水性提取物、姜黄提取物、丁香提取物和桂皮提取物中的至少一种提取物。
2.权利要求1的组合物，其含有选自甘草疏水性提取物、丁香提取物和桂皮提取物中的至少一种提取物。
3.权利要求1的组合物，其含有甘草疏水性提取物。
4.权利要求1的组合物，其含有姜黄提取物。
5.权利要求1的组合物，其含有丁香提取物。
6.权利要求1的组合物，其含有桂皮提取物。
7.用于食品/饮料的权利要求1的组合物。
8.用于医药的权利要求1的组合物。
9.用于人的权利要求1的组合物。
10.用于家畜或宠物的权利要求1的组合物。
11.用于化妆品或准药物的权利要求1的组合物。
12.权利要求1的组合物，其中多危因素综合征为选自内脏脂肪型肥胖、糖尿病、高脂血和高血压中的至少一种。
13.权利要求1的组合物，其中多危因素综合征为内脏脂肪型肥胖。
14.权利要求1的组合物，其中多危因素综合征为糖尿病。
15.权利要求1的组合物，其中多危因素综合征为高脂血。
16.权利要求1的组合物，其中多危因素综合征为高血压。
全文摘要
本发明涉及一种用于预防或改善多危因素综合征包括内脏脂肪型肥胖、糖尿病、高脂血和高血压的组合物，其含有选自甘草疏水性提取物、姜黄提取物、丁香提取物和桂皮提取物中的至少一种提取物。
文档编号A61K36/54GK1479626SQ01820494
公开日2004年3月3日 申请日期2001年12月12日 优先权日2000年12月12日
发明者前辰正, 塚川美寿, 寿, 之, 岸田秀之, 北野光昭, 昭, 北原干郎, 郎, 中川格 申请人:钟渊化学工业株式会社