专利名称：化橘红制剂及其生产方法
技术领域：
本发明涉及中药化橘红有效成分的提取方法，化橘红制剂及其生产方法。
本发明是这样实现的。
将化橘红未成熟或近成熟的全果粉碎，经过水提取，同时收集挥发油，水提取液滤过，合并滤液，进一步加入有机溶剂分离纯化或不使用有机溶剂，浓缩成浸膏，加入辅料，混合，加入已收集的挥发油，制粒，压片，包糖衣，制成片剂，或制成胶囊，或冲剂(颗粒剂)，或制成其它口服制剂。
本发明中可以不收集挥发油，但其使用效果略有下降。
本发明的化橘红以正毛化橘红为佳。其有效成分含量高于副毛化橘红。
本发明的化橘红可以单味药作为原料药，也可以与其它中药复合(复合)制成复方制剂。
本发明中的水提取可以采用在室温或者在加热沸腾条件下进行。提取次数至少应是一至三次。水的用量为水至少能没过化橘红全果药材，水用量过多不限。
本发明加入的有机溶剂可以采用乙醇、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等。乙醇可以采用无水乙醇或者各种浓度乙醇，石油醚可以采用石油醚-30、石油醚-60或石油醚-90。
取上述提取方法制成的化橘红全果浸膏适量，与化橘红皮的同样方法的提取物浸膏适量，加高效液相色谱流动相甲醇—醋酸—水(35∶4∶61)稀释，过滤，滤液置于容量瓶中，用流动相定量，再用微孔滤膜(0.45um)过滤后，注入高效液相仪中，外标法定量，得化橘红全果或浸膏中柚皮甙的含量。结果发现，全果浸膏中柚皮甙的含量高于化橘红皮浸膏，表明全果的提取率比皮的提取率高。用全果能更好的开发利用化橘红原料资源。同时，化橘红全果较化橘红皮其原料来源更广泛，原料生产工艺更简单。
色谱条件Agilent1100高效液相色谱仪(手动进样器，20ul定量环，真空脱气机，四元泵，柱温箱，二极管阵列检测器)，色谱柱Hypersil ODS柱(5um，4.0×250mm)；流动相甲醇—醋酸—水(35∶4∶61)；检测波长283nm；柱温40℃，流速1ml/min。
化橘红是化痰止咳的中药，我们通过药理药效实验，对本发明的化橘红制剂进行实验动物小白鼠的止咳化痰，结果表明本发明的化橘红制剂的低、中、高剂量灌胃给药对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间，与空白对照组比较，均有显著延长，在统计学上有显著差异。与阳性对照药物美沙芬片比较，耐受时间延长，疗效较阳性药物美沙芬显著。
本发明的化橘红制剂对实验动物小鼠的化痰实验表明，本发明的化橘红制剂的低、中、高剂量灌胃给药对小鼠支气管分泌液增加，与空白对照组比较，均有显著增加，在统计学上有显著差异。与阳性对照药物痰咳净比较，对小鼠支气管分泌液均有显著增加，在统计学上有显著差异。提示本发明的化橘红制剂具有止咳化痰的药理药效作用，且比阳性对照疗效要好。
同时，本发明的化橘红制剂，有以下特点(1)给药方便，患者可自行完成。(2)服用量小，疗效迅速。(3)携带方便。(4)质量较稳定。
总之，本发明的化橘红制剂采用化洲柚的幼果全果或近成熟全果为生药材原料，具备良好的止咳化痰效果，其生产方法简单，有效成份提取率高。本发明的化橘红制剂成人使用剂量相当于6～9克中药材/次，每日2～3次。
化橘红全果粉碎，过20目筛，加水100℃没过药材，提取三次，每次1小时，过滤，同时收集挥发油，合并滤液，滤液蒸干，得棕黑色浸膏。浸膏加入辅料，混合后再加入收集得到的挥发油，混匀，加入适量的本技术领域熟知的粘合剂，制粒干燥，加入润滑剂，压片机压成片剂，包糖衣，分装，即得化橘红糖衣片剂；也可以将制成的颗粒，加入适量润滑剂装胶囊制成胶囊剂；也可以颗粒分装制成颗粒剂。
挥去氯仿，得墨绿色浸膏，浸膏再加入收集得到的挥发油，混匀，真空干燥或常压烘干(过80-100目筛)。加入适当浓度乙醇制成软材，制颗粒，干燥，加润滑剂，混匀，压片机压片成片剂，包糖衣，分装，即得糖衣片剂。
化橘红全果粉碎，过20目筛，经75℃水煎煮三次，每次2小时，过滤，合并滤液，滤液加入石油醚萃取，静置，滤液分为两层，水层和石油醚层，去水层，得石油醚层。
挥去石油醚，得墨绿色浸膏，浸膏再加入收集得到的挥发油，混匀，浸膏自然蒸干，干燥成粉末。过100-120目筛，装胶囊，分装，即得胶囊剂。
旋转蒸发仪挥去乙酸乙酯，得墨绿色浸膏，浸膏加入收集得到的挥发油，混匀后，浸膏再常压烘干，加适量润滑剂制成软材，制粒，干燥，压片机压片成片剂，薄膜包衣，分装，即得包衣片剂。
加热蒸干水层，得棕黑色浸膏，浸膏加入收集得到的挥发油，混匀。浸膏再喷雾干燥蒸成粉末。加入适量赋形剂后混匀，分装，成散剂。
化橘红全果粉碎，不过筛，室温下水浸泡提取三次，每次三天，过滤，合并滤液，滤液加入乙醇，静置，滤液沉淀，得水层和沉淀，去水层，得沉淀。
沉淀挥干，得浸膏，浸膏加入收集得到的挥发油，混匀。浸膏再直接加入赋形剂，矫味剂等后，混合均匀，制成颗粒，干燥后过8-10目筛，分装，即得颗粒剂。
(2)广西产化橘红提取浸膏水溶液广西产化橘红提取浸膏水溶液(相当于生药含量300mg/ml，给药剂量相当于生药3000mg/kg体重)。
(3)美沙芬片剂，美沙芬含量为15mg/片。取2片溶解于20毫升生理盐水中，制成悬液，浓度为3mg/ml，剂量为30mg/kg体重。
(4)生理盐水(氯化钠注射液)，NaCl含量0.9％。3、实验方法(浓氨水喷雾法)小鼠灌胃1小时后，开始接受浓氨水喷雾。按一定时间喷入浓氨水气雾，喷雾结束，立即取出小鼠，观察有无咳嗽反应。观察一分钟内咳嗽次数，若1分钟内出现3次以上典型咳嗽动作(腹肌收缩或缩胸，同时张大嘴，有时可有咳声)者，算作“有咳嗽”。否则算作“无咳嗽”。4、实验过程用序贯法(上下法)求出引起半数小鼠咳嗽的喷雾时间(EDT50)。计算R值，若R值大于130％，说明药物有止咳作用。若R值大于150％，则表明有显著的止咳作用。计算公式如下EDT50＝log-1c/n(式中n为动物数，c为rx值的总和，r为每剂量组的动物数，x为剂量(即喷雾时间)的对数。) 5、实验结果
经统计，正毛化橘红和广西产化橘红提取物组半数咳嗽时间及止咳效果见下表1。
本发明的实施例1正毛化橘红水提取物和广西产橘红水提取所得物，灌胃给药对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间比较，实施例1正毛化橘红水提取物对小鼠耐受时间有显著延长，在统计学上有显著差异。而广西产化橘红水提取物对小鼠耐受时间无显著延长，在统计学上无显著差异。说明本发明的正毛化橘红全果水提取物，对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间与广西产化橘红水提取物比较，耐受时间延长，疗效显著。本发明所采用的正毛化橘红所制成浸膏，止咳效果优于广西产化橘红浸膏。故本发明的上述实施例均采用正毛化橘红。
表1.正毛化橘红和广西产化橘红提取物的止咳效果比较组别剂量(mg/kg)EDT50(秒)R值(％)止咳效果代号样品名1 生理盐水 0 11.98 - -2 正毛化橘红水提物 300017.23111.7 无效3广西产化橘红水提物300013.38144.2 有效4 美沙芬 30 18.28153.0 有效
(2)化橘红皮B水提浸膏水溶液组皮B水提浸膏水溶液(相当于生药含量300mg/ml，给药剂量相当于生药3000mg/kg体重)。
(3)化橘红皮C水提浸膏水溶液组皮C水提浸膏水溶液(相当于生药含量300mg/ml，给药剂量相当于生药3000mg/kg体重)。
(4)美沙芬片剂，美沙芬含量为15mg/片。取2片溶解于20毫升生理盐水中，制成悬液，浓度为3mg/ml，剂量为30mg/kg体重。
(5)生理盐水(氯化钠注射液)NaCl含量0.9％。3、实验方法同实施例10采用浓氨水喷雾法。4、实验结果经统计，化橘红皮与全果提取物组半数咳嗽时间及止咳效果见下表2。
表2. 化橘红全果与皮的提取物的止咳效果比较组别剂量(mg/kg)EDT50(秒)R值(％)止咳效果代号 样品名1 生理盐水0 26.1 - -2 实施例13000 45.60174.7显效3 皮B水提物 3000 33.93130.0有效4 皮C水提物 3000 34.32131.5有效5 美沙芬 30 38.86148.9有效本发明的实施例1化橘红全果水提取物和化橘红皮水提取所得物，灌胃给药对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间与空白对照组比较，均有显著延长，在统计学上有显著差异。本发明的实施例1化橘红全果水提取物，对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间与阳性药物对照美沙芬片比较，耐受时间延长，疗效较阳性药物组美沙芬显著，与化橘红皮水提取物组比较，耐受时间延长，疗效较皮水提取浸膏组显著。
(2)高剂量组取化橘红制剂A直接给药(相当于生药含量300mg/ml，给药剂量相当于生药3000mg/kg体重)。
(3)中剂量组取化橘红制剂A，加生理盐水，按1∶2稀释后给药(相当于生药含量100mg/ml，给药剂量相当于生药1000mg/kg体重)。
(4)低剂量组取化橘红制剂A，加生理盐水，按1∶8稀释，稀释后给药(相当于生药含量33mg/ml，给药剂量相当于生药330mg/kg体重)。
(5)阳性物采用美沙芬片剂，美沙芬含量为15mg/片。取2片溶解于20毫升生理盐水中，制成悬液，浓度为3mg/ml，剂量为30mg/kg体重。
(6)生理盐水(氯化钠注射液)，NaCl含量0.9％。3、实验方法同实施例10采用浓氨水喷雾法。4、实验结果经统计，各剂量组半数咳嗽时间及止咳效果见下表3。
表3. 化橘红水提取浸膏的止咳效果组别剂量(mg/kg)EDT50(秒)R值(％)止咳效果代号样品名1 生理盐水 0 29.08 - -2 美沙芬片 30 38.98 134.04有效3化橘红浸膏高剂量组 3000 45.14 155.27显效4化橘红浸膏中剂量组 1000 41.82 143.81有效5化橘红浸膏低剂量组 330 10.47 139.17有效本发明的化橘红制剂低、中、高剂量灌胃给药对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间与空白对照组比较，均有显著延长，在统计学上有显著差异。与阳性药物对照美沙芬片比较，耐受时间延长，疗效较阳性药物组美沙芬显著。
(2)实施例4氯仿提取成分组氯仿提取浸膏水溶液(相当于生药含量300mg/ml，给药剂量相当于生药3000mg/kg体重)。
(3)实施例6乙酸乙酯提取成分组乙酸乙酯提取浸膏水溶液(相当于生药含量300mg/ml，给药剂量相当于生药3000mg/kg体重)。
(4)实施例1水提提取成分组水提取溶液(相当于生药含量300mg/ml，给药剂量相当于生药3000mg/kg体重)。
(5)美沙芬片剂，美沙芬含量为15mg/片。取2片溶解于20毫升生理盐水中，制成悬液，浓度为3mg/ml，剂量为30mg/kg体重。
(6)生理盐水(氯化钠注射液)，NaCl含量0.9％。3、实验方法同实施例10采用浓氨水喷雾法。4、实验结果经统计，各提取提取成分组半数咳嗽时间及止咳效果见下表4。
本发明的化橘红水提取浸膏及经各种有机溶剂分离所得浸膏，灌胃给药对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间与空白对照组比较，均有显著延长，在统计学上有显著差异。与阳性药物对照美沙芬片比较，耐受时间延长，疗效较阳性药物组美沙芬显著。实施例9的同样试验表明，实施例9的试验结果较实施例1为差，表明有机溶剂提取的有效成分的制剂效果不佳。
表4. 化橘红各提取成分的止咳效果组别 剂量EDT50(秒)R值(％)止咳效果代号样品名 (mg/kg)1 生理盐水0 27.54--2 实施例1水提溶液 300050.12 181.99 显效3实施例5石油醚提成分300035.80 129.99 有效4实施例6乙酸乙酯成分300038.31 139.11 有效5 实施例4氯仿成分 300041.82 151.85 显效6 美沙芬 30 44.67 162.22 显效
(2)高剂量组取化橘红制剂A直接给药(相当于生药含量300mg/ml，给药剂量相当于生药3000mg/kg体重)。
(3)中剂量组取化橘红制剂A，加生理盐水，按1∶2稀释后给药(相当于生药含量100mg/ml，给药剂量相当于生药1000mg/kg体重)。
(4)低剂量组取化橘红制剂A，加生理盐水，按1∶8稀释，稀释后给药(相当于生药含量33mg/ml，给药剂量相当于生药330mg/kg体重)。
(5)阳性物采用痰咳净散剂，取0.2克溶解于10毫升生理盐水中，即得阳性对照痰咳净溶液，浓度为20mg/ml。给药剂量为200mg/kg体重。
(6)生理盐水(氯化钠注射液)，NaCl含量0.9％。3、实验方法(酚红法)(1)小鼠禁食不禁水12h。
(2)灌胃给药。按动物号顺序，每只小鼠灌胃后停3分钟，再灌另外一只，时间间隔为3分钟，每组10只总共灌胃时间为30分钟。
(3)各鼠灌胃后半小时，经腹腔注射5％酚红生理盐水溶液0.2ml。按顺序，即每一只小鼠腹腔注射酚红后3分钟，再注射另外一只，10只小鼠共30分钟。
(4)各鼠腹腔注射后半小时，按顺序脱颈椎处死小鼠，处死时间间隔3分钟。动物处死后，仰位固定于手术板上，剪开颈正中皮肤，分离气管，用小镊子支起气管。
(5)用大注射器吸取生理盐水冲洗气管外壁，洗去血液和气管外壁中的酚红，滤纸吸干洗液。
(6)先于气管分支处剪下气管，再于另一端甲状软骨上端剪下气管(环状甲状软骨包括在内)。
(7)将各气管段放入预先盛有1.5ml的5％NaHCO3溶液试管中。
(8)在3分钟内完成上述气管分离剪切工作。再用同样方法处理第二只小鼠。方法如上。
(9)将各试管置涡流混合器上震荡2分钟，使气管段中的酚红释放出来。
(10)将各试管中溶液于721型分光光度计546nm处测OD值。
(11)将各试管含气管段放置过夜，24h后重测OD值。
(12)将酚红配制成不同含量的水溶液，测定OD值，计算出回归方程为Y＝-0.135302794+14.19137583X。线性范围0.1ng/ml～10ng/ml，r＝0.9999。X为OD值，Y为酚红含量。X为OD值，Y为酚红含量。
(13)根据回归方程计算出各个动物气管酚红的排出量(酚红含量)。
(14)酚红含量和动物体重计算出校正酚红含量，用SPSS8.0统计软件进行方差分析。校正酚红含量＝酚红含量(ng)/小鼠体重(kg)4、结果判断将各组结果进行方差分析，当总体有差异时，如果阳性药物与对照组比较，校正酚红含量升高，且有显著性差异(P＜0.05)，确定实验可靠。再将各剂量组与对照组比较，校正酚红含量明显升高，且有显著性差异(P＜0.05)时，认为该剂量组有效。5、实验结果经统计，水提取浸膏各剂量组酚红排出量见下表5。
表5. 化橘红水提取物各剂量的化痰效果(X±S)
组别 剂量 动物气管酚校正酚红含量a化痰率b代号 样品名 (mg/kg) 红含量(ng) (ng/kg) P值(％)1 生理盐水 0 1.6792±0.4379 84.7774±21.0409 - -2痰咳净 200 2.6073±0.5986132.0956±32.0495P＜0.05 155.783实施例1高剂量组 30003.1702±0.7423158.6855±34.8674P＜0.01 187.154实施例1中剂量组 10003.1267±1.4389160.3666±78.3494P＜0.01 189.165实施例1低剂量组 330 2.7414±0.7917139.6466±42.4319P＜0.05 164.72a校正酚红含量＝酚红含量/动物体重b化痰率＝给药组/空白对照组×100％酚红含量计算方法(ng)OD值×14.19137583-0.135302794本发明的化橘红制剂对实验动物小鼠的化痰实验表明，本发明的化橘红制剂低、中、高剂量灌胃给药对小鼠支气管分泌液增加与空白对照组比较，均有显著增加，在统计学上有显著差异。与阳性药物痰咳净对照比较，实施例高、中剂量组对小鼠支气管分泌液有显著增加，在统计学上有显著差异。表明，实施例1化痰效果优于阳性对照物痰咳净。经试验，本发明的其他实施例显示与实施例1具备相似的效果。
综上所述，说明本发明的化橘红制剂剂具有很好的止咳化痰效果。
权利要求
1.化橘红制剂，其原料是化洲柚的幼果全果或近成熟全果，剂型为口服剂型。
2.根据权利要求1所述的化橘红制剂，其特征在于化橘红采用正毛化橘红。
3.根据权利要求1所述的化橘红制剂，其特征在于制剂为胶囊剂。
4.根据权利要求1所述的化橘红制剂，其特征在于原料药为化橘红药单味药。
5.根据权利要求1所述的化橘红制剂，其特征在于原料药为化橘红药与其它中药的复合。
6.化橘红制剂的生产方法，依次包括以下步骤将化橘红全果粉碎，水提取一至三次，同时收集挥发油，水提取液滤过，合并滤液，浓缩成浸膏，与挥发油合并，按常规方法制成口服制剂。
7.根据权利要求5所述的化橘红制剂，其特征在于合并滤液后，加入有机溶剂萃取，回收有机溶剂，取有机溶剂层，浓缩成浸膏。
8.根据权利要求5所述的化橘红制剂，其特征在于浓缩成浸膏后，与挥发油合并，加入矫味剂，加水调节容量，制成口服液。
9.根据权利要求5所述的化橘红制剂，其特征在于浓缩成浸膏后，加入辅料，混合，加入已收集的挥发油，制粒，加入片剂常规辅料压片，制成片剂。
10.化橘红制剂的生产方法，依次包括以下步骤将化橘红全果粉碎，水提取一至三次，滤过，合并滤液，浓缩成浸膏，按常规方法制成口服制剂。
全文摘要
一种化橘红制剂及其生产方法,将化橘红全果粉碎,经过水提取一至三次,同时收集挥发油,过滤,合并滤液,加入有机溶剂分离再浓缩或者直接浓缩成浸膏,干燥,加入辅料,加入已收集的挥发油或者不加挥发油直接制粒,压片制成片剂或制成胶囊。本发明采用全果之后,大大提高化橘红有效成分的利用率,简化了生产工艺,本发明的化橘红制剂具有良好的止咳化痰作用,疗效显著。
文档编号A61P11/14GK1369306SQ0211484
公开日2002年9月18日 申请日期2002年2月8日 优先权日2002年2月8日
发明者苏薇薇, 唐小江, 方铁铮, 杨翠平 申请人:中山大学