专利名称：冻干人凝血酶的生产方法
技术领域：
本发明涉及医用材料，特别是一种冻干人凝血酶的生产方法。
背景技术：
凝血酶是一种快速止血药，其直接作用于凝血过程中的最后步骤，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，其一步到位式的作用方式具有其它任何一种止血药无法比拟的止血速度和作用强度，这种快速高效的止血作用的特点，被广泛应用于外科、手术及消化系统部位出血的止血。我国市场上使用的凝血酶全部为动物来源制品，由于世界各地出现动物疫情，人们要求使用人源性且经过病毒灭活的人凝血酶，而目前世界上使用的人凝血酶的病毒灭活为单一灭活方法，临床使用仍有不安全的因素。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是采用一种双重灭活病毒的技术生产人凝血酶，确保其临床应用更安全。本发明的技术案是这样的，该冻干人凝血酶的生产方法包括有以下工艺步骤，以人血浆低温乙醇分步分离法得到的组份FIII为原料进行溶解、PEG沉淀、S/D灭活病毒、超滤浓缩、激活、阳离子交换层析纯化、超滤除菌分装、冻干，其特征在于在激活步骤中所用的激活剂为CaCl2，对冻干的瓶装制品在沸水浴中保持30分钟进行干热灭活病毒。沸水浴的水温为98-100℃。本发明由于采用了CaCl2激活剂和S/D及干热双重病毒灭活技术，因而本发明生产的人凝血酶具有活性高，病毒灭活彻底，使用更安全的显著优点。
具体实施例方式冻干人凝血酶的生产方法工艺步骤为(1)取3千克F III原料，加入12升注射用水进行溶解，溶解温度为25℃，溶解后的体积为15升，(2)在溶解液中加入2.14升PEG溶液，后加入600毫升NaHCO3调整PH至6.8，冷却至5℃，(3)离心过滤得体积15.5升，(4)将上述滤液置入灭活病毒罐中，加入含155克TWeen-80及51.7毫升TNBP的S/D母液1.55升，在25℃下缓慢灭活6个小时，灭活后的体积为17升，(5)加DEAE-Sephadex A-50凝胶吸附60分钟，去除S/D残留物，(6)用洗涤液洗凝胶5次，洗脱液洗凝胶2次，收集液脱液5升进行过滤，(7)超滤浓缩后体积为0.5升，(B)加入激活剂1mol/L的CaCl23.5毫升进行激活，(9)过滤，得体积0.5升，(10)用SP-SepharoseFF层析胶层析，(11)洗脱后体积100毫升，其效价约700IU/毫升，(12)用孔径为0.2μm的膜进行过滤除菌分装，分装规格为1毫升/瓶、2毫升/瓶、5毫升/瓶，(13)冻干，(14)将冻干后的制品置于98-100℃的沸水中进行30分钟干热病毒灭活。
权利要求
1.冻干人凝血酶的生产方法，它包括有以下工艺步骤，以人血浆低温乙醇分步分离法得到的组份FIII为原料进行溶解、PEG沉淀、S/D灭活病毒、超滤浓缩、激活、阳离子交换层析纯化、超滤除菌分装、冻干，其特征在于在激活步骤中所用的激活剂为CaCl2，对冻干的瓶装制品在沸水浴中保持30分钟进行干热灭活病毒。
2.根据权利要求1所述的冻干人凝血酶的生产方法，其特征在于沸水浴的水温为98-100℃。
全文摘要
本发明公开了一种冻干人凝血酶的生产方法，它包括有以下工艺步骤，以人血浆低温乙醇分步分离法得到的组份F III为原料进行溶解、PEG沉淀、S/D灭活病毒、超滤浓缩、激活、阳离子交换层析纯化、超滤除菌分装、冻干，其特征在于在激活步骤中所用的激活剂仅为单一的无机物CaCl
文档编号A61K38/43GK1410537SQ0211715
公开日2003年4月16日 申请日期2002年4月25日 优先权日2002年4月25日
发明者安康, 马小伟, 潘若文, 刘文芳, 范蓓 申请人:华兰生物工程股份有限公司