专利名称：藤黄酸类化合物的复合物,其制备方法及以该复合物为活性成份的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新颖的藤黄酸类化合物的复合物，其制备方法和以该化合物为活性成份的药物组合物，以及它们在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
已有研究表明，藤黄酸类化合物极微溶于水，但对肿瘤有抑制作用，特别是对肝癌和肠癌具有较好的抗癌作用，且其对白细胞的正常生长没有影响。
一直以来，学界认为提高其药用价值应当从提高其水溶性着手，如公开号CN1309125A
公开日2001年8月22日的中国发明专利申请。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一类新的、具有药用价值的藤黄酸类化合物的复合物。
本发明所要解决的另一技术问题是提供一种制备上述复合物的方法。
本发明进一步所要解决的技术问题是提供一种抗肿瘤药物的组合物。
本发明所要解决的另一技术问题是提供上述复合物在抗肿瘤药物中的应用。
本发明所提供的藤黄酸类化合物的复合物的通式为 式中R＝H或R＝OH，B表示含碳数大于8个小于20个的含氮有机碱性化合物。
本发明所指的藤黄酸类化合物为总藤黄酸、藤黄酸或新藤黄酸，其制备方法可参照《江西医学院学报》1980，(2)；1制备。
总藤黄酸的制备方法藤黄树脂100g，碾碎加丙酮500ml，回流半小时，重复三次，合并提取液，浓缩至干，得到以含R为H和OH为主的混合物(即总藤黄酸)。
藤黄酸的制备方法总藤黄酸10g，加丙酮溶解，溶解液经层析分离后，割取Rf值为0.49的色斑，用丙酮洗脱，浓缩至干，得到藤黄酸(R＝H)。
新藤黄酸的制备方法方法如藤黄酸的制备，总藤黄酸10g，加丙酮溶解，溶解液经层析分离后，割取Rf值为0.23的色斑，用丙酮洗脱，浓缩至干，得到新藤黄酸(R＝OH)。
上述藤黄酸类化合物的复合物的B的优选方案是普鲁卡因、N，N’-二苄基乙二胺、月桂胺、N，N-二乙基苯胺、N，N-二乙基间甲苯胺或十四叔胺中的任意一个。B的最优选方案普鲁卡因、N，N’-二苄基乙二胺中的任意一个发明人认为，就药物而言，水溶性好诚然重要，但这不是提高其药用价值的唯一途径。本发明突破了以往对藤黄酸类化合物研究的固有成见，提供的藤黄酸类化合物的复合物由于其“B”的碳链较长，具有较以往藤黄酸类化合物及藤黄酸类化合物的复合物更高的脂溶性，从而使其在体内吸收较慢，作用时间长，因而本发明是一种与以往藤黄酸类化合物的复合物不同的复合物，较易适于制成长效型药物。并且，通过实验证明，本发明提供的复合物的抗肿瘤活性不逊于藤黄酸类化合物及以往的藤黄酸类化合物的复合物(而尤以藤黄酸类化合物尤其是新藤黄酸与普鲁卡因或N，N’-二苄基乙二胺的复合物最为突出)，且其在小白鼠体内抑瘤试验中表明，每两天给药一次的本发明的复合物比每天给药一次的5-FU具有更好的抑瘤率和存活率，同时对小白鼠体内的白细胞生长无影响，也无血管刺激性，具有较高的药物开发研究价值。
本发明提供藤黄酸类化合物的复合物的制备方法为藤黄酸类化合物和含氮有机碱以1∶0.5-2.0的比例(摩尔比)在水和/或醇溶剂中反应。
其优选方案为藤黄酸类化合物和含氮有机碱以1∶0.8-1.5的比例(摩尔比)在水和/或醇溶剂中反应。
本发明提供的抗肿瘤药物的组合物除含有治疗有效量的上述通式为活性成份为外，还应含有一种或多种药学上可接受的载体。其优选含0.1-99.9％(重量比)的活性成份，最优选含有1-99.9％(重量比)的活性成份。所述的组合物中的复合物的R＝H或R＝OH。所述复合物也可为为R＝H的复合物及R＝OH的复合物的任意比例的混合物。
本发明提供的复合物和药物组合物可用于制备治疗肝癌、肠癌、肺癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、白血病的药物。
上文所述药学上可接受的载体是指药学领域常规载体，如稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、香味剂、甜味剂等。
本发明的药物组合物其剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射剂等。其制备方法可以按常规生产方法制备。例如活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需剂型。
本发明提供的复合物的用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01-100mg/kg，优选为0.1-100mg/kg。可以一次或多次施用。
具体实施例方式
下面的实例可以使专业人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本专利。
实例1、藤黄酸普鲁卡因的制备将藤黄酸溶于浓度为0.8％(W/V)的Na2HPO4缓冲液中，加入20-25％NaCl(W/V)溶液，过滤，得无菌滤液。
于无菌滤液中加入10％丁醇(V/V)，1∶1(M)普鲁卡因盐酸盐，搅拌，加入适量晶种，析出藤黄酸普鲁卡因。过滤，分别用水、丁醇洗涤晶体，减压下55-60℃干燥，得藤黄酸普鲁卡因。
实例2、藤黄酸月桂胺复合物的制备取藤黄酸10g于烧杯中，加入适量的50％的乙醇溶解，搅拌下，慢慢加入月桂胺，搅拌均匀后，过滤，滤液冷冻干燥，得11g藤黄酸月桂胺复合物。
实例3、新藤黄酸普鲁卡因的制备将新藤黄酸溶于浓度为0.8％(W/V)的Na2HPO4缓冲液中，加入20-25％NaCl(W/V)溶液，过滤，得无菌滤液。
于无菌滤液中加入10％丁醇(V/V)，1∶1(M)普鲁卡因盐酸盐，搅拌，加入适量晶种，析出新藤黄酸普鲁卡因。过滤，分别用水、丁醇洗涤晶体，减压下55-60℃干燥，得新藤黄酸普鲁卡因。
实例4、藤黄酸二苄基乙二胺的制备将藤黄酸溶于乙醇溶液中，慢慢加入10％(W/V)N，N’-二苄基乙二胺的水溶液中，搅拌半小时后，用1MHCl调PH至7.0-7.5，加入适量晶种，析出藤黄酸二苄基乙二胺。过滤，用水洗涤晶体，减压下55-60℃干燥，得藤黄酸二苄基乙二胺。
实例5、新藤黄酸二苄基乙二胺的制备将新藤黄酸溶于乙醇溶液中，慢慢加入10％(W/V)N，N’-二苄基乙二胺的水溶液中，搅拌半小时后，用1MHCl调PH至7.0-7.5，加入适量晶种，析出新藤黄酸二苄基乙二胺。过滤，用水洗涤晶体，减压下55-60℃干燥，得新藤黄酸二苄基乙二胺。
实例6.新藤黄酸二苄基乙二胺注射剂的制备新藤黄酸二苄基乙二胺 10g聚山梨酯80 15ml将新藤黄酸二苄基乙二胺10g加适量乙醇溶解，再加入15ml聚山梨酯80，搅匀，在搅拌下加入半量的注射用水中，加入适量活性炭及苯甲醇3ml，充分搅拌，煮沸30min，冷却至室温，冷藏过夜，滤过，加注射用水至1000ml，滤过，灌封，灭菌，即得。
实例7藤黄酸普鲁卡因片的制备藤黄酸普鲁卡因 10g淀粉 100g淀粉浆(8％) 适量硬脂酸镁 1.4g
将藤黄酸普鲁卡因加淀粉拌和均匀，加8％淀粉浆制成软件，用14目尼龙筛制粒，70-80℃干燥，加硬脂酸镁，经10-12目铁丝筛整粒，混匀，用12mm冲模压片。
实例8总藤黄酸二苄基乙二胺胶囊剂的制备总藤黄酸二苄基乙二胺 10g微晶纤维素 40g乳糖 60g羟甲基淀粉钠 4g淀粉浆 适量硬脂酸镁 1g微粉硅胶 1g总藤黄酸二苄基乙二胺，微晶纤维素，乳糖，羟甲基淀粉钠分别过筛，并混合均匀，加淀粉浆适量制成软材，过20目筛制粒，湿颗粒于50℃下干燥，干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁、微粉硅胶混匀，灌装胶囊。
实例9.普鲁卡因、N，N’-二苄基乙二胺、月桂胺、N，N-二乙基苯胺、N，N-二乙基间甲苯胺、十四叔胺藤黄酸复合物对肝癌SMMC7721细胞生长的影响1.分别称取上述化合物各50mg，加水溶解，如水不溶可以1mlDMSO助溶，完全溶解后，配成2.5mg/ml的贮备液。
2.取上述贮备改液适量，加细胞完全培养液，混匀，依次配制成药物浓度分别为16ug/ml，8ug/ml，4ug/ml，2ug/ml，1ug/ml，0.5ug/ml，0.25ug/ml的培养液。
3.按规范进行培养，用酶标仪，570nm测光密度OD。
4.细胞存活率＝(加药细胞OD/对照细胞OD)*100细胞抑制率(I)＝100-细胞存活率将对应的药物浓度C，细胞抑制率I，按公式1g(I/100-)＝A+B1gC进行线回归，得方程后，IC50＝1g-1[(-A)/B]。
试验结果数据
从上述实验数据中可以看出，本发明提供的复合物，其抗肿瘤活性不逊于藤黄酸类化合物及以往的藤黄酸类化合物的复合物，其中普鲁卡因和N，N’-二苄基乙二胺藤黄酸复合物的抗肿瘤活性有了较大的提高。
实例10、藤黄酸二苄基二乙胺、新藤黄酸普鲁卡因、新藤黄酸、新藤黄酸赖氨酸复合物对肠癌SW480细胞生长的影响试验方法同例9试验结果数据如下
从上述实验数据中可以看出，本发明提供的复合物，其抗肿瘤活性不逊于藤黄酸类化合物及以往的藤黄酸类化合物的复合物，其中普鲁卡因和N，N’-二苄基乙二胺新藤黄酸复合物的抗肿瘤活性有了较大的提高。实例11.普鲁卡因新藤黄酸复合物抑癌谱试验实验方法同实验9。
从上表可以看出普鲁卡因新藤黄酸复合物对多种肿瘤细胞有抑菌作用，尤其对肝癌、肠癌细胞作用强烈。
实例12.新藤黄酸普鲁卡因复合物对小鼠移植肉瘤S180、小鼠移植Heps实体瘤的抑制作用药物配制定量称取新藤黄酸普鲁卡因，加入0.9％NaCl溶液配成所需浓度。
给药途径ip给药周期于接种后24h连续给药10天，实验组每二天给药一次，阳性对照组每天给药一次，停药后第一天处死解剖。剂量设置共设五组A组新藤黄酸普鲁卡因组(20，10，5mg/kg)B组5-FU(20mg/kg)C组空白对照组(生理盐水0.4ml/20g)小鼠类型昆明种小鼠体重18-22g给药体积0.4ml/20g实验方法取上述规格小鼠50只，按移植性肿瘤研究法接种，接种后24小时称鼠重，并随机分为5组，每组10只，雌雄各半，生理盐水和5-FU分别为阴、阳对照组，新藤黄酸普鲁卡因组设高、中、低三个剂量组。于停药后第一天称重，处死并分离瘤块，称瘤重并进行统计学处理(t检验)表1新藤黄酸普鲁卡因ip对小鼠移植S180的抑制作用(x±SD)
··P＜0.01与生理盐水对照组相比表2新藤黄酸普鲁卡因ip对小鼠移植Heps实体瘤的抑制作用(x±SD)
··P＜0.01与生理盐水对照组相比实验结果结果表明与生理盐水对照组相比，新藤黄酸普鲁卡因有非常明显地抑制小鼠S180、移植性Heps实体瘤的生长作用，并对小鼠体重增长无明显影响，且新藤黄酸普鲁卡因的抑瘤作用强于5-FU。
实例13.藤黄酸N，N’-二苄基乙二胺复合物对小鼠移植性肿瘤生命的延长作用药物配制定量称取藤黄酸N，N’-二苄基乙二胺，加入0.9％NaCl溶液配成所需浓度。
给药途径ip给药周期于接种后24h连续给药10天，实验组每两天给药一次，阳性对照组每天给药一次，停药后共观察60天。剂量设置共设五组A组藤黄酸N，N’-二苄基乙二胺组(20，10，5mg/kg)B组5-FU(20mg/kg)C组空白对照组(生理盐水0.4ml/20g)小鼠类型昆明种小鼠体重18-22g给药体积0.4ml/20g实验方法取上述规格小鼠50只，按移植性肿瘤研究法接种，接种后，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，生理盐水和5-FU分别为阴、阳对照组，藤黄酸N，N’-二苄基乙二胺组设高、中、低三个剂量组。给药后，观察荷瘤小鼠存活天数(存活60天以上小鼠按60天计)及存活率(按存活60天以上且无症状小鼠计)，并进行统计学处理(t检验)表1藤黄酸N，N’-二苄基乙二胺ip对EAC腹水型小鼠移植瘤延长生命作用
··P＜0.01与生理盐水对照组相比表2藤黄酸N，N’-二苄基乙二胺ip对Heps腹水型小鼠移植肉瘤延长生命作用
··P＜0.01与生理盐水对照组相比实验结果结果表明，与生理盐水对照组相比，藤黄酸N，N’-二苄基乙二胺有延长EAC腹水型小鼠、Heps腹水型小鼠存活天数作用(P＜0.01)，且对EAC腹水型小鼠、Heps腹水型小鼠的生命延长率及存活率皆优于5-FU。
实例14.新藤黄酸普鲁卡因对小鼠血中白细胞数的影响实验方法取18-22g小鼠，按移植性肿瘤研究法，接种S180，接种后次日称重并随机分为5组，每组10只，雌雄各半，ip给药，共10天，于接种后24h连续给药10天，实验组每二天给药一次，阳性对照组每天给药一次，于停药后的第一天称重并由眼眶静脉取血，镜检白细胞总数，同时解剖分离瘤块，称重并进行统计学处理。
A组新藤黄酸普鲁卡因组(20，10，5mg/kg)B组5-FU(20mg/kg)C组空白对照组(生理盐水0.4ml/20g)
··P＜0.01与生理盐水对照组相比实验结果结果表明与生理盐水对照组相比，新藤黄酸普鲁卡因有非常明显地抑制小鼠S180的生长作用，其效果好于5-FU，且对小鼠外周血中白细胞无明显影响。实例15.新藤黄酸普鲁卡因血管刺激性试验实验方法取体重2.2-2.4kg健康家兔1只，把家兔置于固定器中，家兔左耳缘静脉滴注新藤黄酸普鲁卡因注射液20mg/kg共计6ml，右耳滴注氯化钠注射敢液6ml/kg，滴注速度为20滴/分钟，每天上午滴注一次，连续一周。观察左右耳缘静脉反应，每日观察注射部位血管有无发红、水肿、周围有无渗血，触摸血管有无变硬现象，左右耳比较现察。于未次给药后12小时，将动物处死，取下左右耳，切片检查。
实验结果两只兔给药后，每天左、右耳均正常，未发红，无水肿，组织病理学检查也无明显异常。新藤黄酸普鲁卡因的血管刺激性试验表明，此药品对家兔耳缘静脉无明显局部刺激作用。
权利要求
1.具有下述通式的藤黄酸类化合物的复合物 式中R＝H或R＝OH，B表示含碳数大于8个小于20个的含氮有机碱性化合物。
2.如权利要求1所述藤黄酸类化合物的复合物，其特征在于B优选为普鲁卡因、N，N’-二苄基乙二胺、月桂胺、N，N-二乙基苯胺、N，N-二乙基间甲苯胺或十四叔胺中的任意一个。
3.如权利要求1所述藤黄酸类化合物的复合物，其特征在于B最优选为普鲁卡因和N，N’-二苄基乙二胺中的任意一个。
4.权利要求1的藤黄酸类化合物的复合物的制备方法，其特征在于藤黄酸类化合物和含氮有机碱以1∶0.5-2.0的比例(摩尔比)在水和/或醇溶剂中反应。
5.如权利要求4所述的藤黄酸类化合物的复合物的制备方法，其特征在于其优选方案为藤黄酸类化合物和含氮有机碱以1∶0.8-1.5的比例(摩尔比)在水和/或醇溶剂中反应。
6.用于治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于其中含有治疗有效量的权利要求1的复合物和药学上可接受的载体。
7.按照权利要求6所述的用于治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于所述的组合物中的复合物的R＝H。
8.按照权利要求6所述的用于治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于所述的组合物中的复合物的R＝OH。
9.按照权利要求6所述的用于治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于所述的复合物为R＝H的复合物及R＝OH的复合物的任意比例的混合物。
10.权利要求1-3中任意一项复合物，在制备治疗肝癌、肠癌、肺癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、白血病肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了下列通式的藤黄酸类化合物的复合物，式中R＝H或R＝OH，B表示含碳数大于8个小于20个的含氮有机碱性化合物。本发明提供的复合物具有较高的脂溶性，其在体内吸收较慢，作用时间长，是一种与以往藤黄酸类化合物的复合物不同的复合物，较易适于制成长效型药物。本发明还提供了上述藤黄酸类化合物的复合物的制备方法，本发明还提供了以上述复合物为活性成份的抗肿瘤药物的组合物，本发明还提供了上述复合物和药物组合物在制备治疗肝癌、肠癌、肺癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、白血病的药物中的用途。
文档编号A61P35/00GK1470516SQ0212664
公开日2004年1月28日 申请日期2002年7月23日 优先权日2002年7月23日
发明者金彪, 乔林, 沈国伟, 陈炜, 金 彪 申请人:杭州博大药物研究所