专利名称：一种治疗艾滋病的天然蟾衣的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药，具体地说是涉及一种用有毒动物为原料而制成的治疗艾滋病的药物。
背景技术：
艾滋病是一种全球性的流行病，具有传染性强、流行迅速、死亡率高的特点。自1981年世界上发现第一例艾滋病人，到2001年的20年中，全世界已有6500万艾滋病病毒感染者，其中已死亡2500万，有4000万病毒感染者，成为20世纪的瘟疫，世界防治艾滋病组织的有关人员称，在今后的20年内，全世界艾滋病人要死亡7000万，将是前20年的2.8倍。联合国艾滋病联合规划署2002年11月26日公布的最近报告显示，2002年全世界已有310万人死于艾滋病，新感染艾滋病病毒的人数约有500万。也就是说全世界已有7000万艾滋病病毒感染者，其中已死亡2800万，现还有4200万病毒感染者。
我国自1985年发现第一个病例到2001年底，卫生部正式公布我国已有85万艾滋病病毒感染者，艾滋病人20万，其中已死亡10-12万人，到2002年6月底艾滋病病毒感染者已达百万，我预测到2002年底我国艾滋病病毒感染者将增加到115万以上，目前已进入高速增长期。
在艾滋病的治疗方面，至今尚无有效的治愈办法。目前常用西药治疗，例如用齐多夫定(AZT)等药物。利用西药治疗能快速仰制病人体内的艾滋病病毒，使血液中的病毒载量迅速下降，可以推迟发病和死亡时间，但是利用西药治疗艾滋病存在着四大问题①西药是艾滋病病毒的抑制剂，而不是提高人的整体免疫功能，而且有强烈的毒付作用，②艾滋病病毒对西药有抗药性，为了减缓抗药性，往往需要三种西药联合使用，而且要终身服药和治疗；③到目前为止16种西药还无法治愈此病；④西药价格十分昂贵，普通病人买不起。因此，国内外医学界纷纷转向中国的中医药，药价比西药要便宜得多。据中国中医研究院基础理论研究所和中国医学科学院动物科学研究所有关科研人员研究的“SIV筛选抗AIDS中药”(中医治疗研究艾滋病实践论文汇编，第一辑，主编吕维柏，1992年10月第1版，P132-134页，人民卫生出版社)他们选用的病毒(SIV)是1984年首先由新英格兰灵长类研究中心从恒河猴中分离出来的，而艾滋病病毒(HIV)与从恒河猴中分离出来的SIV基因组成极为相似，都是一种逆转录病毒，他们用HUT-78细胞培养方法，加入SIV，在体外筛选了40余种中药的抗病毒作用。在实验中发现紫花地丁、天花粉、甘草等4种中药与一单一化学成分对SIV阳性细胞抑制率大于50％，有4种抑制率在30-50％，国外报导中已证实紫花地丁、天花粉、甘草甜素对HIV有较好的抑制作用(①R.Shinmam Chang et al Antiviral Researrch 9163-176，1988；②伊藤正彦等，第四回和汉医药学会学术总结会论文摘要1987，P21-22；③后藤洋一等，医学のすゆみ140(8)619-620，1987)，在他们的实验中，这些中药也表现出很好的仰制SIV的作用，与国外用HIV实验后的抑制效果一致。由于HIV实验需在P3级生物安全实验室中进行，该实验室造价极为昂贵，国内仅有为数不多的几家，所以国内仅用SIV进行抗AIDS的中药筛选，但可以作为应用P3级生物安全实验研究筛选HIV中药的一个初筛实验。
目前，在国内外尚未见到利用有毒动物蟾蜍的蟾衣为原料制成治疗艾滋病病毒的药物报导。
发明内容
1、发明目的本发明的目的是提供一种利用有毒动物为原料而制成的治疗艾滋病的药物。
2、技术方案根据中医学说中关于“以毒攻毒”的理论，因为艾滋病病毒是一种毒，所以选用有毒动物蟾蜍作为原料，其药用部分为蟾衣，即是活蟾蜍脱下的蟾皮上最外边的一层表皮。一只活蟾蜍每年要脱2-3次蟾衣，经漂洗过的蟾衣含有74％以上的蛋白质，含蟾毒内酯0.3-0.33％，总灰分15.58-16.78％，含重金属＜5PPM，砷盐＜1PPM。还含有锌、锰、硒、铜、锗、铬、镁、钾、钒、钼、锶等多种微量元素。
本发明目的解决的技术方案是选用2-3令以上大活蟾蜍的蟾衣，经清水漂洗或不经漂洗均可，然后自然风干、晒干或30-40℃下烘干，再粉碎成碎片或粉状，将粉碎的蟾衣按蟾衣和水以1∶5-10的比例煎煮成水溶液，再用RPMI 1640细胞培养液配制成亚毒性浓度(1.52mg/ml)以下的六种浓度(mg/ml)即1.25、0.625、0.3125、0.156、0.078、0.039，进行抗HIV-1的实验，经4次实验结果显示，蟾衣在0.625mg-1.25mg/ml剂量浓度范围内，对HIV-1有明显的仰制作用，其抑制率为57.77％-61.65％，治疗指数为3.4。说明蟾衣有明显抑制HIV-1的作用。
将风干、晒干或烘干的蟾衣粉碎成粉末，然后制成胶囊；或者按干蟾衣和水1∶5-10的比例煎煮成水溶液(汤剂)服用。
3、有益效果目前，在国内外尚未有利用天然蟾衣进行抗艾滋病病毒(HIV)的试验报导，我在中国中医研究院基础理论研究所的P3级生物安全实验室进行天然蟾衣对抗HIV-1型的试验，结果表明蟾衣在0.625mg-1.25mg/ml剂量范围内，对HIV的抑制率达到57.77％-61.65％的明显效果。
具体实施例方式
通过下列实施例进一步说明本发明的有益效果实施例1检测材料天然蟾衣材料来源江苏海门市平山威泰野生动物养殖场检测仪器日本进口的量子共振检测仪(简称QRS)检测方法按规定将样本置于QRS的传感器上检测日期2000年5月12日检测单位上海交通大学微电子技术研究所量子医学研究中心。
现将天然蟾衣部分样品性能检测结果见下表
量子共振检测仪(简称QRS)是一种高灵敏度的微弱磁场测定装置。它是测定样品中电子运动产生的磁场波形，并与仪器中预先设定的标准波形比较，计算出变化的程度，用该仪器测得的数值称为量化值，其单位用量价表示。根据临床实践证明，正的量化值越大，其保护和治疗效果也越好，从上表检测的结果，对艾滋病毒和其他病毒的量价分别为12458和14666，说明天然蟾衣对艾滋病病毒和其他病毒的抑制率有较好的功效。
实施例2检测单位中国中医研究院基础理论研究所检测日期2002年6月25日检测材料和方法
细胞MT-4细胞，由中国预防医学科学院病毒学研究所提供。
病毒人类免疫缺陷病毒I型(HIV-1)，感染滴度为2×104CCID50，由中国预防医学院病毒学研究所提供。
药物蟾衣，由南京土壤所周正度提供。
试剂所用的噻唑兰即MTT(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazoliumbromide)，为美国进口试剂，以PH7.2PBS配制成0.7mg/ml溶液置4℃冰箱保存备用。其他如RPMI 1640细胞培养液，96孔细胞培养板等，均为美国进口试剂和材料。
仪器测定光密度所用酶标仪为法国生产的LP400全自动酶标仪。
步骤(1)向全板各孔加入100μl生长旺盛的MT-4细胞悬液，使每孔中含有104个细胞。
(2)将20CCID50的HIV-1病毒液50μl，加入除正常细胞对照外的各孔中，置试验细胞板于37℃ 5％CO2孵箱中，孵育2小时。
(3)向细胞板中除细胞对照和病毒感染对照外各孔中，加入不同稀释度的蟾衣水溶液。
(4)置试验细胞板于37℃ 5％CO2孵箱中，培养5天。
(5)MTT染色试验MTT试验的原理是，黄色的MTT被代谢旺盛的活细胞线粒体脱氢酶还原成兰色的formazan结晶，溶解后可用分光光度计测量光密度(OD)值，其兰色越深，OD值就越高，反映出活细胞的量就越多，因而可求出药物对病毒感染细胞的保护率。
结果计算首先分别计算出各稀释度OD均值和标准差，再以下式计算各稀释度药物对HIV感染细胞的保护率 实验结果将蟾衣煎煮的水溶液用RPMI1640细胞培养液配制成亚毒性浓度CC50＝1.52mg/ml以下的若干个浓度，进行抗HIV-1实验。方法如上所述，结果见下表。
蟾衣对HIV-1感染细胞的保护作用
表中可见，蟾衣在0.625mg-1.25mg/ml剂量浓度范围内，对HIV-1的抑制率为57.7％-61.65％；以Bliss法求得抑制HIV-1的半数有效浓度EC50＝0.45mg/ml，其治疗指数TI＝CC50/EC50＝1.52/0.45＝3.4。
权利要求
1.一种治疗艾滋病的中药，其特征是它的原料是天然蟾衣。
2.根据权利要求1所述的天然蟾衣，其特征是选用2-3令以上大活蟾蜍的蟾衣。
3.根据权利要求1和2所述的蟾衣，其特征是蟾衣经清水漂洗或不经漂洗。然后经自然风干、晒干或30-40℃下烘干后，再粉碎成碎片或粉状。
4.根据权利要求3所述的蟾衣，其特征是干蟾衣粉碎后可制成胶囊或按蟾衣和水以1∶5-10的比例煎煮成水溶液(汤剂)服用。
5.根据权利要求4所述的蟾衣，其特征是将煎煮的蟾衣水溶液再用RPMI1640细胞培养液配制成亚毒性浓度以下的六种浓度(mg/ml)即1.25、0.625、0.3125、0.156、0.078、0.039。
6.根据权利要求5所述的蟾衣，其特征是蟾衣在0.625mg-1.25mg/ml剂量浓度范围内，对HIV-1有明显的抑制作用，其抑制率为57.77％-61.65％.
全文摘要
本发明公开了一种治疗艾滋病的中药，它是选用活蟾蜍脱下的天然蟾衣为原料，经清水漂洗或不漂洗，然后自然风干，晒干或烘干。再粉碎成碎片或粉状，将煎煮的蟾衣水溶液再用细胞培养液配制成若干浓度，经实验研究结果表明，蟾衣在0.625mg－1.25mg/ml剂量浓度范围内，对艾滋病病毒(HIV－1)有明显的抑制作用，其抑制率为57.77％－61.65％。
文档编号A61P31/18GK1425389SQ0215723
公开日2003年6月25日 申请日期2002年12月24日 优先权日2002年12月24日
发明者周正度 申请人:周正度