专利名称：增加抗肿瘤活性的化疗药物的联用的制作方法
技术领域：
本发明涉及丁酸新戊酰氧甲酯，在商业上被称为PIVANEX，与化疗药物联合使用，还涉及包含它们的药物组合物以及治疗哺乳动物的方法。本发明证明包含氧基亚烷基的化合物和化疗药物联用增加了对大量不同癌细胞的抗肿瘤活性。
相关领域的描述 丁酸是发现于黄油中的浓度高达约5％的非毒性天然产物。在消化系统中，其作为微生物发酵产物而分泌。在结肠中其可达到mM浓度。已知丁酸，无论是游离形式或更常见的其碱金属盐形式(“丁酸/盐”)，显示了抗瘤活性。特别地，这一活性表现为对瘤细胞的毒性、抑制细胞增殖并诱导细胞分化的形式。这样的活性已在体外和体内得到证明。
因此，例如在多种体外生长的肿瘤细胞，已报道了丁酸/盐因诱导形态学和生物化学的改变而产生的抗肿瘤活性。一些人源受作用细胞的代表性例子是成神经细胞瘤[Prasad和Kumar，Cancer 361338(1975)]白血病[Collins等Proc.Natl.Acad.Sci.752458(1978)]；结肠癌[Dexter等Histochern.16137(1984)]以及Augeron和Laboisse，Cancer Res.443961(1984)]；胰腺癌[Mclntyres等，Euro.J.Cancer Clin.Onc.20265(1984)]；肾肿瘤细胞[Heifetz等，J.Biol.Chem.2566529(1981)]；乳腺癌[Stevens等，Biochem.Biophys.Res.Coinm.119132(1984)]；前列腺癌[Reese等，Cancer Res.452308(1985)]；星形细胞瘤[McIntyre，J.Cell.Sci.11634(1971)]；人表皮样癌[Marcher et al，Exp.Cell.Res.11795(1978)]。此外，在本发明人进行的所有体外测试中，作用于从骨髓性白血病患者分离出的白血病细胞上，发现丁酸/盐是最强的细胞毒剂和细胞分化剂，例如，比维甲酸、1，25-二羟基维生素D以及阿糖胞苷更为有效。
丁酸/盐体内应用的报道实例如下。成神经细胞瘤患者接受高达10g/天的剂量，但并未产生临床上可检测的毒性[Prasad，Life Sci.271351(1980)]。使用0.5g/kg/天的剂量治疗顽固性急性骨髓性白血病儿童的复发，致使部分地临时缓解且无可检测毒性作用的[Novogrodsky等Cancer 519(1983)]。此外，使用1g/kg/天持续10天和再使用1.5g/kg/天持续6天，本发明人治疗了急性骨髓性白血病患者的复发；临床随访显示无副反应[Rephaeli等，Blood68192a(1986)]。高剂量丁酸/盐的临床试验并没有导致毒性。
在迄今未公布的工作中(由M.Shaklai和E.Januszewiez进行的)，通过抑制从正常骨髓和白血病患者外周血中获得的培养于琼脂糖中的菌落形成单元、粒细胞和巨噬细胞(CFU-GM)证明了丁酸/盐的选择性。
Suzanne M.Cutts等，Cancer Research 61，8194-8202描述了多柔比星(Adriamycin)与丁酸新戊酰氧甲酯同时接触细胞或施用多柔比星长述18小时后再施用丁酸新戊酰氧甲酯时的协同作用。作者报道了相反顺序的加入导致拮抗作用。
Elena di Gennaro等，Abstract Number3636 in the Proceedings of theAACR，Volume 44，March 2003指出使用组蛋白脱乙酰酶抑制剂SAHA预处理后接着给予雷替曲塞或5FU产生了相互协同的增效作用。SAHA是辛二酰苯胺异羟肟酸。A.Patnaik等Clinical Cancer Research Vol.8，2142-2148，July2002报道了体外应用的AN-9(丁酸新戊酰氧甲酯)和多西他赛、吉西他滨或顺铂对于多种细胞系具有强于加合的细胞毒作用，但没有讨论这些化疗药物的加入顺序。
发明简介 本发明提供了治疗癌症特别是治疗哺乳动物体内癌症的方法，包括连续地给予治疗有效量的包含组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂的组合物，该抑制剂包含氧基亚烷基，随后给予其它化疗药物。在本发明的实例中，该包含氧基亚烷基的HDAC抑制剂是丁酸新戊酰氧甲酯。令人惊奇地，并且与所报道的多柔比星的实践相反，发现了这一加入顺序导致强于加合的效能。
我们已发现对人或动物体内癌症或其它肿瘤生长的大于加合抑制发生在连续给予治疗有效量的包含氧基亚烷基的化合物并随后给予某些其它化疗药物和/或任选针对癌变部位的其它治疗的过程中。我们还观察到如果反转给予的顺序，出现拮抗(反加合，antiadditive)作用。该增强的抑制作用在较高剂量的包含氧基亚烷基的化合物中尤为显著，特别是哺乳动物中Pivanex的剂量在超过2g/m2/天尤其是约为3、4、5、6或7g/m2/天，或者肿瘤细胞中Pivanex超过150、160、170、180、190、200、210、220、230、240或250μM。这些增加的剂量或浓度的目的是实质减少对接触Pivanex的需求，或者说减少Pivanex诱导期(下文中将更详细地描述和定义)，该诱导期使肿瘤细胞对化疗药物的作用敏感。应用这些增加的剂量或浓度将使得Pivanex诱导期降至低于60、48、36、24、12、6、4以及略高于2小时。
更具体地，本发明提供了抗癌的治疗方法，包括药学载体和包含氧基亚烷基的化合物，随后继续使用其它化疗药物进行治疗，和/或任选如此处所定义的其它癌症治疗方法伴随治疗该癌症的方法一起使用。
本发明还还涉及HDAC抑制剂在制备增加所述HDAC抑制剂抗肿瘤活性的化疗制剂中的应用，包括在所述的制备中应用微管蛋白作用剂、DNA-干扰剂、DNA-烷基化剂和铂络合物等化疗药物，所述制剂适宜在诱导期内给予HDAC抑制剂，随后给予所述的化疗药物。
本发明的药物组合物可适合于口服、肠胃外或直肠给予、局部以及其它方式包括尿道内、阴道内、膀胱内等方式给药，并可以制成单位剂型，这些均是本领域技术人员所熟知的。
本发明还涉及在动物体内治疗肿瘤或产生免疫应答调节效果的方法，其包括对肿瘤部位连续给予有效的抗肿瘤发生或免疫应答调节量的包含氧基亚烷基的化合物，随后给予一种或多种化疗剂，和/或任选其它的治疗。本发明还包括使用包含氧基亚烷基的化合物与其它化疗剂一起用于制备在动物体内治疗肿瘤或产生免疫调节应答的药物。此处描述的化合物在人和非人动物体内均有效。
本发明的其它目的、特点和优势将在下面的描述中进行阐述，或者，从描述中是显而易见的或可以通过实践本发明而获知。本发明的目的、特点和优势可通过特别是在附加权利要求中所指出的方法和组合而实现并获得。
发明详述 PIVANEX(丁酸新戊酰氧甲酯)是包含氧基亚烷基的化合物，是丁酸的新戊酸酯衍生物并可从Titan Pharmaceuticals，Inc.购得。
在一个实施方案中，本发明提供一种通过相继应用包含氧基亚烷基的化合物与某些化疗剂的治疗方法而增强抗肿瘤活性的方法。在一个实施方案中，包含氧基亚烷基的化合物是丁酸新戊酰氧甲酯。
特别地，化疗剂选自DNA-干扰剂、DNA-烷基化剂、微管蛋白作用剂和铂络合物。
在一个实施方案中，其治疗活性可有效地治疗、预防或改善癌症和其它增生性疾病。相继给药的本发明的化合物特别适用于治疗、预防或改善癌症或其它增生性紊乱的效果，其在受这些疾病折磨的对象中起抗增生或分化剂的作用。这些紊乱包括但不限于白血病比如急性前髓细胞白血病、急性髓细胞样白血病、急性骨髓单核细胞性白血病、其它骨髓增生异常综合征，多发性骨髓瘤比如但不限于乳腺癌、子宫颈癌、黑素瘤、结肠癌、鼻咽癌、非Hodgnins淋巴瘤(NHL)、卡波济肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、其它皮肤恶性肿瘤、畸胎癌、T细胞淋巴瘤、肺癌、神经胶质瘤、成神经细胞瘤、外周神经外胚层瘤、横纹肌肉瘤以及前列腺瘤和其它实体瘤。该包含氧基亚烷基的化合物可以对非癌细胞具有抗增生效果，可用于治疗良性肿瘤和其它增生性疾病比如牛皮癣。
在另一个实施方案中，该治疗活性对治疗或改善白血病、鳞状细胞癌和成神经细胞瘤有效。
可以由本发明的方法特别有效地治疗的癌症包括哺乳动物癌症，尤其是人类癌症。由本发明的方法特别易于治疗的癌症是对凋亡诱导剂敏感的癌症。这些癌症包括乳腺癌、结肠和直肠癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、子宫颈癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌以及淋巴瘤(lymphoinas)、骨髓瘤和白血病。使用本发明相继治疗的方法特别易于治疗的癌症括乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌以及非小细胞肺癌。
在生物学评价中，已经证明丁酸新戊酰氧甲酯是一种非myeloablative和非髓抑制的剂。不同于传统的癌症疗法，该包含氧基亚烷基的化合物已经显示会诱发癌细胞中基因表达的改变，引起它们进行凋亡。丁酸新戊酰氧甲酯作为分化剂在培养物中具有抗多种肿瘤细胞型的活性。
在治疗肺癌和顽固性的恶性肝转移的初步的I/II临床试验中，丁酸新戊酰氧甲酯显示了良好的耐受性。
在组织培养物中进行了与化疗剂相互作用的丁酸新戊酰氧甲酯剂量和给药方案的检测以有利于临床计划。
已经发现包含氧基亚烷基化合物对肿瘤细胞的生长抑制和细胞毒作用是时间和浓度依赖性的。在肿瘤细胞接触浓度高于125μM的丁酸新戊酰氧甲酯6小时后或使用浓度高于25μM的丁酸新戊酰氧甲酯处理72小时后观察到细胞毒性，其是肿瘤细胞系依赖性的。
在使用剂量低至5至25μM的丁酸新戊酰氧甲酯处理72小时后观察到肿瘤细胞的形态变化和生长抑制。所观察到的与更加分化的表型相一致的形态变化促进了接触丁酸新戊酰氧甲酯后癌基因表达的研究。肿瘤细胞接触剂量为10-50μM的丁酸新戊酰氧甲酯72小时导致p53、c-myc和ras的显著抑制。P53、c-myc和ras表达的改变与化学耐药性相关，暗示了使用足以抑制癌基因表达但却无直接细胞毒性的剂量的PIVANEX进行预处理可以增强细胞毒药物的作用，并因此与目前的化学疗法起加合或协同作用。
使用丁酸新戊酰氧甲酯预处理肿瘤细胞时的协同作用经人癌细胞得以证明。人T24膀胱和A549肺癌细胞接触浓度不断增加的丁酸新戊酰氧甲酯6或72小时，接着接触各种化疗剂。使用较低剂量的丁酸新戊酰氧甲酯处理6小时没有增强这些药物的细胞毒性，但是使用丁酸新戊酰氧甲酯处理这些细胞系72小时，即使化疗剂的浓度低至没有直接的细胞毒性仍增强了诱导的药物的细胞毒性。在较高剂量下，如上面讨论的丁酸新戊酰氧甲酯的较短的诱导期后将显示伴随相继给药方案的细胞毒的增加。
评价了Pivanex单独应用和与标准化疗剂多西他赛联合应用对人非小细胞肺癌细胞系、H522和NCI-H23的生长抑制活性。细胞接触多西他赛24小时后使用Pivanex处理3天，或者细胞接触Pivanex 3天后使用多西他赛处理24小时。通过使用MTS四唑活体染色的标准技术判断在4天的实验末期的细胞生长抑制。在等效线图解法分析仪上记录各种比例的两种药物与细胞生长的关系，从而确定后继的药物治疗是否具有加合、协同作用或弱于加合的作用。Pivanex后接着使用多西他赛的顺序产生的数据模式显示这两种药物之间的加合或协同相互作用。相反，多西他赛后接着使用Pivanex的顺序产生了不同的模式，期显示弱于加合甚至拮抗的作用。在H522和NCI-H23细胞中的顺序研究的结果支持的优选顺序为起始使用Pivanex接着使用多西他赛处理。
相继联合治疗 包含氧基亚烷基的化合物与一种或多种化疗药物联合用于治疗癌症或肿瘤。这些联合相继给予，其中包含氧基亚烷基的化合物在给予化疗药物之前给予。
该相继治疗方案提供了在诱导期给予包含氧基亚烷基的化合物，其后给予哺乳动物或宿主细胞化疗有效量的微管蛋白作用剂、DNA-干扰剂、DNA-烷基化剂和铂络合物组成的化合物。
包含氧基亚烷基的化合物可以在给予化疗药物之前从约多于2小时、优选多于4小时、更优选多于6小时至120小时内的诱导期给予。在本发明的一个实施方案中，该包含氧基亚烷基的化合物可以在给予化疗药物之前约24小时至96小时的诱导期给予。
在另一个实施方案中，丁酸新戊酰氧甲酯在包含氧基亚烷基的化合物之后约48至约84小时的诱导期给予。在本发明的另一个实施方案中，丁酸新戊酰氧甲酯在给予化疗药物之前约54至78小时的诱导期给予。在本发明的另一个实施方案中，该诱导期减至接触Pivanex 48、36、24、12、6、4以及略长于2小时。
可与包含氧基亚烷基的化合物一起使用的化疗药物通常被分组为DNA-干扰剂、DNA-烷基化剂和铂络合物。各组化疗药物还可通过活性或化合物的类型细分。与包含氧基亚烷基的化合物联合使用的化疗药物包括这些组的某些成员。参见Dorr等人，Cancer Chemotherapy Handbook，第2版，15-34页，Appleton&Lange(Connecticut，1994)，对化疗药物及其给药方法进行了详细的讨论，该文献在此全部引入作为参考。
DNA-干扰剂包括烷化剂例如卡铂、顺铂、奥沙利铂、环磷酰胺、达卡巴嗪或替莫唑胺，基于嘧啶的核苷比如吉西他滨或基于嘌呤的核苷氟达拉滨。达卡巴嗪是可选用治疗多黑色素瘤的药物。
铂络合物包括顺铂、卡铂和奥沙利铂。
微管蛋白作用剂通过结合微管蛋白上的特定位点而起作用，微管蛋白聚合形成细胞微管，微管是关键的细胞结构单元。当该作用剂与结合相连时，由于所用药物的不同，微管蛋白被稳定或解聚。微管蛋白作用剂包括秋水仙素、长春新碱、长春碱、长春瑞宾、紫杉醇和多西他赛。
在本发明的一个实施方案中，包含氧基亚烷基的化合物与下列化疗药物一起给药顺铂、卡铂、奥沙利铂、吉西他滨、紫杉酚、多西他赛和紫杉醇。在本发明的另一个实施方案中，与化疗药物一起给予的氧基亚烷基化合物是丁酸新戊酰氧甲酯。
本发明直接涉及通过相继给予患者或宿主细胞有效增加治疗活性的治疗量包含氧基亚烷基的HDAC抑制剂以及一定量的化疗药物而增加某些化合物治疗活性。通常，治疗活性的增加意味着与正常地不存在化疗联合时相比，特定化合物(即包含氧基亚烷基的化合物和/或化疗药物)的治疗效果将会更强、疗效增加。增加的治疗活性包括活性的增强。此外，相继给予化疗药物和本发明特定的化合物还可导致协同作用，并允许给予较不存在包含氧基亚烷基的化合物时实现相同疗效所需的剂量更低的化疗药物。
定义 此处所用的“药学上可接受的”组分是适用于人和/或动物而无不适当相反副作用(比如毒性、刺激和变态反应)，具有合理的利益/危险比。
此处所用的“包含氧基亚烷基的化合物”是具有式(I)、(II)和(III)结构的化合物 (I)X-CH2-CHX-CHX-C(＝O)-O-Z (II)CH3-CO-CH2-C(＝O)-O-Z (III)CH3-CH2-CO-C(＝O)-O-Z 其中X是H，或只有一个X可以是OH；Z是-CHR-O-(O＝)C-R′，R表示氢或烷基，R′表示烷基、氨基烷基、芳烷基、芳基、烷氧基、芳烷氧基和芳氧基，其中芳基自身以及芳烷基、芳烷氧基和芳氧基中的芳基分别选自如下亚组(a)和(b)，其中(a)是未取代的苯基、萘基、呋喃基或噻吩基，以及(b)选自苯基、萘基、呋喃基或噻吩基，各基团分别被至少一个选自烷基、烷氧基或卤素的基团取代，条件是在(I)中当X是H且R′是丙基时，那么R是包含至少三个碳原子的烷基。该包含氧基亚烷基的化合物包括丁酸新戊酰氧甲酯。
此处所用的术语“安全有效量”是指当按照本发明的方法使用时，足以产生所需的治疗应答而无不适当相反副作用(比如毒性、刺激或变态反应)具有合理的利益/危险比的组分的量。“化疗有效量”意指有效地产生所需化疗应答的本发明化合物的量。例如，有效延缓癌症、肉瘤或淋巴瘤生长或导致其或使癌收缩或预防转移，或增加哺乳动物存活时间的量。特定的安全有效量或化疗有效量随着一些因素而改变，这些因素如所治疗的特定病情、患者的身体条件、所治疗的哺乳动物或其它动物的类型、治疗的延续时间、并行治疗(如果存在)的性质以及所用的特定制剂和化合物或其衍生物的结构。
此处在一些例子中所用术语“mg/m2”或“g/m2”，取决于个别的化疗药物，可以指每日剂量或在治疗或治疗期或治疗周期的过程中给予的剂量。在少许例子中，剂量为mg/kg/天的形式(例如，对于达卡巴嗪而言)。在大量例子中，化疗药物在治疗过程中的某些天或时期给予。给予药物的这些天或时期之后通常跟随着不给药的休药期。例如，多西他赛的常规剂量是每三周75mg/m2。口服药替莫唑胺的典型剂量是在28天内，第一个五天给药的总剂量为750mg/m2，接着为23天的休药期。丁酸新戊酰氧甲酯的常规剂量在治疗的每天是2.5、3、4、5、6、7g/m2。
“药学盐”是已通过制备化合物的酸或碱盐修饰的化疗药物的盐。例子包括但不限于，碱性残基比如胺的矿酸或有机酸盐；酸性残基比如羧酸的碱性或有机盐，等等。药学上可接受的盐包括但不限于，氢的卤化物、硫酸盐、methosulfates、甲基磺酸盐、甲苯磺酸、硝酸盐、磷酸盐、马来酸盐、醋酸盐、乳酸盐等等。本发明化合物的药学上可接受的盐可以通过这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量或更大的量的适当的碱或酸在水中或有机溶剂中或两者的混合物中反应而制备；通常，优选非水介质如如醚、乙酸乙酯、乙醇异丙醇或乙腈。本发明的盐还可通过例如离子交换而制备。适宜的盐列表于Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，1985，1418页或The Merck Index，第十三版，2001，MerckResearch Laboratories Division of Merck&Co.Inc.出版，第MISC-22和MISC-23页中，这些文献在此全部引入作为参考。药学上可接受的盐还包括氨基酸盐比如精氨酸、赖氨酸、谷氨酸以及天冬氨酸盐。
如此处所用的“药物载体”是药学上可接受的溶剂、悬浮剂或媒介(vehicle)，用以将与其它化疗药物连用的包含氧基亚烷基的化合物释放于动物或人。该载体可以是液体或固体，并以所设想的计划的给药方式进行选择。脂质体也是一种药物载体。
如此处所用的“癌症”是指在哺乳动物体内发现的所有类型的癌症或肿块或恶性肿瘤，包括癌和肉瘤。肿瘤的例子包括脑癌、乳腺癌、胰腺癌、宫颈癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、卵巢癌、肉瘤、胃癌、子宫癌和成神经管细胞瘤。
术语“白血病”广泛地指进行性的、血液形成的器官的恶性疾病，且特征通常在于白细胞和其血液及骨髓中的前体的扭曲增生和发展。白血病在临床上通常基于如下分类(1)急性或慢性疾病的病程和特征；(2)所涉及细胞的类型；髓样细胞(骨髓生成的)、淋巴样细胞(淋巴生成的)或单核细胞；以及(3)血液-白血病或非白血病(亚白血病(subleukemic))中异常细胞数量的增加或不增加。P388白血病模型广泛地被认为可预测体内抗白血病活性。因此，本发明包括治疗白血病的方法以及，优选地，治疗急性非淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、成人T细胞白血病、非白血性白血病、leukocythemic白血病、basophylic白血病、母细胞白血病、牛白血病、慢性髓细胞白血病、白血病膜皮、胚芽白血病、嗜酸性细胞白血病、Gross氏白血病、毛细胞白血病、血小板白血病、血胚细胞白血病、组织细胞白血病、干细胞白血病、急性单核细胞白血病、白细胞减少的白血病、淋巴性白血病、淋巴母细胞白血病、淋巴细胞白血病、成淋巴白血病、淋巴样白血病、淋巴肉瘤细胞白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞白血病、淋巴肉瘤细胞白血病、小原粒型白血病、单核细胞白血病、原始粒细胞白血病、髓细胞性白血病、髓样粒细胞白血病、粒单核细胞白血病、Naegeli白血病、浆细胞白血病(plasma cell leukemia)、浆细胞白血病(plasmacytic leukemia)、前髓细胞白血病、Rieder细胞白血病、Schilling’s白血病、干细胞白血病、亚白血病的(subleukemic)未分化细胞白血病的方法。
术语“肉瘤”通常是指由类似的胚胎结缔组织物质组成的肿瘤，且通常由植入原纤维的接近的致密的细胞或同质物质组成。可以使用包含氧基亚烷基的化合物和化疗药物治疗的肉瘤包括软骨肉瘤、纤维肉瘤、淋巴肉瘤、黑肉瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、Abemethy′s肉瘤、脂肪肉瘤、脂肉瘤(liposarcoma)、软组织腺泡状肉瘤、成釉细胞肉瘤、葡萄样肉瘤、绿色瘤、绒膜癌、胚胎肉瘤、Wilins′肿瘤肉瘤、子宫内膜肉瘤、间质肉瘤、尤因氏肉瘤、筋膜肉瘤、成纤维细胞的肉瘤、巨细胞肉瘤、绿色肉瘤、何杰金氏肉瘤、特发性多发性色素沉着出血性肉瘤、B细胞免疫母细胞肉瘤、淋巴瘤、免疫母细胞肉瘤、晏森氏肉瘤、卡波济氏肉瘤、库普弗细胞肉瘤、血管肉瘤、白血病性肉瘤、恶性间叶瘤肉瘤、骨膜外肉瘤、网状细胞肉瘤、劳氏肉瘤、浆液囊性肉瘤、滑膜肉瘤以及毛细血管扩张性肉瘤(telangiectaltic sarcoma)。
术语“黑色素瘤”用于意指源于皮肤及其它器官黑素细胞的系统的肿瘤。可以使用包含氧基亚烷基的化合物和化疗药物治疗的黑色素瘤包括例如阿克拉尔-雀斑的黑素瘤、无黑色素性黑素瘤、良性青年性黑色素瘤、Cloudman氏黑素瘤、S91黑素瘤、硬化-帕西黑素瘤、青年性黑色素瘤、恶性小痣黑素瘤、恶性黑色素瘤、小节的黑素瘤、subungal黑素瘤以及浅表扩展性黑素瘤。
术语“癌”是指由倾向于浸润周围组织并引起转移的上皮细胞构成的恶性新生长瘤。可以使用包含氧基亚烷基的化合物和化疗药物治疗的例示性癌包括例如腺泡癌、腺泡状癌(acinous carcinoma)、囊性腺样癌、腺样囊性癌、腺癌、肾上腺皮质癌、蜂窝状癌、肺泡细胞癌、基底细胞癌、basocellulare癌、类基底细胞癌、基底鳞状细胞癌、细支气管肺泡癌、细支气管癌、支气管癌、髓样癌、胆管细胞癌、绒膜癌、胶样癌、粉刺癌、子宫体癌、筛状癌、铠甲状癌、皮肤癌、柱状癌、柱状细胞癌、管癌、硬癌、胚胎性癌、髓样癌(encephaloid carcinoma)、epiermoid癌、腺样上皮细胞癌、外植癌、溃疡性癌、硬癌(carcinoma fibrosum)、胶样癌(gelatiniform carcinoma)、凝胶状癌(gelatinous carcinoma)、巨细胞癌(giant cell carcinoma)、巨细胞癌(carcinomagigantocellulare)、腺癌(glandular carcinoma)、粒层细胞癌、发母质癌、多血癌、肝细胞癌、Hurthie细胞癌、粘液癌、hypemephroid癌、幼稚的胚胎性癌、原位癌(carcinomain situ)、表皮内癌、上皮内癌、克罗姆佩柯赫尔氏肿瘤癌、库尔契茨基氏细胞癌、大细胞癌、豆状癌(lenticular carcinoma)、豆状癌(carcinoma lenticulare)、脂肪瘤癌、淋巴上皮癌、髓样癌(carcinomamedullare)、髓样癌(medullary carcinoma)、黑色素癌、软癌、粘液癌(carcinomamucosum)、粘液癌(mucinous carcinoma)、粘液瘤样癌、鼻咽癌、燕麦细胞癌、骨化性癌(carcinoma ossificans)、类骨质癌(osteoid carcinoma)、乳头状癌、门脉周癌、原位癌、鳞状细胞癌、粉刺癌、肾的肾细胞癌、贮备细胞癌、梭形细胞癌、sclmeiderian癌、硬癌、阴囊癌、印戒细胞癌、单纯癌、小细胞癌、马铃薯状癌、球状的细胞癌、绳捆癌、癌spongiosum、鳞状细胞癌、鳞状细胞癌、线癌、血管扩张性癌(carcinoma telangiectaticum)、血管扩张性癌(carcinoma telangiectodes)、转移细胞癌、结节性皮癌(carcinoma tuberosum)、结节性皮癌(tuberous carcinoma)、疣状癌以及绒毛状癌。
其它可使用本发明的包含氧基亚烷基的化合物治疗的癌症包括例如，何杰金病、非Hodgliin′s淋巴瘤、多发性骨髓瘤、成神经细胞瘤、乳腺癌、ovanan癌症、肺癌、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多、伯宏球蛋白血、小-细胞肺肿瘤、原发脑肿瘤、胃癌、结肠癌、恶性的胰腺的insulanoma、恶性的类癌瘤、膀胱癌症、恶变前的皮肤损害、睾丸癌症、淋巴瘤、甲状腺癌、成神经细胞瘤、食道癌症、泌尿生殖道癌症、恶性的高钙血症、子宫颈的癌症、子宫内膜的癌症、肾上腺皮层的癌症以及前列腺癌症。
如此处所用的“化疗药物”包括但不限于DNA-干扰剂或烷化剂，比如某些嘧啶或嘌呤核苷、基于铂的细胞毒药物以及微管蛋白作用剂。本发明的“化疗药物”的例子包括但不限于顺铂、卡铂、奥沙利铂、紫杉醇、多西他赛、吉西他滨和氟达拉滨。
如此处所用“联合治疗”或“添加治疗(adjunct therapy)”意指给予需要药物的患者另一种治疗该疾病的药物与包含氧基亚烷基的化合物联用进行治疗。该联合治疗是相继治疗，其中首先使用包含氧基亚烷基的化合物治疗患者，例如丁酸新戊酰氧甲酯，然后使用一种或多种其它化疗药物治疗。
术语“诱导期”意指期间基本上除了给予包含氧基亚烷基的化合物外不给予其它化疗药物的化疗治疗期。该句中术语“基本上除了”意指在诱导期将给予不超过10％的其它化疗药物，优选不超过5％，最优选0％的其它化疗药物。该诱导期使所治疗的肿瘤细胞敏感，以变得更易于接受诱导期后给予的其它化疗药物的化疗。其理解为，在诱导期给予的包含氧基亚烷基的HDAC抑制剂不限于恒定的日剂量而可包括给予可变剂量的HDAC抑制剂。相似地，诱导期后给予的其它化疗药物的剂量可以是恒定的或可变的。本文中术语“可变”包括除恒定剂量外所有的剂量变化。这意味着，例如剂量可以从诱导期的第1天至第2天或该诱导期后增加或减少。
术语“组蛋白”描述高碱性多肽，其被分类为富含赖氨酸、轻微地富含赖氨酸以及富含精氨酸。许多碱性氨基酸集聚于氨基末端尾部。它们是高度多阳离子的并与DNA多阴离子骨架相互作用以形成不带电的核蛋白。组蛋白参与维持染色体的构成材料-染色质所必需的相互作用。组蛋白及其功能更详细地描述于Thomas M.Devlin Textbook of Biochemistry with ClinicalCorrelations，Wiley-Liss，1992，637、639-641页中，该文献在此全部引用作为参考。
术语“组蛋白脱乙酰化酶抑制剂”或“HDAC”抑制剂描述了一类阻碍组蛋白脱乙酰化的分子。组蛋白的乙酰化将导致组蛋白的多阳离子特性中和从而导致染色质的基本结构单元-核小体的部分打开。这导致更为松弛的DNA构型，使得转录元件靠近DNA并促进基因表达。“HDAC抑制剂”在乙酰化期保留组蛋白并诱导多种人癌细胞生长停止和凋亡。HDAC抑制剂更详细地描述于Paul A.Marks等Curr Opiiz Qicol 2001，13477-483，2001中，该文献在此全部引入作为参考。
本发明描述的所有特征、特性和范围，无论是在实施方案中、无论作为优选与否描述的，均可与其它联合。例如，HDAC抑制剂的优选特征或剂量范围可以与此处所描述的第二化疗药物更广泛定义的并非优选特征或剂量范围联合。
包含氧基亚烷基的化合物与一种或多种化疗药物的联合通过可任何可用于药物联合的常规方法给药，可作为单独药物或与其它药物的联合给药。与包含氧基亚烷基的化合物一起用于治疗癌症、肿瘤、白血病或其它相关疾病的化疗药物的用量和种类将根据患者的反应和生理状况、副作用的类型和严重程度、所治疗的疾病、优选的给药方法、患者的预后或其它类似的因素而改变。
这里包含氧基亚烷基的化合物与其它化疗药物联合使用，包含氧基亚烷基的化合物与其它药物的比例将根据所需的治疗效果、观察到的联合副作用或医学领域技术人员已知的其它这样的考虑而改变。通常，包含氧基亚烷基的化合物与其它治疗药的比例在基于重量的约0.5％∶99.5％至约99.5％∶0.5％之间。
在治疗癌症、肿瘤或其它疾病的其它药物之前给予包含氧基亚烷基的化合物的用量、包含氧基亚烷基的化合物和其它药物各自的剂量以及给药方案可以改变。相继治疗可以在合理的时间内在完成第一治疗之后开始第二治疗之前的诱导期范围内。
给予PIVANEX的剂量范围从约0.01g/m2/天至约10g/m2/天，高于2、3、4、5、6或7g/m2/天。通常该剂量范围在约0.1g/m2/天至约5g/m2/天。
与包含氧基亚烷基的化合物联合的紫杉醇的给药剂量范围是约10mg/m2至200mg/m2每疗程之间。优选该剂量范围是约20mg/m2/天至约150mg/m2之间。The Physicians Desk Reference，2003，2193页提供了其它的剂量指导(该文献在此全部引入作为参考)。
与包含氧基亚烷基的化合物联合的吉西他滨给药剂量范围是高达10000mg/m2每疗程，该疗程长达12周。在此范围内，适当的剂量范围可以约是100mg/m2至8000mg/m2。The Physician′s Desk Reference，2003，第57版，1837页(该文献在此全部引入作为参考)推荐了如下的吉西他滨给药方案超过30′给予1000mg/m2，每周一次长达7周，接着一周的休药期，接着在四周内三个连续周中每周一次进行治疗。吉西他滨是一种选择用于治疗胰腺癌、非小细胞肺癌及相关疾病的药物。优选静脉内途径给药。该产品可以用于静脉内给药的200mg及1g盐酸盐的小瓶提供。
紫杉酚的剂量范围将在10mg/m2至500，优选40至300mg/m2每疗程。
与包含氧基亚烷基的化合物联合的多西他赛的给药剂量范围是约10mg/m2至200mg/m2每疗程之间，优选50mg/m2至150mg/m2。更优选该剂量约为60mg/m2至100mg/m2。。The Physician′s Desk Reference，2003，773页(该文献在此全部引入作为参考)推荐了如下的多西他赛治疗乳腺癌包括转移乳腺癌的给药方案每三周作为1小时输液给予100mg/m2。优选的非小细胞肺癌的治疗方案在60mg/m2至100mg/m2范围内，更优选每三周在超过1小时静脉给予75mg/m2。
与包含氧基亚烷基的化合物联合的卡铂的有效剂量范围是约1mg/m2至约1000mg/m2每疗程之间。卡铂的优选剂量约为100mg/m2至约500mg/m2每疗程之间。The Physician′s Desk Reference，2003，1126页(该文献在此全部引入作为参考)推荐了如下的卡铂给药方案每四周第1天360mg/m2或应用如第1129页描述的Caivert公式。该产品可以50、150和450mg静脉内输液的单一剂量小瓶提供。卡铂是选择治疗各种形式的卵巢癌包括卵巢carcinoma及相关疾病的一种药物。
与包含氧基亚烷基的化合物联合的顺铂的有效剂量范围是约1mg/m2至约300mg/m2每疗程之间。
与包含氧基亚烷基的化合物联合的奥沙利铂的有效剂量范围是约10mg/m2至约250mg/m2每疗程之间。The Physician′s Desk Reference，2003，2999页(该文献在此全部引入作为参考)推荐了如下的奥沙利铂给药方案每两周在超过120′静脉内给予的85mg/m2。奥沙利铂是选择治疗结肠直肠癌或直肠癌或相关疾病的一种药物。该产品以50或100mg的小瓶提供。
与包含氧基亚烷基的化合物联合的达卡巴嗪的剂量范围是每10天约0.5至10mg/m2，优选1至8mg/m2之间。The Physician′s Desk Reference，2003，885页(该文献在此全部引入作为参考)推荐了如下的达卡巴嗪给药方案2至4.5mg/kg/天，在相连10天内给药。该治疗可以在四周间隔重复。另一种方案为250mg/m2/天，给药5天，每三周重复该治疗。达卡巴嗪是选择治疗转移性恶性黑色素瘤或霍奇金病或相关疾病的一种药物。该药物以用于静脉内注射的100mg和200mg小瓶形式提供。
替莫唑胺是口服给予的化疗药物。在与包含氧基亚烷基的化合物联合中，其给药的剂量为每疗程的总剂量为500、750、1000和1250mg/m2，该疗程通常是5天。The Physician′s Desk Reference，2003，3081页(该文献在此全部引入作为参考)推荐了如下的替莫唑胺给药方案每个28天疗程的起始剂量为每天口服150mg/m2，持续5天。在血小板计数监测下，该剂量可以增加至200mg/m2。替莫唑胺是选择治疗顽固性间变的星细胞瘤或相关疾病的一种药物。该药物以250mg胶囊形式提供。
在一个实例中，丁酸新戊酰氧甲酯以约0.5g/m2/天至5g/m2/天的剂量连续给药三天，接着在第4天给予约50mg/m2至100mg/m2的多西他赛。
应理解为此处所指示的剂量范围仅是一般的指导。包含氧基亚烷基的化合物的给药剂量范围的比例可以据包含氧基亚烷基基团的HDAC抑制剂(例如，丁酸新戊酰氧甲酯)和上面所提供的化疗药物的有效剂量范围而确定，还可以据给定剂量范围和比例的治疗的有效性而确定。治疗医师拥有很大的灵活性并运用它们的专业判断确定对个别患者最有效的方案。还应理解为此处公开的相继治疗以及给药方案的加合或优于加合(协同)的效果需要可能超出此处公开的剂量范围的剂量变化或调整。
准确的方案还将取决于所治疗的疾病、疾病的程度以及对治疗的反应。
化疗药物、药物载体以及给予的化合物的量将取决于哺乳动物的种类和体重以及所治疗肿瘤的类型而广泛地改变。给予的剂型也可取决于已知的因素而改变，这些因素比如特定化疗药物的药物动力学特性及其给药方式和路线；接受者的年龄、性别、代谢率、吸收效率、健康和体重；症状的本性和限度；给予的并行治疗的种类；治疗的频率；以及所需的疗效。
包含氧基亚烷基的化合物以及一种或多种化疗药物优选以两种或多种不同剂型分别给予。取决于所应用的剂型，它们可以经同一途径或经两种或多种不同给药途径独立给予。
适宜的药物组合物和剂型将优选包括包含氧基亚烷基的化合物和一种或多种化疗药物。
化疗药物的剂量和范围将取决于特定的药物和所治疗癌症的类型。本领域技术人员将能够确定适当的剂量。
剂型 相继治疗还可以口服、静脉内(推注或输液)、腹膜内、皮下或肌内的形式给药，本领域技术人员熟知所有的应用剂型。
与一种或多种化疗药物联合的包含氧基亚烷基的化合物典型地与适宜的药物稀释剂、增充剂、赋形剂或载体(此处通称为药学上可接受的载体或载体材料)混合给予，考虑到想要的给药形式进行适宜地选择并与常规的制药实践相一致。该单位形式将是适于口服、直肠、静脉内注射或胃肠外给药的形式。此外，可使用局部或其它的给药方式包括尿道内、阴道内或膀胱内给药。
与一种或多种化疗药物联合的包含氧基亚烷基的化合物可以单独给药但通常与药学上可接受载体混合。此载体可以是固体或液体，载体的类型通常基于所采用的给药类型进行选择。
药学上可接受载体和赋形剂的特定例子可以如RemingtonThe Scienceand Practice of Pharmacy，A.Gennaro，ed.，第20版，Lippincott，Williams&Wilkins，Philadelphia，PA；Advances in Pharmaceutical Sciences(DavidGanderton，Trevor Jones，Eds.，1992)；Advances in Pharmaceutical Sciences Vol7.(David Ganderton，Trevor Jones，James McGinity， Eds.，1995)中的描述所使用。Pivanex作为Intralipid 20％IV Fat Emulsion与200-强度单位的乙醇中的乳剂静脉内(IV)给药。将其稀释于乙醇(2mL/g的Pivanex)中，然后加至Intralipid 20％IV Fat Emulsion生成20mg Pivanex/mL的储备乳剂。
与一种或多种化疗药物联合的包含氧基亚烷基的化合物还可以以脂质体释放系统的方式给药，比如小的单层囊泡、大的单层囊泡以及多层囊泡。脂质体可由由多种磷脂形成，比如胆固醇、硬脂酰胺或磷脂酰胆碱。
还可配制持续释放剂型，首先在诱导期释放Pivanex，接着释放口服活性的化疗药物比如替莫唑胺。本领域已知这样剂型的制备方法。
通常，水、适宜的油、盐水、右旋糖(葡萄糖)水溶液以及相关的糖溶液和二元醇比如丙二醇或聚乙二醇均是用于注射液的适宜载体。胃肠外给药的溶液优选包含活性成分的水溶性盐、适宜的稳定剂，以及如果需要，缓冲物质。抗氧化剂比如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸，单独或联合地适用作稳定剂。还可使用柠檬酸及其盐和EDTA盐。此外，肠胃外溶液可包含防腐剂，比如氯苄烷铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯以及氯代丁醇。适宜的药物载体描述于RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，本领域的标准参考文献。
胃肠外和静脉内形式还可以包括使其与所选择的注射或其它释放系统相容的矿物以及其它材料。
下面解释了给予与一种或多种化疗药物联合的包含氧基亚烷基的化合物的有用药物剂型。
可注射溶液 适于经注射给药的胃肠外组合物通过在10％体积的丙二醇和水中搅拌1.5％重量份的活性成分而制备。该溶液经氯化钠制备成等渗溶液并灭菌。
治疗方法 治疗方法可以是任何适宜的方法，其对所治疗的特定癌症或肿瘤类型有效。治疗可以是直肠、胃肠外或静脉内给药或注射入肿瘤或癌症。给予有效量的方法还可取决于所治疗的紊乱或疾病而不同。在本发明的一个实施方案中，通过静脉内、皮下或肌内应用与一种或多种化疗药物联合的包含氧基亚烷基的化合物、与适当的载体、其它抑制癌症的化合物或有利于应用的稀释剂相配制的胃肠外治疗将是给予温血动物这些化合物的优选方法。
本领域技术人员将认识到，可以在体外或体内使用已知细胞系通过常规筛选确定与一种或多种化疗药物联合的包含氧基亚烷基的化合物的效力。可以从American Tissue Type Culture或其它实验室获得细胞系。
如下的实施例进行了举例说明但并不意在限制本发明。
实施例1 肿瘤细胞系和细胞培养 T24膀胱移行癌细胞、Calu-6间变性肺癌细胞以及SK-MES-1鳞状肺癌细胞购自American Type Culture Collection(Manassas，VA)。所有的细胞系均在含10％胎牛血清的RPMI-1640中培养。对于在微量滴定皿中的培养，细胞平铺的密度为104细胞/孔，在37℃、5％CO2中培养过夜。
培养过夜后，一式四份向孔中加入药物并在存在或不存在包含氧基亚烷基的化合物的情况下培养6至96小时。移出培养基之前，加入新鲜培养基和细胞毒药物，并继续培养该培养基6小时。
然后洗涤各孔并向各孔中加入不含药物的培养基。随后培养微量滴定皿3天，然后使用结晶紫测定法测定细胞密度。在显微照相之前，一些培养物还可在甲醇中固定并使用苏木精和曙红(H&E)染料染色5分钟。
抗肿瘤药物 PIVANEX(pivaloyloxymethyl butyrate)自Titan Pharmaceuticals Iric.(South San Francisco，CA获得，并在加入培养基之前与0.05％lntralipidTM(Fresenius Kabi，Clayton，NC)混合。细胞毒药物吉西他滨(Gemzar；Eli Lilly and Co.，Indianapolis，IN)、顺铂(Platinol，Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ)、紫杉醇(Taxol；Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ)以及多西他赛(Taxotere，Aventis Pharmaceuticals Products，Inc.，Bridgewater，NJ)与PIVANEX一起进行研究。
结晶紫微量滴定测试法 微量滴定皿中的细胞经PBS漂洗，并于两体积的100％冷甲醇中固定5分钟。加入一体积溶于20％甲醇中的0.5％结晶紫并染色贴壁细胞10分钟。然后洗涤该细胞，并使用0.1N柠檬酸钠缓冲液洗脱结晶紫，在ELISA平板读数仪上于490nm处读数。
癌基因表达分析 使用标准方法分离肿瘤细胞培养mRNA，并进行RT-PCR以确定c-Myc癌基因表达水平。用于RT-PCR循环的c-Myc引物对是 c-Myc 5′-GCC AAG CCA GTT CCA TTA AA-3′ 3′-ACT CCC GGA CTG TCT GTC AT-5′ 该c-Myc引物对按如下程序循环95℃3分钟，然后30周期(95℃1分钟，然后55℃1分钟，然后72℃1分钟)，接着72℃保持温度7分钟，然后迅速降温至4℃。利用1％琼脂糖凝胶电泳和凝胶密度测定法定量分析样品。
表1aPivanex降低c-Myc癌基因的表达Pivanex浓度μMCalu-6NSCLC T24膀胱癌Calu-6NSCLC T24膀胱癌接触96小时PCR单位细胞n＝2 PCR单位 细胞n＝3SDSD0880 706663010893 760205925743 97213723450711 966072100647 6402082200460 560131 a表显示了单位为μM的PIVANEX浓度(接触96小时)与任意PCR单元的关系，表明PIVANEX降低了c-Myc癌基因的表达。
表2aPivanex和顺铂的细胞毒性在T24膀胱癌细胞系中的加合作用顺铂剂量(μM)0μMPivanex10μMPivanex50μMPivanex100μMPivanex0μMPiv SD10μMPiv SD50μMPiv SD100μMPiv SD00.4790.480.4220.0120.020.0472.50.4860.4810.4060.4240.0230.0090.0170.00650.4340.4270.3360.4180.0210.0220.030.046100.4040.3780.3180.310.0120.0280.0340.027200.250.2870.2310.2180.0120.0360.0340.003 a表显示了单位为μM的PIVANEX处理和PIVANEX处理后顺铂的浓度(μM)对T24癌细胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和顺铂的细胞毒性具有加合性。
表3aPivanex克服了SK-MES-1非小细胞肺癌细胞对紫杉醇的耐药性紫杉醇浓度0μMPivanex10μMPivanex50μMPivanex0μMPiv SD10μMPiv SD50μMPiv SD00.7370.7430.7690.0160.0890.051250.6550.6690.6820.0370.020.016500.6270.5810.5590.0160.0510.0371000.420.1180.2170.1130.0240.019 a表显示了单位为μM的PIVANEX处理和PIVANEX处理后紫杉醇的浓度(μM)对SK-MES-1癌细胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX克服了对紫杉醇的耐药性。
表4aPivanex和顺铂的细胞毒性在Calu-6非小细胞肺癌细胞系中的加合作用μMPivanex0μM顺铂2.5μM顺铂5μM顺铂10μM顺铂20μM顺铂0μMPivanex0.6660.6080.5570.3280.23810μMPivanex0.6170.580.5270.3680.24650μMPivanex0.5770.4860.4430.3650.242100μMPivanex0.2840.2330.160.1150.081 a表显示了单位为μM的PIVANEX处理和PIVANEX处理后顺铂的浓度(μM)对Calu-6癌细胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和顺铂的细胞毒性具有加合作用。
表5aPivanex和顺铂的细胞毒性在Calu-6非小细胞肺癌细胞系中的加合作用μMPivanex0μMcis SD2.5μMcis SD5μMcis SD10μMcis SD20μMcis SD0μMPivanex0.0260.0310.0410.0150.00910μMPivanex0.0380.0210.0750.0930 04350μMPivanex0.0110.0080.0160.0470.026100μMPivanex0.0090.0080.0570.0560.013 a表显示了单位为μM的PIVANEX处理和PIVANEX处理后顺铂的浓度(μM)对Calu-6癌细胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和顺铂的细胞毒性具有加合性。
表6aPivanex和吉西他滨(”Gem”)的细胞毒性在Calu-6非小细胞肺癌细胞系中的加合作用 0nM Gem. 25nM Gem. 50nM Gem. 100nM Gem. 200nM Gem. 0nM Gem.SD 25nM Gem.SD 50nM Gem.SD 100nM Gem.SD 200nM Gem.SD 0μM Pivanex 0.666 0.587 0.466 0.456 0.403 0.026 0.028 0.027 0.025 0.011 10μM Pivanex 0.617 0.565 0.479 0.437 0.313 0.038 0.058 0.041 0.039 0.038 50μM Pivanex 0.577 0.481 0.453 0.368 0.268 0.011 0.039 0.03 0.028 0.049 100μM Pivanex 0.284 0.217 0.211 0.194 0.204 0.009 0.023 0.016 0.052 0.03 a表显示了单位为μM的PIVANEX处理和PIVANEX处理后吉西他滨的浓度(nM)对Calu-6癌细胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和吉西他滨的细胞毒性具有加合性。
表7aPivanex和吉西他滨的细胞毒性在T24细胞系中的作用超过加合作用MPivanex0nM吉西他滨25nM吉西他滨50nM吉西他滨100nM吉西他滨0nM SD10nMSD50nMSD00.4790.480.4220.010.020.052250.4790.4760.4090.4240.0230.0090.017500.4550.4610.4180.4180.0150.0220.031000.4140.410.4010.310.0120.0280.0342000.410.3590.3660.2180.0120.0360.034 a表显示了单位为μM的PIVANEX处理和PIVANEX处理后吉西他滨的浓度(nM)对T24癌细胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和吉西他滨的细胞毒性超过了加合作用。
表8aPivanex和顺铂的细胞毒性在SK-MES-1非小细胞肺癌细胞系中的作用超过加合作用 Pivanex 浓度 Pivanex 单用(Abs) Piv+ 10μM顺铂 Piv+ 20μM顺铂 Piv 单独SD Piv+10μM顺铂 SD Piv+20μM顺铂 SD 0 2.232 1.562 1.477 0.048 0.166 0.242 25 1.852 0.751 0.11 0.051 100 1.908 0.755 0.127 0.085 200 1.952 0.779 0.02 0.061 a表显示了单位为μM的PIVANEX处理和PIVANEX(μM)和顺铂的浓度(μM)对SK-MES-1非小细胞癌细胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和顺铂的细胞毒性超过了加合性。
表9aPivanex和多西他赛的细胞毒性在Calu-6非小细胞肺癌细胞系中超过加合的作用多西他赛浓度0μMPivanex10μMPivanex50μMPivanex0μMPiv SD10μMPiv SD50μMPiv SD00.7160.7320.5530.0170.040.083250.2190.2140.1170.0470.0470.027500.1830.1480.1060.0780.0720.0261000.1740.1310.0990.0790.0280.0172000.1480.1130.0920.0520.0180.007 a表显示了单位为μM的PIVANEX处理和PIVANEX处理后多西他赛的浓度(μM)对Calu-6非小细胞癌细胞生存能力的作用(A490吸收度)，表明PIVANEX和多西他赛的细胞毒性超过了加合作用。
PIVANEX和化疗药物对肿瘤细胞生长的作用概述如下 已发现处理膀胱癌细胞系(T24)时，PIVANEX与顺铂联合具有加合作用，与吉西他滨联合具有超过加合的作用。
已发现处理化学耐药性的非小细胞肺癌细胞系(SK-MES-1)时，PIVANEX与顺铂或紫杉醇联合具有大于加合作用的作用。
已发现治疗非小细胞肺癌细胞系(Calu-6)时，PIVANEX与顺铂或核苷类似物吉西他滨联合具有加合作用，与紫杉烷多西他赛联合具有超过加合的作用。
对于某些适应症，已发现PIVANEX与化疗药物的联合具有加合作用，对于另一些适应症，该联合具有超过加合的作用的作用。
几种癌细胞系(Calu-6、SK-MES-1、T-24)在培养基中接触浓度低至10-50μM的PIVANEX 96小时，降低了c-Myc癌基因的表达。
PIVANEX对癌基因表达的调节是时间依赖性的也是肿瘤细胞系依赖性的。
实施例2 该实施例显示了在药物联合中PIVANEX和多西他赛的细胞毒性，其具有3天的诱导期(72小时)，接着接触多西他赛24小时。
方法 细胞系 人NSCLC细胞系H522(快速生长；t＝28小时)和H23(缓慢生长；t＝38小时)购自ATCC(Rockville，MD)，维持在75-cm 2塑料组织培养瓶内包含10％胎牛血清(FBS；Nova Tech)的RPMI培养基中(RPMI；Nova Tech，Grand Island，N.Y.)。在37℃包含5％CO2的潮湿空气中培养细胞。
处理 在100％乙醇中稀释Pivanex(Titan Pharmaceuticals)以形成1M储备液，终乙醇浓度＜0.5％。多西他赛(Taxotere TM)由Aventis(Strasbourg，France)慷慨提供并溶解于100％二甲亚砜中(DMSO)以形成1000x储备液。对于细胞培养研究，Pivanex和多西他赛均稀释于细胞培养基中以分别形成终浓度＜0.5％乙醇和＜0.1％DMSO。
生长抑制测试 使用胰蛋白酶(0.05％)/EDTA(0.02％)收获指数生长细胞，并在包含10％FBS的新鲜培养基中再悬浮。在第0天将100μl生长培养基中的细胞悬浮液平铺于96孔微量滴定板(Falcon，Oxnard，CA)中，浓度为104细胞/孔。药物处理之前，在37℃包含5％CO2的潮湿空气中培养细胞24小时。第1天，向细胞板中加入100μl包含系列稀释浓度药物和媒介的部分，并在各自序列指定的时间培养。在37℃潮湿培养器(5％CO2的/95％HEPA过滤空气)中培养4天后，移出100μl生长培养基。加入20μl MTS四唑盐[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2-四唑-内盐]化合物(1.9mg/ml的PBS溶液，pH 6.0)后于37℃培养细胞1小时。该MTS四唑盐化合物经活细胞生物还原成可溶于细胞培养基中的有色甲(formazan)产物。在DynexHD微量反应板读数仪上于490nm波长处记录吸收度。使用PrismGrapIiPad软件据3组不同的测试测定IC50值，各组测试对于每一剂量测定涉及4次重复。所示数值为生长抑制百分比，其中0％代表仅加入媒介(0.1％DMSO)的孔中的均值，按照如下计算 ％生长抑制＝(1-(OD测试/OD媒介))×100 其中OD测试是受试样品的光密度，OD媒介是溶解有关药物的媒介的光密度。
H23细胞加PIVANEX/多西他赛 在Pivanex后继用多西他赛的相继联合研究，结果显示两种药物在抑制肿瘤细胞生长方面具有协同/加合作用。
H23-使用Pivanex后继用多西他赛的治疗导致协同的生长抑制活性，然而单独使用PIVANEX和多西他赛显示了接触24小时后H23细胞生长的急剧增加。
H522-使用Pivanex后继用多西他赛的治疗显示加合/协同的生长抑制活性，然而单独使用PIVANEX和多西他赛显示了接触24小时后H522细胞生长的急剧增加。
在该测试中，在Pivanex/多西他赛浓度介于60/40至25/75之间的范围内，给予H23的Pivanex产生了超过加合(协同)的生长抑制作用，其活性高于加合的基线的5至25％之间(25/75为5％；50/50为12％以及40/60为25％)。相对于加合基线值此作用的生长抑制活性相应增加约12.5％、25％和60％。
实施例3 Pivanex Intralipid的配制方法 在层流通风厨中使用无菌操作。适当量的Pivanex置于无菌瓶中，并向该瓶中加入2ml乙醇(200标准强度)/克Pivanex。然后向该瓶中加入适当量的Intralipid(20％)以生成Pivanex浓度为20mg/mL的储备液。然后将该瓶轻轻地倒转几次。使用Intralipid(20％)进一步稀释该乳剂至所需的浓度。
媒介对照 适当量的Intralipid(20％)置于无菌玻璃瓶中。加入适当量的乙醇(200标准强度)以形成4％浓度。轻轻地导致该瓶几次。
尽管本发明已在此参照具体实施方式
进行了描述，可以认为，对于本领域技术人员而言将容易地进行许多修改或变化。所公开并详细描述的优选实例是例示性的并不因此意在限制本发明。因此，所有这样的变化或修改均包括在本发明的范围内。
前述公开包括所有被认为必需的信息，能购使得本领域技术人员实践所要求保护的发明。由于所引用的专利或出版物可以提供其它有用的信息，这些引用的资料在此全部并入作为参考。
权利要求
1.一种增加组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂抗肿瘤活性的方法，其包括在诱导期连续地给予哺乳动物或宿主细胞化疗有效量的包含氧基亚烷基的HDAC抑制剂，随后给予哺乳动物或宿主细胞化疗有效量的微管蛋白作用剂、DNA-干扰剂、DNA-烷基化剂或铂络合物。
2.权利要求1的方法，其中包含氧基亚烷基的HDAC抑制剂是具有式(I)、(II)和(III)的化合物
(I)X-CH2-CHX-CHX-C(＝O)-O-Z
(II)CH3-CO-CH2-C(＝O)-O-Z
(III)CH3-CH2-CO-C(＝O)-O-Z
其中X是H，或只有一个X可以是OH；Z是-CHR-O-(O＝)C-R′，R表示氢或烷基，R′表示烷基、氨基烷基、芳烷基、芳基、烷氧基、芳烷氧基和芳氧基，其中芳基自身以及芳烷基、芳烷氧基和芳氧基中的芳基分别选自如下亚组(a)和(b)，其中(a)是未取代的苯基、萘基、呋喃基或噻吩基，以及(b)是苯基、萘基、呋喃基或噻吩基，各基团分别被至少一个选自烷基、烷氧基或卤素的基团取代，条件是在(I)中当X是H且R′是丙基时，那么R是包含至少三个碳原子的烷基。
3.权利要求1的方法，其中包含氧基亚烷基的化合物是丁酸新戊酰氧甲酯。
4.权利要求1的方法，其中微管蛋白作用剂是紫杉酚、紫杉醇或多西他赛，DNA-干扰剂是基于嘧啶的核苷类似物或氟达拉滨，DNA-烷化剂是达卡巴嗪、替莫唑胺或环磷酰胺，且铂络合物是顺铂、卡铂或奥沙利铂。
5.权利要求4的方法，其中基于嘧啶的核苷类似物是吉西他滨。
6.权利要求1的方法，其中诱导期为约从超过2小时至120小时。
7.权利要求1的方法，其中诱导期约为24至96小时。
8.权利要求1的方法，其中诱导期约为48至84小时。
9.权利要求1的方法，其中诱导期约为54至78小时。
9.权利要求1的方法，其中哺乳动物是人。
10.权利要求1的方法，其中与化疗药物联合的有效量的包含氧基亚烷基的化合物的给药剂量在约0.01g/m2/天至约10g/m2/天之间。
11.权利要求5的方法，其中与包含氧基亚烷基的化合物联合的有效量的吉西他滨在长达12周的疗程内的给药剂量可高达约10000，优选100至4000mg/m2。
13.权利要求4的方法，其中与包含氧基亚烷基的化合物联合的有效量的紫杉醇和多西他赛的每疗程给药剂量在约10mg/m2至约200mg/m2之间。
14.权利要求13的方法，其中多西他赛的给药剂量在10mg/m2至200mg/m2之间，优选50mg/m2至120mg/m2。
15.权利要求4的方法，其中与包含氧基亚烷基的化合物联合的有效量的卡铂的每疗程给药剂量在约10mg/m2至约1000mg/m2之间。
16.权利要求15的方法，其中有效量的卡铂的给药剂量在约100mg/m2至500mg/m2之间。
17.权利要求4的方法，其中与包含氧基亚烷基的化合物联合的有效量的奥沙利铂的每疗程给药剂量在约10mg/m2至约250mg/m2之间。
18.权利要求4的方法，其中与包含氧基亚烷基的化合物联合的有效量的顺铂的每疗程给药剂量在约1mg/m2至约300mg/m2之间。
19.权利要求4的方法，其中与包含氧基亚烷基的化合物联合的有效量的达卡巴嗪在十天的疗程内的给药剂量在约0.5mg/kg/天至10mg/kg/天之间。
20.权利要求4的方法，其中与包含氧基亚烷基的化合物联合的有效量的替莫唑胺的每疗程给药剂量为500mg/m2至1250mg/m2。
21.权利要求3的方法，其中丁酸新戊酰氧甲酯以0.5g/m2/天至5g/m2/天的剂量给予，连续给药三天，随后在第4天给予约50mg/m2至100mg/m2的多西他赛。
22.HDAC抑制剂在制备用于增加所述HDAC抗肿瘤活性的化疗制剂中的应用，其中包括应用如下化疗药物微管蛋白作用剂、DNA-干扰剂、DNA-烷基化剂以及铂络合物，所述制剂适用于诱导期，期间给予HDAC抑制剂，随后给予所示化疗药物。
全文摘要
包含氧基亚烷基基团的组蛋白脱乙酰酶抑制剂与另一种抗瘤药物相继使用以增加在细胞和哺乳动物内的抗肿瘤活性。
文档编号A61K31/225GK1681489SQ03822108
公开日2005年10月12日 申请日期2003年7月11日 优先权日2002年7月17日
发明者路易斯·R·布卡洛, 苏尼尔·斯里达兰 申请人:蒂坦药物股份有限公司