专利名称：神经纤维再生促进剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有优良的神经纤维再生促进效果的神经纤维再生促进剂。
背景技术：
脊椎动物的神经组织分为两类，一类是来源于神经管(neural tube)的中枢神经系统，另一类是来源于神经嵴(neural crest)的末梢神经系统。中枢神经系统由脑、脊髓和视网膜构成，末梢神经系统包含脑神经、脊髓神经、末梢神经节、肾上腺髓质等。这样，2种神经系统在胚胎学上在解剖学上也有区别。哺乳动物中在断裂的神经纤维(轴索)是否再生这一点上也是各不相同的。
成熟的哺乳动物的中枢神经纤维如果被切断是不再生的，而末梢神经系统的神经纤维如果条件完备是可以再生的。造成这种差异的原因并不是中枢神经系统的细胞(神经细胞neuron)和末梢神经系统的细胞(神经节细胞ganglion cell)的性质不同，而是它们所处的周围的环境，特别是形成髓鞘(神经纤维的外膜)的细胞(在中枢是少突胶质细胞、在末梢是Schwann细胞)的不同。
伴有神经纤维、特别是中枢神经纤维的损伤的疾病中，有很多疾病是由于脑、脊髓、视神经的外伤及其它原因引起的，希望通过采用神经纤维再生的方法来进行治疗。
在所作的中枢神经纤维再生的尝试中，较为有名的一种方法是，移植末梢神经，采用逆行标记检出轴索再生细胞的方法(A.J.AGUAYOin Synaptic Plasticity，C.W.COTMAN ed.，Guilford，1985年，p.457-484)。此外，在轴索再生后功能恢复的验证方面，也发表过如下的报告，即，通过切断动物的视神经，利用末梢神经的自体移植和中枢连接，恢复对光缩瞳反射(S.J.O.WHITELEY et al.Exp.Neurol.，1999年，第154卷，p.560页)及回避行动(H.SASAKI et al.Exp.Neurol.，1999年，第159卷，p.377)等功能。
但是，在这些功能恢复上还有很多需要克服的难题，例如上述视神经再生，即使移植末梢神经促使轴索再生，但仍难以使轴索末捎广泛地扩展于脑内，形成突触。特别是再生纤维的数量极少，以视神经为例，仅再生全部视神经纤维的4％以下。要再生轴索，必须是即使切断轴索，神经细胞也还是存活的，但促进存活与促进轴索再生并没有直接的联系(Goldberg JL，Barres BAAnnu.Rev.Neurosci.，2000年，第23卷，p.579-612；LuP et al.J.Comp.Neurol.，2001年，第436卷，p.456-470、Watanabe Met al.Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，2000年，第41卷，S190))。我们也作了和后述实施例同一类的试验，即，将神经营养因子和folskolin注入眼球内，虽然使存活细胞数增加，但是并没有获得促进轴索再生的结果。因此，要通过药剂来促进中枢神经的轴索再生，必须找到一种具有使存活细胞增加，而且还能促进轴索再生的效果的药剂。但是，具有这种作用，能够促进中枢神经的轴索再生，用于治疗的药剂目前尚未发现。
另一方面，已知3，4-二氢-8-(2-羟基-3-异丙胺基)丙氧基-3-硝酰基-2H-1-苯并吡喃(通用名尼普地洛(nipradilol))具有优良的β阻断作用，作为高血压症、心绞痛等循环系统疾病的治疗剂是非常有用的(日本特许公报昭60-54317号、日本特许公报平01-53245号)。但尼普地洛(nipradilol)对神经纤维的再生具有怎样的作用却是全然未知。
发明内容
因此，本发明的目的是提供具有促进神经纤维再生效果的神经纤维再生促进剂。
针对上述的状况，本发明者进行了仔细深入地研究，结果意外地发现以用于高血压、心绞痛治疗的β阻断剂而为人熟知的尼普地洛(nipradilol)还具有神经纤维再生促进作用，并据此最终完成了本发明。
即，本发明提供以尼普地洛(nipradilol)为有效成分的神经纤维再生促进剂。
本发明还提供制造神经纤维再生促进剂的方法，其特征是使用尼普地洛(nipradilol)。
本发明还提供促进神经系统疾病患者的神经纤维再生的方法，其特征是，给予有效量的尼普地洛(nipradilol)。
采用本发明，能够提供具有优良的神经纤维再生促进效果的神经纤维再生促进剂。
具体实施例方式
本发明所使用的尼普地洛(nipradilol)如前所述，可以采用日本特许公报昭60-54317号所述的方法制造，如后述实施例所示，其在猫视神经切断模型中显示出优良的神经纤维再生促进作用，因此作为神经纤维再生促进剂是非常有用的。
本发明的神经纤维再生促进剂以尼普地洛(nipradilol)为有效成分，可以制成口服剂或非口服剂，例如口服剂、注射剂、栓剂、软膏剂、贴附剂、滴眼剂等，可以配合药学上允许的载体，采用本行业公知惯用的制剂方法，制造适合于给药方式的组合物。
调制口服用固体制剂时，例如，能够在尼普地洛(nipradilol)中加入赋形剂，以及根据需要添加的粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味剂、矫臭剂等后，采用常规方法制造片剂、包衣片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂等。这种添加剂可以使用该领域中常用的添加剂，例如，赋形剂可例举乳糖、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、淀粉、碳酸钙、高岭土、微晶纤维素、硅酸等；粘合剂可例举水、乙醇、丙醇、单糖浆、葡萄糖液、淀粉液、明胶液、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基淀粉、甲基纤维素、乙基纤维素、紫胶、磷酸钙、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂可例举干淀粉、褐藻酸钠、琼脂末、碳酸氢钠、碳酸钙、月桂基硫酸钠、一甘油硬脂酸酯、乳糖等；润滑剂可例举精制滑石、硬脂酸盐、硼砂、聚乙二醇等；矫味剂可例举蔗糖、橙皮、柠檬酸、酒石酸等。
调制口服用液体制剂时，例如可以在尼普地洛(nipradilol)中加入矫味剂、缓冲剂、稳定剂、矫臭剂等，采用常规方法制造内服液剂、糖浆剂、酏剂等。这时，矫味剂可以采用上述所例举的，缓冲剂可例举柠檬酸钠等；稳定剂可例举西黄蓍胶、阿拉伯胶、明胶等。
调制注射剂时，例如可以在尼普地洛(nipradilol)中加入pH调节剂、缓冲剂、稳定剂、等张剂、局部麻醉剂等，采用常规方法制造皮下、肌肉及静脉内注射剂。这时的pH调节剂及缓冲剂可例举柠檬酸钠、醋酸钠、磷酸钠等。稳定剂可例举焦亚硫酸钠、EDTA、巯基乙酸、硫代乳酸等。局部麻醉剂可例举盐酸普鲁卡因、盐酸利多卡因等。等张剂可例举氯化钠、葡萄糖等。
其它的剂型同样也可以按照公知的方法制成制剂。
如上所述制得的本发明的神经纤维再生促进剂对发生轴索损伤或伴有该损伤的所有中枢神经系统的损伤或者疾病，即包括脑、脊髓或者视神经的任意部分的损伤或疾病具有较好的疗效，尤其是对受伤后立即发生的损伤、受伤后非立即发生的损伤、贯穿性外伤、在神经外科手术或其它处置中所发生的外伤等外伤，及出血性卒中、缺血性卒中等卒中、及视神经病变、青光眼等所伴等的视神经损伤等具有很好的疗效。
本发明的神经纤维再生促进剂的用药量随患者的体重、年龄、性别、症状、给药方式及给药次数等而有所不同，通常较好是，成人一天以尼普地洛(nipradilol)计分一次或数次口服或非口服0.01～1000mg，更好是0.1～100mg。
实施例以下，例举实施例详细地说明本发明，但本发明并不限于此。
实施例1按照以下程序，对神经纤维再生促进作用进行了评价。
1、麻醉用笑气(0.5L/min)、氟烷(1～1.5％)、氧气(1L/min)的混合气体将成年猫麻醉，固定于脑定位固定装置。在腹腔内和皮下分别注射4mg硫酸阿托品和20万单位青霉素。
2、尼普地洛(nipradilol)的注入用25G的注射针在左眼球的锯齿缘后方的巩膜开了一个小孔。按照如下要求调整浓度，溶解于林格氏液，该要求是，将玻璃体的体积作为平均2.7ml，尼普地洛(nipradilol)的玻璃体内浓度达到1×10-7mol/L。用10μL Hamilton注射器将10μL水溶液从小孔注入玻璃体内。此外，还准备了不注入尼普地洛(nipradilol)的一组作为对照例。
3、视神经的切断和末梢神经移植从同一个体的大腿部取出腓总神经(40～50mm长)。为了便于4.的标记，在距中枢端10mm和20mm的位置用10-0缝合线做了标记。注入尼普地洛(nipradilol)30～60分钟后，在眼球后方(紧靠着眼球)将视神经完全切断，在断端缝合了腓总神经。另一端留置在肌肉内。
4、再生细胞的标记移植末梢神经24天后[至第4周的第4天前]，或者38天后[至第6周的第4天前]，在麻醉状态下通过解剖暴露移植神经。由10-0缝合线引导，将移植神经在距接合部20mm处切断，在断端放置红色的荧光色素dexstran-rhodamine(葡聚糖-若丹明)的粉末，用10-0缝合线缝合。2天后(至实验处理的第2天前)，将移植神经在距接合部10mm处切断，在断端放置黄色的荧光色素dexstran-fluorescein(葡聚糖-荧光黄)的粉末，用10-0缝合线缝合。
5、估计总细胞数移植末梢神经4周或6周后，将猫用戊巴比妥钠进行深度麻醉，摘出左眼球。在Ames培养液中摘出视网膜，用3％多聚甲醛-磷酸缓冲液固定。
将视网膜密封入PermaFluor，制作进展标本，用荧光显微镜求出总细胞数和双重标记率。即，以1mm的间隔，对480μm正方形内的fluorescein标记细胞(将轴索伸长了10～20mm的细胞、10R)及被fluorescein和rhodamine两者标记的细胞(将轴索伸长了20mm以上的细胞、20R)进行了计数，估计出了总细胞数。将20R/10R作为双重标记率，以此作为轴索伸长速度的指标。总细胞数的结果及双重标记率的结果示于表1。
表1
如表1所示，对照例的总细胞数在移植末梢神经4周后及6周后分别为2139±795个、3678±313个，与此相对，通过将尼普地洛(nipradilol)(最终浓度1×10-7mol/L)注入玻璃体内，总细胞数在4周后平均为8963个，在6周后增加到11278±5568个。此外，20R/10R表示在将轴索再生了10mm以上的细胞中再生了20mm以上的比例，如表1所示，对照例视网膜的20R/10R在4周后及6周后分别为17±4％及65±10％，而在玻璃体内注入了尼普地洛(nipradilol)(最终浓度1×10-7mol/L)的视网膜，在4周后及6周后分别上升到38％及77±14％。从表1的结果可以确认，尼普地洛(nipradilol)促进了轴索再生。
权利要求
1.神经纤维再生促进剂，其特征在于，以3，4-二氢-8-(2-羟基-3-异丙胺基)丙氧基-3-硝酰基-2H-1-苯并吡喃为有效成分。
2.根据权利要求1所述的神经纤维再生促进剂，其特征在于，神经纤维是中枢神经纤维。
3.根据权利要求2所述的神经纤维再生促进剂，其特征在于，中枢神经纤维是视神经纤维。
4.3，4-二氢-8-(2-羟基-3-异丙胺基)丙氧基-3-硝酰基-2H-1-苯并吡喃在制造神经纤维再生促进剂的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，神经纤维是中枢神经纤维。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，中枢神经纤维是视神经纤维。
7.促进神经系统疾病患者的神经纤维再生的方法，其特征在于，投入3，4-二氢-8-(2-羟基-3-异丙胺基)丙氧基-3-硝酰基-2H-1-苯并吡喃的有效量。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，神经纤维是中枢神经纤维。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，中枢神经纤维是视神经纤维。
全文摘要
本发明涉及以3，4－二氢－8－(2－羟基－3－异丙胺基)丙氧基－3－硝酰基－2H－1－苯并吡喃为有效成分的神经纤维再生促进剂。
文档编号A61K31/353GK1708299SQ20038010197
公开日2005年12月14日 申请日期2003年10月23日 优先权日2002年10月24日
发明者渡部眞三 申请人:兴和株式会社