专利名称：抗肿瘤天然营养剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗肿瘤天然营养剂，尤其涉及一种从牛奶乳清中制备的具有抗肿瘤作用的生物活性物质的方法，可广泛应用于防治多种恶性肿瘤。
发明技术背景恶性肿瘤是严重影响人类身体健康的疾病，尽管目前有很多化学药物都具有抗肿瘤作用，但是，毒副作用通常也较大，因此，发现有效对抗肿瘤的天然物质，在应用于治疗恶性肿瘤时，可以减少毒副作用对患者的伤害，长期应用安全可靠。
日本流行病学研究(R.K.Cameron，et al.Grann.，69679，1981)证实，经常喝牛奶的人群，胃癌发病率明显降低。美国科学家报导，经常饮用牛奶的人群结肠癌发病率明显降低。动物实验证实，应用酸奶产品可以抑制肿瘤细胞的生长繁殖(G.W.Reddy，et al.，J.Natil，cancer Inst.，50815，1973)。
脱脂牛奶中含有两种胆固醇合成抑制剂，一种是乳酸，另一种是羟基茂酸盐复合物转化为胆固醇的抑制剂(Inhibitor of Mevalonate Incorporation into Cholesterol，IMIC)，具有抑制内源性胆固醇合成的作用(A.A.Anmed，et al.，Atherosclerosis，32347，1979)，IMIC被发现具有抑制肿瘤细胞生长的作用，其机理可能是通过抑制内源性胆固醇合成，而阻止合成肿瘤细胞膜，从而抑制肿瘤细胞生长。IMIC存在于牛奶的乳清中，其分子量约165～230，通常并不单独存在，而是粘附在牛奶的蛋白腙-蛋白胨等蛋白质上，在酸性环境下稳定。
本发明所要解决的技术问题是，从牛奶的乳清中制备具有抗肿瘤作用的胆固醇合成抑制剂，并应用于防治多种恶性肿瘤。
发明内容
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案，其特征是，以牛奶为原料，用酸剂调PH至4.6～4.8，加热凝固酪蛋白，以离心或过滤方式去除已凝固的酪蛋白，加热凝集乳清蛋白，采用离心方式去除，收集的上清液用超滤方式反复过滤浓缩，冷冻干燥制备富含具有抗肿瘤作用的胆固醇合成抑制剂，应用于防治多种恶性肿瘤。
本发明的技术特征是，牛奶以离心方式脱脂，用酸剂调PH至4.6～4.8，加热35℃～50℃，持续20～40分钟，使酪蛋白凝集，用离心方式或滤布过滤方式去除已凝集的酪蛋白，离心速度4,000～6,000rpm/分，离心时间为10～30分钟。
本发明的技术特征是，收集已去除酪蛋白的乳清加热至80℃～100℃，维持30～60分钟，然后降温至2℃～8℃，维持约10～12小时，沉淀乳清蛋白，用分子量为0.1～0.4mu.m的微滤膜滤除已凝集的乳清蛋白。
本发明的技术特征是，已去除乳清蛋白的上清液，用分子量为500～1,000D的超微滤膜，在交错切面流体超滤设备上进行超滤分离浓缩，超滤浓缩物反复加双蒸馏水稀释后继续超滤分离浓缩，重复4～6次，超滤分离时温度在100～120°F。
本发明的技术特征是，超滤浓缩物可以贮存在冷冻环境下保存，进行进一步分离，或直接进行冷冻干燥制备冷冻干粉，内含丰富的具有抗肿瘤作用的胆固醇合成抑制剂。
本发明的技术特征是，为了获得更高纯度的制剂，可以采用层析柱进行进一步分离，将超滤浓缩物过柱，用硫磺酸溶液洗脱后，洗脱液冷冻干燥，获得更高纯度的产品。
本发明的技术特征是，本发明方法制备的具有抑制恶性肿瘤细胞生长作用的天然营养成分，是羟基茂酸盐转化为胆固醇的抑制剂，通过抑制内源性胆固醇合成，阻碍肿瘤细胞膜生成，从而抑制肿瘤细胞生长，它存在于牛奶中，分子量约165～230，通常粘附在牛奶的蛋白腙-蛋白胨碎片上，不会被透析，属于一种水溶性物质，在酸性环境下稳定，具有抑制胆固醇合成的功能。
本发明的技术特征是，本发明方法制备的具有抑制肿瘤细胞生长作用的天然营养成分，用紫外光谱仪测试时，在中性或酸性环境下，最大吸收波长为207nm和278nm，在基础溶液中为223nm和290nm，在Biorad Aminex 87WX树脂层析柱(30cm.times.7.9mm)上采用高效液相层析术，用0.05NH.Sub.2 So.sub.4作为流动相，以0.7ml/每分钟的流速洗脱时，其生物活性高峰在洗脱储留时间约7.0～8.0分钟。
本发明的技术特征是，本发明方法制备的抗肿瘤天然营养剂，发挥其有效作用的剂量为1～10mg/每公斤体重/每天，最好的剂量为2～4mg/每公斤体重/每天，对于一个体重70公斤的成年人来说，每天的剂量约70mg～700mg，施用的最好途径是口服，可以单独应用，或联合其他抗肿瘤药物联合应用，长期应用无毒副作用。
本发明的技术特征是，本发明方法制备的抗肿瘤天然营养剂，可以直接服用，制备成口服液服用，或与其他医药等级的辅料混合后，制备成片剂、胶囊剂、冲剂、丸剂、软胶囊剂、乳剂、水剂、散剂、油剂应用，还可以作为食品添加剂制备强化型食品应用，包括但不限于奶粉、奶茶、速溶茶、速溶咖啡、饼干、糕点、果冻、布丁等。
本发明的技术特征是，本发明方法制备的抗肿瘤天然营养剂，可以应用于预防和治疗多种恶性肿瘤，包括但不限于白血病、淋巴瘤、支气管肺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、黑色素瘤和乳腺癌等，既可以用来预防肿瘤的发生，也可以与化疗、放疗联合治疗各种肿瘤，尤其可以用来治疗手术后的肿瘤病人，防止肿瘤细胞转移和复发。
本发明的有益效果是，应用天然营养成份对抗肿瘤，在抑制恶性肿瘤细胞生长时，不伤害正常器官和组织，长期服用无毒副作用。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明实施例1从牛奶中制备抗肿瘤天然营养剂取120升脱脂牛奶，用1N HCL调PH至4.6，加热45℃持续30分钟，看到乳水分离，用离心机以5,000rpm/分速度离心20分钟，去除酪蛋白，收集的上清液加热到100℃持续60分钟，然后降温至4℃，静置10小时，用0.4mu.m的微滤膜滤除凝集的乳清蛋白，应用交错切面流体超滤装置(TFF装置，美国Pall公司生产制造)，用分子量为1,000D的超滤膜，入口压力为50PSI，出口压力为20PSI，温度为100°F，收集超滤浓缩物加3倍量温水重复超滤过程，共重复五次，滤除乳糖、矿物质和其他可溶性物质，收集超滤浓缩物，冷冻贮存。
取1克固定的冷冻干燥超滤浓缩物溶解在100ml溶液中，溶液内甲醇∶甲酸∶水＝70∶20∶10，溶液采用超声波混合4小时，再冷冻4小时，然后以1000克的离心力，在4℃温度下离心25分钟，过滤上清液，用旋转或蒸发干燥成干粉，内含丰富的抗肿瘤天然营养成份。
实施例2体外观察抑制肿瘤细胞生长作用P388白血病细胞接种在15ml带10％FBS的RPMI 1640培养液内，在32℃温度下培养48小时，48小时后，非接触生长的细胞从培养瓶中移除，并加入新的培养液，培养瓶内细胞浓度为10.sup.6cells/ml，用RPMI稀释到10.sup.5cells/ml，每48小时更换一次带10％FBS的新鲜RPMI 1640培养液，在培养96小时后，在培养基内加入实施例1制备的抗肿瘤天然营养剂2mg，继续培养96小时，用倒置显微镜观察，加入抗肿瘤天然营养剂的培养基内的98％～100％的P388白血病细胞被杀灭，而对照组P388白血病细胞则生长正常。
权利要求
1.本发明涉及-种抗肿瘤天然营养剂，尤其涉及一种从牛奶乳清中制备的具有抗肿瘤作用的生物活性物质的方法，可广泛应用于防治多种恶性肿瘤，其特征是，以牛奶为原料，用酸剂调PH至4.6～4.8，加热凝固酪蛋白，以离心或过滤方式去除已凝固的酪蛋白，加热凝集乳清蛋白，采用离心方式去除，收集的上清液用超滤方式反复过滤浓缩，冷冻干燥制备富含具有抗肿瘤作用的胆固醇合成抑制剂，应用于防治多种恶性肿瘤。
2.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，牛奶以离心方式脱脂，用酸剂调PH至4.6～4.8，加热35℃～50℃，持续20～40分钟，使酪蛋白凝集，用离心方式或滤布过滤方式去除已凝集的酪蛋白，离心速度4,000～6,000rpm/分，离心时间为10～30分钟，收集已去除酪蛋白的乳清加热至80℃～100℃，维持30～60分钟，然后降温至2℃～8℃，维持约10～12小时，沉淀乳清蛋白，用分子量为0.1～0.4mu.m的微滤膜滤除已凝集的乳清蛋白。
3.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，已去除乳清蛋白的上清液，用分子量为500～1,000D的超微滤膜，在交错切面流体超滤设备上进行超滤分离浓缩，超滤浓缩物反复加双蒸馏水稀释后继续超滤分离浓缩，重复4～6次，超滤分离时温度在100～120°F，超滤浓缩物可以贮存在冷冻环境下保存，进行进一步分离，或直接进行冷冻干燥制备冷冻干粉，内含丰富的具有抗肿瘤作用的胆固醇合成抑制剂。
4.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，为了获得更高纯度的制剂，可以采用层析柱进行进一步分离，将超滤浓缩物过柱，用硫磺酸溶液洗脱后，洗脱液冷冻干燥，获得更高纯度的产品。
5.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，本发明方法制备的具有抑制恶性肿瘤细胞生长作用的天然营养成分，是羟基茂酸盐转化为胆固醇的抑制剂，通过抑制内源性胆固醇合成，阻碍肿瘤细胞膜生成，从而抑制肿瘤细胞生长，它存在于牛奶中，分子量约165～230，通常粘附在牛奶的蛋白腙-蛋白胨碎片上，不会被透析，属于一种水溶性物质，在酸性环境下稳定，具有抑制胆固醇合成的功能。
6.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，本发明方法制备的具有抑制肿瘤细胞生长作用的天然营养成分，用紫外光谱仪测试时，在中性或酸性环境下，最大吸收波长为207nm和278nm，在基础溶液中为223nm和290nm，在Biorad Aminex 87 WX树脂层析柱(30cm.times.7.9mm)上采用高效液相层析术，用0.05 NH.Sub.2 So.sub.4作为流动相，以0.7ml/每分钟的流速洗脱时，其生物活性高峰在洗脱储留时间约7.0～8.0分钟。
7.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，本发明方法制备的抗肿瘤天然营养剂，发挥其有效作用的剂量为1～10mg/每公斤体重/每天，最好的剂量为2～4mg/每公斤体重/每天，对于一个体重70公斤的成年人来说，每天的剂量约70mg～700mg，施用的最好途径是口服，可以单独应用，或联合其他抗肿瘤药物联合应用，长期应用无毒副作用。
8.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，本发明方法制备的抗肿瘤天然营养剂，可以直接服用，制备成口服液服用，或与其他医药等级的辅料混合后，制备成片剂、胶囊剂、冲剂、丸剂、软胶囊剂、乳剂、水剂、散剂、油剂应用，还可以作为食品添加剂制备强化型食品应用，包括但不限于奶粉、奶茶、速溶茶、速溶咖啡、饼干、糕点、果冻、布丁等。
9.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，本发明方法制备的抗肿瘤天然营养剂，可以应用于预防和治疗多种恶性肿瘤，包括但不限于白血病、淋巴瘤、支气管肺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、黑色素瘤和乳腺癌等，既可以用来预防肿瘤的发生，也可以与化疗、放疗联合治疗各种肿瘤，尤其可以用来治疗手术后的肿瘤病人，防止肿瘤细胞转移和复发。
全文摘要
本发明涉及一种抗肿瘤天然营养剂，尤其涉及一种从牛奶乳清中制备的具有抗肿瘤作用的生物活性物质的方法，可广泛应用于防治多种恶性肿瘤，其特征是，以牛奶为原料，用酸剂调pH至4.6～4.8，加热凝固酪蛋白，以离心或过滤方式去除已凝固的酪蛋白，加热凝集乳清蛋白，采用离心方式去除，收集的上清液用超滤方式反复过滤浓缩，冷冻干燥制备富含具有抗肿瘤作用的胆固醇合成抑制剂，应用于防治多种恶性肿瘤。
文档编号A61K9/00GK1557472SQ200410016110
公开日2004年12月29日 申请日期2004年2月4日 优先权日2004年2月4日
发明者高春平 申请人:高春平