阿尔茨海默氏病和相关病症的治疗的制作方法

专利名称：阿尔茨海默氏病和相关病症的治疗的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗人体的方法和物质。具体地说，本发明提供治疗与脑内β-淀粉状肽沉着有关的疾病例如阿尔茨海默氏病，或预防或延迟与此类疾病有关的痴呆发病的方法。
阿尔茨海默氏病(AD)是最普遍的的痴呆形式。在AmericanPsychiatric Association(DSM-IV)出版的Diagnostic and StatisticalManual of Mental Disorders，第4版中对其诊断方法有论述。它是神经变性疾病，其临床特征在于记忆和综合认知功能进行性丧失，病理特征在于细胞外蛋白斑在患者大脑皮层和相关脑区域中沉着。这些斑主要包含β-淀粉状肽(Aβ)纤维聚集体。通过分别与β-促分泌酶(secretase)和γ-促分泌酶有关的胞外蛋白水解活动，由淀粉状前体蛋白(APP)形成Aβ。在γ-促分泌酶介导的蛋白水解部位上的变异导致产生不同链长度的Aβ，例如Aβ(1-38)、Aβ(1-40)和Aβ(1-42)。还在脑内发现N端平截例如Aβ(4-42)，可能由于β-促分泌酶介导的蛋白水解部位变异所致。为了方便，本文中使用的短语″Aβ(1-40)″和″Aβ(1-42)″包括这样的N端平截变种。分泌物进入胞外培养基后，初始可溶性Aβ形成最终导致不溶性沉淀的聚集体和致密神经炎性斑(denseneuritic plaques)，这种斑是AD的病理学特性。
与脑内Aβ沉着有关的其它痴呆病症包括脑淀粉状蛋白血管病、遗传性淀粉样变性脑出血、Dutch-type(HCHWA-D)、多梗死性痴呆、拳击员痴呆和唐氏综合征。
已有建议对斑形成过程进行各种干预以治疗AD(参见例如Hardy和Selkoe，Science，297(2002)，353-6)。提出的这种治疗的一个方法是例如通过抑制β-或γ-促分泌酶以阻断和减弱Aβ生成。也有报道称，抑制糖原合酶激酶-3(GSK-3)，尤其抑制GSK-3α可阻断Aβ生成(参见Phiel等Nature，423(2003)，435-9)。
其它建议的治疗方法包括给予阻断Aβ聚集的化合物；给予选择性结合Aβ的抗体。
另一种治疗模式是调节γ-促分泌酶作用以选择性减弱Aβ(1-42)生成。此导致Aβ的短链同工型优先分泌，据信其自我聚集和斑形成的倾向减少，因此更容易从脑内清除和/或神经毒性减小。表现出这种效果的化合物包括某些非甾体抗炎药(NSAIDs)及其类似物(见WO01/78721、美国专利2002/0128319和Weggen等Nature，414(2001)212-16；Morihara等，J.Neurochem.，83(2002)，1009-12；和Takahashi等，J.Biol.Chem.，278(2003)，18644-70)。也有报道称，调节PPARα和/或PPARδ活性的化合物有减少Aβ(1-42)的作用(WO 02/100836)。据报道，可释放一氧化氮的NSAID衍生物证实提高抗神经发炎作用和/或减少动物模型中脑内Aβ沉着(WO 02/092072；Jantzen等，J.Neuroscience，22(2002)，226-54)。
欧洲专利0234708、欧洲专利0307077和欧洲专利0300676公开了具有前列腺素和血栓烷拮抗剂作用的四氢咔唑1-链烷酸，据称，可作为细胞保护剂用于治疗哮喘、腹泻、高血压、心绞痛、血小板聚集、大脑性惊挛、早产、自然流产和痛经，并遏制环孢菌素引起的肾毒性。没有对Aβ分泌作用的公开或提示性报道，也没有治疗或预防AD或任何其它与脑内Aβ沉着有关的病症的任何效用的报道。
WO 01/79169、WO 02/08186和WO 03/062200公开了各种环烷并-吲哚前列腺素受体拮抗剂，但还是没有治疗AD或相关病症的功效的公开报道。
现发现某些四氢咔唑1-链烷酸和相关化合物具有选择性抑制Aβ(1-42)生成的需要的性质。
按照本发明，提供式I化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防与脑内β-淀粉状蛋白沉着有关的疾病的药物中的用途
其中V代表键、CH2或CH2CH2；X代表SO2或CHR3，其中R3是H或任选被以下基团取代的含最多达10个碳原子的烃基卤素、CF3、C1-4烷氧基或C1-4烷硫基；Y代表CO2H或四唑；Ar代表任选具有最多达3个取代基的苯基，所述取代基独立选自最多达6个碳原子的烃基和(CH2)m-Z，其中m是0、1或2，且Z代表卤素、N3、CN、CF3、OCF3、OR4、其中t是0、1或2的S(O)tR4、CO2R4、四唑、N(R4)2、NHCOR5、NHCON(R4)2、CON(R4)2、SO2N(R4)2、NHSO2R5、COR5或OCOR5；n是0、1、2或3；每个R1独立选自最多达6个碳原子的非芳族烃基和(CH2)q-W，其中q是0、1或2，且W代表卤素、CN、CF3、OR4、N(R4)2，其中t是0、1或2的S(O)tR4、CO2R4、四唑、CON(R4)2、SO2N(R4)2、COR5、OCOR5或苯基或杂芳基，苯基或杂芳基中的任一个任选具有最多达3个的选自以下的取代基卤素、CF3、OCF3、CN、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基或C1-4烷氧基羰基；每个R2独立是H或C1-4烷基；或一个R2基团与连接在同一个环位置上的R6基团一起作为-C(R2)2-Y部分形成3元-6元螺接烃环；R4代表H或任选被以下基团取代的最多达7个碳原子的烃基卤素、CN、CF3、OH、C1-4烷氧基或C1-4烷氧基羰基；或与同一氮原子连接的两个R4基团可形成5元或6元杂环；R5代表除H以外的R4；p是0、1或2；和
R6代表C1-6烷基、C2-6链烯基或苯基、苄基或杂芳基，所述苯基、苄基或杂芳基任选具有最多达3个的选自以下的取代基卤素、CN、CF3、OCF3、OR4、CO2R4、COR5、OCOR5和C1-4烷基；或R6基团与R2基团一起可形成定义同前的螺接烃环。
在本发明的一个具体的实施方案中，每个R2独立是H或C1-4烷基。
在一个分实施方案中，V代表CH2；X代表SO2或CHR3，其中R3是H或C1-6烷基；Ar代表任选具有最多达3个取代基的苯基，所述取代基独立选自最多达6个碳原子的非芳族烃基和(CH2)m-Z，其中m是0、1或2，Z代表卤素、N3、CN、CF3、OR4、其中t是0、1或2的S(O)tR4、CO2R4、四唑、N(R4)2、NHCOR5、NHCON(R4)2、CON(R4)2、SO2N(R4)2、NHSO2R5、COR5或OCOR5；每个R1独立选自最多达6个碳原子的非芳族烃基和(CH2)q-W，其中q是0、1或2，和W代表卤素、CN、CF3、OR4、其中t是0、1或2的S(O)tR4、CO2R4、四唑、CON(R4)2、SO2N(R4)2、COR5、OCOR5，或任选被卤素、CF3、CN、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C1-4烷氧基羰基取代的苯基；R4代表H或最多达7个碳原子的任选被以下基团取代的烃基卤素、CN、CF3、OH、C1-4烷氧基或C1-4烷氧基羰基；R6代表C1-6烷基、C2-6链烯基或苯基或苄基，所述苯基或苄基任选具有最多达3个选自以下的取代基卤素、CN、CF3、OR4、CO2R4、COR5、OCOR5和C1-4烷基；和Y、n、R2、R5以及p定义同前。
与脑内Aβ沉着有关的疾病典型的是阿尔茨海默氏病(AD)、脑淀粉状蛋白血管病、多梗死性痴呆、拳击员痴呆或唐氏综合征(Downsyndrome)，优选AD。
在第二个方面，本发明提供定义同上的式I化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗、预防或延迟与阿尔茨海默氏病、脑淀粉状蛋白血管病、HCHWA-D、多梗死性痴呆、拳击员痴呆或唐氏综合征有关的痴呆发病的药物中的用途。
本发明还提供治疗或预防与脑内Aβ沉着有关的疾病的方法，该方法包括给予有这种需要的患者治疗有效量的定义同上的式I化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供治疗、预防或延迟与阿尔茨海默氏病、脑淀粉状蛋白血管病、HCHWA-D、多梗死性痴呆、拳击员痴呆或唐氏综合征有关的痴呆发病的方法，该方法包括给予有这种需要的患者治疗有效量的定义同上的式I化合物或其药学上可接受的盐。
式I化合物调节γ-促分泌酶的作用以选择性减少Aβ(1-42)的同工型生成，而不明显减少短链同工型例如Aβ(1-40)生成。此导致分泌自我凝聚倾向较小的Aβ和形成不溶性沉淀，更容易从脑内清除和/或神经毒性较小。因此，本发明的另一方面提供延迟、抑制或预防脑内Aβ蓄积的方法，该方法包括给予有这种需要的患者治疗有效量的定义同上的式I化合物或其药学上可接受的盐。
因为式I化合物调节γ-促分泌酶的活性，以拮抗对所述活性的抑制，据信可获得上述治疗利益和减少副作用风险，例如可通过由中断γ-促分泌酶介导的其它活性例如Notch信号处理产生的那些。
在本发明的一个实施方案中，给予患有AD、脑淀粉状蛋白血管病、HCHWA-D、多梗死性痴呆、拳击员痴呆或唐氏综合征，优选AD的患者式I化合物。
在本发明的一个备选的实施方案中，给予患有轻度认知损害或老年性认知衰退的患者式I化合物。这种治疗的有利结果是预防或延迟AD发病。老年性认知衰退或轻度认知损害(MCI)是其中存在记忆力缺乏，但其它痴呆的诊断标准不存在的病症(Santacruz和Swagerty，American Family Physician，63(2001)，703-13)。(另参见″The ICD-10Classification of Mental and Behavioural Disorders″，GenevaWorldHealth Organisation，1992，64-5)。本文中使用的“老年性认知衰退”是指在至少6个月中，在以下的至少一个方面出现衰退记忆和学习；注意力和专心度；思考；语言；视觉空间功能和低于标准化神经心理学测试例如MMSE标准的1个以上标准差的得分。尤其是可能有进行性记忆衰退。在更严重的MCI病症中，记忆损害程度超出公认的不存在AD的患者的正常年龄范围。Petersen等在Arch.Neurol.，56(1999)，303-8中描述了MCI和轻度AD的诊断差异。Knopman等，Mayo Clinic Proceedings，78(2003)，1290-1308提供了有关MCI诊断差异的进一步信息。在年龄更大的患者研究中，Tuokko等(Arch，Neurol.，60(2003)577-82)发现出现MCI的患者在5年内发展为痴呆的风险增加3倍。
Grundman等(J.Mol.Neurosci.，19(2002)，23-28)报道，MCI患者的基础海马体积低是随后AD的预后指征。同样，Andreasen等(ActaNeurol.Scand，107(2003)47-51)报道高CSF水平总τ、高CSF水平磷酸(phospho)-τ和低CSF水平Aβ42均与MCI发展为AD的风险增加有关。
在该实施方案中，最好给予患有记忆功能损害但未出现痴呆症状的患者式I化合物。这种记忆功能损害的特征是不会导致全身性或脑疾病，例如垂体功能障碍造成的中风或代谢障碍。此类患者可能尤其发生在55岁或55岁以上年龄人群中，尤其在年龄60岁或60岁以上的人群，而优选在65岁或65岁以上人群中。此类患者可具有与其年龄相当的正常生长激素分泌形式和水平。但此类患者可具有一种或多种发展为阿尔茨海默氏病的其它风险因素。这些因素包括该疾病的家族史；该疾病的遗传诱因；高胆固醇血；和成年起病型糖尿病。
在本发明的一个具体的实施方案中，给予患有老年性认知衰退或MCI，另外还患有一种或多种选自以下的发展为AD的风险因素的患者式I化合物该疾病的家族史；该疾病的遗传诱因；高胆固醇血；和成年起病型糖尿病；高基础海马体积；高CSF水平总τ；高CSF水平磷酸-τ；和低CSF水平Aβ(1-42)。
遗传诱因(尤其针对早期AD发病)可从众多基因中的一个或多个基因包括APP、率老(presenilin)-1和率老-2基因上的突变点出现。纯合载脂蛋白的E基因ε4同工型的患者也有发展为AD的较大风险。
根据本发明，最好在固定时间间隔前、期间和/或疗程后评价患者认知衰退或损害的程度，以便检测其中的变化，例如减缓或终止认知衰退。本领域中已知多种用于该目的的神经心理测试，例如根据年龄和教育程度调至标准的Mini-Mental State Examination(MMSE)(Folstein等，J Psych.Res.，12(1975)，196-198；Anthony等，Psychological Med.，12(1982)，397-408；Cockrell等，Psychopharmacology，24(1988)，689-692；Crum等，J.Am.Med.Assoc′n.18(1993)，2386-2391)。MMSE是测量成人认知状态简略的定量方法。其可用于筛选认知衰退或损害；在具体的点及时评价认知衰退或损害的严重程度；追踪随时间推移个体的认知变化过程和记录个体对治疗的反应。另一个适宜的测试是Alzheimer Disease Assessment Scale(ADAS)，尤其是其认知要素(ADAS-cog)(参见Rosen等，Am.J.Psychiatry，141(1984)，1356-64)。
除另有所指外，当变量在式I或其取代基中出现一次以上，该变量的每次出现彼此独立。
本文中使用的短语“烃基”是指由只有碳原子和氢原子组成的基团。除另有所指外，这样的基团可包括单独的或用与指定碳原子最大数相同的任何组合的可以饱和或不饱和的直链、支链或环状结构，如果指定的碳原子最大数允许，也包括芳族结构。
本文中使用的短语“C1-x烷基”，其中x是大于1的整数，是指直链饱和烷基，其中碳原子成分的数目在1-x的范围内。具体的烷基是甲基、乙基、正丙基、异丙基和叔丁基。派生的短语例如“C2-6链烯基”、“羟基C1-6烷基”、“杂芳基C1-6烷基”、“C2-6炔基”和“C1-6烷氧基”应按相同方式看待，在此类基团中的碳原子数不超过6。
本文中使用的术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘，其中优选氟和氯。
本文中使用的术语“杂芳基”表示选自C、N、O和S的最多至10个环原子的环或多环系，其中构成环系的至少一个环是芳族，而其中芳环中的至少一个原子不是碳。优选不超过3个环原子不是碳。杂芳基的实例包括吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、咪唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基及其苯并稠合的类似物。适宜的杂芳环系的其它实例包括1，2，4-三嗪、1，3，5-三嗪、1，2，3，4-四氢喹啉和1，2，3，4-四氢异喹啉。优选5元或6元单环系，尤其吡啶或噻吩。
为在药物中使用，式I化合物可以为药学上可接受的盐的形式。但其它盐可用于制备式I化合物或其药学上可接受的盐。本发明化合物的适宜的药学上可接受的盐包括可通过本发明化合物溶液与以下药学上可接受的酸溶液混合形成的酸加成盐例如盐酸、硫酸、甲磺酸、苯磺酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、草酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸。另外，因为本发明化合物带有酸性部分，可通过用适宜的碱中和所述酸性部分形成药学上可接受的盐。由此形成的药学上可接受的盐的实例包括碱金属盐例如钠或钾盐；铵盐；碱土金属盐例如钙或镁盐；以及与适宜的有机碱形成的盐例如胺盐(包括吡啶鎓盐)和季铵盐。
当本发明化合物有至少一个不对称中心时，因而它们可能存在对映体。当本发明化合物具有两个或更多个不对称中心时，它们还可能存在非对映体。应理解所有此类异构体及其以任何比例形成的混合物均包括在本发明范围内。
在式I中，V代表键，CH2或CH2CH2。在一个具体的实施方案中，V代表CH2，和式I化合物是9-取代的-1，2，3，4-四氢咔唑-1-基乙酸衍生物。
X代表SO2或CHR3，其中R3代表H或定义同前的任选取代的最多至10个碳原子的烃基。优选X代表CHR3。R3的适宜含义包括H；烷基(尤其是C1-6烷基例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、2-甲基丙基、正丁基、3-甲基丁基和4-甲基戊基)；取代的烷基(例如甲氧基甲基、甲硫基甲基和3，3，3-三氟丙基)；链烯基(例如烯丙基)；环烷基(尤其是C3-6环烷基例如环丙基、环戊基和环己基)；环烷基烷基(例如环丙基甲基和环己基乙基)；芳基(例如苯基和4-三氟甲基苯基)和芳基烷基(例如苄基)。在一个具体的实施方案中，X代表CHR3，及R3是任选取代的2-10个碳原子烃基，优选2-6个碳原子，尤其是2-6个碳原子的烷基。优选的X的含义包括CH2、CHCH3、CHCH2CH3和CHCH2CH2CH3。
Y代表CO2H或四唑(尤其是1，2，3，4-四唑-5-基)，而优选代表CO2H。
Ar代表定义同前的任选取代的苯基。
由Ar代表的苯基任选具有最多达3个定义同前的取代基。当所述取代基包含用(CH2)m-Z代表的基团时，优选m是0或1，最优选0。当Ar代表单取代的苯基时，取代基适宜占据4位。适宜的取代基的实例包括卤素(尤其是Cl和F)、N3、CF3、OCF3、OH、OMe、SMe、NHCOMe、SO2Me、CO2H、CO2Me、C1-4烷基(例如甲基、乙基、正丙基和异丙基)、CON(Me)2、COMe、SO2N(Me)2、NHSO2Me和NHCONHMe。优选的取代基包括Cl、F、N3、OCF3、CF3和OMe。
Ar代表的基团的具体实例包括苯基、4-氯苯基、4-三氟甲基苯基、4-氟苯基、4-叠氮苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲氧基苯基、2，4-二(三氟甲基)苯基、3，4-二氯苯基、2，4-二氯苯基、2，4，6-三氟苯基和4-碘苯基，其中尤其优选4-氯苯基和4-三氟甲基苯基。
在式I中，n是0、1、2或3，但优选0、1或2，最优选1或2。每个R1基团独立选自最多达6个碳原子的非芳烃和(CH2)q-W，其中q是0、1或2，而W定义同前。优选q是0或1，而最优选q是0。R1代表的非芳烃基非常适合为直链或支链C1-6烷基例如甲基、乙基、正丙基、异丙基和叔丁基，其中尤其优选甲基、异丙基、正丁基和叔丁基；或C3-6环烷基例如环丙基和环己基。W代表的基团的实例包括卤素(尤其是F、Cl和Br)、CN、CF3、OMe、SMe、S(O)Me、SO2Me、N(R4)2(尤其其中R4基团形成杂芳环例如吡咯烷、哌啶或吗啉)和任选取代的苯基或杂芳基。优选的W代表的杂芳基实例包括吡啶基(尤其是3-吡啶基)和噻吩(例如3-噻吩基)。优选的W代表的取代的苯基实例包括4-氟苯基、3，4-二氯苯基、3-甲硫基苯基、2，5-二甲基苯基和3-三氟甲氧基苯基。优选的R1的含义包括包括甲基、乙基、异丙基、正丁基、叔丁基、环丙基、Br、Cl、F、CN、CF3、OCH3、OCF3、SCH3、吗啉-1-基、4-氟苯基、3，4-二氯苯基、3-甲硫基苯基、2，5-二甲基苯基和3-三氟甲氧基苯基。
每个R2独立是H或C1-4烷基例如甲基、乙基或丙基。优选一个R2是H，而另一个是H或烷基。最优选两个R2基团均为H。另外，当p不为0时，一个R2基团与在同一个环位置上连接的R6基团一起作为-C(R2)2-部分形成3元-6元螺接烃环例如环丙基。
当出现时，R6代表直链或支链C1-6烷基(优选C1-4烷基)例如甲基、乙基、正丙基、异丙基或叔丁基、C2-6链烯基例如乙烯基或烯丙基，或定义同前的任选取代的苯基、杂芳基或苄基。优选的取代基包括卤素(尤其是Cl或F)、OCH3、OCF3、CF3和C1-4烷基(例如甲基)。优选的杂芳基是吡啶基，尤其是3-吡啶基。R6代表的基团的实例包括甲基、异丙基、乙烯基、3-吡啶基、苯基、4-氯苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、4-氟-3-甲基苯基、4-甲氧基苯基、3，4-二氯苯基、3，4-二氟苯基和2，5-二甲基苯基。R6基团可与环上任何可利用的位置连接，包括与常有-C(R2)2-Y部分的碳原子和包括在V中的任何碳原子连接。当存在两个R6基团时，它们可以相同或不同，并且可连接在相同或不同的环位置上。当p是2时，优选仅一个R6基团是任选取代的苯基、杂芳基或苄基。另外，R6基团可与R2结合形成定义同前的螺接环。
适用于本发明的化合物的具体实例包括式I9-取代的-1，2，3，4-四氢咔唑-1-基乙酸衍生物，其中V是CH2，而Y是CO2H，其余的变量如下表所示。
表1
式I化合物一个亚组由式II定义
其中V、X、n、p、R1、R2和R6定义同前和具有同前优选的含义。
除其中V是CH2，X是CH2，p是0，每个R2是H和(R1)n代表6，8-二氟的化合物外，相信其中V是CH2或CH2CH2的式II化合物及其药学上可接受的盐是新的，因而构成本发明的另一方面。本发明还延伸至包含在药学上可接受的载体中的其中V是CH2或CH2CH2的式II化合物或其药学上可接受的盐的药用组合物，其中V是CH2，X是CH2，p是0，每个R2是H，(R1)n代表6，8-二氟的化合物除外。
在式II中，优选X是CHR3，尤其是CH2、CH(Me)、CH(Et)或CH(Pr)。尤其优选的实例包括化合物{6-异丙基-9-[1-(4-三氟甲基苯基)乙基]-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基}-乙酸；和{6-异丙基-9-[1-(4-三氟甲基苯基)丙基]-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基}-乙酸；和{6-异丙基-9-[1-(4-三氟甲基苯基)丁基]-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基}-乙酸。
其中p是1或2，及至少一个R6代表C2-6链烯基或前述任选取代的苯基、杂芳基或苄基的式I化合物也是新的，而所述化合物、其药学上可接受的盐，和包含它们的药用组合物构成本发明的另一方面。在本文中，优选V是CH2，优选p是1和优选R6是任选取代的苯基，例如与四氢咔唑环的3位或4位连接的苯基或4-氟苯基。
式I化合物的另一新的亚组由式III定义 其中R3a代表含2-10个碳原子的烃基，该烃基任选被卤素、CF3、C1-4烷氧基或C1-4烷硫基取代；和V、Y、Ar、n、p、R1、R2和R6具有与先前相同的定义和优选的含义，前提是R1不代表SOR4或SO2R4。
式III化合物及其药学上可接受的盐构成本发明的又一方面。本发明还延伸至包含式III化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药用组合物。
在式III化合物中，R3a非常适合代表C3-6烷基，尤其是正丙基。V非常适合为CH2。Ar非常适合为4-三氟甲基苯基。优选Y是CO2H。优选至少一个R2是H，而最优选两个R2基团都代表H。
式III化合物的具体实例包括9-取代的-1，2，3，4-四氢咔唑-1-基乙酸衍生物，其中V代表CH2，Y代表CO2H，Ar代表4-三氟甲基苯基，每个R2是H(除另有所指外)，而其它变量如表2中所示表2
*和R2一起具体式III化合物的另一个实例包括下式的那些，其中各变量示于表3中
表3
本领域技术人员会理解，在式III中，与R3a连接的碳原子和与C(R2)2-Y连接的碳原子均是手性中心，因此，相关化合物存在至少两个非对映体和至少四个对映体
其中V、Y、Ar、n、p、R1、R2、R3a和R6的含义同前。
应理解所有作为纯化合物或以任何比例形成的异构体的混合物均包括在本发明范围内。
其中X是SO2的式I化合物可通过使化合物(1)与ArSO2Cl反应制备 其中V、Ar、Y、n、p、R1、R2和R6的含义同前。该反应在碱例如三乙胺存在下，在非质子溶剂中进行。
其中X是CHR3的式I化合物可通过用ArCH(R3)-L使式(1)化合物N-烷基化制备，其中L是离去基团例如Cl、Br、I、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或三氟甲磺酸酯，而Ar和R3的含义同前。在约0℃下，可通过用强碱例如氢化钠或叔丁醇钾在DMF溶液中处理式I化合物，然后加入ArCH(R3)-L并升温至环境温度进行N-烷基化。
式(1)化合物可通过熟知的Fischer吲哚合成路线制备，该路线涉及使肼(2)与酮(3)缩合 其中V、Y、n、p、R1、R2和R6的含义同前。该反应可通过在低级链烷醇中回流进行。
式(1)化合物的另一个途径涉及酮(3)与碘代苯胺(4)反应 其中n和R1的含义同前。该反应在DMF溶液中，在Si(OEt)4和酸例如甲苯磺酸的存在下进行，然后用乙酸钯和Hunig′s碱处理。
也可通过Fischer吲哚路线，用式(5)肼代替式(2)肼直接制备其中X是CHR3的式I化合物 其中Ar、n、R1和R3的含义同前。欧洲专利0234708公开了用于其中V是CH2的酮(3)的Fischer吲哚路线的详细方法。这些方法同样适用于其中V是键或CH2CH2的酮(3)。
优选的其中p是1和R6如以下化合物(9)所示连接的式I化合物的路线包括氧化其中p是0的化合物(1)，形成酮(6a)，随后用ArSO2Cl处理，得到磺酰胺(6b) (a)R＝H(b)R＝SO2Ar随后转化为相应的三氟甲磺酸烯醇酯(7) 随后用R6-B(OH)2处理，得到式(8)化合物 随后经氢化，得到式(9a)化合物
(a)X＝SO2(b)X＝CHR3其中Tf代表三氟甲磺酰基(triflyl)，而n、R1、R2、R6、V、Y和Ar的含义同前。
在以上流程中，R6非常适合代表苯基或取代的苯基例如4-氟苯基。
可用DDQ的THF水溶液，在约0℃下氧化形成酮(6a)，而ArSO2Cl处理可按前述实施。在THF中，在低温(例如-78℃)下，在强碱(例如六甲基二甲硅烷叠氮化锂(lithium hexamethyldisilazide)和在N-苯基二(三氟甲磺酰亚胺)的存在下，形成三氟甲磺酸酯(7)。可在二氧六环中，在约80℃下，在磷酸钾和Pd(PPh3)4的存在下，用R6-B(OH)2处理。氢化可在Pd/C催化剂的存在下，在乙酸乙酯中进行。
可通过用钠汞齐和NaH2PO4处理其中Ar是4-甲基苯基的化合物(8)，随后用其中L是离去基团例如Cl、Br、I、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或三氟甲磺酸酯，而R3的含义同前的ArCH(R3)-L使脱甲苯磺酰化产物N-烷基化，然后如前氢化制备相应的(9b)化合物(其中X代表CHR3)。可在环境温度下，在THF-甲醇混合物中用钠汞齐和NaH2PO4处理。可通过在约0℃下，用氢化钠在DMF中处理脱甲苯磺酰化产物，然后加入ArCH(R3)-L并升温至环境温度进行N-烷基化。
在上述所有化学处理期间，优选将Y代表的羧酸基团保护为甲基酯或乙基酯，通过在最终步骤中例如用LiOH的THF水溶液水解再生为游离酸。
因为式I化合物具有至少一个不对称中心，所以它们存在对映体。如果需要，通过常规方法分离为纯形式的单一对映体。例如，可通过制备型手性HPLC或通过用旋光纯胺处理，形成可通过分级结晶分离的非对映体的盐对，将外消旋混合物拆分为其组分对映体，旋光纯酸可从其中再生。同样，外消旋酸可与旋光纯的醇或胺反应，形成可通过层析或分级结晶分离的非对映体酯或酰胺对，水解后得到对映体纯的酸。这些拆分技术可同样在式I化合物的合成前体上实施，而得到的旋光纯中间体用于制备旋光纯形式的式I化合物。
能够提供单一对映体例如式IIIA、IIIB、IIIC或IIID中的那些对映体(其中Y是CO2H，两个R2基团都是H)的优选的合成路线涉及使肼(5a)或5(b)与丙烯酸衍生物(10)缩合，分别形成(11a)或(11b)，随后不对称氢化外向环双键 其中V、Ar、n、p、R1和R6的含义同前，而R3b是不为H的R3。优选在回流的异丙醇中，在甲苯磺酸和分子筛的存在下，用过量的(10)进行缩合。优选氢化在低级链烷醇例如甲醇中，经其中BINAP是二(二苯膦基)-1，1′-联萘的手性Ru(BINAP)Cl2催化剂进行。优选经Ru(S-BINAP)Cl2氢化(11a)。
可通过分别用手性溴化物(12a)和(12b)使肼(2)烷基化，得到手性肼(5a)和(5b)，通过用四溴化碳和三苯膦处理手性醇(13a)和(13b)又可分别得到手性溴化物(12a)和(12b) 该烷基化可在强碱例如六甲基二甲硅烷叠氮化钠(sodiumhexamethyldisilazide)的存在下，在THF中进行。该溴化通常在二氯甲烷溶液中进行。
可通过不对称还原其中Ar和R3b的含义同前的Ar-CO-R3b酮得到手性醇(13a)和(13b)。可使用任何适宜的手性还原剂，但在优选的方法中，在手性噁唑硼烷(oxazaborolidine)(OAB)催化剂存在下，用硼实现还原(见Corey，Angew，Chem.Int.Ed.Engl.，37(1998)，1986)。该反应可在-30℃下，在二氯甲烷/甲苯混合物中进行。(R)-OAB的用途是提供醇(13a)和(最后)肼(5a)。(S)-OAB的用途是提供醇(13b)和(最后)肼(5b)。
通常以含一种或多种式I化合物和药学上可接受的载体的药用组合物的形式使用式I化合物。优选这些组合物为单位剂型，例如片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、无菌肠胃外溶液剂或混悬剂、定量气雾剂或液体喷雾剂、滴剂、安瓿剂、透皮贴剂、自动注射器装置或栓剂；用于口服、肠胃外、鼻内、舌下或直肠给药，或用于吸入或吹入给药。通常将主要的活性成分与药用载体例如常用压片成分例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁和磷酸氢二钙，或树胶、分散剂、悬浮剂或表面活性剂例如司盘-60和聚乙二醇，和其它药用稀释剂例如水混合，形成均匀的含本发明化合物或其药学上可接受的盐的预制剂组合物。当称这些预制剂组合物均匀时，是指活性成分均匀地分散在整个组合物中，以便组合物可易于细分为相同有效的单位剂型，例如片剂、丸剂和胶囊剂。然后将该预制剂组合物细分为含0.1-约500mg本发明活性成分的上述类型的剂型。典型的单位剂型含1-100mg，例如1、2、5、10、25、50或100mg活性成分。可将片剂或丸剂组合物包衣，或另外配制成可提供长效作用优势的剂型。例如，片剂或丸剂可包含内剂量和外剂量组分，后者是前者的保护层。两种组分可通过肠溶层分隔，肠溶层用作阻止在胃中崩解，而使内组分完全通过进入十二指肠，或被延迟释放。多种物质可用于此类肠溶层或包衣，此类物质包括多种高分子酸和高分子酸和此类物质如虫胶、鲸蜡醇以及醋酸纤维素的混合物。
用于口服或注射给药的其中可合为一体的可用于本发明的组合物的液体形式包括水溶液、液体或凝胶填充胶囊、适当矫味的糖浆、水或油混悬液、含有食用油例如绵子油、芝麻油、椰子油或花生油的芳香乳剂和酏剂和类似的药用溶媒。水混悬液的适宜的分散剂或悬浮剂包括合成和天然树胶例如黄蓍胶、阿拉伯胶、藻酸盐、右旋糖酐、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚(乙二醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)或明胶。
用于治疗或预防阿尔茨海默氏病时，适宜的剂量水平是每日约0.01-250mg/kg，优选每日约0.01-100mg/kg，而更优选每日约0.05-50mg/kg体重的活性化合物。该化合物可按每日1-4次给药方案给予。但在某些情况中，可使用这些限度以外的剂量。
可任选式I化合物与一种或多种其它可用于治疗或预防AD或其症状的已知化合物联用。而这样的其它化合物包括益智药例如乙酰胆碱酯酶抑制剂(例如多奈哌齐和加兰他敏)、NMDA拮抗剂(例如美金刚)或PDE4抑制剂(例如ArifloTM和在WO 03/018579、WO01/46151、WO 02/074726和WO 02/098878中公开的一类化合物)。这样的其它化合物还包括降胆固醇药例如它汀类例如辛伐他汀。这样的其它化合物同样包括限制脑内Aβ生成或处理的已知化合物(“淀粉状蛋白改性剂”)，例如抑制Aβ分泌的化合物(包括γ-促分泌酶抑制剂、β-促分泌酶抑制剂和GSK-3α抑制剂)、抑制Aβ凝聚的化合物和与Aβ选择性结合的抗体。
在本发明的这个实施方案中，淀粉状蛋白改性剂可以是抑制Aβ分泌的化合物，例如γ-促分泌酶抑制剂(例如在WO 01/53255、WO01/66564、WO 01/70677、WO 01/90084、WO 01/77144、WO 02/30912、WO 02/36555、WO 02/081435、WO 02/081433、WO 03/018543、WO03/013506、WO 03/013527、W003/014075、WO 03/093252、WO03/093264、WO 03/093251、WO 03/093253、WO 2004/039800和WO2004/039370中公开的那些)，或β-促分泌酶抑制剂(例如在WO03/037325、WO 03/030886、WO 03/006013、WO 03/006021、WO03/006423、WO 03/006453、WO 02/002122、WO 01/70672、WO02/02505、WO 02/02506、WO 02/02512、WO 02/02520、WO 02/098849和WO 02/100820中公开的那些)，或抑制形成和释放Aβ的任何其它化合物包括在WO 98/28268、WO 02/47671、WO 99/67221、WO01/34639、WO 01/34571、WO 00/07995、WO 00/38618、WO 01/92235、WO 01/77086、WO 01/74784、WO 01/74796、WO 01/74783、WO01/60826、WO 01/19797、WO 01/27108、WO 01/27091、WO 00/50391、WO 02/057252、美国专利2002/0025955和美国专利US2002/0022621中公开的那些，还包括GSK-3抑制剂，尤其是GSK-3a抑制剂例如Phiel等在Nature，423(2003)，435-9公开的锂。
在该实施方案中，淀粉状蛋白改性剂最好是γ-促分泌酶抑制剂，其中优选的实例包括式XI化合物或其药学上可接受的盐
其中m、R1b、R1c、Z、Ar1和Ar2定义同WO 03/018543。
此类化合物可按WO 03/018543所述制备。优选的实例包括式XIa定义的那些化合物 及其药学上可接受的盐，其中m是0或1，X是Cl或CF3，而Y是OH、OC1-6烷基、NH2或NHC1-6烷基。具体实例包括其中m是1，而Y是OH(或其钠盐)的那些化合物和其中m是0，而Y是NH2或NHC1-6烷基的那些化合物。
用于本发明的该实施方案的另一类优选的γ-促分泌酶抑制剂是式XII定义的那些化合物或其药学上可接受的盐 其中X和R如在WO 03/093252中所定义。
X非常适合是5-取代的-噻唑-2-基、5-取代的-4-甲基噻唑-2-基、5-取代的-1-甲基吡唑-3-基、1-取代的-咪唑-4-基或1-取代的-1，2，4-三唑-3-基。优选R代表任选取代的苯基或杂芳基例如苯基、一卤代苯基、二卤代苯基、三卤代苯基、氰基苯基、甲苯基、甲氧基苯基、三氟甲基苯基、三氟甲氧基苯基、吡啶基、一卤代吡啶基和三氟甲基吡啶基，其中“卤代”是指氟或氯。特别优选的R-X-的含义包括5-(4-氟苯基)-1-甲基吡唑-3-基、5-(4-氯苯基)-1-甲基吡唑-3-基和1-(4-氟苯基)咪唑-4-基。此类化合物可通过在WO 03/093252中公开的方法制备。
另外，淀粉状蛋白改性剂可以是抑制Aβ凝聚的化合物。适宜的实例包括螯合剂例如氯碘羟喹(Gouras和Beal，Neuron，30(2001)，641-2)和在WO 99/16741中公开的化合物，尤其是被称为DP-109的化合物(Kalendarev等，J.Pharm.Biomed.Anal.，24(2001)，967-75)。适用于本发明的其它Aβ凝聚抑制剂包括在WO 96/28471、WO 98/08868和WO 00/052048中公开的化合物，包括称为ApanTM(Praecis)的化合物；在WO 00/064420、WO 03/017994、WO 99/59571中公开的化合物和称为AlzhemedTM的化合物(Neurochem)；WO 00/149281中公开的化合物和称为PTI-777和PTI-00703的组合物(ProteoTech)；WO 96/39834、WO 01/83425、WO 01/55093、WO 00/76988、WO 00/76987、WO00/76969、WO 00/76489、WO 97/26919、WO 97/16194和WO 97/16191中公开的化合物。
另外，淀粉状蛋白改性剂可以是与Aβ选择性结合的抗体。所述抗体可以是多克隆或单克隆的，但优选单克隆抗体，而且优选人或人源化抗体。优选所述抗体可螯合WO 03/016466、WO 03/016467、WO 03/015691和WO 01/62801中所述的生物体液中的可溶性Aβ。适宜的抗体包括人源化抗体266(WO 01/62801中所述)和WO03/016466中所述的其改良形式。
本文中使用的短语“联合”需要给予患者治疗有效量的式I化合物和其它化合物，但对实现此的方式无限制。因此，可将两种药物结合到单一剂型中同时给予患者，或可提供分开的剂型同时或序贯给予患者。可在较短或较长间隔时间内序贯给药，例如在早晨给予一种药物，而另一种药物在夜晚给予。可按相同频次或不同频次给予分开的药物，例如一种每日给予一次，而另一种每日给予两次或更多次。可通过相同途径或不同途径给予分开的药物，例如一种口服，而另一种肠胃外给予，如果可能，优选两种药物都通过口服给药。当其它的化合物是抗体时，通常将其与式I化合物分开通过肠胃外给药。
在另一个方面，本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐与式XI(a)化合物或其药学上可接受的盐的组合，用于治疗或预防与脑内β-淀粉状蛋白沉着有关的疾病。所述用途可涉及同时或分别给予有这种治疗或预防需要的患者各个化合物。
在另一个方面，本发明提供药用组合物，该组合物含药学上可接受的载体、式I化合物或其药学上可接受的盐和式XI(a)化合物或其药学上可接受的盐。优选该药用组合物为适宜口服给药的单位剂型，例如片剂或胶囊剂。
实施例用以下试验测定式I化合物选择性抑制Aβ(1-42)产生的能力细胞性γ-促分泌酶测定接种前，用丁酸钠(10mM)诱导过度表达直接γ-促分泌酶底物SPA4CT的人SH-SY5Y成神经细胞瘤细胞4小时。在96孔板上的无酚红的MEM/10％FBS，50mM HEPES，1％谷氨酰胺中，按35,000细胞/孔/100μl浓度接种细胞，然后在37℃、5％CO2下温育2h。
将待测化合物稀释到Me2SO中，得到10点剂量-反应曲线。通常，将10μl这些化合物的Me2SO稀释溶液再稀释到182μl稀释缓冲液中(无酚红的MEM/10％FBS，50mM HEPES，1％谷氨酰胺)，然后将10μl各个稀释度溶液加入到96孔板上的细胞中(得到的最终Me2SO浓度为0.5％)。用适当的溶媒和抑制剂对照确定该测定窗口。
在37℃、5％CO2下温育过夜后，分别将10μl和50μl培养基转移至新的Costar圆底96孔板中，用于检测Aβ(40)和Aβ(42)肽。将40μl Origen缓冲液(PBS，2％BSA，0.2％吐温-20)加入Aβ(40)孔中，随后向各孔中加入25μl各个抗体的预混合物Aβ(40)预混合液用Origen缓冲液稀释的1μg/ml钌化的G2-10抗体、4μg/ml生物素化的4G8抗体
Aβ(42)预混合液用Origen缓冲液稀释的0.5μg/ml钌化的G2-11抗体、4μg/ml生物素化的4G8抗体(生物素化的4G8抗体由SignetPathology Ltd提供；G2-10和G2-11抗体由Chemicon提供)在4℃下，测定板在摇床上过夜培养后，按生产商的说明校正Origen M8分析仪(Igen Inc.)。将25μl链霉抗生物素磁性珠(Dynal)预混合液(400μg/ml链霉抗生物素珠/ml的Origen缓冲液溶液)加入测定板中，在摇床上培养15分钟。将150μl Origen缓冲液加入各孔中，按生产商的说明在Origen M8分析仪上读板。
除去Aβ测定培养基后，按照生产商的说明，利用MTS(Owen氏试剂)生物还原为甲，通过细胞增殖比色测定(CellTiter 96TMAQ测定，Promega)测量相应细胞的细胞存活力。将5μl 10×MTS/PES快速加入到剩余的50μl培养基中，然后送回培养箱。～4小时后，在495nm处读出光密度。
通过非线性回归拟合分析，用适当的软件(例如Excel拟合)计算抑制Aβ(40)和Aβ(42)的LD50和IC50值。总信号和背景由相应的Me2SO和抑制剂对照定义。
上表1-3列出的化合物都提供了抑制Aβ(1-42)的IC50值，其至少比相应的抑制Aβ(1-40)的IC50值小2倍，典型地为至少小5倍，而在优选的案例中至少小50倍。
实施例1{6-异丙基-9-[1-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基}-乙酸
步骤1搅拌下，向4-异丙基苯肼盐酸盐(8.35g，45mmol)的乙醇(300ml)溶液加入2-环己酮乙酸乙酯(8.23g，45mmol)，将该混合物加热至回流16小时。冷却后，蒸发溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯(200ml)，用1N HCl(200ml)洗涤。水层再用乙酸乙酯(200ml)萃取，合并的有机液用盐水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发至干。残留物经柱层析纯化，用乙醚∶己烷(1∶3)洗脱，得到需要的四氢咔唑(5.1g)。
1H NMR(CDCl3)8.60(1H，br s)，7.29(1H，d，J＝1.0Hz)，7.21(1H，d，J＝8.5Hz)，7.01(1H，dd，J＝8.5，1.0Hz)，4.20(2H，q，J＝7.0Hz)，3.34(1H，m)，2.99(1H，七重峰，J＝7.0Hz)，2.71-2.54(4H，m)，2.05(1H，m)，1.95-1.75(2H，m)，1.69-1.57(1H，m)，1.30(6H，d，J＝7.0Hz)，1.28(3H，t，J＝7.0Hz).m/z＝300[MH]+步骤2向得自前述步骤的四氢咔唑(448mg，1.50mmol)的DMF(10ml)脱气溶液中加入叔丁醇钾(201mg，1.8mmol)。在环境温度下，搅拌得到的红/棕色溶液10分钟，然后加入1-(1-溴乙基)-4-三氟甲基苯(417mg，1.65mmol)的DMF(2ml)溶液。另搅拌2.75小时后，颜色退成浅黄色，加入2N HCl(50ml)猝灭反应。混合物用乙酸乙酯(2×100ml)萃取，合并的有机液再用2N HCl(100ml)、水(100ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发至干。残留物经柱层析纯化，用乙醚∶己烷(1∶6)洗脱，得到需要的N-苄基化的四氢咔唑(376mg)，为3∶2的非对映体混合物(分别以异构体A和异构体B表示)。1H NMR(CDCl3)7.56(2H，d，J＝8.5Hz，异构体B)，7.50(2H，d，J＝8.5Hz，异构体A)，7.33(3H[异构体B]+1H[异构体A]，m)，7.19(2H，d，J＝8.5Hz，异构体A)，6.87-6.81(2H[异构体A]+1H[异构体B]，m)，6.63(1H，d，J＝8.5Hz，异构体B)，5.63(1H，br q，J＝7.0Hz，异构体A+B)，4.24-4.02(2H，m，异构体A+B)，3.49(1H，br d，J＝10Hz，异构体A+B)，3.00-2.83(2H，m，异构体A+B)，2.73-2.37(4H，m，异构体A+B)，2.05(3H，d，J＝7.0Hz，异构体A)，2.01-1.80(3H，m，异构体A+B)，1.87(3H，d，J＝7.0Hz，异构体B)，1.32-1.18(9H，m，异构体A+B)。m/z＝472[MH]+。
步骤3向得自前述步骤的酯(376mg，0.80mmol)的THF(20ml)溶液中加入氢氧化锂(200mg)的水(10ml)溶液，在60℃下，剧烈搅拌该混合物4小时。冷却后，使混合物在乙酸乙酯(50ml)和2N HCl(50ml)之间分配。水层再用乙酸乙酯(50ml)萃取，合并的有机液用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发至干。残留物经柱层析纯化，用乙酸∶乙酸乙酯∶己烷(0∶33∶100至1∶33∶100)洗脱，得到需要的产物(340mg)，为3∶2的非对映体混合物(分别以异构体A和异构体B表示)。1H NMR(CDCl3)11.5-9.5(1H，v br s，异构体A+B)，7.57(2H，d，J＝8.5Hz，异构体B)7.51(2H，d，J＝8.5Hz，异构体A)7.33(3H[异构体B]+1H[异构体A]，m)，7.18(2H，d，J＝8.5Hz，异构体A)，6.86-6.82(2H[异构体A]+1H[异构体B]，m)，6.64(1H，d，J＝8.5Hz，异构体B)，5.60(1H，br q，J＝7.0Hz，异构体A+B)，3.49(1H，m，异构体A+B)，3.01-2.81(2H，m，异构体A+B)，2.75-2.43(4H，m，异构体A+B)，2.05(3H，d，J＝7.0Hz，异构体A)，2.01-1.80(3H，m，异构体A+B)，1.88(3H，d，J＝7.0Hz，异构体B)，1.26(6H，m，异构体A+B)。m/z＝444[MH]+。
使用Berger Instruments Minigram SFC，柱Chiralcel OJ-H250×10mm(5μ)[Chiral Technologies]，柱箱温度35℃，洗脱液CO2+8％[MeOH+0.1％二乙胺]改性剂流速10ml/min，CO2出口压100巴；检测波长220nm，通过超临界流体层析可将该非对映体的外消旋混合物有效地分离为4个单独的立体异构体。
异构体B，成分1在5.68min洗脱；异构体B，成分2在6.21min洗脱；异构体A，成分1在7.19min洗脱；异构体A，成分2在9.49min洗脱。
制备1-(1-溴乙基)-4-三氟甲基苯在氮气下，搅拌下，向1-(4-三氟甲基苯基)-乙醇(4.2g，22mmol)的二氯甲烷(60ml)溶液中滴加三溴化磷(2.3ml，24mmol)。在环境温度下搅拌反应物1小时，然后加入水(20ml)猝灭反应。有机层再用水(30ml)、碳酸氢钠饱和溶液(30ml)和盐水(30ml)洗涤，然后干燥(MgSO4)，蒸发，得到产物(3.6g)。
1H NMR(CDCl3)7.60(2H，d，J＝8.5Hz)，7.54(2H，d，J＝8.5Hz)，5.19(1H，q，J＝7.0Hz)，2.04(3H，d，J＝7.0Hz).
实施例2{4-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-[(4-三氟甲基苯基)甲基]-1，2，3，4-四氢咔唑-1-基}乙酸 步骤1 可按欧洲专利0234708实施例34步骤1中所述方法，用4-异丙基苯肼盐酸盐提供。
步骤2 在氮气下，将步骤1产物(5.0g，16.7mmol)的脱气THF(170ml)和水(15ml)溶液冷却至0℃，在15min内，滴加DDQ(9.3g，41.4mmol)的脱气THF(60ml)溶液。在0℃下、3h后，浓缩混合物，将残留物溶于乙酸乙酯(200ml)，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(5×50ml)、水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发，得到棕褐色固体(4.8g)。m/z＝314[MH]+步骤3 在氮气下，将步骤2产物(1，6g，7.5mmol)的无水DMF(25ml)溶液冷却至0℃。在15min内，分批加入氢化钠(60％矿物油分散体，450mg，11.3mmol)。在0℃下搅拌20min后，滴加甲苯磺酰氯(2.1g，11.3mmol)的无水甲苯(25ml)溶液。将反应物在0℃下搅拌1h，然后升温至室温，再搅拌1h。反应用饱和氯化铵水溶液(5ml)猝灭，用水(500ml)稀释，用乙酸乙酯(3×100ml)萃取。有机提取液用水(2×50ml)，盐水洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发。粗产物经快速层析纯化，用9∶1的异己烷/乙酸乙酯至4∶1异己烷/乙酸乙酯洗脱，得到浅棕色泡沫状物(1.9g)。
1H NMR(CDCl3)8.10(2H，dd，J＝8.4，1.8Hz)，7.73(2H，d，J＝8.4Hz)，7.32(3H，m)，4.23(2H，q，J＝7.0Hz)，3.05-2.98(2H，m)，2.75-2.65(2H，m)，2.53-2.48(2H，m)，2.37(3H，s)，2.30-2.20(2H，m)，1.30(6H，d，J＝7.1Hz)，1.27(3H，t，J＝7.0Hz).m/z＝468[MH]+步骤4 在氮气下，在冷却至-78℃下，在15min内向步骤3产物(1.7g，4.6mmol)的无水THF(20ml)溶液中滴加六甲基二甲硅烷叠氮化锂(1M的THF溶液，7ml，7mmol)。在-78℃下搅拌1h后，在10min内，加入N-苯基二(三氟甲磺酰亚胺)(2.5g，6.9mmol)的无水THF(20ml)溶液。将反应物在-78℃下搅拌1h，然后在0℃下搅拌1h，然后用饱和氯化铵水溶液(5ml)猝灭，用水(300ml)稀释，用乙醚(3×100ml)萃取。有机萃取液用水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发。粗产物经快速层析纯化，用5∶1的异己烷/乙醚洗脱，得到无色泡末状物(1.4g)。
1H NMR(CDCl3)8.11(1H，d，J＝8.8Hz)，7.75(2H，d，J＝8.4Hz)，7.58(1H，d，J＝1.4Hz)，7.30-7.23(3H，m)，5.68(1H，dd，J＝2.8，6.7Hz)，4.17(2H，q，J＝7.0Hz)，4.02(1H，m)，3.00(1H，七重峰，J＝7.1Hz)，2.68-2.52(4H，m)，2.37(3H，s)，1.30(6H，d，J＝7.0Hz)，1.27(3H，t，J＝7.0Hz).
步骤5 向步骤4产物(500mg，0.83mmol)的二氧六环(25ml)溶液中加入4-氟苯基硼酸(128mg，0.91mmol)、磷酸钾(264mg，1.2mmol)和Pd(PPh3)4(50mg，5mol％)。将混合物在80℃下加热3h，使其冷却，用水(200ml)稀释，用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。有机萃取液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发。产物经快速层析纯化，用9∶1的异己烷/乙酸乙酯至5∶1异己烷/乙酸乙酯洗脱，得到无色固体(395mg)。
m/z＝546[MH]+1H NMR(CDCl3)8.12(1H，d，J＝8.8Hz)，7.77(2H，d，J＝8.4Hz)，7.43-7.22(5H，m)，7.12-7.02(2H，m)，6.43(1H，d，J＝1.8Hz)，5.72(1H，dd，J＝2.8，6.7Hz)，4.19(2H，q，J＝7.1Hz)，4.13-4.06(1H，m)，2.78-2.61(4H，m)，2.54-2.47(1H，m)，2.35(3H，s)，1.27(6H，d，J＝7.0Hz)，1.26(3H，t，J＝7.0Hz).
步骤6 用磷酸二氢钠(365mg，2.3mmol)和钠-汞齐(5％钠，700mg，过量)处理步骤5产物(390mg，0.78mmol)的1∶1的THF/甲醇(10ml)混合溶液。在室温下搅拌2h后，倾出反应物，用水(100ml)稀释，用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。有机萃取物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发，得到黄色油状物(290mg)。m/z＝378[MH]+步骤7 在氮气下，将步骤6产物(200mg，0.5mmol)的无水DMF(7ml)溶液冷却至0℃，加入氢化钠(60％的矿物油分散体，25mg，0.55mmol)，将反应物在0℃下搅拌20min，然后加入4-(三氟甲基)苄基溴(350mg，0.6mmol)。让反应物升温至室温，搅拌18h，然后用水(100ml)稀释，用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。有机萃取液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发。产物经快速层析纯化，用9∶1的异己烷/乙酸乙酯至4∶1的异己烷/乙酸乙酯洗脱，得到浅绿色油状物(180mg)。
1H NMR(CDCl3)7.54(2H，d，J＝8.4Hz)，7.48-7.43(2H，m)，7.15-7.07(5H，m)，7.00-6.97(1H，m)，6.72(1H，s)，5.58(1H，dd，J＝2.8，6.7Hz)，5.56(1H，d，J＝16Hz)，5.43(1H，d，J＝16Hz)，3.61(3H，s)，3.41-3.34(1H，m)，2.84-2.64(3H，m)，2.54-2.47(1H，m)，2.32(1H，dd，J＝5.1，16.0Hz)，1.10(6H，d，J＝7.0Hz).
m/z＝536[MH]+
步骤8 向步骤7产物(175mg，0.33mmol)的乙酸乙酯(25ml)溶液中加入10％碳披钯(25mg)。在50psi氢气压下振摇混合物36h。过滤除去催化剂，蒸发滤液，残留物经快速层析纯化，用9∶1的异己烷/乙酸乙酯至4∶1的异己烷/乙酸乙酯洗脱，得到无色油状物(155mg)。m/z＝538[MH]+步骤9向步骤8产物(140mg，0.26mmol)的THF(4ml)溶液中加入氢氧化锂(35mg，1.25mmol)的水(1ml)溶液。搅拌反应物18h，然后用水(100ml)稀释，用2M盐酸酸化，用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。有机萃取液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发。粗产物经快速层析纯化，用1∶1的异己烷/乙酸乙酯至乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物，为无色固体(85mg)。
1H NMR(CDCl3)7.54(2H，d，J＝8.0Hz)，7.20-7.24(2H，m)，7.10(2H，d，J＝8.0Hz)，6.90-7.02(4H，m)，6.52(1H，d，J＝1.4Hz)，5.39(1H，d，J＝17Hz)，5.32(1H，d，J＝17Hz)，4.09-4.17(1H，m)，3.42(1H，t，J＝1.6Hz)，2.63-2.79(2H，m)，2.52-2.57(1H，m)，2.29-2.37(1H，m)，2.13-2.21(2H，m)，1.72-2.00(2H，m)，1.05-1.29(6H，m).m/z＝524[MH]+.
按照相同方法，在步骤5中使用适当的硼酸，在步骤7中使用适当的苄基卤，制备如下化合物
实施例3按照实施例1的方法，在步骤1中使用适当的苯肼，在步骤2中使用适当的1-(1-溴烷基)-4-三氟甲基苯，制备出下列化合物
除另有所指外，*代表[MH]+实施例4(6-丁基-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸
向实施例3a，步骤2产物(55mg，0.1mmol)的甲苯(2ml)和水(0.1ml)溶液中加入丁基硼酸(15mg，0.134mmol)、磷酸钾(75mg，0.35mmol)、三环己基膦(3mg，0.01mmol)和乙酸钯(3mg，0.01mmol)。将混合物脱气，置于在氮气下，在100℃下加热5h。冷却后，反应物用EtOAc(50ml)稀释，通过Celite，滤液用水(20ml)、盐水(20ml)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。粗产物经快速层析纯化，用异己烷至20∶1的异己烷/乙醚洗脱，得到无色油状物(25mg)，为非对映异构体的混合物。在氮气下，向该酯(25mg，0.045mmol)的THF(5ml)溶液中加入氢氧化锂(7mg，0.32mmol)的水(1ml)溶液。搅拌反应物18h，然后用水(30ml)稀释，用盐酸(水溶液，2M)制成酸性，用EtOAc(3×20ml)萃取。有机萃取液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。粗产物经快速层析纯化，用4∶1的异己烷/乙酸乙酯至1∶1的异己烷/乙酸乙酯洗脱，得到(6-丁基-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸，为1∶1的非对映异构体的混合物白色固体(18mg)。
1H NMR(CDCl3)7.54(1H，J＝7.8Hz)，7.48(1H，J＝7.9Hz)，7.24(4H，m)，6.79(1H，m)，5.41(1H，t，J＝8.1Hz)，3.50(0.5H，m，非对映体A)，3.44(0.5H，m，非对映体B)，2.82(1H，m)，2.65(3H，m)，2.52-2.45(2H，m)，2.34-2.28(1H，m)，2.0-1.76(4H，m)，1.61(2H，五重峰，J＝6.8Hz)，1.41-1.18(5H，m)，0.99-0.71(6H，m).m/z＝486[MH]+按照相同方法，用适当的烷基硼酸和在适当时，用得自实施例3a、3b或3c的步骤2的中间体又制备如下
实施例5(6-氰基-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸 在氮气下，向得自实施例3a的步骤2的中间体(85mg，0.16mmol)的无水N-甲基-2-吡咯烷酮(5ml)溶液中加入氰化亚铜(I)(50mg，0.56mmol)。在180℃下加热混合物3h。冷却后，反应物用水(50ml)稀释，用乙醚(3×20ml)萃取。乙醚萃取液用氨水溶液(3×20ml)、水(20ml)和盐水(20ml)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。粗产物经快速层析纯化，用9∶1的异己烷/乙醚至4∶1的异己烷/乙醚洗脱，得到白色固体(68mg)。将该酯按实施例1，步骤3方法水解，得到标题化合物，为约1∶1的非对映异构体混合物白色固体(55mg)。
1H NMR(CDCl3)7.85(1H，d，J＝12.1Hz)，7.59-7.51(2H，m)，7.30-7.16(3.5H，m)，6.86(0.5H，d，J＝7.1Hz)，5.48(1H，t，J＝7.4Hz)，3.59-3.49(0.5H，m，非对映体A)，3.47-3.39(0.5H，m，非对映体B)，2.91-2.75(1H，m)，2.71-2.39(3H，m)，2.01-1.95(2H，m)，1.91-1.81(2H，m)，1.33-1.18(2H，m)，0.97(2H，m)，0.85(3H，t，J＝7.1Hz).m/z＝455[MH]+
实施例6(5-(吗啉-1-基)-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸 将氢氧化钾(20mg)、十六烷基三甲基溴化铵(4mg)和二(三叔丁基膦基)合钯(0)(2mg)混合，向烧瓶中冲入氮气。将得自实施例3c，步骤2的产物(144mg)溶于甲苯(1.5ml)，随后加入吗啉(17μL)和水(5μL)，将该混合物在90℃下加热15h。将反应物冷却至环境温度，加入水，混合物用乙酸乙酯(×3)萃取。合并的有机液用盐水洗涤，真空蒸发，经层析(硅胶和20∶1的己烷∶乙酸乙酯)纯化，得到需要的(5-(吗啉-1-基)-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸乙酯(10mg)，为非对映异构体混合物。MH+543。用实施例1，步骤3的方法水解该酯，得到需要的(5-(吗啉-1-基)-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸(8mg)，非对映异构体混合物。
1H NMRδppm(CDCl3)7.56(1H，d，J＝8.4Hz)，7.52(1H，d，J＝8.2Hz)，7.26(0.5H，m)，7.18(1H，d，J＝7.85Hz)，7.14(1H，d，J＝8.25Hz)，7.01(0.5H，t，J＝7.95Hz)，6.85-6.97(1.5H，m)，6.74(0.5H，d，J＝8.05)，5.40-5.55(1H，m)，4.09(4H，br s)，3.15-3.6(5.5H，m)，2.78-2.95(1H，m)，2.33-2.75(4H，m)，1.70-2.10(4H，m)，1.45-1.60(0.5H，m)，1.15-1.40(1.5H，m)，0.99(1.5H，t，J＝7.3Hz)，0.88(1.5H，t，J＝7.3Hz)，0.7-0.83(0.5H，m).m/z 513[MH+]
实施例7(5-(叔丁氧基)-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸 向在充满氮气烧瓶中的乙酸钯(2.6mg)、2-(二叔丁基膦基)联苯(2mg)和叔丁醇钠(27mg)的混合物加入甲苯(0.5ml)和得自实施例3c，步骤2的产物(99mg)的甲苯(1ml)溶液。将反应物在100℃下加热3h，冷却，加入水，混合物用乙酸乙酯(×2)萃取。合并的有机液经MgSO4干燥，真空蒸发，用硅胶/20∶1的己烷∶乙酸乙酯，经层析纯化，得到需要的(5-(叔丁氧基)-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸乙酯(70mg)。用实施例1，步骤3的方法水解该酯，得到需要的(5-(叔丁氧基)-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸(50mg)。
1H NMR(CDCl3)7.45-7.60(3H，m)，7.31(1H，d，J＝8.2Hz)，7.18(1H，d，J＝8.0)，6.95-7.1(2H，m)，5.45(1H，br s)，3.51(0.5H，d，J＝15Hz)，3.41(0.5H，d，J＝10Hz)，2.80-2.90(1H，m)，2.25-2.75(7H，m)，1.80-2.03(4H，m)，1.15-1.60(9H，m)，0.99(1.5H，t，J＝7.5Hz)，0.80-0.90(1.5H，m)
实施例8(5-氰基-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸 用实施例5的方法，由得自实施例3c，步骤2的中间体(100mg)制备，得到需要的化合物(35mg)，为非对映异构体混合物。1HNMRδppm(CDCl3)7.57(1H，d，J＝8Hz)，7.53(1H，d，J＝15Hz)，7.35-7.45(1H，m)，7.26(1H，d，J＝6Hz)，7.16(1H，d，J＝8Hz)，6.95-7.10(2H，m)，5.5(1H s)，3.4-3.6(1H，m)，3.20-3.40(1H，m)，2.80-3.0(1H，m)，2.30-2.80(4H，m)，2.17(0.5H，s)，1.80-2.10(4H，m)，1.45-1.60(0.5H，m)，1.43(0.5H，s)，1.15-1.35(1H，m)，1.00(1.5H，t，J＝7.3Hz)，0.88(2.0H，m).m/z＝453[M-H]实施例9(5-(3-{三氟甲氧基}苯基)-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸 在氮气下，将得自实施例3c，步骤2的中间体(733mg)溶于THF(80ml)，加入3-三氟甲氧基苯基硼酸(383mg)，随后加入碳酸钾(290mg)的水(18ml)溶液。最后，加入Pd(PPh3)4(78mg)，在85℃下加热反应物15h。加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有机相用盐水洗涤，蒸发，经层析(硅胶/20∶1的己烷∶乙酸乙酯)纯化，得到需要的酯(700mg)，用实施例1，步骤3的方法使其水解，得到需要的(5-(3-{三氟甲氧基}苯基)-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸，通过超临界流体层析将其分离为单一异构体。非对映异构体A1H NMRδppm(CDCl3)7.57(2H，d，J＝8.3Hz)，7.37-7.45(2H，m)，7.38(2H，d，J＝8.3)，7.23(1H，d，J＝8)，6.98(1H，t，J＝7.5Hz)，6.91(1H，d，J＝6.7Hz)，6.84(1H，d，J＝8Hz)，5.48(1H，dd，J＝3.5，11Hz)，3.51(1H，d，J＝9.5Hz)，1.50-2.60(13H，m)，0.91(3H，d，J＝7Hz).非对映异构体B1H NMRδppm(CDCl3)7.42-7.65(5H，m)，7.15-7.40(3H，m)，7.06(1H，t，J＝9Hz)，6.89(1H，d，J＝9Hz)，5.49(1H，br s)，3.45(1H，br s)，1.25-2.80(13H，m)1.02(3H，t，J＝9Hz)按照类似方法，用适当的硼酸和在适宜时用得自实施例3a、3b或3c中步骤2的中间体制备如下
实施例10(6-三氟甲基-9-{4-(三氟甲基)苄基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸 向碘(3.9g，15.5mmol)和硫酸银(4.8g，15.5mmol)的乙醇(150ml)溶液混合物中加入4-三氟甲基苯胺(2.5g，15.5mmol)。搅拌混合物2h，过滤，固体用EtOAc充分洗涤，真空浓缩滤液。将残留物溶于DCM(100ml)，用5％氢氧化钠水溶液(50ml)、水(40ml)、盐水(30ml)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。粗2-碘-4-三氟甲基苯胺经快速层析纯化，用4∶1的异己烷/DCM洗脱，得到橙色固体(3.1g)。向得自前—步骤的2-碘-4-三氟甲基苯胺(900mg，3.14mmol)的无水DMF(2ml)溶液中加入2-环己酮乙酸乙酯(0.62ml，3.5mmol)、对甲苯磺酸(20mg)和四乙氧基硅烷(0.9ml，4.1mmol)。将混合物在130℃下加热5h，使冷却至110℃，再加入DMF(5ml)，随后加入Hunig氏碱(2ml)和乙酸钯(30mg，5mol％)。将反应物在110℃下加热15h。冷却后，反应物用EtOAc(100ml)稀释，用水(2×30ml)、2M HCl水溶液(30ml)、盐水(30ml)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。粗({6-三氟甲基}-2，3，4，9-四氢-1-咔唑-1-基)乙酸乙酯经快速层析纯化，用异己烷至10∶1的异己烷/乙醚洗脱，得到黄色油状物(260mg)，使其在实施例1，步骤2的条件下苄基化。用实施例1，步骤3的方法使得到的(6-三氟甲基-9-{4-(三氟甲基)苄基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸乙酯水解，得到需要的(6-三氟甲基-9-{4-(三氟甲基)苄基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸白色固体(40mg)。
1H NMR(MeOD)7.76(1H，s)，7.55(2H，d，J＝8.2Hz)，7.32(2H，m)，7.07(2H，d，J＝8.2Hz)，5.58(1H，d，J＝17.7Hz，)，5.48(1H，d，J＝17.7Hz)，3.31(1H，m)，2.92-2.81(1H，m)，2.72-2.62(1H，m)，2.48(2H，m)，1.99-1.81(4H，m).
m/z＝456[MH]+实施例11(6-异丙基-9-{2-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸 步骤1 2-溴-2-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇将[4-(三氟甲基)苯基]环氧乙烷(980mg，5.27mmol)(按照J.Med.Chem.2002，45(18)，3891制备)溶于CHCl3(20ml)，加入HBr(48％水溶液，15ml)，在室温下搅拌该混合物3小时。分离有机层，用NaHCO3溶液(20ml)和盐水(20ml)洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩，得到1.2g(86％)标题化合物δH(360MHz，CDCl3)7.64(2H，d，J＝8.3Hz)，7.56(2H，d，J＝8.3Hz)，5.07(1H，dd，J＝5.8，7.4Hz)，4.12-3.96(2H，m)，2.13(1H，m).
步骤2 2-[1-(4-异丙基苯基)肼基]-2-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇 将(4-异丙基苯基)肼盐酸盐(450mg，2.4mmol)悬浮于甲苯(10ml)中，加入Et3N(0.43ml，3.1mmol)，将混合物回流1小时，然后冷却至室温。加入得自前步骤的2-溴-2-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇(0.48g，1.8mmol)的甲苯(2ml)溶液，将溶液在80℃下加热5小时。冷却至室温后，过滤在反应期间形成的白色固体，浓缩溶液。经硅胶层析纯化，用梯度10-50％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到330mg标题化合物(40％)δ(360MHz，CDCl3)7.55(2H，d，J＝8.3Hz)，7.38(2H，d，J＝8.3Hz)，7.13-7.09(2H，m)，6.86-6.82(2H，m)，4.82(1H，dd，J＝3.4，7.8Hz)，4.27(1H，dd，J＝7.8，11.5Hz)，4.01(1H，dd，J＝3.4，11.5Hz)，3.73(2H，s)，2.85-2.77(1H，七重峰，J＝6.9)，1.19(6H，d，J＝6.9)，m/z(ES+)339(MH+)，322(M-NH2+).
步骤3 (9-{2-羟基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-6-异丙基-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸乙酯 将得自前步骤的2-[1-(4-异丙基苯基)肼]-2-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇(1.0g，2.96mmol)溶于乙醇(20ml)，加入(2-氧代环己基)乙酸乙酯(0.53ml，2.96mmol)和对甲苯磺酸一水合物(1.12g，5.97mmol)，在氮气下使该反应混合物回流过夜。然后真空浓缩溶剂，残留物经硅胶层析纯化，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到970mg标题化合物(67％)，为1∶1的非对映异构体混合物m/z(ES+)488(MH+)。
步骤4 (6-异丙基-9-{2-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸乙酯 将得自前述步骤的(9-{2-羟基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-6-异丙基-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸乙酯(100mg，0.2mmol；1∶1的非对映异构体混合物)溶于DMF(5ml)，冷却至0℃。加入NaH(60％油分散体，9mg，0.2mmol)，在0℃下搅拌混合物30分钟。然后加入MeI(38μl，0.6mmol)，使混合物缓慢升温至室温。在室温下搅拌30分钟后，加入H2O(10ml)和乙酸乙酯(20ml)，分离各层，有机层经MgSO4干燥，真空浓缩。经硅胶层析纯化，用50％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到47mg标题化合物(47％)，为3∶2的非对映异构体混合物。
步骤5 (6-异丙基-9-{2-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸 将得自前述步骤的(6-异丙基-9-{2-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸乙酯(46mg，0.092mmol；3∶2的非对映异构体混合物)溶于THF(2ml)，加入LiOH(22mg，0.92mmol)H2O(1ml)溶液。将反应混合物加热至50℃，搅拌12小时。然后用乙酸乙酯(20ml)稀释，用1N HCl(20ml)、盐水(20ml)洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩。经硅胶层析纯化，依次用50％乙酸乙酯/己烷和50％乙酸乙酯/己烷+0.1％乙酸洗脱，随后用制备HPLC(梯度30-85％CH3CN-0.1％TFA/H2O)进一步纯化，得到27mg需要的(6-异丙基-9-{2-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸(67％)，为1∶1的非对映异构体混合物(a+b)δ(360MHz，CDCl3)7.56(1H，d，J＝8.2Hz，a/b)，7.50(1H，d，J＝8.1Hz，a/b)，7.41(1H，d，J＝8.2Hz，a/b)，7.32(1H，m，a+b)，7.20(1H，d，J＝8.2Hz，a/b)，6.86(1.5H，m，a+b)，6.77(0.5H，d，J＝8.5Hz，a/b)，5.66-5.61(1H，m，a+b)，4.44(0.5H，dd，J＝6.0，9.7Hz，a/b)，4.33-4.25(1H，m，a/b)，3.97(0.5H，dd，J＝6.2，9.8Hz，a/b)，3.55(0.5H，br d，a/b)，3.45(0.5H，br d，a/b)，3.37(1.5H，s，a/b)，3.31(1.5H，s，a/b)，3.05-2.84(2.5H，m，a+b)，2.72-2.39(2.5H，m，a+b)，1.99-1.85(4H，m，a+b)1.27(6H，dd，J＝4.1，6.8Hz，a+b)；m/z(ES+)474(MH+).
实施例12(6-异丙基-4，4-二甲基-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸
步骤1(4-甲基-2-氧代环己-3-烯-1-基)乙酸乙酯在-78℃下，在搅拌下，向LDA(1.5M的THF溶液，19.97ml)的THF(10ml)溶液中滴加3-甲基-2-环己烯-1-酮(3.0g，27.23mmol)的THF(10ml)溶液。在-78℃下搅拌30min后，滴加溴乙酸乙酯(3.34ml，29.96mmol)的THF(10ml)溶液。加入后，在室温下继续搅拌2h。反应混合物用HCl(2N，100ml)猝灭，该混合物用乙酸乙酯(2×100ml)萃取。有机萃取液用盐水(1×100ml)洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩。残留物经快速层析纯化，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(4-甲基-2-氧代环己-3-烯-1-基)乙酸酯，为黄色油状物(3.76g，70％)。
1H NMRδ(ppm)(360MHz，CDCl3)5.88(1H，s)，4.19-4.11(2H，m)，2.89(1H，dd，J＝5.3，16.2Hz)，2.79-2.71(1H，m)，2.46-2.22(3H，m)，2.14-2.04(1H，m)，1.96(3H，s)，1.84-1.76(1H，m)，1.32-1.24(3H，m).
步骤2 (4，4-二甲基-2-氧代环己基)乙酸乙酯在-5℃下，将碘化铜(225mg，1.18mmol)加入甲基镁化碘(3.39ml，3M的THF溶液，10.19mmol)的乙醚(10ml)溶液。搅拌得到的混合物30min，然后滴加得自前述步骤的烯酮(2.0g，10.19mmol)的乙醚(10ml)溶液。在-5℃下搅拌该反应混合物2h，然后在环境温度下搅拌1h。反应混合物用饱和氯化铵(100ml)猝灭，用乙醚(3×100ml)萃取。有机萃取液用盐水(1×100ml)洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩。残留物经梯度快速层析纯化，用1％至2％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(4，4-二甲基-2-氧代环己基)乙酸乙酯，为油状物(695mg，32％)。
1H NMRδ(ppm)(400MHz，CDCl3)4.16-4.09(2H，m)，2.80-2.70(2H，m)，2.30(1H，d，J＝13Hz)，2.18-2.11(2H，m)，2.05-1.99(1H，m)，1.74-1.55(3H，m)，1.26(3H，t，J＝7.1Hz)，1.08(3H，s)，0.87(3H，s).
步骤3 (6-异丙基-4，4-二甲基-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸乙酯使得自前述步骤的(4，4-二甲基-2-氧代环己基)乙酸乙酯(200mg，0.94mmol)、1-(4-异丙基苯基)-1-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}肼(用实施例13，步骤1的方法，由乙基氯化镁和4-三氟甲基苯甲醛制备，随后用实施例13，步骤4的方法，用四溴化碳/三苯膦处理，最后用实施例13，步骤5的方法，用4-异丙基苯基肼盐酸盐处理)(317mg，0.94mmol)和PTSA(360mg，1.88mmol)的乙醇(30ml)溶液混合物回流18h。将反应混合物冷却至环境温度，真空浓缩。残留物用乙酸乙酯(100ml)稀释。依次用水(1×100ml)、盐酸(2N，100ml)和盐水(100ml)洗涤。有机萃取物经MgSO4干燥，真空浓缩，经快速层析纯化，用2％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到需要的产物((6-异丙基-4，4-二甲基-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸乙酯)，为两个非对映异构体A&B(2∶1)的混合物(112mg，23％)。1H NMR(360MHz，CDCl3)δ7.54-7.42(8H，m，非对映体A+B)，7.20-7.18(1H，m，非对映体A)，7.12-7.08(1H，m，非对映体B)，7.02-6.88(1H，m，非对映体A)，6.90-6.88(1H，m，非对映体B)，6.82-6.78(1H，m，非对映体A)，6.70-6.67(1H，m，非对映体B)，5.42-5.34(2H，m，非对映体A+B)，4.19-4.08(4H，m，非对映体A+B)，3.52-3.44(1H，m，非对映体B)，3.38-3.32(1H，m，非对映体A)，3.06-2.92(2H，m，非对映体A+B)，2.71-2.42(8H，m，非对映体A+B)，1.88-1.72(4H，m，非对映体A+B)，1.64-1.52(8H，m，非对映体A+B)，1.40-1.02(20H，m，非对映体A+B)，0.90-0.80(12H，m，非对映体A+B)ppm步骤4 (6-异丙基-4，4-二甲基-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸将氢氧化锂(52mg，2.2mmol)的水(2ml)溶液加入得自前述步骤的(6-异丙基-4，4-二甲基-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸乙酯(110mg，0.22mmol)的二氧六环(4ml)溶液中，在60℃下搅拌18h。反应混合物用盐酸(2N，20ml)稀释，用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有机催萃取液用盐水(1×50ml)洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩，得到(6-异丙基-4，4-二甲基-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸，为两个非对映异构体A&B(2∶1)的混合物(10mg，10％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.57-7.50(4H，m，非对映体A+B)，7.35(1H，d，J＝8.0Hz，非对映体A)，7.18(1H，d，J＝8.0Hz，非对映体A)，7.12(1H，d，J＝8.5Hz，非对映体B)，6.91(1H，d，8.4Hz，非对映体A)，6.83(1H，d，J＝8.5Hz，非对映体B)，6.70(1H，d，J＝8.4Hz，非对映体B)，5.36-5.30(2H，m，非对映体A+B)，3.49-3.42(1H，m，非对映体B)，3.40-3.31(1H，m，非对映体A)，3.01-2.94(2H，m，非对映体A+B)，2.72-2.41(8H，m，非对映体A+B)，1.86-1.80(4H，m，非对映体A+B)，1.54-1.58(2H，m，非对映体A+B)，1.54-1.52(6H，m，非对映体A+B)，1.36-1.41(6H，m，非对映体A+B)，1.22-1.29(12H，m，非对映体A+B)，1.01-1.08(4H，m，非对映体A+B)，0.82-0.91(6H，m，非对映体A+B)ppm实施例13 步骤1在0℃下，在5min内，向4-三氟甲基苯甲醛(9.7g，56mmol)的THF(100ml)溶液中加入正丙基氯化镁(2M的乙醚溶液31ml，61mmol)。加入结束后，在0℃下搅拌溶液10分钟，然后升温至室温，保持1小时，加入饱和氯化铵水溶液(50ml)猝灭。该溶液用乙醚(2×100ml)萃取，合并的有机液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发。残留物经层析(硅胶；洗脱液5％EtOAc∶己烷)纯化，得到(RS)-1-(4-三氟甲基苯基)丁-1-醇，为浅黄色油状物(4.7g)。
步骤2在氮气下，将前述步骤的醇(4.7g，21.4mmol)的丙酮(100ml)溶液冷却至0℃，在10分钟内，用Jones试剂(7.5ml)(得自CrO3[40g]的水[80ml]/浓H2SO4[20ml]储备液)分次处理，在0℃下，再将得到的绿色混合物搅拌30分钟。反应物用水稀释，用乙醚(2×100ml)萃取。合并的有机液用水(3×100ml)洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发。残留物通过硅胶塞(己烷洗脱)过滤纯化，得到1-(4-三氟甲基苯基)丁-1-酮，为无色液体(4.1g)。
步骤3向预冷(-30℃)硼烷甲硫醚络合物(3.1ml，32.4mmol)的甲苯(30ml)溶液中加入(R)-甲基CBS oxazaborolidine(1M的甲苯溶液，3.3ml，3.3mmol)，在-30℃下搅拌混合物15分钟。在30分钟内，滴加得自前述步骤的酮(7.0g，32.4mmol)的二氯甲烷(30ml)和甲苯(30ml)混合物溶液，在-30℃下再搅拌反应物6h。小心加入甲醇(7ml)猝灭反应，混合物用乙醚和1N HCl(50ml)稀释。分离有机层，再用1N HCl(50ml)和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发。残余液体经层析(硅胶；洗脱液5％EtOAc∶己烷)纯化，得到(S)-1-(4-三氟甲基苯基)-丁-1-醇，为无色油状物(5.22g)，静置固化。将样品衍生为其Mosher氏酯(MTPACl、Et3N、DMAP、DCM，室温，30min)，表明91％对映体过量。
步骤4在0℃下，边搅拌，边向得自前述步骤的(S)-1-(4-三氟甲基苯基)-丁-1-醇(4.65g，21mmol.，91％对映体过量)的无水二氯甲烷(100ml)溶液中加入经MgSO4-干燥的四溴化碳(9.91g，1.4当量)的无水二氯甲烷(50ml)溶液。然后在20分钟内，分批加入三苯膦(8.38g，1.5当量)，保持内部温度在6℃以下。加入结束后撤去冷却浴，搅拌反应物30分钟，真空减少至约一半体积，将剩余溶液加入硅胶垫中，用乙醚洗脱。真空蒸发含产物的合并的乙醚组分，残留物经快速层析(硅胶；己烷洗脱)纯化，得到5.1g(R)-1-(4-三氟甲基苯基)-1-溴丁烷。
步骤5 在0℃下，边搅拌，边向得自前述步骤的4-异丙基苯基肼盐酸盐(545mg，2.8mmol)的无水THF(20ml)悬浮液中加入NaHMDS(5.9ml 1M NaHMDS的THF溶液，2.1当量)溶液。撤去冷却浴，搅拌黄色悬浮液1小时，然后冷却至0℃。加入得自前述步骤的溴化物(820mg，2.9mmol.)的无水THF(10ml)溶液，撤去冷却浴，在室温下搅拌混合物17小时。反应物用乙醚(150ml)和水(100ml)稀释，分离各液层。水层再用乙醚(100ml)萃取，合并的乙醚层用水(2×100ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发，得到1.3g深红色油状物。经柱层析(硅胶；洗脱液10％乙酸乙酯∶己烷)纯化，得到红色油状产物(530mg)。(手性HPLC检测对映体过量86％)步骤6
在5℃下，向甲醇钠的甲醇(25％，117ml，0.51mol)溶液中加入环己酮(50g，1当量)和草酸二乙酯(70ml，1当量)的混合物，在室温下搅拌该混合物6小时。加入水(1500ml)和EtOAc(1000ml)猝灭反应，分离水层，用浓HCl酸化，再用EtOAc(2×1000ml)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机液，真空蒸发，得到90g粗中间体，其在下一步中直接使用。
在5℃下，将得自前述步骤的粗酮酸酯加入磷酸二氢钾(770ml 1M溶液)水溶液、磷酸氢二钠水溶液(1700ml 0.5M溶液)和50％二羟乙酸(188ml)混合物中。用浓NaOH溶液将混合物调至pH 6-7，然后在5℃下搅拌1小时，然后用EtOAc(500ml)洗涤。水层用浓HCl酸化，然后用EtOAc(2×700ml)萃取，干燥(MgSO4)合并的有机液，真空蒸发，得到残留物，用庚烷研磨，得到需要的产物，为浅黄色，粘性固体(37g)。
步骤7(Fischer吲哚合成)搅拌下，向得自步骤5的肼(556mg，1.59mmol)的无水异丙醇(20ml)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(271mg，0.9当量)、步骤6产物(489mg，2当量)和3A分子筛粉末(600mg)，将得到的混合物加热至温和回流3小时。冷却反应物，用水(50ml)稀释，萃取到EtOAc(2×100ml)中。合并的有机液用1N HCl(100ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)，真空蒸发至剩余残留物，使其经层析(硅胶；洗脱液1∶2的乙酸乙酯∶己烷)纯化，得到黄色泡状产物(460mg)。
步骤8-不对称氢化在厚壁烧瓶中，在搅拌下，向得自前述步骤的产物(460mg，0.98mmol)的甲醇(25ml)溶液中加入三乙胺(0.14ml，1.0当量)，用氮气泡使溶液脱气10分钟。加入(S)-Ru(BINAP)Cl2(78mg，10mol％)，使混合物置于氢气压(35psi)下，升温至40℃，在氢气下振动14小时。冷却混合物，用EtOAc(100ml)稀释，用1N HCl(50ml)洗涤。水层再用EtOAc(100ml)萃取，合并的有机液用盐水(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)。向得到的黄色溶液中加入活性炭(1g)，搅拌悬浮液10分钟，然后通过CeliteTM垫过滤，再用EtOAc充分洗涤。蒸发滤液，得到残留物，使其经层析(硅胶；洗脱液1∶2的乙酸乙酯∶己烷)纯化，得到产物(320mg)，为浅棕色泡末状物(87∶13的非对映体混合物)。可通过其二环己胺盐将该非对映体混合物结晶纯化。
1H NMR(游离酸)δ(ppm)(500MHz，CDCl3)7.54(2H，d，J 8.0Hz)，7.33-7.31(3H，m)，6.87(1H，dd，J8.5，1.5Hz)，6.76(1H，d，J 8.5Hz)，5.40(1H，dd，J 10.5，4.0Hz)，3.4g(1H，m)，2.96(1H，七重峰，J 7.0Hz)，2.86(1H，dd，J＝15.0，4.0Hz)，2.68(1H，m)，2.52-2.44(2H，m)，2.37-2.30(2H，m)，1.96(3H，m)，1.85-1.81(1H，m)，1.28(6H，d，J7.0Hz)，1.21(1H，m)和0.87(4H，m).m/z 472(MH+).
实施例14 用步骤1中的环己基乙基溴化镁，按实施例13所述制备。
1H NMRδ(ppm)(500MHz CDCl3，)7.53(2H，d，J＝8.2Hz)，7.34(1H，s)，7.31(2H，d，J＝8.2Hz)，6.87(1H，d，J＝8.5Hz)，6.78(1H，d，J＝8.5Hz)，5.35(1H，dd，J＝4.4，10.3Hz)，3.47(1H，d，J＝11.4Hz)，3.00-2.94(1H，m)，2.86(1H，dd，J＝4.2，14.9Hz)，2.72-2.66(1H，m)，2.54-2.32(4H，m)，2.00-1.92(3H，m)，1.88-1.78(1H，m)，1.65-1.51(6H，m)，1.29(6H，d，J＝6.9Hz)，1.17-1.09(5H，m)，0.80-0.77(2H，m)；m/z(ES+)540(MH+).
实施例15 用步骤1中的4-甲基戊基溴化镁，按实施例13所述制备。
1H NMRδ(ppm)(500MHz，CDCl3，)7.54(2H，d，J＝8.1Hz)，7.33-7.31(3H，m)，6.87(1H，dd，J＝1.3，4.9Hz)，6.77(1H，d，J＝8.4Hz)，5.39(1H，dd，J＝10.6and 3.7Hz)，3.49(1H，bd，J＝6.8Hz)，3.00-2.94(1H，m，J＝7.0)，2.86(1H，dd，J＝4.6，15.5Hz)，2.71-2.64(1H，m)，2.55-2.41(2H，m)，2.39-2.25(2H，m)，2.00-1.92(3H，m)，1.89-1.77(1H，m)，1.43-1.37(1H，m)，1.28(6H，d，J＝6.9Hz)，1.23-1.10(4H，m)，0.77(3H，d，J＝6.6Hz)，0.71(3H，d，J＝6.6Hz)；m/z(ES-)512(MH-).
实施例16(6-异丙基-1-丙基-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丁基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸 步骤1 (2-氧代-1-丙基环己基)乙酸甲酯在-78℃下搅拌LDA(1.5M的THF溶液，133ml)的THF(100ml)溶液，向其中滴加环己酮(21ml，200mmol)的THF(30ml)溶液。在-78℃下搅拌30min后，滴加碘代丙烷(19.5ml，200mmol)的THF(20ml)溶液，在环境温度下继续搅拌14h。反应用HCl(2N，100ml)猝灭，混合物用乙酸乙酯(3×100ml)萃取。合并的有机液用盐水(1×100ml)洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩。残余的油经真空蒸馏纯化(34-36℃/10mmbar)，得到2-丙基环己酮，为无色油状物(2.3g，8％)。
在-78℃下，将2-丙基环己酮(2.3g，16.4mmol)的THF(10ml)溶液滴加到LDA(1.5M的THF溶液，11ml)的THF(40ml)的搅拌溶液中。在-78℃下搅拌30min后，滴加TMSCl(2.1ml，16.4mmol)，在环境温度下搅拌3h。反应用水/己烷(200ml/200ml)猝灭。有机相用饱和碳酸氢钠(1×100ml)洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩。残留的油经真空蒸馏(38-45℃/10mmbar)纯化，得到三甲基[(6-丙基环己-1-烯-1-基)氧基]硅烷，为无色油状物(1.9g，56％)。在-15℃下，将叔丁醇钾溶液(8.9ml，1.0M的THF溶液)滴加到该硅烷(1.90g，8.9mmol)的THF(20ml)的搅拌溶液中。在-15℃下，搅拌反应混合物1h，然后冷却至-78℃。滴加溴乙酸甲酯(0.84ml，8.9mmol)，在-78℃下搅拌1h，然后在环境温度下搅拌10h。反应混合物用水(100ml)猝灭，用乙酸乙酯(2×100ml)萃取。有机萃取液用盐水(100ml)洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩。残余油经梯度快速层析纯化，用2％-8％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(2-氧代-1-丙基环己基)乙酸甲酯，为无色油状物(821mg，43％)。1H NMR(360MHz，CDCl3)δ3.64(3H，s)，2.45-2.28(2H，m)，2.01-1.12(12H，m)，0.91-0.27(3H，m)。
步骤2 (6-异丙基-1-丙基-9-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丁基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸甲酯将(2-氧代-1-丙基环己基)乙酸酯(821mg，4.14mmol)、1-(4-异丙基苯基)-1-{(1S)-1-[4-(三氟甲基)苯基]丁基}肼(实施例13步骤5)(903mg，2.58mmol)和HCl(2N，1滴)在乙醇(30ml)中的混合物回流18h。将反应混合物冷却至环境温度，浓缩。残留物用乙酸乙酯(100ml)稀释，依次用水(1×100ml)、盐酸(2N，100ml)和盐水(100ml)洗涤。有机萃取液经MgSO4干燥，真空浓缩。残余油经快速层析纯化，用2％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到目标分子，为两个非对映异构体A&B(1∶1)的无色油状物(112mg，23％)。m/z(ES+)542(MH+)。
步骤3按实施例12步骤4所述水解得自步骤2的甲基酯。经制备HPLC纯化，得到目标化合物，为两个非对映异构体A&B(1∶1)的混合物(97mg，34％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.53(1H，d，J＝8Hz，非对映体A或B)，7.47(1H，d，J＝8Hz，非对映体A或B)，7.40(1H，d，J＝8Hz，非对映体A或B)，7.33(1H，dd，J＝8Hz，2Hz，非对映体A或B)，7.16-7.09(1.5H，m，非对映体A+B)，6.97-6.87(1.5H，m，非对映体A+B)，5.72-5.64(1H，m，非对映体A+B)，5.34-5.30(1H，br，非对映体A+B)，2.92-3.02(1H，m，非对映体A+B)，1.09-2.88(21H，m，非对映体A+B)，1.02-0.83(4.5H，m，非对映体A+B)，0.67-0.55(1H，m，非对映体A或B)，0.11(1.5H，t J＝8Hz，非对映体A或B)。m/z(ES)+512(MH+)。
实施例176-异丙基-9-{1-[4-三氟甲基]苯基}丁基}2，3，4，9-四氢螺[咔唑-1，1′-环丙烷]-2′-甲酸
步骤14-氧代螺[2，5]辛烷-1-甲酸 将1-乙烯基螺[2，5]辛-4-酮(0.16g，1.06mM)(Roberton，J.等Tetrahedron.2000，54，8959-65)溶于二氯甲烷∶甲醇(20ml，1∶1)，冷却至-78℃，使臭氧通过溶液发生气泡5分钟。然后再搅拌反应物10分钟，然后用甲硫醚(1ml)猝灭反应，静置自然升温至室温，搅拌过夜。蒸发反应物，将粗醛再溶于四氢呋喃(20ml)，在室温下用亚氯酸钠(0.62g，6.8mM)和氨基磺酸(0.25g，2.5mM)处理，搅拌3小时。然后使反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，在硅胶上纯化，用异己烷-乙酸乙酯混合物洗脱，得到标题化合物，为异构体混合物(0.078g)ms(ES+)m/e 168[MH]+.1H NMR(250MHz，CDCl3)δ9.5(1H，br)，2.50-2.45(1H，m)，2.32-2.20(1H，m)，2.08-1.97(2H，m)，1.90-1.78(4H，m)，1.50-1.44(1H，m)，1.35-1.10(1H，m)和1.04-1.01(1H，m).
步骤2将1-(4-异丙基苯基)-1-{1-[4-(三氟甲基)苯基]丙基}肼(0.158g，0.45mM)和4-氧代螺[2，5]辛烷-1-甲酸(0.076g，0.45mM)溶于乙醇(3ml)，用对甲苯磺酸(0.154g，0.81mM)处理，加热至80℃持续3小时。蒸发反应混合物，在硅胶上纯化，用异己烷-乙酸乙酯混合物洗脱，得到产物，为异构体混合物，0.021g，ms(ES+)m/e 483[MH]+。
权利要求
1.式I化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防与脑内β-淀粉状蛋白沉着有关的疾病的药物中的用途 其中V代表键、CH2或CH2CH2；X代表SO2或CHR3，其中R3是H或任选被以下基团取代的含最多达10个碳原子的烃基卤素、CF3、C1-4烷氧基或C1-4烷硫基；Y代表CO2H或四唑；Ar代表任选具有最多达3个取代基的苯基，所述取代基独立选自最多达6个碳原子的烃基和(CH2)m-Z，其中m是0、1或2，而Z代表卤素、N3、CN、CF3、OCF3、OR4、其中t是0、1或2的S(O)tR4、CO2R4、四唑、N(R4)2、NHCOR5、NHCON(R4)2、CON(R4)2、SO2N(R4)2、NHSO2R5、COR5或OCOR5；n是0、1、2或3；每个R1独立选自最多达6个碳原子的非芳族烃基和(CH2)q-W，其中q是0、1或2，W代表卤素、CN、CF3、OR4、N(R4)2、其中t是0、1或2的S(O)tR4、CO2R4、四唑、CON(R4)2、SO2N(R4)2、COR5、OCOR5或苯基或杂芳基，苯基或杂芳基中的任一个任选具有选自以下的最多达3个取代基卤素、CF3、OCF3、CN、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基或C1-4烷氧基羰基；每个R2独立是H或C1-4烷基；或一个R2基团与连接在同一个环位置上的R6基团一起以-C(R2)2-Y部分形成3元-6元螺接烃环；R4代表H或任选被以下基团取代的最多达7个碳原子的烃基卤素、CN、CF3、OH、C1-4烷氧基或C1-4烷氧基羰基；或与同一氮原子连接的两个R4基团可形成5元或6元杂环；R5代表不是H的R4；p是0、1或2；和R6代表C1-6烷基、C2-6链烯基或苯基、苄基或杂芳基，所述苯基、苄基或杂芳基任选具有最多达3个的选自以下的取代基卤素、CN、CF3、OCF3、OR4、CO2R4、COR5、OCOR5和C1-4烷基；或R6基团与R2基团一起可形成定义同前的螺接烃环。
2.一种治疗或预防与脑内Aβ沉着有关的疾病的方法，所述方法包括给予有这种需要的患者治疗有效量的权利要求1定义的式I化合物或其药学上可接受的盐。
3.权利要求1的用途，其中所述疾病是阿尔茨海默氏病、脑淀粉状蛋白血管病、多梗死性痴呆、拳击员痴呆或唐氏综合征。
4.权利要求1定义的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中p是1或2，和至少一个R6代表C2-6链烯基或任选取代的苯基、杂芳基或苄基。
5.式II化合物或其药学上可接受的盐 其中V、X、n、p、R1、R2和R6定义同权利要求1；前提是如果V是CH2，X是CH2，p是0，和每个R2是H，则(R1)n不代表6，8-二氟。
6.权利要求4或权利要求5的化合物，其中X是CHR3。
7.式III化合物或其药学上可接受的盐 其中R3a代表任选被以下基团取代的含2-10个碳原子的烃基卤素、CF3、C1-4烷氧基或C1-4烷硫基；而其余的变量定义同权利要求1，前提是R1不代表SOR4或SO2R4。
8.权利要求7的化合物，其中Y代表CO2H，Ar代表4-三氟甲基苯基，和两个R2基团均代表H。
9.权利要求4-8中任一项的化合物，其中n是1或2，及每个R1独立选自甲基、乙基、异丙基、正丁基、叔丁基、环丙基、Br、Cl、F、CN、CF3、OCH3、OCF3、SCH3、吗啉-1-基、4-氟苯基、3，4-二氯苯基、3-甲硫基苯基、2，5-二甲基苯基和3-三氟甲氧基苯基。
10.权利要求4-9中任一项的化合物，它用于人体的治疗。
11.一种药用组合物，所述组合物包含权利要求4-9中任一项的化合物和药学上可接受的载体。
12.一种制备权利要求7定义的式III化合物的方法，所述方法包括经手性Ru(BINAP)Cl2催化剂氢化式(11a)或(11b)化合物的步骤 其中BINAP是二(二苯膦基)-1，1′-联萘，和R3b是除H以外的R3。
13.权利要求12的方法，其中式(11a)或(11b)化合物通过式(5a)或(5b)化合物与式(10)化合物的反应得到
全文摘要
用于治疗与脑内β－淀粉状蛋白沉着有关的疾病的式(I)化合物。
文档编号A61P25/28GK1832744SQ200480022229
公开日2006年9月13日 申请日期2004年7月29日 优先权日2003年8月7日
发明者D·贝赫尔, M·贝塔蒂, G·D·彻克斯菲尔德, I·丘尔切尔, V·A·杜蒂, P·J·奥亚克利, A·库杜斯, M·R·蒂尔, J·D·赖利 申请人:默沙东有限公司