专利名称：治疗白癜风的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及皮肤病学领域，尤其涉及可用于化妆品领域以及人类药物领域的组合物。它对白癜风引起的损伤有效。
背景技术：
黑素生成是一种过程，经由该过程，制造皮肤色素的细胞(melanocites)的再生以及该细胞合成的黑色素颗粒的量都增加了。
诸如白癜风的疾病(Prcic S.Duran V.等人，2002)，(PanuncioA1.等人，2003)，(Gauthier Y.等人，2003)，在患者处于严重的压力之下以后，其会发生皮肤黑色素产生细胞的进行性丢失(Martin-Garcia RF.等人，2003)，(Hadad A1.等人，2003)，(BrigantiS.等人，2003)。
该疾病影响了大约1％的世界人口，它以主要位于脸部和四肢的白斑的出现为特征，而不论年龄、性别或地理区域。
从本领域的知识水平可以知道，刺激黑素生成过程的某些化学物质可用于该疾病的治疗。其中有被称作补骨脂素的物质(Kreuter A.等人，2001)，(Handa S.等人，2001)，(Hofer A.等人，2001)，(KwokYK.等人，2002)，它是一种埃及植物(Ammi-Majus)的合成衍生物。然而补骨脂素避免不了毒副作用，局部给药后能够引起皮炎和皮肤坏死。除此之外，大多数病例停止用药后它还具有缓慢的可逆效应。
另一类似于本发明的技术解决方案是专利FR8220746中所提及的。在该专利中，50％乙醇提取物从紫河车中提取，紫河车是在无菌条件下从分娩后的健康孕妇那里收集的。
从本领域的知识水平也可以获知，Melagenina Plus，专利第WO00/06180号“刺激皮肤黑色素合成的组合物、获取方法和应用”，它是一种源于紫河车的含氯化钙的50％乙醇提取物，它是迄今为止所有治疗当中最有效且无害的(Miyares Cao.Carlos，1997)。
使用Melagenina plus的治疗是局部的，一日一次且不能日光照射。其有效成分是一种α脂蛋白，它获得自人胎盘绒毛叶，通过用有机溶剂处理人胎盘绒毛叶，随后再溶解于乙醇和氯化钙溶液中而获得的。
L-脯氨酸不是一种普通的氨基酸，因为由于它的NH基团受临近碳原子的影响，它的结构被看作是一种亚氨基酸。因此，它被看作是分子量为115.1的α-氨基酸。
迄今为止，本领域中还没有关于脯氨酸的使用与黑素细胞产生增加之间有关联的报道，或与引起白癜风患者的皮肤再着色之间有关联的报导。
发明描述L-脯氨酸是本发明主题组合物的有效成分，它刺激皮肤黑色素的合成和黑素细胞的再生，而不具有进行的毒理学和临床试验所证明的严重的副作用。
本发明令人惊奇地证明了L-脯氨酸与上述本领域已经存在的产品相比在黑素生成过程中具有更优秀的效果。如药理学实验所证明的，该产品刺激皮肤黑色素的合成和黑素细胞的再生。如毒理学、畸形学和临床试验所证明的，没有报道有严重的副作用。易于获得和应用，该产品的再着色效果开始迅速(治疗的15-20天)，一旦终止使用该产品，它也是不可逆的。再着色以后，被治疗皮肤的颜色与正常皮肤区域的颜色是完全相同的，它不随时间而增加它的着色强度。
根据用本发明组合物进行的临床试验，已经证明脯氨酸对于治疗白癜风具有鼓舞人心的结果，在所有被治疗的患者中，它的应用已经显示了十分显著的效力。该产品在治疗该疾病时是通过口服途径给药的，一周只需3次，这在以前是达不到的。
获得本发明主题组合物的方法是通过使用0.5-2mg/mL浓度范围的试剂级L-脯氨酸(Sigma)溶液来进行的。为了该目的，使用70°-90°乙醇，在22-28℃下保存在120mL棕色玻璃瓶中。
实施例1测定80％乙醇水溶液和1.5mg/mL L-脯氨酸的黑素生成活性，与Melagenina Plus对CENPALAB提供的18-22g的C57BL6品系雄性黑鼠耳表皮基底层的黑素细胞的作用相比。
各产品试验重复三次。
该小鼠耳表皮的组织化学分析证明该组织中存在黑素细胞计数的改变(Nordlund等人，1981)。由5只动物构成的组各自进行下列试验。待试验的样品是A-对照80°乙醇B-Melagenina plusC-L-脯氨酸乙醇水溶液对小鼠局部施用进行研究。
在Bioterio中适应新环境10天的动物的平均体重是20.15g。一旦5次施用结束，在最后一次施用后的72小时内通过折断颈椎杀死(处死)动物。
处死以后，两只耳朵都用去毛霜去毛，去毛霜于涂敷10分钟后去除，然后用大量自来水冲洗耳朵。获得各只耳表皮并将它在L-多巴中进行培育组织化学方法的第一步包括，用手从软骨剥离皮肤，然后在室温下将各只耳的皮肤放入1M氯化钙溶液1-2小时，这可以帮助真皮-表皮的分离。一旦这个目的达到，用蒸馏水洗涤表皮10分钟，开始下列操作将表皮在85°乙醇中浸渍20分钟。
用蒸馏水洗涤。
在37℃下将它放入溶于磷酸盐缓冲液的L-多巴溶液(1mg/mL)中。更新该溶液，使表皮保留在其中12-15小时。然后用大量自来水冲洗，从组织去除过量的多巴。
用蒸馏水再洗涤一次。
将它在10％中性甲醛溶液中固定20分钟。
用蒸馏水再洗涤一次。
At the end it is montada in a simipermanente montagesolution选择耳朵的五个不同部位来测定黑素细胞的数量/mm2。选择较多黑素细胞数量的部位，使用专门用于细胞计数的DIGIPAT程序。测定各只动物的黑素细胞的数量/mm2，获得了10个值，因此，每组获得了50个值。
进行分析以确定L-脯氨酸的黑素生成作用，与Melagenina Plus相比。如
图1所示，已经证明了它相对于Melagenina Plus对黑鼠耳黑素细胞具有十分显著的较高的黑素生成作用。
实验结果显示，当局部施用乙醇水溶液时，氨基酸L-脯氨酸刺激了黑素细胞的再生和皮肤黑色素的合成。因此，与Melagenina Plus和乙醇(80°)相比，获得了数量更高的值。
实施例2在自愿的原则下选择21名白癜风患者进行人类临床试验。所有人都来自servicio clinico nacional del centro，如下分组性别女性10男性11种族白人16黑人4混血儿1年龄小于15岁4大于15岁17
脱色素百分率低于10％14介于10-20％3介于20-40％4需要注意的是，所选择的所有患者都有Melagenina Plus治疗-耐药至少一年。
治疗包括施用L-脯氨酸的80％乙醇水溶液，浓度1.5mg/mL，用手指在脱色部位揉搓，一周3次(周一、周三和周五)。
通过适当相应的皮肤和眼睛刺激来证明用于试验的产品的无害性。
在实验开始时准备各个患者的临床记录，拍摄脱色部位的数字图像，标明施用L-脯氨酸乙醇水溶液的部位。
一个月以后，把患者叫来检查治疗效果。在用被调查产品治疗的3个月和6个月重复此项工作。
在每次指定的点确定获得的再着色效果，如下评价显效身体褪色的％减少在损伤部位内部或边缘出现雀斑样的色素损伤面积减少中等损伤部位的颜色浑浊化程度没有消失或减少不好没有改变再次拍摄案例的被治疗区域的最终数字图像，其中发生了再着色的显著的可评估的改变。
这是6个月的临床试验。
临床试验结果下表显示了获得的结果以及图像(图2-13)。
表1再着色的结果
如上表所示，22名患者中仅有2名对治疗没有显示应答，他们中的18名显示出了显著到中度应答，只有1名患者中途退出了，因此无法评价他的结果。另一方面，应当注意的是，任何病例都没有报道损伤增加或出现了局部或全身副作用。获得的结果支持(证明)治疗的有效性以及L-脯氨酸乙醇水溶液的无害性。大多数患者一周仅使用3次就显示了肯定应答的事实表明它相对于Melagenina Plus的优越性，即使认为当每天使用时，他们中的所有人已经对该产品产生了抵抗力。
该化合物相对于Melagenina Plus的另一个优点是它的合成来源，它避免了对获得Melagenina Plus中所用的胎盘通常要进行的困难和昂贵的试验，防止了污染。
实施例3在制备后(新鲜的)以及加工后第12天和24天进行L-脯氨酸乙醇水溶液的分光光度计测定和氨基酸分析，以进行稳定性研究。根据以前的技术，证明制备溶液后2年，L-脯氨酸仍旧保持稳定(表2、3)。
表2分光光度计测量的稳定性研究结果(por fotometria)
权利要求
1.治疗白癜风的组合物，其特征在于包含在乙醇载体中的L-脯氨酸作为有效成分。
2.根据权利要求1的组合物，其特征在于乙醇赋形剂含0.52mg/mL比例的L-脯氨酸。
3.根据权利要求1的组合物，其特征在于70°-90°的乙醇作为乙醇载体。
4.L-脯氨酸用于治疗白癜风的用途。
5.治疗白癜风的方法，其特征在于包含L-脯氨酸的组合物是乙醇赋形剂，用于局部施用，用手指在受累区域揉搓，一周3次。
全文摘要
本发明涉及皮肤病学领域，尤其涉及可用于化妆品和药物领域的组合物，用于治疗由白癜风引起的损伤。本发明的组合物包含作为活性成分的氨基酸L－脯氨酸，它刺激皮肤黑色素的合成以及黑素细胞的再生，并且如进行的毒理学和临床研究所证实的，L－脯氨酸不引起严重的副作用。本发明的技术目的是获得有效治疗白癜风、而不具有毒性或不会使疾病复发的合成产品。
文档编号A61P17/00GK1845732SQ200480025492
公开日2006年10月11日 申请日期2004年8月3日 优先权日2003年8月5日
发明者C·M·米亚雷斯考, I·霍兰斯巴尔卡, R·皮米恩塔洛佩斯 申请人:胎盘组织治疗中心