口服施用的小肽协同增强抑制素活性的制作方法

专利名称：口服施用的小肽协同增强抑制素活性的制作方法
技术领域：
本发明涉及动脉粥样硬化领域。特别地，本发明关于鉴定可口服施用和改善动脉粥样硬化的一种或多种症状的一类肽。
背景技术：
心血管疾病是发病和死亡的主要原因，特别是在美国和西欧国家。心血管疾病的发展中涉及几个病因因素，包括对疾病的遗传素质、性别、生活方式因素，例如吸烟和膳食，年龄、高血压和高脂血症，包括高胆固醇血症。这些因素中的几个，特别是高脂血症和高胆固醇血症(高的血液胆固醇浓度)提供了与动脉粥样硬化相关的显著的危险因素。胆固醇作为脂蛋白粒子内部的游离的和酯化胆固醇存在于血液中，通常被称为乳糜微粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。在血液中的总胆固醇浓度受到以下影响(1)来自消化道的胆固醇吸收，(2)来自饮食成分，例如碳水化合物、蛋白、脂肪和乙醇的胆固醇合成，(3)通过组织，特别是肝脏，从血液中除去胆固醇和随后将胆固醇转化成胆汁酸、甾体激素和胆汁胆固醇。血液胆固醇浓度的维持受到遗传和环境因素的影响。遗传因素包括胆固醇生物合成中的限速酶浓度，肝脏在低密度脂蛋白受体的浓度、用于胆固醇胆汁酸转化的限速酶浓度、脂蛋白的合成和分泌的速度和人的性别。影响人类的血液胆固醇浓度的内环境平衡的因素包括饮食成分、吸烟的发生率、身体活动和各种药物试剂的使用。饮食的变数包括脂肪(饱和的和多不饱和的脂肪酸)的数量和种类，胆固醇的数量，纤维的数量和种类，也许还有维生素，例如维生素C和D，和矿物质，例如钙的数量。流行病学研究显示了高密度脂蛋白(HDL)和载脂蛋白(apo)A-I水平与动脉粥样硬化事件发生的负相关(Wilson et al.(1988)Arteriosclerosis 8737-741)。向用致动脉粥样化的膳食饲养的兔子注射HDL已经显示出抑制动脉粥样硬化的病变形成(Badimon et al.(1990)J.Clin.Invest.851234-1241)。由于其抗致动脉粥样化的性质，人apo A-I已经成为了密集研究的对象。可互换的载脂蛋白，包括apo A-I，具有脂质结合结构域(Brouilletteand Anantharamaiah(1995)Biochim.Biophys.Acta 1256103-129；Segrest et al.(1974)FEBS Lett.38247-253)。已经假定Apo A-I具有八个串联的重复22mer序列，其中大多数具有形成A类两亲螺旋结构的潜力(Segrest et al.(1974)FEBS Lett.38247-253)。A类两亲螺旋的特征包括在极性-非极性界面处带正电残基的存在，和在极性面的中心处带负电残基的存在(Segrestet al.(1974)FEBS Lett.38247-253；Segrest et al.(1990)ProteinsStructure，Function，and Genetics 8103-117)。已经显示Apo A-I强烈地与磷脂交联形成复合物，和促进胆固醇从富含胆固醇的细胞流出。有效地缓解动脉粥样硬化的一种或多种症状的apo A-I的血清水平的释放和维持，迄今为止被证明是难以捉摸的。
发明概述本发明提供了新的肽和氨基酸对，施用它们缓解了动脉粥样硬化和其它炎症性疾病，例如，类风湿性关节炎、红斑狼疮、多发性结节性动脉炎、骨质疏松症、阿尔茨海默氏病、充血性心力衰竭、内皮功能障碍、病毒疾病例如A型流行性感冒，和例如多发性硬化的疾病的一种或多种症状。在某些实施方式中，本发明的发现是，当用“D”氨基酸残基配制时含有A类两亲螺旋、和/或具有受保护的氨基和羧基末端的肽，可以被口服地施用给生物体，很容易被摄取和释放到血清，对于缓解动脉粥样硬化的一种或多种症状是有效的。在某些实施方式中，所述肽可以用所有的“L”氨基酸残基配制并且仍是有效的，特别是当通过除口服施用以外的途径施用时。还有一项发现是，如在此描述的具有疏水末端氨基酸或通过一种或多种疏水封闭基团处理后具有疏水性的末端氨基酸，和具有本文所述的内部的酸性的和/或碱性的、和/或脂肪族的、和/或芳香族的氨基酸的“小”肽(例如，长度范围约三个氨基酸到约11个氨基酸)也能够缓解动脉粥样硬化或以炎症性反应为特征的其它病变的一种或多种症状。本发明的肽和/或氨基酸对一般地对于刺激前-β高密度脂蛋白样粒子(pre-beta high density lipopretein-like particles)的形成和循环，和/或促进脂质转运和解毒，是有效的。在此描述的肽和/或氨基酸对对于预防骨质疏松症发作或抑制或消除骨质疏松症的一种或多种症状也是有效的。还有一项惊讶的发现是，所述肽和/或氨基酸对可被用于增强(例如，协同地增强)抑制素(statin)和/或依泽替米贝(Ezetimibe)或其它胆固醇摄取抑制物的活性，从而允许以更低剂量有效使用抑制素或胆固醇摄取抑制物，和/或使抑制素或胆固醇摄取抑制物在任何给定剂量变得抗炎性显著增强。在某些实施方式中，本发明提供了改善炎症性状况(例如，动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、红斑狼疮、多发性结节性动脉炎、骨质疏松症、阿尔茨海默氏病、病毒疾病、哮喘、糖尿病等等)的一种或多种症状的肽，或肽的组合和/或氨基酸对。某些优选的肽长度范围从3到约5个氨基酸；可以以大于约4mg/mL的浓度溶于乙酸乙酯；可溶于pH7.0的水性缓冲液；当在水性环境与磷脂接触时，形成直径约7.5nm的粒子，和/或形成层叠的双分子层(stacked bilayer)，双分子层尺寸大概(on the order of)3.4到4.1nm，层叠(stack)中双分子层之间的间隔大约2nm；具有低于约900道尔顿的分子量；将促炎症性(pro-inflammatory)HDL转化成抗炎性HDL，或使抗炎性HDL抗炎性更强；和不具有氨基酸序列Lys-Arg-Asp-Ser(SEQID NO238)，其中Lys-Arg-Asp和Ser都是L氨基酸。在某些实施方式中，这些肽保护磷脂(例如，1-棕榈酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(PAPC)，1-硬脂酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(SAPC))和1-硬脂酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(SAPE)。在某些实施方式中，这些肽可包括、但不限于在此描述的任何小肽。在某些实施方式中，本发明提供了改善炎症性状况(例如，动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、红斑狼疮、多发性结节性动脉炎、骨质疏松症、阿尔茨海默氏病、病毒疾病、哮喘、糖尿病等等)的一种或多种症状的肽，或肽的组合和/或氨基酸对。某些优选的肽的特征是式X1-X2-X3n-X4，其中n是0或1；X1是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；X4是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；和，当n是0时，X2是选自由酸性氨基酸、碱性氨基酸和组氨酸构成的组的氨基酸；和，当n是1时，X2和X3独立地是酸性氨基酸、碱性氨基酸、脂肪族氨基酸、或芳香族氨基酸，从而当X2是酸性氨基酸时；X3是碱性氨基酸、脂肪族氨基酸、或芳香族氨基酸；当X2是碱性氨基酸时；X3是酸性氨基酸、脂肪族氨基酸、或芳香族氨基酸；和当X2是脂肪族的或芳香族的氨基酸时，X3是酸性氨基酸，或是碱性氨基酸。某些优选的肽将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL或使抗炎性HDL抗炎性更强。在某些实施方式中，所述肽不具有氨基酸序列Lys-Arg-Asp-Ser(SEQID NO238)，其中Lys、Arg、Asp、和Ser都是L氨基酸。本发明的肽包括根据上式的肽，和/或包含上式的肽和/或这种肽的多联体(concatamers)的肽。在某些实施方式中，X1和X4独立地选自由丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、甲硫氨酸(Met)、带有疏水保护基团的丝氨酸(Ser)、β-萘基丙氨酸、α-萘基丙氨酸、正亮氨酸、环己基丙氨酸、带有疏水保护基团的苏氨酸(Thr)、带有疏水保护基团的酪氨酸(Tyr)、带有疏水保护基团的赖氨酸(Lys)、带有疏水保护基团的精氨酸(Arg)、带有疏水保护基团的鸟氨酸(Orn)、带有疏水保护基团的天冬氨酸(Asp)、带有疏水保护基团的半胱氨酸(Cys)和带有疏水保护基团的谷氨酸(Glu)构成的组。在某些实施方式中，肽是三体的(tri-mer)(即，N是0)。在某些三体中，X1是Glu、Leu、Lys、Orn、Phe、Trp或norLeu；X2是酸性的(例如，天冬氨酸、谷氨酸，等等)，或碱性的(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸，等等)，和X4是Ser、Thr、Ile、Leu、Trp、Tyr、Phe或norleu。在某些实施方式中，所述肽包含表3中所列的肽的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述肽是如表3中所示的受保护的三体。在某些实施方式中，n是1，所述肽是四体(tetramer)，或包含四体，其中X2和X3独立地是酸性氨基酸或碱性氨基酸，这样当X2是酸性氨基酸时，X3是碱性氨基酸，和当X2是碱性氨基酸时，X3是酸性氨基酸，X1和X4可以独立地包括选定的氨基酸，例如，如上所指出的。在某些实施方式中，X2和X3独立地选自Asp、Glu、Lys、Arg和His。在某些实施方式中，所述肽包含表4中所列的肽的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述肽是如表4中所示的受保护的四体。在又一个实施方式中，n是1，所述肽是四体，或包含四体，其中X2和X3独立地是酸性、碱性或脂肪族氨基酸，X2或X3之一是酸性或碱性氨基酸，这样当X2是酸性或碱性氨基酸时，X3是脂肪族氨基酸；和当X3是酸性或碱性氨基酸时，X2是脂肪族氨基酸。X1和X4可以独立地包括选定的氨基酸，例如，如上所指出的。在某些实施方式中，X2和X3独立地选自由Asp、Glu、Lys、Arg、His和Ile构成的组，更优选的选自由Asp、Arg、Leu和Glu构成的组。在某些实施方式中，所述肽包含表5中所列的肽的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述肽是如表5中所示的受保护的四体。在另一个实施方式中，n是1，所述肽是四体，或包含四体，其中X2和X3独立地是酸性、碱性或芳香族氨基酸，X2或X3之一是酸性或碱性氨基酸，这样当X2是酸性或碱性氨基酸时，X3是芳香族氨基酸；和当X3是酸性或碱性氨基酸时，X2是芳香族氨基酸。X1和X4可以独立地包括选定的氨基酸，例如，如上所指出的。在某些实施方式中，X2和X3独立地选自由Asp、Arg、Glu、Trp、Tyr、Phe和Lys构成的组。在某些实施方式中，所述肽包括表6中所列的肽的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述肽是如表6中所示的受保护的四体。本发明还提供了肽，所述肽是五体或包含五体(pentamer)(5-mer)，所述五体以式X1-X2-X3-X4-X5为特征，其中X1是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；X5是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；X2、X3和X4独立地选自芳香族氨基酸或组氨酸；和所述肽将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL，或使抗炎性HDL抗炎性更强。在某些实施方式中，X1和X5独立地选自由丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、甲硫氨酸(Met)、带有疏水保护基团的丝氨酸(Ser)、β-萘基丙氨酸、α-萘基丙氨酸、正亮氨酸、环己基丙氨酸、带有疏水保护基团的苏氨酸(Thr)、带有疏水保护基团的酪氨酸(Tyr)、带有疏水保护基团的赖氨酸(Lys)、带有疏水保护基团的精氨酸(Arg)、带有疏水保护基团的鸟氨酸(Orn)、带有疏水保护基团的天冬氨酸(Asp)、带有疏水保护基团的半胱氨酸(Cys)和带有疏水保护基团的谷氨酸(Glu)构成的组。在某些实施方式中，X2、X3和X4独立地选自由Phe、Val、Trp、Tyr和His构成的组。在某些实施方式中，所述肽包含表7中所列的肽的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述肽是如表7中所示的受保护的四体。本发明还提供了改善炎症性状况的一种或多种症状的更大的肽。在某些实施方式中，所述肽长度范围从5到11个氨基酸；末端氨基酸是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；非末端氨基酸形成至少一个酸性结构域和至少一个碱性结构域；所述肽将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL，或使抗炎性HDL抗炎性更强。在某些实施方式中，所述肽长度范围从5到11个氨基酸；末端氨基酸是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；非末端氨基酸形成至少一个酸性结构域或一个碱性结构域和至少一个脂肪族结构域；所述肽将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL，或使抗炎性HDL抗炎性更强。在其它实施方式中，所述肽长度范围从5到11个氨基酸；末端氨基酸是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；非末端氨基酸形成至少一个酸性结构域或一个碱性结构域和至少一个芳香族结构域；所述肽将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL，或使抗炎性HDL抗炎性更强。在其它的实施方式中，所述肽长度范围从6到11个氨基酸；末端氨基酸是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；非末端氨基酸形成至少一个芳香族结构域或通过一个或多个组氨酸分隔的两个或多个芳香族结构域；所述肽将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL，或使抗炎性HDL抗炎性更强。本发明还提供了改善炎症性状况的一种或多种症状和包含一种或多种两亲螺旋的肽。因而，本发明包括肽或肽的多联体，其长度范围约10到约30个氨基酸、优选的约18到约30个氨基酸；包含至少一个A类两亲螺旋；在所述两亲螺旋的非极性面的中心处包含一个或多个脂肪族或芳香族氨基酸；保护磷脂对抗氧化剂的氧化；并且其不是D-18A肽。在某些实施方式中，所述肽包含表2或表12中所列的肽的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述肽是如表2或表12中所示的受保护的四体。在某些实施方式中，本发明的肽保护磷脂(例如，1-棕榈酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(PAPC)，1-硬脂酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(SAPC))、1-硬脂酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(SAPE)对抗氧化剂(例如，13(S)-HPODE、15(S)-HPETE、HPODE、HPETE、HODE、HETE，等等)的氧化。在此描述的任何肽可在氨基末端氨基酸(例如，X1)和/或羧基末端氨基酸(例如，X4、X5，等等)上带有一个或多个疏水保护基团。所述保护基团可以附着于氨基或羧基末端和/或氨基酸的侧链(R基团)。所述保护基团可以直接地偶联(例如，经由共价键)或间接地偶联(例如，经由接头)。优选的疏水的保护基团包括，但不限于，叔丁氧羰基(Boc)、Fmoc、烟酰基、OtBu、苯甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酯基、甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、N-甲基氨基邻甲苯基(N-methyl anthranilyl)、3到20碳烃基、酰胺、3到20碳烃基基团、9-芴乙酰基(fluoreneacetyl)基团、1-芴羧基(fluorenecarboxylic)基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基(9-fluorenone-1-carboxylic)基团、苄氧基羰基(benzyloxycarbonyl，如上所述地也称为苄酯基)、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(2，2，5，7，8-pentamethyl chroman-6-sulphonyl)(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、三氟乙酰基(TFA)、4-[N-{1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)-3-甲基二丁基)-氨基}苯甲基酯(ODmab)、α-烯丙酯(OAll)、2-苯基异丙基酯(2-PhiPr)、1-[4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-基-亚基)乙基(Dde)，等等。在某些实施方式中，所述疏水保护基团选自由Boc、Fmoc、烟酰基和OtBu构成的组。在某些实施方式中，肽的N-末端被选自由Boc-、Fmoc-和烟酰基-构成的组的保护基团封闭，和/或肽的C-末端被选自由tBu和OtBu构成的组的保护基团封闭。任选地，所述肽也可以包括至少一个D氨基酸。在某些实施方式中，所述肽包括多个D-氨基酸，或甚至可以包括全部是D-氨基酸。在某些实施方式中，所述肽包含交替的D-和L-氨基酸。所述肽也可以都是L-形式的氨基酸。所述肽可以是分离的(例如，基本上纯的)、干燥的或在溶液中的，和/或与药理学上可接受的赋形剂组合的。在某些实施方式中，所述肽与适合于向哺乳动物(例如，人或非人哺乳动物)口服施用的药理学上可接受的赋形剂混合。所述肽可以作为药学上可接受的赋形剂中的单位制剂和/或作为定时释放制剂来提供。所述肽也可以与一种或多种生物素偶联(例如，直接地、经由接头、和/或经由氨基酸侧链)。在某些实施方式中，生物素与赖氨酸(Lys)偶联。在某些实施方式中，本发明还提供了改善炎症性状况的一种或多种症状的氨基酸对。所述氨基酸对一般地包含带有至少一个保护基团的第一氨基酸；带有至少一个保护基团的第二氨基酸；其中所述第一氨基酸和第二氨基酸是不同类的氨基酸，和其中所述氨基酸对将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL，或使抗炎性HDL抗炎性更强。在氨基酸对的各种实施方式中，当在水性环境与磷脂接触时，形成直径大约7.5nm的粒子和形成层叠双分子层，双分子层尺寸大概3.4到4.1nm，在层叠中双分子层之间的间隔大约2nm。在某些实施方式中，所述第一和第二氨基酸独立地选自由酸性氨基酸、碱性氨基酸和非极性氨基酸构成的组。在某些实施方式中，所述第一氨基酸是酸性的或碱性的和所述第二氨基酸是非极性的，或所述第一氨基酸是非极性的和所述第二氨基酸是酸性的或碱性的。在某些实施方式中，两个氨基酸都使酸性的或碱性的。任选地，所述第一和第二氨基酸可以共价地偶联在一起，例如，直接地或经由接头偶联。在某些实施方式中，氨基酸经由肽键连接从而形成二肽。在某些实施方式中，所述第一氨基酸和第二氨基酸被混合在一起，而不是共价连接的。所述保护基团包括、但不限于在此描述的任何保护基。在某些实施方式中，所述第一氨基酸被选自由Boc-、Fmoc-和烟酰基-构成的组的保护基团封闭，和所述第二氨基酸被选自由tBu和OtBu构成的组的保护基团封闭。在某些实施方式中，每个氨基酸带有至少两个保护基团。在某些实施方式中，每个氨基酸被选自由Boc-、Fmoc-和烟酰基-构成的纽的第一保护基团，和选自由tBu和OtBu构成的组的第二保护基团封闭。在某些实施方式中，每个氨基酸被Boc和OtBu封闭。在各种实施方式中，所述氨基酸对形成选自由Phe-Arg、Glu-Leu和Arg-Glu构成的组的二肽。在某些实施方式中，所述氨基酸对形成选自由Boc-Arg-OtBu、Boc-Glu-OtBu、Boc-Phe-Arg-OtBu、Boc-Glu-Leu-OtBu和Boc-Arg-Glu-OtBu构成的组的二肽。本发明还提供了包含一种或多种在此描述所述肽、和/或氨基酸对，和药学上可接受的赋形剂的药物制剂。一般地，所述肽、和/或氨基酸对以有效剂量存在。所述肽、和/或氨基酸对也可以作为定时释放制剂和/或作为单位剂量制剂提供。在某些实施方式中，所述制剂被配制为用于口服施用的。在某些实施方式中，所述制剂被配置为用于通过选自由口服施用、吸入(例如，鼻部施用、口腔吸入，等等)、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注射、经皮的施用、吸入施用、肌肉注射等构成的组的途径施用。还提供了试剂盒，所述试剂盒包含含有在此描述的一种或多种肽、和/或氨基酸对的容器，和指导材料，教导在治疗以炎症为特征的病变(例如，动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、红斑狼疮、多发性结节性动脉炎、哮喘、骨质疏松症、阿尔茨海默氏病、病毒疾病，等等)中使用所述肽、和/或氨基酸对。本发明还提供了在哺乳动物(人或非人哺乳动物)中缓解(例如，降低或消除)动脉粥样硬化的一种或多种症状的方法。该方法一般地包括向所述哺乳动物施用有效量的一种或多种在此描述的肽、和/或氨基酸对。所述肽、和/或氨基酸对可以在药学上可接受的赋形剂中施用(例如，口服施用)，并且任选地可以与脂质联合(例如，之前、之后或同时)施用。所述施用可以包括通过选自由口服施用、吸入(例如，鼻部施用、口腔吸入，等等)、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注射、经皮的施用和肌肉注射构成的组的途径施用所述肽、和/或氨基酸对。在某些实施方式中，所述哺乳动物是被诊断为具有一种或多种动脉粥样硬化症状的哺乳动物。在某些实施方式中，所述哺乳动物是被诊断为存在中风或动脉粥样硬化的风险的哺乳动物。在另一个实施方式中，本发明提供了缓解炎症性病变(例如，动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、红斑狼疮、多发性结节性动脉炎、骨质疏松症、多发性硬化、糖尿病、哮喘、阿尔茨海默氏病、病毒疾病，等等)的一种或多种症状方法。该方法一般地包括向哺乳动物施用有效量的一种或多种在此描述的肽、和/或氨基酸对。所述肽、和/或氨基酸对可以在药学上可接受的赋形剂中施用(例如，口服施用)，并且任选地可以与脂质联合(例如，之前、之后或同时)施用。所述施用可以包括通过选自由口服施用、吸入、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注射、经皮的施用和肌肉注射构成的组的途径施用所述肽、和/或氨基酸对。在某些实施方式中，所述哺乳动物是被诊断为具有一种或多种炎症性病变症状的哺乳动物。在某些实施方式中，所述哺乳动物是被诊断为存在炎症性病变的风险的哺乳动物。本发明的所述肽、和/或氨基酸对还与抑制素和/或与选择性胆固醇摄取抑制物(例如，依泽替米贝(Ezetimibe)协同地起作用。该方法一般地包括与抑制素和/或胆固醇摄取抑制物共同施用有效量的一种或多种在此描述的肽。在某些实施方式中，所述抑制素选自由西立伐他汀(cerivastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、罗苏伐他汀(rosuvastatin)和匹伐他汀(pitavastatin)构成的组。所述肽可以在之前、之后或同时地与抑制素和/或胆固醇摄取抑制物施用。所述肽和/或所述抑制素和/或胆固醇摄取抑制物可以作为单位剂量制剂施用。在某些实施方式中，所述施用包含通过选自由口服施用、鼻部施用、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注射、经皮的施用和肌肉注射构成的组的途径施用所述肽和/或所述抑制素。所述哺乳动物包括、但不限于，被诊断为具有动脉粥样硬化的一种或多种症状的，或被诊断为存在中风或动脉粥样硬化的风险的哺乳动物。本发明还提供了在哺乳动物中缓解与动脉粥样硬化相关的一种或多种症状的方法。该方法一般地包括施用抑制素和/或选择性胆固醇摄取抑制物；和有效量的一种或多种在此描述的肽、和/或氨基酸对，其中与在不存在所述肽、和/或氨基酸对的情况下施用的抑制素或胆固醇摄取抑制物的有效量相比，所述抑制素和/或胆固醇摄取抑制物的有效量更低。在某些实施方式中，与在不存在所述抑制素和/或胆固醇摄取抑制物的情况下施用的肽、和/或氨基酸对的有效量相比，所述肽、和/或氨基酸对的有效量更低。在某些实施方式中，所述抑制素选自由西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、罗苏伐他汀和匹伐他汀构成的组。所述肽可以在之前、之后或同时地与抑制素和/或胆固醇摄取抑制物施用。所述肽、和/或氨基酸对，和/或所述抑制素和/或胆固醇摄取抑制物可以作为单位剂量制剂施用。在某些实施方式中，所述施用包括通过选自由口服施用、吸入、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注射、经皮的施用和肌肉注射构成的组的途径施用所述肽、和/或氨基酸对，和/或所述抑制素。哺乳动物包括、但不限于，被诊断为具有动脉粥样硬化的一种或多种症状的，或被诊断为存在中风或动脉粥样硬化的风险的哺乳动物。所述哺乳动物包括、但不限于，被诊断为具有动脉粥样硬化的一种或多种症状的，或被诊断为存在中风或动脉粥样硬化的风险的哺乳动物。在又一个实施方式中，本发明提供了在哺乳动物中降低或抑制骨质疏松症的一种或多种症状的方法。该方法一般地包括向所述哺乳动物施用一种或多种在此描述的肽、和/或氨基酸对，其中所述肽、和/或氨基酸对以足够降低或消除骨质疏松症的一种或多种症状的浓度施用。在某些实施方式中，所述肽、和/或氨基酸对以足够降低或消除骨骼的脱钙作用的浓度施用。在某些实施方式中，所述肽、和/或氨基酸对以足够诱导骨骼的复钙作用(recalcification)的浓度施用。所述肽、和/或氨基酸对可以与药理学上可接受赋形剂(例如，适合于向哺乳动物口服施用的赋形剂)组合。在某些实施方式中，本发明的方法和/或肽排除了在WO97/36927、和/或美国专利6,037,323、和/或6,376,464、和/或6753,313、和/或在Garber et al.(1992)Arteriosclerosis and Thrombosis，12886-894中公开的任何一种或多种肽。在某些实施方式中，本发明排除了在美国专利4,643,988和/或在Garber等(1992)中公开的任何一种或多种肽，那些肽都是由对映异构的L氨基酸合成的、或肽是保护基团时用D氨基酸合成的。在某些实施方式中，本发明排除了具有式A1-B1-B2-C1-D-B3-B4-A2-C2-B5-B6-A3-C3-B7-C4-A4-B8-B9(SEQ ID NO(SEQID NO1)的肽，其中A1、A2、A3和A4独立地是天冬氨酸或谷氨酸，或其同系物或类似物；B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8和B9独立地是色氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、亮氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、缬氨酸或α-萘基丙氨酸，或其同系物或类似物；C1、C2、C3和C4独立地是赖氨酸或精氨酸，和D是丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸、甘氨酸、组氨酸，或其同系物或类似物；条件是，当A1和A2是天冬氨酸时，A3和A4是谷氨酸，B2和B9是亮氨酸，B3和B7是苯丙氨酸，B4是酪氨酸，B5是缬氨酸，B6、B8和D是丙氨酸，和C1、C2、C3和C4是赖氨酸，B1不是色氨酸。在某些实施方式中，虽然本发明可能排除如上所述的一种或多种肽，SEQ ID NO8(4F或D4F)将被清楚地包括在本发明内。在某些实施方式中，本发明排除了在WO 97/36927中的任何一种或多种肽和/或其D变体。特定的实施方式排除了一种或多种以下内容如在WO 97/36927中描述的载脂蛋白A、载脂蛋白A-I、载脂蛋白A-2、载脂蛋白A4、载脂蛋白B、载脂蛋白B-48、载脂蛋白B-100、载脂蛋白C、载脂蛋白C-1、载脂蛋白C-2、载脂蛋白C-3、载脂蛋白D、载脂蛋白E。在某些实施方式中，还排除的是在美国专利6,037,323中公开的任何一种或多种肽和/或其D变体。特定的实施方式排除了apo A-I拮抗剂化合物，包含(i)在存在脂质的情况下形成两亲α螺旋并包含下式的18到22残基的肽或肽类似物Z1-X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-Z2(SEQID NO2)，其中X1是Pro(P)、Ala(A)、Gly(G)、Asn(N)、Gln(Q)或D-Pro(p)；X2是脂肪族氨基酸；X3是Leu(L)；X4是酸性氨基酸；X5是Leu(L)或Phe(F)；X6是Leu(L)或Phe(F)；X7是碱性氨基酸；X8是酸性氨基酸；X9是Leu(L)或Tro(W)；X10是Leu(L)或Trp(W)；X11是酸性氨基酸或Asn(N)；X12是酸性氨基酸；X13是Leu(L)、Trp(W)或Phe(F)；X14是碱性氨基酸或Leu(L)；X15是Gln(Q)或Asn(N)；X16是碱性氨基酸；X17是Leu(L)；X18是碱性氨基酸；Z1是H2N--或RC(O)NH--；Z2是--C(O)NRR、--C(O)OR或--C(O)OH或其盐；每个R独立地是--H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)炔基、(C5-C20)芳基、(C6-C26)烷芳基、5-20有支的异芳基(membered heteroaryl)或6-26有支的烷异芳基或1到4残基肽或肽类似物，其中在残基1-7之间的一个或多个键独立地是取代的酰胺、酰胺的电子等排物或酰胺模拟物；和在残基X1直到X18之间的每个“-”独立地指示酰胺键、取代的酰胺键、酰胺的电子等排物或酰胺模拟物；或(ii)式(I)的改变的形式，其中X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、X16、X17或X18残基中的至少一个被另一个残基、和/或其D变体保守地替换。在某些实施方式中，本发明排除了具有序列Lys-Arg-Asp-Ser(SEQ ID NO238)的肽，和在某些实施方式中，本发明排除了具有序列Lys-Arg-Asp-Ser(SEQ ID NO238)的肽，其中Lys-Arg-Asp和Ser都是L氨基酸。在某些实施方式中，根据美国专利6,376,464中提供的检测方法测量，本发明的肽显示了低于38％，优选的低于约35％、更优选的低于约30％或低于约25％的LCAT活化活性。
定义术语“多肽”、“肽”和“蛋白”在此可互换地使用，来指氨基酸残基的聚合物。该术语适用于这样的氨基酸聚合物，在其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然发生的氨基酸的人工化学类似物，还适合于天然发生的氨基酸聚合物。术语“A类两亲螺旋(class A amphipathic helix)”是指形成α-螺旋的蛋白质结构，产生极性和非极性面的分离，在极性-非极性界面处存在带正电荷残基，在极性面的中心处存在带负电残基(参见，例如Segrest et al.(1990)ProteinsStructure，Function，and Genetics 8103-117)。当涉及“改善动脉粥样硬化的一种或多种症状”时，术语“改善”是指减少、预防或消除以动脉粥样硬化和/或相关病变为特征的一种或多种症状。这种降低包括、但不限于，氧化的磷脂的减少或消除，动脉粥样硬化的斑块形成和破裂的减少，临床事件例如心脏病发作、绞痛或中风的减少，高血压的下降，炎症性蛋白生物合成的下降，血浆胆固醇的减少，等等。“改善动脉粥样硬化的一种或多种症状”也可以指改善受动脉粥样硬化影响的向血管床的血流。术语“对映体氨基酸”是指以互为不能重叠的镜像的至少两种形式存在的氨基酸。大多数氨基酸(除甘氨酸外)是对映的，以所谓的L-型(L氨基酸)或D-型(D氨基酸)存在。大多数天然发生的氨基酸是“L”氨基酸。术语“D氨基酸”和“L氨基酸”被用于指氨基酸的绝对构型，而不是指平面偏光的特定旋转方向。在此的用法与本领域的技术人员的标准用法相一致。术语“保护基团”是指一种化学基团，当其附着于氨基酸上的官能团时(例如，侧链、α氨基、α羧基，等等)封闭或掩盖该官能团的性质。优选的氨基末端保护基团包括、但不限于乙酰基或氨基。其它氨基末端保护基团包括、但不限于脂肪酸中的烷基链、丙酰基、甲酸基，等等。优选的羧基末端保护基团包括、但不限于形成酰胺或酯的基团。术语“侧链保护基团”是指保护/封闭氨基酸的侧链(即，R基团)的保护基团。侧链保护基团包括、但不限于氨基保护基团、羧基保护基团和羟基保护基团例如芳基醚，和胍保护基团例如硝基、甲苯磺酰基，等等。用语“保护磷脂免于氧化剂的氧化”是指，当磷脂与氧化剂(例如，过氧化氢、13-(S)-HPODE、15-(S)-HPETE、HPODE、HPETE、HODE、HETE，等等)接触时，化合物减少磷脂的氧化速率(或产生的氧化磷脂的数量)的能力。术语“低密度脂蛋白”或“LDL”是根据本领域技术人员的通用用法定义的。一般地，LDL是指当用超速离心法分离时以密度范围d＝1.019到d＝1.063存在的脂质-蛋白质复合物。术语“高密度脂蛋白”或“HDL”是根据本领域技术人员的通用用法定义的。一般地，“LDL”是指当用超速离心法分离时以密度范围d＝1.063到d＝1.21存在的脂质-蛋白质复合物。术语“I组HDL”是指减少氧化的脂质(例如，低密度脂蛋白中的)或保护氧化的脂质免于被氧化剂氧化的高密度脂蛋白或其成分(例如，apoA-I、对氧磷酶、血小板活化因子乙酰基水解酶，等等)。术语“II组HDL”是指在保护脂质免于氧化方面或在修复(例如，减少)氧化的脂质方面提供了减少的活性或没有活性的HDL。术语“HDL成分”是指包含高密度脂蛋白(HDL)的成分(例如，分子)。保护脂质免于氧化或修复(例如，减少氧化的脂质)的HDL的检测，还包括显示了这种活性的HDL的成分的检测(例如，apo A-I、对氧磷酶、血小板活化因子乙酰基水解酶，等等)。术语“人apo A-I肽”是指全长人apo A-I肽，或包含A类两亲螺旋的其片段或结构域。在此使用的“单核细胞反应”是指有与动脉粥样硬化斑块形成相关的“炎症性反应”特征的单核细胞活性。单核细胞反应的特征是，单核细胞附着到血管壁的细胞(例如血管内皮的细胞)，和/或趋化进入内皮下的间隙，和/或单核细胞分化成巨噬细胞，和/或体外测量(例如，利用神经探测室)的单核细胞趋化性。当涉及氧化的磷脂数量时，术语“没有变化”是指没有可检测的变化，更优选的指没有统计学上显著的变化(例如，至少85％，优选的至少90％，更优选的至少95％，和最优选的至少98％或99％的可信水平)。没有可检测的变化也可以指一种检测，其中氧化的磷脂水平变化了，但不像不存在此处描述的蛋白时、或参考其它阳性或阴性对照时那么多。在此使用以下缩写PAPCL-A-I-棕榈酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；POVPC1-棕榈酰-2(5-氧戊酰)-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；PGPC1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；PEIPC1-棕榈酰-2-(5，6-环氧异前列腺烷(epoxyisoprostane)E2)-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；ChC18:2胆甾烯基亚油酸；ChC18:2-OOH胆甾烯基亚油酸过氧化氢物；DMPC1，2-双十四烷酰十四烷酰-rac-甘油-3-磷酸胆碱；PON对氧磷酶；HPF标准化的高倍视野；PON对氧磷酶；BL/6C57BL/6J；C3H:C3H HeJ。关于蛋白或肽使用术语“保守性替换”是体现实质上不改变分子的活性(特异性(例如，对于脂蛋白))或结合亲合性(例如，对于脂质或脂蛋白)的氨基酸替换。一般地，保守性氨基酸包括将一个氨基酸替换为具有类似化学性质(例如，电荷或疏水性)的另一个氨基酸。以下的六组各自包含相互是典型的保守性替换的氨基酸1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；和6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。术语“同一的”或“同一性”百分比在两个或多个核酸或多肽序列的上下文中是指，当进行最大相应性比较或比对、使用以下序列比较算法之一测量或通过目测检查时，两个或多个序列或子序列是相同的或有特定百分比的相同氨基酸残基或核苷酸。对于本发明的肽，在肽的全长上测定序列同一性。对于序列比较，一般地一个序列作为参考序列，测试序列与其进行比较。当使用序列比较算法时，将测试和参考序列输入到计算机中，指定子序列坐标(coordinates)，如有必要，指定序列算法程序参数。然后序列比较算法根据指定的程序参数，计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。可以通过，例如，Smith & Waterman，Adv.Appl.Math.2482(1981)的局部同源性算法，Needleman & Wunsch，J.Mol.Biol.48443(1970)的同源性比对算法，Pearson & Lipman(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 852444的相似性搜索法，这些算法的计算机化实现方式(Wisconsin GeneticsSoftware Package，Genetics Computer Group，575 Science Dr.，Madison，WI中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)，或通过目测检查(一般参见Ausubelet al.，同上)来进行用于比较的、最佳的序列比对。有用算法的一个实例是PILEUP。PILEUP使用渐进的、成对的比对来创建来自一组有关序列的多个序列比对，显示相互关系和序列同一性百分比。它还标绘出树或树形图来显示用于产生比对的簇相互关系。PILEUP使用了Feng & Doolittle(1987)J.Mol.Evol．35351-360的渐进比对方法的简化形式。使用的该方法类似于Higgins & Sharp(1989)CABIOS 5151-153描述的方法。该程序可以比对多达300个序列，每个的最大长度为5,000核苷酸或氨基酸。多重比对步骤开始于两个最相似序列的成对比对，产生两个被比对序列的簇。然后将这个簇与下一个最相关的序列或被比对序列的簇进行比对。通过两个独立序列的成对比对的简单扩展来比对两个序列簇。通过一系列渐进的、成对的比对，完成最终的对准。通过指定具体序列和它们用于序列比较的区域的氨基酸或核苷酸坐标，和通过指定程序参数来运行程序。例如，可以将参考序列与其它测试序列比较来确定序列同一性百分比相互关系，使用以下参数默认的缺口权重(3.00)、默认缺口长度权重(0.10)和加权的末端缺口。适合于确定序列同一性和序列相似百分比的算法的另一个实例是BLAST算法，其在Altschul et al.(1990)J. Mol.Biol.215403-410中被描述。用于执行BLAST分析的软件在国家生物技术信息中心(http//www.ncbi.nlm.nih.gov/)是公众可获得的。这个算法包括，首先通过在查询序列中鉴定长度W的短字来鉴定高分序列对(HSP)，当与数据库序列中相同长度的字比对时，高分序列对匹配或满足某些正评估的阈值分T。T被称为邻近字分数阈值(Altschul et al.，同上)。这些最初的邻近字采样充当了开始搜索以发现含有它们的更长的HSP的种子。然后沿着每个序列的两个方向延伸所述字采样，直到累积的比对计分可被提高。对于核苷酸序列，使用参数M(匹配的残基对的奖励分；总是＞0)和N(错配残基的罚分；总是＜0)来计算累积的计分。对于氨基酸序列，使用计分矩阵来计算累积的分数。当累积的比对分数从其达到的最大值下降了数值X；由于一个或多个负分数残基比对的积累，累积的计分达到零或低于零；或到达任何一个序列的结尾；时，停止在每个方向上字采样的延伸。BLAST算法的参数W、T和X决定了比对的敏感性和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)默认使用的是字长度(W)11，期望值(E)10，M＝5，N＝-4，比较两个链。对于氨基酸序列，BLASTP程序默认使用的是，字长度(W)3，期望值(E)10，和BLOSUM62计分矩阵(参见Henikoff&Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8910915)。除了计算序列同一性百分之之外，BLAST算法还进行两个序列之间的相似性统计分析(参见，例如，Karlin & Altschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，905873-5787)。BLAST算法提供的一种相似性测量法是最小求和概率(P(N))，其提供了在两个核苷酸或氨基酸序列之间可能偶然出现匹配的概率指示。例如，如果在与参考核酸比较测试核酸时最小求和概率低于约0.1，更优选的低于约0.01，和最优选的低于约0.001时，核酸被认为是与参考序列相似的。术语“D-18A肽”是指具有序列D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F(SEQ ID NO3)的肽，其中所有的对映体氨基酸是D型氨基酸。例如，当对于本发明的肽和另一个活性试剂(例如，抑制素)使用术语“共施用”或“共同施用”时，是指使用所述肽和所述活性试剂从而两者都可以同时达到生理学效果。然而，这两种试剂不必同时施用。在某些实施方式中，一个试剂的施用可以先于另一个的施用，然而，这种共施用一般引起两个试剂以任何给定剂量的最大血清浓度的显著分数(例如，20％或更高，优选的30％或40％或更高，更优选的50％或60％或更高，最优选的70％或80％或90％或更高)同时地存在于体内(例如，血浆中)。当关于脂质、LDL或HDL使用术语“解毒”时，是指除去某些或全部的氧化的脂质(oxidizing lipids)和/或氧化后的脂质(oxidized lipids)。因而，例如，摄取全部或某些HPODE和/或HPETE(脂肪酸上的过氧化物)将阻止或降低这些过氧化物进入LDL，从而防止或降低LDL氧化。术语“前-β高密度脂蛋白样粒子(pre-beta high densitylipoprotein-like particles)”一般是指含有粒子的胆固醇，所述粒子还含有apo A-I，其更加小，并且与大多数HDL粒子中的脂质蛋白质比率相比，相对是脂质贫乏的。当用FPLC分离血浆时，这些“前-β高密度脂蛋白样粒子”存在于FPLC馏分中，所述FPLC馏分含有比主要HDL峰中的粒子更小的粒子，位于FPLC色谱中HDL的右侧，如在相关申请USSN 10/423,830中所示。用语“反向脂质转运和解毒”是指从组织，例如动脉中除去脂质，包括胆固醇，其它固醇，包括氧化的固醇、磷脂、氧化剂和氧化的磷脂，并从这些周围的组织转运出来到达器官中，在所述器官中它们可以被解毒和分泌，例如通过肝脏排出到胆汁中，和通过肾排出到尿中。解毒还指阻止如在此说明的氧化的磷脂形成，和/或破坏氧化的磷脂。如在此使用的术语“生物样品”是指从活的生物体或从已经死亡的生物体获得的任何样品。生物样品的实例包括取自生物体(例如人或非人哺乳动物)的体液、组织样本、细胞和细胞系。当涉及疏水保护基团或疏水封闭基团时术语“酰胺”包括甲基胺或乙基胺的单酰胺。该术语还包括烷基酰胺例如CO-NH-R，其中R是甲基、乙基，等等(例如，达到约7、优选的9、更优选的11或13个碳)。术语“D肽”是指一种肽，其中所述包含的一个或多个对映体氨基酸是D型氨基酸。在某些实施方式中，多个对映体氨基酸是D型氨基酸。在某些实施方式中，至少一半的对映体氨基酸是D型氨基酸。在某些实施方式中，所述肽包含交替的D和L型氨基酸。在某些实施方式中，所有的对映体氨基酸是D型氨基酸。术语“L”肽是指一种肽，其中所有的氨基酸(对映体氨基酸)是L型氨基酸。“将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL或使抗炎性HDL抗炎性更强”的肽是指，当向哺乳动物(例如，人、大鼠、小鼠，等)施用时，或当用于适合的活体外检测(例如，如在此描述的)时，与对照检测中的HDL相比(例如，来自施用了较低剂量的所述肽的对照动物或检测的HDL、或来自缺乏所述肽的阴性对照动物或检测的HDL)，将HDL转化成这样的一种HDL，该HDL降低或阻断氧化剂的脂质氧化(例如，如在USSN 6,596,544中描述的)，和/或具有提高的对氧磷酶活性，和/或降低由动脉壁细胞产生的LDL诱导的单核细胞趋化活性。HDL的改变(从无保护作用的转化成有保护作用的，或在保护活性方面增加)优选的是可检测的变化。在优选的实施方式中，所述变化是统计学上显著的变化，例如，使用任何适合于提供数据集的统计测验(例如，t-测验、变异量分析(ANOVA)、半参数技术、非参数技术(例如，Wilcoxon Mann-Whitney Test、Wilcoxon Signed RanksTest、Sign Test、Kruskal-Wallis Test，等等))来确定。优选的，统计学上显著的变化是至少85％、更优选的至少90％、再更优选的至少95％、和最优选的至少98％或99％可信水平的显著性。在某些实施方式中，所述变化是至少10％的变化，优选的至少20％的变化，更优选的至少50％的变化，和最优选的至少90％的变化。当在此使用时，例如关于施用包含两种氨基酸的氨基酸对、关于使用本发明的肽的组合、关于与其它药理学的活性药剂(例如，一种或多种抑制素)一同使用本发明的肽/氨基酸对，等等，术语“联合”表示施用两种(或多种)试剂，使得在它们对生物体的生理学活性方面存在至少某些时间顺序上的重叠。因而可以同时地和/或次序地施用两种或多种试剂。在次序的施用种，只要当第二施用的试剂被施用或在生物体内变成有活性时，第一施用的试剂已经对生物体发挥了某些生理学上的改变，在施用第二试剂前甚至可以有相当多的延迟(例如，数分钟乃至数小时或数天)。
附图的简要说明附

图1说明了根据本发明的肽的液相合成的合成方案。附图2说明了使用附图1描述的过程合成四肽的过程。附图3显示了Boc-Lys(Boc)-Arg-Asp-Ser(tBu)-OtBu(全由D氨基酸合成)(表4种SEQ ID NO238)的预孵育(pre-treatment)但不是共孵育(Co-inc)抑制了由人动脉壁细胞(HAEC)产生的LDL诱导的单核细胞趋化活性。将细胞与125μg/mL、250μg/mL、或500μg/mL的肽预孵育，然后除去肽，添加了带有新鲜培养基的100μg/mL胆固醇的LDL，或与LDL一同添加相同浓度的肽，测定单核细胞趋化活性。附图4显示了，将附图3中描述的四肽添加到apoE裸小鼠的饮用水中，与D-4F相似，可以将HDL和HDL后的FPLC馏分从促炎症性转化成抗炎性。所述四肽或D-4F以5μg/mL的浓度添加到小鼠(每种条件n＝4)的饮用水中18小时。对小鼠放血，通过FPLC分离它们的脂蛋白。将100μg/mL胆固醇的对照人LDL添加(LDL)或不添加(未添加)到人动脉壁共培养物，或与来自正常人类对照受试者(+对照HDL)的50μg/mL的HDL一同添加，或与来自apoE裸小鼠的50μg/mL的HDL一同添加，所述小鼠接受了无肽(+水对照HDL)的饮用水，或接受了四肽(+D-TetraHDL)或D-4F(+D4F HDL)或HDL后FPLC馏分(post-HDL FPLC fractions)，所述HDL后FPLC馏分来自未接受所述肽的apoE裸小鼠(+HDL后水对照)，或来自接受了所述四肽的(+D-Tetra post HDL)小鼠或接受了20μg/mLD-4F(+D4F post HDL)以及100μg/mL胆固醇的人类对照LDL的小鼠。8小时后检测上清液的单核细胞趋化活性。附图5显示了，接受了饮用水中的D-四肽或D-4F的apoE裸小鼠具有诱导更少的单核细胞趋化活性的LDL。来自附图4中描述的小鼠的FPLC馏分的LDL以100μg/mL添加到共培养物中。8小时后检测上清液的单核细胞趋化活性。附图6显示了，口服给予全由D氨基酸合成的表4的SEQ IDNO258(在附图中称为D-11)，或D-4F产生了apoE裸小鼠中的HDL抗炎性，但是如D-4F中一样含有相同D氨基酸、但以杂乱序列排列、防止脂质结合的肽，没有产生所述抗炎性。由D氨基酸合成的五百微克SEQ IDNO258(D-11)或500μg D-4F(D-4F)或500μg杂乱的D-4F(Scramb.Pept)通过软管滴注到雌性3个月大apoE裸小鼠的胃中，(n＝4)，20分钟后(管饲20分钟后)或6小时后(管饲6小、时后)对小鼠进行放血。分离血浆，通过FPLC分离HDL。人大动脉内皮细胞的培养物只接受了培养基(无添加/检测对照)，不含(LDL/检测对照))或含有50μgm/mL胆固醇的标准对照人类HDL((LDL+对照HDL/检测对照)的100μgm/mL胆固醇的标准正常人类LDL，或100μgm/mL胆固醇的对照人类LDL与50μgm/mL胆固醇的小鼠HDL一同添加，所述小鼠HDL获得自接受了杂乱的D-4F肽(LDL+Scramb.Pept.HDL)、或D-4F(LDL+D-4F HDL)、或全由D氨基酸制成的SEQ ID NO258(LDL+D-11HDL)的小鼠。孵育培养物8小时。然后检测上清液的单核细胞趋化活性。数值是9个高倍视野中迁移的单核细胞的数目的平均值±SD。*表示p＜0.001。附图7显示了，接受D-4F或由D氨基酸合成的表4的SEQ IDNO258(称为D-11)(但不是来自接受了杂乱的D-4F的小鼠)的apo E裸小鼠具有诱导更低单核细胞趋化活性的LDL。来自附图6中描述的小鼠的FPLC馏分的LDL以100μg/mL添加到培养物中。8小时后检测上清液的单核细胞趋化活性。*表示p＜0.001，**表示p＜0.01。附图8显示了，在向apoE裸小鼠的食物添加了由D氨基酸合成的表4的SEQ ID NO238(称为D-1)(200μg/gm食物18小时)之后，HDL从促炎症性的被转化成抗炎性的。检测对照无添加剂，没有向共培养物添加；LDL，向共培养物添加标准对照人类LDL；+对照HDL，向共培养物添加对照正常人类HDL。食物LDL(chow LDL)，来自只接受食物(chow)的小鼠的LDL；+Chow Autolog.HDL，来自只接受食物的小鼠的HDL，与来自这些小鼠的LDL一同添加；+D-1 Autolog.HDL，来自接受了肽的小鼠的HDL，与来自这些小鼠的LDL一同添加到共培养物中，测定单核细胞趋化活性。附图9显示了所述四肽(表4中的SEQ ID NO258)比在体外SEQID NO238有效十倍。在预保温中，所述四肽以100、50、25或12.5μgm/mL被添加或不添加到人动脉壁细胞共培养物中，并孵育2小时。然后洗涤培养物。然后某些反应孔只接受培养基(无添加)。其它反应孔接受了100μgm/mL胆固醇的标准正常人类LDL(LDL)，或与50μgm/mL胆固醇的标准对照人类HDL一同接受了这种LDL(LDL+对照HDL)，孵育8小时。然后检测培养物上清液的单核细胞趋化活性。数值是9个高倍视野中迁移的单核细胞的数目的平均值±SD。在2小时预孵育中以上述浓度接受了所述四肽，随后添加100μgm/mL胆固醇的LDL的反应孔在图中被指明(LDL+四肽，按μgm/mL)。附图10显示了，表4的SEQ ID NOs243、242和256(在附图中分别称为Seq No.5、Seq No.6和Seq No.9)将来自apoE裸小鼠的促炎症性HDL转化成抗炎性HDL。两个月大的雌性apoE裸小鼠(每次处理n＝4)禁食18小时，以20μgm肽/鼠腹膜内注射L-四肽，或注射盐水赋形剂。两小时后，在异氟的轻微麻醉下，从眶后窦收集血液。分离血浆，通过FPLC分离HDL。然后测定HDL的炎症性/抗炎性的性质。人大动脉内皮细胞的培养物只接受培养基(无添加)，不含(LDL)或含有50μgm/mL胆固醇的标准对照人类HDL(LDL+对照HDL)的100μgm/mL胆固醇的标准正常人类LDL，或100μgm/mL胆固醇的标准对照人类LDL与50μgm/mL胆固醇的小鼠HDL，所述小鼠HDL从接受了所述四肽或盐水赋形剂的小鼠获得(来自腹膜内注射的小鼠的LDL+HIDL)。孵育培养物8小时。然后检测上清液的单核细胞趋化活性。数值是9个高倍视野中迁移的单核细胞的数目的平均值±SD。附图11显示了表4的SEQ ID NO258(在附图中称为S-11)将来自apoE裸小鼠的促炎症性HDL转化成抗炎性HDL，比SEQ ID NO254和SEQ ID NO282更好(在附图中分别称为S-7和S-35)。两个月大的雌性apoE裸小鼠(每次处理n＝4)禁食18小时，以20μgm肽/鼠腹膜内注射S-7或S-11或S-35，或注射盐水赋形剂(盐水赋形剂)。两小时后，在异氟的轻微麻醉下，从眶后窦收集血液。分离血浆，通过FPLC分离LDL和HDL。然后测定HDL的炎症性/抗炎性的性质。人大动脉内皮细胞的培养物只接受培养基(无添加/检测对照)，不含(LDL/检测对照)或含有50μgm/mL胆固醇的标准对照人类HDL(+对照HDL/检测对照)的100μgm/mL胆固醇的标准正常人类LDL，或100μgm/mL胆固醇的小鼠LDL与50μgm/mL胆固醇的小鼠HDL，所述小鼠HDL获得自接受了S-7或S-11或S-35(分别是LDL+S-7HDL，LDL+S-11HDL，LDL+S-35HDL)或盐水赋形剂(LDL+盐水HDL)的小鼠。孵育培养物8小时。然后检测上清液的单核细胞趋化活性。数值是9个高倍视野中迁移的单核细胞的数目的平均值±SD。*p＜0.001。附图12。来自附图11中描述的小鼠的FPLC馏分的LDL以100μg/mL添加到细胞中。8小时后检测上清液的单核细胞趋化活性。检测对照如附图11中所描述的。盐水LDL，来自用盐水赋形剂注射的小鼠的LDL；S-7LDL，来自用如附图11中描述的表4的SEQ ID NO254注射的小鼠的LDL；S-11LDL，来自用如附图11中描述的表4的SEQ ID NO258注射的小鼠的LDL；S-35，来自用如附图9中描述的SEQ ID NO282注射的小鼠的LDL。#p＜0.001。附图13显示了在注射肽后的血清淀粉样蛋白A(SAA)血浆水平。在注射附图11和12中描述的肽之后24小时测量血浆中的SAA水平。*p＜0.001。附图14显示了，当全用L氨基酸合成和口服给药时，表4的SEQID NO258将来自apoE裸小鼠的促炎症性HDL转化成抗炎性HDL。雌性3个月大的apoE裸小鼠(n＝4)给予溶于水中的200μg如表4的SEQ IDNO258描述的肽，其全由L氨基酸合成(在附图中称为S-11)。通过胃管施用所述肽或不含肽的水，4小时后给小鼠放血。第二组的四只小鼠给予粉末形式的、含有200微克S-11的标准鼠食，所述S-11全由L氨基酸合成，按每1.0克粉未鼠食添加，对笼中的四只小鼠总共4克粉末鼠食含有总共800微克所述肽，或给予小鼠不含肽的相同粉末鼠食。整夜让小鼠获得所述食物，到早上所述食物被吃完，给小鼠放血。分离血浆，通过FPLC分离HDL。然后测定HDL的炎症性/抗炎性的性质。人大动脉内皮细胞的培养物只接受培养基(无添加/检测对照)，不含(LDL/检测对照)或含有50μgm/mL胆固醇的标准对照人类HDL(LDL+Cont.HDL/检测对照)的100μgm/mL胆固醇的标准正常人类LDL，或100μgm/mL胆固醇的对照人类LDL与50μgm/mL胆固醇的小鼠HDL，所述小鼠HDL获得自通过胃管(通过胃部管饲法)或在小鼠食物(粉未的膳食)中没有接受肽(LDL+无肽HDL)、或接受L-S-11(LDL+L-S-11HDL)的小鼠。孵育培养物8小时。然后检测上清液的单核细胞趋化活性。数值是9个高倍视野中迁移的单核细胞的数目的平均值±SD。p＜0.001。附图15显示了，当全由L-氨基酸合成并口服给药时，L-S-11提高了血浆对氧磷酶(paraoxonase)活性。对来自附图14中描述的小鼠的血浆检测对氧磷酶活性(PON活性，在附图中显示为每500ml血浆的单位)。无肽，只接受了水或食物，没有肽的小鼠。L-S-11，如附图14描述的，在水或食物中给予了200微克表4的SEQ ID NO256描述的肽的小鼠。P＜0.001。附图16显示了，当全由D氨基酸合成和口服给药时，表4的SEQID NO238(称为D-1)和SEQ ID NO258(称为D-11)引起了apoE裸小鼠中的HDL抗炎性，但是当全由L氨基酸合成(L-1)和口服给药时，SEQID NO238没有引起抗炎性。雌性3个月大apoE裸小鼠(n＝4)给予粉末形式的、含有0.5毫克每种肽的标准鼠食，按每1.0克粉未鼠食添加，对笼中的四只小鼠总共4克粉末鼠食含有总共2毫克所述肽，或给予小鼠不含肽的相同粉末鼠食。让小鼠获得所述食物24小时，这时所述食物被吃完，给小鼠放血。分离血浆，通过FPLC分离HDL。人大动脉内皮细胞的培养物只接受了培养基(无添加/检测对照)，不含(LDL/检测对照)或含有50μgm/mL胆固醇的标准对照人类HDL(LDL+对照HDL/检测对照)的100μgm/mL胆固醇的标准正常人类LDL，或100μgm/mL胆固醇的对照人类LDL与50μgm/mL胆固醇的小鼠HDL一同添加，所述小鼠HDL获得自未接受肽(LDL+No Pep.HDL)的，或接受全由L氨基酸制成的SEQ ID NO238(LDL+L-1HDL)，或全由D氨基酸制成的SEQ ID NO238(LDL+D-1HDL)，或全由D氨基酸制成的SEQ ID NO258(LDL+D-11HDL)的小鼠。孵育培养物8小时。然后检测上清液的单核细胞趋化活性。数值是9个高倍视野中迁移的单核细胞的数目的平均值±SD。*表示p＜0.01和**表示p＜0.001。附图17显示了，当全由D氨基酸合成和口服给药时，表4的SEQID NO238(D-1)和SEQ ID NO258(D-11)在apoE裸小鼠中引起了HDL抗炎性和降低了LDL诱导的单核细胞趋化活性，而当全由L氨基酸合成和口服给药时没有。从附图16描述的小鼠分离血浆，通过FPLC分离HDL和LDL。人大动脉内皮细胞的培养物接受了单独的培养基(无添加/检测对照)，不含(LDL/检测对照)或含有50μgm/mL胆固醇的标准对照人类HDL(LDL+对照HDL/检测对照)的100μgm/mL胆固醇的标准正常人类LDL，或单独的100μgm/mL胆固醇的自体小鼠LDL(mLDL)或还有50μgm/mL胆固醇的小鼠HDL，所述小鼠HDL获得自未接受肽(mLDL+No Pep.HDL)的，或接受全由L氨基酸制成的SEQ ID NO238(mLDL+L-1HDL)，或全由D氨基酸制成的SEQ ID NO238(mLDL+D-1HDL)，或全由D氨基酸制成的SEQ ID NO258(mLDL+D-11HDL)的小鼠。孵育培养物8小时。然后检测上清液的单核细胞趋化活性。数值是9个高倍视野中迁移的单核细胞的数目的平均值±SD。*表示p＜0.05，**表示p＜0.01和***表示p＜0.001。附图18显示了，当口服向小鼠给药时，全由D氨基酸合成的表4的SEQ ID NO258(D-11)升高了HDL胆固醇浓度，而口服地给予由L或D氨基酸合成的SEQ ID NO238(分别为L-1或D-1)没有。测定来自附图16和17中描述的小鼠的血浆HDL胆固醇浓度。无肽HDL，没有接受肽的小鼠中的血浆HDL胆固醇；L-1HDL，在接受了由L氨基酸合成的SEQ IDNO238的小鼠中的血浆HDL胆固醇；D-1HDL，在接受了由D氨基酸合成的SEQ ID NO238的小鼠中的血浆HDL胆固醇；D-11HDL，在接受了由D氨基酸合成的SEQ ID NO258的小鼠中的血浆HDL胆固醇。*表示p＜0.001。附图19显示了，当口服向小鼠给药时，全由D氨基酸合成的表4的SEQ ID NO258(D-11)升高了HDL对氧磷酶(PON)活性，而口服给予由L或D氨基酸合成的SEQ ID NO238(分别为L-1或D-1)没有。测定在附图18中描述的HDL中的对氧磷酶活性。数值是每500微升血浆的活性。*表示p＜0.001。附图20显示了普伐他汀和D-4F协同地起作用来减少大动脉病变，所述损伤是在apoE裸小鼠的en face制备物中测定的。五周龄雌性apoE裸小鼠在它们的饮用水中给予了无添加的(水对照)，普伐他汀50μg/mL，普伐他汀20μg/mL或D-4F 2μg/mL，或D-4F 5μg/mL，或普伐他汀(PRAVA.)20μg/mL加D-4F 2μg/mL，或普伐他汀(PRAVA.)50μg/mL加D-4F 5μg/mL。11周后处死小鼠，在en face大动脉制备物中测定病变。附图21显示了普伐他汀和D-4F协同地起作用来减少apoE裸小鼠中的主动脉窦病变。五周龄雌性apoE裸小鼠在它们的饮用水中给予了无添加的(水对照)，普伐他汀50μg/mL，普伐他汀20μg/mL或D-4F 2μg/mL，或D-4F 5μg/mL，或普伐他汀(P)50μg/mL加D-4F 5μg/mL，或普伐他汀(P)20μg/mL加D-4F 2μg/mL。11周后处死小鼠，测定主动脉窦病变。附图22显示了D-4F和表4的SEQ ID NO242和SEQ ID NO258显著地降低apoE裸小鼠中的脂蛋白脂质过氧化物。50μg/gm的SEQ IDNO242(在图中D-198)或SEQ ID NO258(在图中D-203)或D-4F(全由D氨基酸合成的肽)被添加到apoE裸小鼠的食物中，或小鼠在无添加的食物上继续喂养(无添加)。十八小时后，给小鼠放血，通过FPLC对它们的血浆分级分离，测定它们的低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的脂质过氧化物(LOOH)的含量。*表示p＜0.01。附图23显示了肽在乙酸乙酯中的溶解性。SEQ ID NO 254Boc-Lys(εBoc)-Glu-Arg-Ser(tBu)-OtBu；和SEQ ID NO 258Boc-Lys(εBoc)-Arg-Glu-Ser(tBu)-OtBu。还显示的是SEQ ID NO250在乙酸乙酯中的溶解性。附图24，当与DMPC在水性环境混和时SEQ ID NO258形成7.5nm粒子。向磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的1mg/mL DMPC悬浮液添加10％脱氧胆酸盐，直到DMPC溶解。添加SEQ ID NO258或SEQ ID NO254(DMPC∶肽；1∶10；wt∶wt)，透析反应混合物。透析后，对于SEQ ID NO258溶液仍然是澄清的，但是对于SEQ ID NO254在透析除去脱氧胆酸盐后溶液是混浊的。图片是用负染色制备的和在147,420x放大倍数下的电子显微照片。箭头指出了SEQ ID NO258粒子，测量为7.5nm(它们看起来是小的白色粒子)。附图25，在水性环境下将SEQ ID NO258添加到DMPC形成直径大约7.5nm的粒子(大的空心)，和层叠的脂质肽双分子层(大的斜纹箭头)(指向圆盘的圆柱形层叠中的白线的小箭头)，双分子层尺寸大概(on theorder of)3.4到4.1nm，双分子层之间的间隙(在圆盘的层叠中白线之间的黑线)大约2nm。条件和放大倍率与附图24中描述的相同。附图26显示了在水性环境中添加到DMPC的SEQ ID NO258的肽形成层叠的脂质-肽双分子层(斜纹箭头)和约38nm的多孔结构(vesicularstructure)(白色箭头)。附图27显示了在水性环境中没有SEQ ID NO258的DMPC不形成直径大约7.5nm的粒子，或层叠的脂质-肽双分子层，也不形成大约38nm的多孔结构。显示的DMPC囊泡是12.5-14nm。条件和放大倍率与附图24中描述的相同。附图28显示了与SEQ ID NO258的肽相比较的SEQ ID NO254的肽的分子模型。红色表示氧原子，蓝色表示氮原子，灰色表示碳原子，白色表示氢原子。附图29显示了与SEQ ID NO258相比较的SEQ ID NO254的间隙填充分子模型。在这个间隙填充分子模型中的箭头指出了该分子的极性和非极性部分。颜色标志与附图28中的相同。附图30说明了对于上部画面给出的方向的肽主干(在底部的画面中)。附图31显示了与SEQ ID NO258相比较的SEQ ID NO254的分子模型，指出了Ser(tBu)-OtBu基团。颜色标志与附图28中的相同。附图32显示了与SEQ ID NO 258相比较的SEQ ID NO254的分子模型，指出了各个保护基团。颜色标志与附图28中的相同。附图33显示了SEQ ID NO258(但不是SEQ ID NO254)引起apoE裸HDL抗炎性。附图34显示了SEQ ID NO258而不是SEQ ID NO254，显著地降低apoE裸小鼠中的主动脉根动脉粥样硬化。如附图33中描述的测定apoE裸小鼠中的主动脉根(主动脉窦)病变计分。每组中的小鼠数目在图象的底部显示(n＝)，在图象的顶部显示每个组的代表性部分。附图35显示了SEQ ID NO258而不是SEQ ID NO254，显著地降低apoE裸小鼠中en face制备物中的大动脉动脉粥样硬化。如附图33中描述的测定apoE裸小鼠中en face制备物中含有动脉粥样硬化病变的大动脉表面的百分比。在图左侧的底部显示每个组中的小鼠数目(n＝)，在图右侧显示单独用食物饲养的，或用补充了SEQ ID NO258的食物饲养的小鼠的代表性主动脉。附图36显示了全由L氨基酸合成的SEQ ID NO250显著地降低动脉粥样硬化。用食物饮食(Chow)或补充有200μg/gm全由L氨基酸合成的SEQ ID NO250(250)的食物维持的ApoE裸小鼠(每组20只)。12周后处死小鼠，在en face制备物中测定病变的大动脉表面面积％。*p＝0.012。
发明详述本发明涉及这样的发现，设计以模拟A类两亲螺旋基序(Segrestet al.(1990)ProteinsStructure，Function，and Genetics 8103-117)的合成肽能够与磷脂结合，展现出许多类似于人类apo-A-I蛋白的生物学性质。特别地，本发明的发现是，当使用D氨基酸配制这种肽时，该肽显示出显著升高的血清半衰期，和特别是当氨基和/或羧基末端被封闭时，甚至可以口服地施用。还有一个令人惊讶的发现是，这些肽可以刺激前-β高密度脂蛋白样粒子的形成和循环。此外，所述肽能够增强/协同增强抑制素的效果，容许抑制素以显著低的剂量施用，或在任何给定剂量有显著更高的抗炎性。还发现，在此描述的肽可以抑制和/或预防和/或治疗骨质疏松症的一种或多种症状。所述肽也可以提高前-βHDL；和/或提供HDL的对氧磷酶(paroxynase)活性。此外，本发明的一项令人惊讶的发现是，这种D型肽保存了相应L型肽的生物学活性。使用这种D型肽的体内动物研究显示了有效的口服递送，升高的血清半衰期，和缓解或预防/抑制动脉粥样硬化的一种或多种症状的能力。还有一个令人惊讶的发现是，由最少两个氨基酸、或单一氨基酸对组成的某些小肽，优选的(但不是必要的)一个或多个所述氨基酸是氨基酸的D-立体异构体，和具有疏水结构域以允许脂质蛋白相互作用，和亲水结构域以允许一定程度的水溶性，也具有显著的抗炎性质。不限于特定的理论，据信，在此描述的所述肽、或氨基酸对与促炎症性氧化的磷脂形成所需的“种子分子(seeding molecules)”例如Ox-PAPC、POVPC、PGPC和PEIPC结合。因为许多炎症性状况至少部分地由氧化的脂质介导，我们相信，本发明的所述肽、或氨基酸对在改善所述炎症状况方面是有效的，所述状况已知或被怀疑起因于生物学活性的氧化脂质的形成。这些包括、但不限于动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、红斑狼疮、多发性结节性动脉炎、多发性硬化、哮喘、糖尿病、阿尔茨海默氏病和骨质疏松症。所述“小肽”一般地长度范围从2或3个氨基酸到约15个氨基酸，更优选的从约4个氨基酸到约10或11个氨基酸，最优选的从约4个到约8或10个氨基酸。所述肽一般地以具有疏水末端氨基酸、或通过附着一个或多个疏水“保护”基团被疏水化处理了末端氨基酸为特征。在此更详细地描述所述肽的内部结构。此外，本发明的一个令人惊讶的发现是，许多物理性质预测本发明的小肽(例如，少于10个氨基酸，优选的少于约8个氨基酸，更优选的从约2或3个到约5或6个氨基酸)或氨基酸对的能力使得HDL抗炎性更强和缓解哺乳动物中的动脉粥样硬化和/或以炎症性反应为特征的其它病变。所述物理性质包括在乙酸乙酯中的高溶解性(例如，大于约4mg/mL)，和在pH7.0的水性缓冲液中的溶解性。在接触磷脂，例如1，2-双十四酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)时，在水性环境中，特别有效的小肽形成直径大约7.5nm(±0.1nm)的粒子，和/或形成层叠的双分子层，双分子层尺寸大概3.4到4.1nm，在层叠中的双分子层之间的间隙大约2nm，和/或还形成大约38nm的多孔结构。在某些优选的实施方式中，所述小肽、或氨基酸对具有低于约900Da的分子量。
I.刺激前-β高密度脂蛋白样粒子的形成和循环反向胆固醇转运被认为是在预防脂质的堆积方面是重要的的，所述脂质的堆积易产生动脉粥样硬化(Shah et al.(2001)Circulation，1033047-3050)。许多人相信具有重大意义的脂质是胆固醇。我们的实验室已经证明，关键的脂质是氧化的磷脂，在动脉粥样硬化中引发炎症性反应(Navabet al.(2001)Arterioscler Thromb Vasc Biol.，21(4)481-488；Van Lenten etal.(001)Trends Cardiovasc Med，11155-161；Navab M et al.(2001)Circulation，1042386-2387)。这些炎症性反应也可能是引起心脏病发作和中风的斑块糜烂或破裂的原因。HDL-胆固醇含量与心脏病发作和中风的风险反相关(Downset al.(1998)JAMA 2791615-1622；Gordon et al.(1977)Am J Med.，62707-714；Castelli et al.(1986)JAMA，2562835-2838)。前-βHDL一般被认为是在促进反向胆固醇转运方面最有活性的HDL馏分(例如，从周围组织例如动脉收集胆固醇，将其运到肝脏用于排出到胆汁中；参见，Fielding and Fielding(2001)Biochim Biophys Acta，1533(3)175-189)。然而，由于前-βHDL循环进行成熟α-迁移HDL的失败，例如，LCAT缺陷或抑制，前-βHDL的水平可被提高(O’Connor et al.(1998)J Lipid Res，39670-678)。已经在冠状动脉病病人中报道了高水平的前-βHDL(Miida et al.(1996)Clin Chem.，421992-1995)。此外，已经发现男性比女性有更高水平的前-βHDL，但是男性的冠心病风险比女性大(O’Connor et al.(1998)J Lipid Res.，39670-678)。因而，前-βHDL水平本身的静态测量对于预测冠状动脉病的风险不是必要的。然而，胆固醇经由前-βHDL循环进入成熟HDL普遍被认为是对动脉粥样硬化有保护性的(Fielding and Fielding(2001)Biochim Biophys Acta，1533(3)175-189)。此外，我们已经证明，通过这种途径从动脉壁细胞除去氧化的脂质起到对抗LDL氧化的保护作用。尽管在口服施用时有相对低的吸收率，本发明的肽(例如，D-4F)是高活性的。在口服施用D-4F的Apo-E裸小鼠的研究中，我们确定了在肠吸收20分钟后，D-4F形成了含有相对高数量的apoA-I和对氧磷酶的小的前-βHDL样粒子。实际上，根据Western印迹估计在这些前-βHDL样粒子中的apoA-I数量，和比较在这些粒子中apoA-I数量与D-4F数量(通过放射性或LC-MRM测定)，表明在D-4F从肠中吸收时，其充当了引起这些前-βHDL样粒子的形成的催化剂。这种少量的肠内衍生的D-4F看起来，补充了一定数量的apoA-I、对氧磷酶和胆固醇进入这些粒子，数量级超过了D-4F的数量(参见，例如，Navab et al.(2004)Circulation，109r120-r125)。因而，在吸收之后，本发明的D-4F和其它肽、或氨基酸对快速地补充相对大量的apoA-I和对氧磷酶以形成前-βHDL样粒子，其极有可能是促进反向胆固醇转运和破坏生物学活性氧化的脂质的最强效的粒子。我们相信，这些粒子的形成和它们随后快速地掺入(incorporation)到成熟HDL中，可能解释了我们在LDL受体裸小鼠和apoE-裸小鼠中观察到的动脉粥样硬化的显著减少，所述LDL受体裸小鼠是Western方式的饮食，所述apoE-裸小鼠是咀嚼食物饮食，所述减少与血浆胆固醇或HDL-胆固醇方面的变化无关(同上)。因而，在一个实施方式中，本发明提供了通过施用一种或多种在此描述的肽、或氨基酸对来刺激前-β高密度脂蛋白样粒子的形成和循环的方法。所述肽、或氨基酸对从而可以促进脂质转运和解毒。
II.缓解动脉粥样硬化的症状我们发现，正常的HDL抑制在适度氧化的LDL的形成方面的三个步骤。在那些研究中(参见，待审申请USSN 09/541,468，2000年3月31日提交)，我们证明了，在体外用A-I或apo A-I模拟肽(37pA)处理人LDL，从LDL中除去了种子分子，包括HPODE和HPETE。这些种子分子是人动脉壁细胞共培养物能够氧化LDL、和LDL诱导动脉壁细胞产生单核细胞趋化活性所需的。我们还证明了在将apo A-I注射入小鼠或输注入人体之后，从小鼠或人类志愿者分离的LDL在注射/输注apo A-I后对人动脉壁细胞的氧化有抗性，在动脉壁细胞共培养物中不诱导单核细胞趋化活性。本发明的某些肽的保护功能在母申请(2000年8月24日提交的09/645,454，2001年6月29日提交的09/896,841，和2001年6月29日提交的WO 02/15923(PCT/US01/26497))中说明了，参见，例如WO 02/15923中的附图1-5。WO 02/15923中的附图1，A、B、C和D显示了在ApoE裸小鼠中14C-D-5F与血液成分的关联。其还表明了，来自饲喂致动脉粥样化饮食并注射PBS的小鼠的HDL，没能抑制人类LDL的氧化和没能在人类动脉壁细胞共培养物中抑制LDL诱导的单核细胞趋化活性。与此相反，来自饲喂致动脉粥样化饮食并每天注射此处描述的肽的小鼠的HDL，在抑制人类LDL氧化和在共培养物中防止LDL诱导的单核细胞趋化活性方面，与正常人类HDL是一样有效的(WO 02/15923中的附图2A和2B)。此外，取自饲喂致动脉粥样化饮食并每天注射PBS的小鼠的LDL，与取自饲喂相同的饮食但每天注射20μg的肽5F的小鼠的LDL相比，更容易被氧化，和更容易诱导单核细胞趋化活性。D肽似乎没有免疫原性(WO 02/15923中附图4)。人类动脉壁细胞与来自饲喂致动脉粥样化饮食并注射根据本发明的肽的小鼠的HDL和LDL的体外反应，与这种肽体内显示的保护作用是一致的。尽管作为总胆固醇百分比，有类似水平的总胆固醇、LDL-胆固醇、IDL+VLDL-胆固醇和较低的HDL-胆固醇，饲喂了致动脉粥样化饮食并注射了所述肽的动物具有显著更低的病变计分(WO 02/15923中附图5)。因而所述肽在饲喂致动脉粥样化饮食的小鼠中阻止了动脉粥样硬化病变的进展。因而，在一个实施方式中，本发明提供了改善和/或预防动脉粥样硬化和/或其它以炎症性反应为特征的状况的一种或多种症状的方法。
III.缓解与急性炎症性反应相关的动脉粥样硬化的症状。本发明的肽、或氨基酸对在很多情况下也是有用的。例如，我们观察到，心血管并发症(例如，动脉粥样硬化、中风，等等)经常伴随着或跟随着急性期炎症性反应的发作。这种急性期炎症性反应常常与复发性的炎性疾病(例如，麻疯病、肺结核、全身性红斑狼疮和类风湿性关节炎)、病毒感染(例如，流行性感冒)、细菌性感染、真菌感染、器官移植、外伤或其它创伤、植入的修复体、生物薄膜，等等有关。本发明的令人惊讶的发现是，施用在此描述的一种或多种肽，可以降低或防止在急性期反应期间或之后的氧化的磷脂的形成，从而缓解或消除与这种状况有关的心血管并发症。因而，例如，我们已经证明，流行性感冒的结果是，在HDL中对氧磷酶和血小板活化的乙酰基水解酶活性方面的减低。不限于特定的理论，我们相信，作为这些HDL酶活性损失的结果，也作为在急性期反应期间助氧化蛋白与HDL的关联的结果，HDL不再能够阻止LDL氧化，并且不再能够阻止LDL诱导的内皮细胞的单核细胞趋化活性。我们观察到，在感染甲型流感病毒后每天注射极低剂量(例如，对于小鼠20微克)的本发明的多肽的受试者中，对氧磷酶水平没有降低，并且生物学活性的氧化的磷脂的产生没有超过背景。这表明，可以在流行性感冒感染或可产生急性期炎症性反应的其它事件(例如，由于病毒感染、细菌性感染、外伤、移植、各种自身免疫状况等等)期间，向患有已知冠状动脉病的病人施用(例如，口服地或通过注射)D-4F(和/或本发明的其它肽)，因而我们可以通过这种短期治疗防止与产生这种炎症性状态的病变有关的心脏病发作和中风发生率的升高。因而，在某些实施方式中，本发明预期向受试者施用本发明的一种或多种肽、或氨基酸对，所述受试者存在急性炎症性反应的风险或承受着急性炎症性反应，和/或存在着动脉粥样硬化症状的风险或承受着动脉粥样硬化的症状。因而，例如，在流行性感冒季节，患有冠心病或有冠心病风险的人可以预防性地施用本发明的多肽、或氨基酸对。经受复发性炎症性状况，例如类风湿性关节炎、各种自身免疫疾病，等等的人(或动物)可以用本发明的多肽治疗，以缓解或预防动脉粥样硬化或中风的发展。经受创伤(trauma)，例如，急性损伤、组织移植，等等的人(或动物)可以用本发明的多肽治疗，以缓解或预防动脉粥样硬化或中风的发展。在某些情况下，这种方法必需有急性炎症性反应的发生或风险的诊断结论。所述急性炎症性反应一般地包括肝脏中新陈代谢和基因调节方面的改变。除了免疫、心血管和中枢神经系统之外，这是涉及身体的所有主要系统的动态自我平衡的过程。通常，急性期反应仅持续数天，然而，在慢性或复发性炎症的情况中，急性期反应的某些方面的异常延续可能促进了伴随着所述疾病的潜在的组织损伤，也可能引起进一步的并发症，例如心血管疾病或蛋白沉淀疾病例如淀粉样变性病。所述急性期反应的一个重要方面是被根本上改变的肝脏的生物合成状况。在正常的环境下，肝脏以稳定的浓度合成特有范围的血浆蛋白。这些蛋白中的许多种具有重要的的功能，这些急性期反应物(APR)或急性期蛋白(APP)的较高的血浆水平，是在炎症性刺激后的急性期反应期间所需的。尽管大多数APR是由肝细胞合成的，有一些是由其它细胞类型产生的，包括单核细胞、内皮细胞、成纤维细胞和脂肪细胞。大多数APR被诱导超过正常水平的50％到数倍之间。与此相反，主要的APR可以增加超过正常水平的1000倍。这一组包括血清淀粉样蛋白A(SAA)，和人类的C-反应蛋白(CRP)或其在小鼠中的同源物，血清淀粉样蛋白P组分(SAP)。所谓的阴性APR在急性期反应期间血浆浓度降低了，以容许肝脏在合成诱导的APR的能力方面的提高。在某些实施方式中，因此通过测量一种或多种APP来评估所述急性期反应或风险。评估这种标记对于本领域的技术人员是公知的，存在着提供这种测量的商业公司(例如，由Cardiotech Services，Louisville，KY测量AGP)。
IV.协同增强抑制素的活性。还发现的是，向apoE裸小鼠的饮用水中添加低剂量的D-4F(1μg/mL)24小时没有显著地改善HDL功能(参见，例如，相关申请USSN10/423,830)。此外，单独地向apoE裸小鼠的饮用水中添加0.05mg/mL的阿托伐他汀或普伐他汀24小时没有改善HDL功能。然而，当与0.05mg/mL的阿托伐他汀或普伐他汀一同将D-4F 1μg/ml添加到饮用水中，在HDL功能方面出现了显著的改善。实际上，促炎症性apoE裸HDL变得与350μg/ml的正常人类HDL一样有抗炎性(h，HDL，参见，例如，相关申请USSN10/423,830)。因而，单独的D-4F、或单独的抑制素的剂量本身对HDL功能没有影响，当一同给药时协同地起作用。当将D-4F和抑制素一同给予apoE裸小鼠时，在人类动脉壁细胞共培养物中，在预防由HPODE氧化PAPC的作用而诱导的炎症性反应方面，50μg/mL HDL-胆固醇的小鼠的促炎症性HDL与350μg/mL HDL-胆固醇的正常人类HDL一样有效。因而，在本发明的某些实施方式中提供了增强抑制素的活性的方法。所述方法一般地包括与一种或多种抑制素同时施用如在此描述的一种或多种肽、或氨基酸对。如在此描述的D-4F或其它类似的肽实现了抑制素和口服肽之间改善动脉粥样硬化的协同作用。由于这个原因，抑制素可以以显著地更低的剂量施用，从而避免与高剂量的抑制素使用有关的各种有害的副作用(例如，肌肉消耗)，和/或在任何给定剂量抑制素的抗炎性质被显著地增强。
V.抑制/治疗骨质疏松症血管钙化和骨质疏松症常常共存于同一个受试者中(Ouchi et al.(1993)Ann NY Acad Sci.，676297-307；Boukhris and Becker(`1972)JAMA，2191307-1311；Banks et al.(1994)Eur J Clin Invest.，24813-817；Laroche etal.(1994)Clin Rheumatol.，13611-614；Broulik and Kapitola(1993)EndocrRegul.，2757-60；Frye et al.(1992)Bone Mine.，19185-194；Barengolts et al.(1998)Calcif Tissue Int.，62209-213；Burnett and Vasikaran(2002)Ann ClinBiochem.，39203-210.Parhami et al.(1997)Arterioscl Thromb Vasc Biol.，17680-687)，表明轻度氧化的LDL(MM-LDL)和MM-LDL中的生物学活性脂质[即，氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱)(Ox-PAPC)]，以及异前列腺烷(isoprostane)、8-异前列腺素E2，而不是未氧化的磷脂(PAPC)或异前列腺烷8-异前列腺素F2a，在体外诱导了碱性磷酸酶活性和钙化的血管细胞(CVC，calcifying vascular cells)的成骨细胞的分化，但是抑制了MC3T3-E1骨细胞的分化。骨单位相似于动脉壁，因为骨单位处在内皮细胞排列的内腔的中心，所述内腔由含有基质和成纤维细胞样细胞的内皮下的间隙围绕，其反过来由在动脉壁中占据了类似于平滑肌细胞的位置的前成骨细胞和成骨细胞围绕(同上)。小梁骨骼成骨细胞还与骨髓内皮下间隙形成界面(同上)。Parhami等假定，脂蛋白可以穿越骨骼动脉的内皮，沉淀在内皮下的间隙中，在这里它们可以象在冠状动脉中一样经历氧化(同上)。根据他们的体外数据，他们预测，在骨骼动脉的内皮下间隙和在骨髓中的LDL氧化将引起降低的成骨细胞分化和矿化，这将促进骨质疏松症(同上)。他们的假说进一步预测，象与冠状动脉钙化一样，LDL水平将与骨质疏松症成正相关(Pohleet al.(2001)Circulation，1041927-1932)，但是HDL水平与骨质疏松症成负相关(Parhami et al.(1997)Arterioscl Thromb Vasc Biol.，17680-687)。在体外，骨髓基质细胞系M2-10B4的成骨细胞分化被MM-LDL抑制，但不被天然LDL抑制(Parhami et al.(1999)J Bone Miner Res.，142067-2078)。当培养来自饲喂了低脂肪食物饮食的动脉粥样硬化易感C57BL/6(BL6)小鼠的骨髓基质细胞时，出现健壮的成骨性分化(同上)。与此相反，当培养取自高脂肪、致动脉粥样化饮食后的小鼠的骨髓基质细胞时，它们没有经历成骨性分化(同上)。这个观察结果是特别重要的，因为它提供了对于骨质疏松症的发展中骨髓基质细胞降低的成骨潜力的可能的解释(Nuttall and Gimble(2000)Bone，27177-184)。在体内，成骨潜力方面的下降伴随着疏松骨中脂肪形成的增加(同上)。据发现，向apoE裸小鼠的饮用水中添加D-4F 6周显著地提高了小梁骨的矿物密度，据信本发明的另其它肽也类似地起作用。我们的数据表明，骨质疏松症可以被认为是“骨骼的动脉粥样硬化”。这看来是氧化的脂质的作用的结果。HDL破坏了这些氧化的脂质并促进成骨细胞分化。我们的数据表明，向哺乳动物施用本发明的肽(例如，在apoE裸小鼠的饮用水中)仅用一周就显著地增加小梁骨。这表明，在此描述的肽、或氨基酸对对于缓解骨质疏松症的一种或多种症状(例如，抑制脱钙作用)，或对于诱导疏松骨的复钙作用(recalcification)是有用的。所述肽作为在哺乳动物(例如，存在骨质疏松症风险的病人)中预防骨质疏松症的症状发作的预防手段是有用的。我们相信类似的机制是冠状动脉钙化的原因，例如钙化的主动脉瓣狭窄。因而，在某些实施方式中，本发明预期施用在此描述的肽、或氨基酸对来抑制或预防疾病的症状，所述疾病例如冠状动脉钙化、钙化的主动脉瓣狭窄、骨质疏松症，等等。
VI.其它的指征。不限于特定的理论，我们还相信在此描述的肽、或氨基酸对，对于预防性或治疗性地缓解各种其它疾病的发作和/或一种或多种症状是有效的，所述疾病包括但不限于，风湿性多肌痛(polymyalgia rheumatica)、多发性结节性动脉炎、硬皮症、红斑狼疮、多发性硬化、特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病(例如，哮喘)、阿尔茨海默氏病、AIDS和糖尿病。一般地，所述肽在缓解症状方面是有用的，所述症状起因于这些疾病的炎症反应、或与这些疾病中的炎症性反应有关。
VII.肽/氨基酸对施用。本发明的方法一般地包括向生物体，优选的为哺乳动物、更优选的为人类，施用一种或多种本发明的肽、或氨基酸对(或这种肽、或氨基酸对的模拟物)。如在此描述的，所述肽、或氨基酸对可以根据多种标准方法中任何一种来施用，所述标准方法包括但不限于注射、栓剂、吸入(例如，鼻喷雾、口腔吸入，等等)、定时释放的植入、穿表皮的贴片，等等。在特别优选的实施方式中，所述肽是口服施用的(例如，作为糖浆、胶囊剂、粉未、gelcap或片剂)。所述方法可以包括施用本发明的单种肽或氨基酸对，或施用两种或多种不同的肽或氨基酸对。所述肽、或氨基酸对可以作为单体，或以二聚的、寡聚的或多聚的形式提供。在某些实施方式中，所述多聚体形式可包含连接的单体(例如，通过离子作用或疏水相互作用连接的)，而某些其它多聚体形式可以包含以共价键连接的单体(直接连接或经由接头连接)。虽然是对于在人类中使用来描述本发明的，其也适合于动物，例如，兽医的用途。因而优选的生物体包括、但不限于人类、非人灵长类、犬、马、猫、猪、有蹄类、largomorphs，等等。本发明的方法不局限于显示了动脉粥样硬化的一种或多种症状(例如，高血压，斑块形成和破裂，临床事件例如心脏病发作、心绞痛或中风的减少，高水平的血浆胆固醇、高水平的低密度脂蛋白、高水平的极低密度脂蛋白，或炎症性蛋白例如CRP，等等)的人类或非人动物，在预防性的环境中也是有用的。因而，本发明的肽、或氨基酸对(或其模拟物)可被施用给生物体来预防动脉粥样硬化和/或在此描述的其它指征之一的一种或多种症状的发作/发展。在这里特别优选的受试者是显示了动脉粥样硬化的一种或多种危险因素(例如，家族史、高血压、肥胖、嗜酒、吸烟、高血胆固醇、高血甘油三酯、升高的血液LDL、VLDL、IDL、或低HDL、糖尿病、或糖尿病的家族史、高血液脂质、心脏病发作、绞痛或中风，等等)和/或在此描述的其它状况之一的受试者。在某些实施方式中，也可以施用本发明的肽和/或氨基酸对来刺激前-β高密度脂蛋白样粒子的形成和循环，和/或促进反向脂质转运和解毒。所述肽、或氨基酸对对于联合抑制素施用也是有用的，此时它们增强(例如，协同增强)通常施用剂量的抑制素的活性，和/或允许抑制素以较低的剂量施用。此外，可以施用所述肽、或氨基酸对来降低或消除骨质疏松症和/或糖尿病、和/或在此描述的任何其它状况的一种或多种症状，和/或预防/抑制骨质疏松症和/或在此描述的任何其它指征的一种或多种症状的发作。
VIII.某些优选的肽和它们的制备。
A)A类两亲螺旋肽。本发明的发现是，包含A类两亲螺旋(amphipathic helix)的肽(“A类肽”)能够缓解动脉粥样硬化的一种或多种症状。A类肽的特征是α-螺旋的形成，其生产极性和非极性残基的分离，从而形成极性和非极性面，在极性-非极性界面处存在带正电的残基，在极性面的中心处存在带负电的残基(参见，例如，Anantharamaiah(1986)Meth.Enzymol，128626-668)。注意到，apo A-I的第四个外显子，当折叠成3.667个残基/转角时产生A类两亲螺旋结构。一个特别有效的A类肽，称为18A(参见，例如，Anantharamaiah(1986)Meth.Enzymol，128626-668)如在此描述的进行修改，产生可口服施用的和在抑制或预防动脉粥样硬化的一种或多种症状方面高度有效的肽。不限于特定的理论，据信，本发明的肽可能通过收集种子分子来在体内起作用，所述种子分子缓解LDL的氧化。我们确定了在18A的疏水面上提高Phe残基的数量将理论上提高脂质亲合性，是通过Palgunachari et al.(1996)Arteriosclerosis，Thrombosis，&Vascular Biology 16328-338描述的计算法测定的。理论上，在18A的非极性面上Phe系统性的残基替换将产生六种肽。具有增加的2、3和4个Phe的肽将分别具有理论上的脂质亲合性(λ)值13、14和15个单位。然而，如果增加的Phe从4个提高到5个，λ值将跃升四个单位(到19λ单位)。增加到6或7个Phe将产生不太显著的提高(分别到20和21λ单位)。因此，我们选择5个增加的Phe(由此所述肽被称为5F)。在一个特别优选的实施方式中，所述5F肽被封闭，其中氨基末端残基被乙酰化和羧基末端残基被酰胺化。新的A类肽类似物，5F，抑制动脉粥样硬化易感小鼠中的病变发展。这种新的肽类似物5F，使用根据Levine等的研究(Levine et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9012040-12044)的肽剂量，与小鼠apo A-I(MoA-I)比较在这些小鼠中抑制饮食诱导的动脉粥样硬化方面的效力。还生产了许多其它的A类肽并在缓解动脉粥样硬化的一种或多种症状方面显示了变化的、但是是显著程度的效力。在表1中例举了许多这种肽。表1.用于本发明的Apo A-I的两亲螺旋的说明性模拟物。

1接头是加了下划线的。
NMA是N-甲基氨基邻甲苯基。在某些优选的实施方式中，所述肽包括4F(表1的SEQ ID NO8)或D-4F的变体，其中一个或两个天冬氨酸(D)被谷氨酸(E)替代。还预期的是肽(例如，4F或D-4F)，其中从羧基末端删除1、2、3或4个氨基酸和/或从羧基末端删除1、2、3或4个氨基酸和/或一个或两个天冬氨酸(D)被谷氨酸(E)替代。在任何在此描述的肽中，可以封闭N-末端并使用mantyl部分(例如，N-甲基氨基邻甲苯基)标记。虽然表1的各种肽是用保护氨基末端的乙酰基或N-甲基氨基邻甲苯基、和保护羧基末端的酰胺基团说明的，这些保护基团的任何一个都可以被消去或用在此描述的另一个保护基团代替。在特别优选的实施方式中，所述肽包含一种或多种在此描述的D型氨基酸。在某些实施方式中，表1的肽的每个氨基酸(例如，每个对映体氨基酸)是D型氨基酸。还注意到，表1不是完全地包括的。使用在此提供的教导，可以常规地生产其它适合的A类两亲螺旋肽(例如，通过保守性或半保守性取代(例如，D被E替代)、添加、删除，等等)。因而，例如，一个实施方式利用了在此显示的任何一种或多种肽(例如，由表1中SEQ ID Nos5-23和42-确定的肽)的截断体。因而，例如，SEQ ID NO24说明了包含来自18A的C-末端的14个氨基酸的肽，所述18A包含一种或多种D氨基酸，而SEQ ID NOS25-41说明了其它截断体。更长的肽也是适合的。这种更长的肽可能完全地形成A类两亲螺旋，或者A类两亲螺旋可以形成所述肽的一个或多个结构域。此外，本发明预期所述肽的多聚体的型式。因而，例如，在此说明的肽可以被偶联在一起(直接地或经由具有一个或多个插入氨基酸的接头(例如，碳接头，或一个或多个氨基酸))。说明性的聚合肽包括18A-Pro-18A和SEQ ID NO81-88的肽，在某些实施方式中包含一个或多个D氨基酸，更优选的每个氨基酸是如在此描述的D氨基酸，和/或具有一个或两个末端被保护。
B)在非极性面具有芳香族或脂肪族残基的、apoA-I的其它A类两亲螺旋肽模拟物。在某些实施方式中，本发明还提供了修饰的A类两亲螺旋肽。某些优选的肽在非极性面的中心掺入了一个或多个芳香族残基，例如3FCπ(如在4F中存在)，或在非极性面的中心掺入一个或多个脂肪族残基，例如3FIπ。不限于特定的理论，我们相信在肽3FCπ的非极性面上的中央芳香族残基，由于在非极性面的中心处p电子的存在，容许水分子渗透接近肽-脂质复合物的疏水脂质烷基链，其反过来允许反应性的氧类(例如脂质过氧化物)的进入，保护它们避开细胞表面。类似地，我们还相信在非极性面的中心带有脂肪族残基的肽，例如，3FIπ，将类似地但不完全地象3FCπ一样有效地起作用。优选的肽能将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL，或使抗炎性HDL抗炎性更强，和/或降低动脉壁细胞产生的LDL诱导的单核细胞趋化活性，所述作用等于或大于D4F或表1中所示的其它肽。显示了这种活性的肽在改善动脉粥样硬化和其它炎症性状况，例如，类风湿性关节炎、红斑狼疮、多发性结节性动脉炎、骨质疏松症、阿尔茨海默氏病、充血性心力衰竭、内皮功能障碍、和病毒疾病例如A型流行性感冒，和例如多发性硬化的疾病方面，是有用的。表2.某些优选的肽的实例。
C)更小的肽。还有一个令人惊讶的发现是，由最少三个氨基酸组成的某些小肽，优选的(但不是必要的)一个或多个所述氨基酸是氨基酸的D-立体异构体，和具有疏水结构域以允许脂质蛋白相互作用，和亲水结构域以允许一定程度的水溶性，也具有显著的抗炎性质。不限于特定的理论，据信，所述肽与促炎症性氧化的磷脂的形成所需的“种子分子”例如Ox-PAPC、POVPC、PGPC和PEIPC结合。因为许多炎症性状况至少部分地由氧化的脂质介导，我们相信，本发明的所述肽在改善状况方面是有效的，所述状况已知或被怀疑起因于生物学活性氧化的脂质的形成。这些包括、但不限于动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、红斑狼疮、多发性结节性动脉炎、肺部疾病、哮喘、多发性硬化、阿尔茨海默氏病、糖尿病和骨质疏松症。所述“小肽”一般地长度范围从3个氨基酸到约15个氨基酸，更优选的从约4个氨基酸到约10或11个氨基酸，最优选的从约4个到约8或10个氨基酸。所述肽一般地以具有疏水末端氨基酸、或通过附着一个或多个疏水“保护”基团被疏水化处理了末端氨基酸为特征。在某些实施方式中，肽可以以如下式I为特征X1-X2-X3n-X4I其中，n是0或1，X1是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团，X4是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；和当n是0时，X2是酸性或碱性氨基酸；当n是1时X2和X3独立地是酸性氨基酸、碱性氨基酸、脂肪族氨基酸或芳香族氨基酸，这样当X2是酸性氨基酸时；X3是碱性氨基酸、脂肪族氨基酸或芳香族氨基酸；当X2是碱性氨基酸时；X3是酸性氨基酸、脂肪族氨基酸或芳香族氨基酸；和当X2是脂肪族或芳香族氨基酸时，X3是酸性氨基酸或碱性氨基酸。更长的肽(例如，多达10、11或15个氨基酸)也是本发明的范围内预期的。一般地，其中所述更短的肽(例如，根据式I的肽)的特征是酸性的、碱性的、脂肪族的、或芳香族氨基酸，所述更长的肽的特征是包含两个或多个这种类型的氨基酸的、酸性的、碱性的、脂肪族的或芳香族的结构域。
1)活性小肽的功能特性本发明的一个令人惊讶的发现是，许多物理性质预测本发明的小肽(例如，少于10个氨基酸，优选的少于8个氨基酸，更优选的从约3个到约5或6个氨基酸)使得HDL抗炎性更强和缓解哺乳动物中的动脉粥样硬化和/或以炎症性反应为特征的其它病变。所述物理性质包括在乙酸乙酯中的高溶解性(例如，大于约4mg/mL)，和在pH7.0的水性缓冲液中的溶解性。在接触磷脂，例如1，2-双十四酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)时，在水性环境中，特别有效的小肽诱导或参与直径大约7.5nm(±0.1nm)的粒子的形成，和/或诱导或参与层叠的双分子层的形成，双分子层尺寸大概3.4到4.1nm，在层叠中的双分子层之间的间隙大约2nm，和/或还诱导或参与大约38nm的多孔结构的形成。在某些优选的实施方式中，所述小肽具有低于约900Da的分子量。因而，在某些实施方式中，本发明预期改善炎症性状况的一种或多种症状的小肽，其中所述肽长度范围从约3个到约8个氨基酸，优选的从约3个到约6个、或7个氨基酸，和更优选的从约3个到约5个氨基酸，可以以大于约4mg/mL的浓度溶于乙酸乙酯；可溶于pH7.0的水性缓冲液；当在水性环境与磷脂接触时，形成直径约7.8nm的粒子，和/或形成层叠的双分子层，双分子层尺寸大概(on the order of)3.4到4.1nm，层叠中双分子层之间的间隔大约2nm；具有低于约900道尔顿的分子量；将促炎症性HDL转化为抗炎性HDL，或使抗炎性HDL抗炎性更强；和不具有氨基酸序列Lys-Arg-Asp-Ser(SEQ ID NO238)，其中Lys-Arg-Asp和Ser都是L氨基酸。在某些实施方式中，这些小肽保护磷脂对抗氧化剂的氧化。虽然这些小肽不必被这样限制，在某些实施方式中，这些小肽可以包括如下所述的小肽。
2)三肽。已经发现，可以合成某些三肽(3个氨基酸的肽)，其显示了在此描述的期望的性质(例如，将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL的能力，降低动脉壁细胞产生的LDL诱导的单核细胞趋化活性的能力，提高前-βHDL的能力，等等)。在某些实施方式中，所述肽的特征是式I，其中N是零，如下显示为式IIX1-X2-X4II其中末端氨基酸(X1和X4)是疏水的，是因为疏水的侧链，或是因为侧链或C和/或N末端被一个或多个疏水保护基团封闭(例如，N-末端被Boc-、Fmoc-、烟酰基(Nicotinyl)-，等等封闭，C-末端被(tBu)-OtBu，等等封闭)。在某些实施方式中，X2氨基酸是酸性的(例如，天冬氨酸、谷氨酸，等等)或碱性的(例如，组氨酸、精氨酸、赖氨酸，等等)。所述肽可以全部是L氨基酸，或包括一个或多个或全部的D氨基酸。本发明的某些优选的三肽包括、但不限于表3中所示的肽。表3.带有疏水保护基团和酸性、碱性或组氨酸中央氨基酸的某些优选的三肽的实例。
3)有中央酸性和碱性氨基酸的小肽。在某些实施方式中，本发明的肽从四个氨基酸到约十个氨基酸。末端氨基酸一般地是疏水的，是因为疏水的侧链，或是因为末端氨基酸带有一个或多个疏水保护基团，末端氨基酸(X1和X4)是疏水的，或是因为疏水的侧链，或是因为侧链或C和/或N末端被一个或多个疏水保护基团封闭(例如，N-末端被Boc-、Fmoc-、烟酰基-，等等封闭，C-末端被(tBu)-OtBu，等等封闭)。一般地，所述肽的中央部分包含碱性氨基酸和酸性氨基酸(例如，在4体中)，或在较长的分子中包含碱性结构域和/或酸性结构域。这些四体可以由式I代表，其中X1和X4是疏水的和/或带有在此描述的疏水保护基团，当X3是碱性的时X2是酸性的，或当X3是酸性的时X2是碱性的。所述肽可以全部是L氨基酸，或包括一个或多个或全部的D氨基酸。本发明的某些优选的肽包括、但不限于表4中所示的肽。表4.有中央酸性和碱性氨基酸的小肽的说明性实例。

<p>表4关于水杨酸和5-氯水杨酸的混合物-1000μl的抑制区试验结果抑制区的直径(毫米)
将5-氯水杨酸代表的式I化合物的表皮脱落(脱皮)活性与水杨酸的活性进行比较。应用D-SQUAME皮肤表面取样片(CuDermCorporation)。将该片应用于清洁、干燥的皮肤表面并且用拇指或指尖紧压数秒。然后将该片转移到贮存卡的黑方块上。在强光下以一定角度观察该片并且与CuDerm Corporation提供的5个参考图形比较。很干燥的皮肤产生大量与图形5相似的皮屑。正常皮肤产生少数区域的细胞小块或者细小均匀的细胞单层。
应用的评分等级如下0没有任何细胞的迹象。
±(几乎觉察不到)-在整个D-SQUAME面几乎没有分散的单一、细小的细胞。
1(最少的)-最少散布的单一、细小的细胞不均匀地分布在D-SQUAME面。
2(轻度的)-单一和/或成簇的差品质、(大的/变形的)细胞轻度散布在D-SQUAME面；在某些、而不是全部D-SQUAME面的细胞块稍稠密。
3(中度的)-成簇的、差品质大的/变形的细胞中度到重度散布在D-SQUAME面；细胞块中度稠密。虽然表4的肽是用特定的保护基团来说明的，注意到，这些基团可以被在此描述的其它保护基团代替，和/或一个或多个示出的保护基团可被除去。
4)在中央具有酸性或者碱性氨基酸同时还有中央脂肪族氨基酸的小肽。在某些实施方式中，本发明的肽从四个氨基酸到约十个氨基酸。末端氨基酸一般地是疏水的，是因为疏水的侧链，或是因为末端氨基酸带有一个或多个疏水保护基团。其中末端氨基酸(X1和X4)是疏水的，是因为疏水的侧链，或是因为侧链或C和/或N末端被一个或多个疏水保护基团封闭(例如，N-末端被Boc-、Fmoc-、烟酰基-，等等封闭，C-末端被(tBu)-OtBu，等等封闭)。一般地，所述肽的中央部分包含碱性或酸性氨基酸、和脂肪族氨基酸(例如，在4体中)，或在较长的分子中包含碱性结构域或酸性结构域和脂肪族结构域。这些四体可以由式I代表，其中X1和X4是疏水的和/或带有在此描述的疏水保护基团，当X3是脂肪族的时X2是酸性或碱性的，或当X3是酸性或碱性的时X2是脂肪族的。所述肽可以全部是L氨基酸，或包括一个、或多个、或全部的D氨基酸。本发明的某些优选的肽包括、但不限于表5中所示的肽。表5.在中央具有酸性或者碱性氨基酸同时还有中央脂肪族氨基酸的某些优选的肽的实例。 虽然表5的肽是用特定的保护基团来说明的，注意到，这些基团可以被在此描述的其它保护基团代替，和/或一个或多个示出的保护基团可被除去。
5)在中央具有酸性或者碱性氨基酸同时还有中央芳香族氨基酸的小肽。在某些实施方式中，本发明的肽从四个氨基酸到约十个氨基酸。末端氨基酸一般地是疏水的，是因为疏水的侧链，或是因为末端氨基酸带有一个或多个疏水保护基团，末端氨基酸(X1和X4)是疏水的，是因为疏水的侧链，或是因为侧链或C和/或N末端被一个或多个疏水保护基团封闭(例如，N-末端被Boc-、Fmoc-、烟酰基-，等等封闭，C-末端被(tBu)-OtBu，等等封闭)。一般地，所述肽的中央部分包含碱性或酸性氨基酸和芳香族氨基酸(例如，在4体中)，或在较长的分子中包含碱性结构域或酸性结构域和芳香族结构域。这些四体可以由式I代表，其中X1和X4是疏水的和/或带有在此描述的疏水保护基团，当X3是芳香族的时X2是酸性或碱性的，或当X3是酸性或碱性的时X2是芳香族的。所述肽可以全部是L氨基酸，或包括一个、或多个、或全部的D氨基酸。五体可以由式I的微小修饰形式代表，其中X5如表6所示的被插入，并且其中X5一般地是芳香族氨基酸。本发明的某些优选的肽包括、但不限于表6中所示的肽。表6.在中央具有酸性或者碱性氨基酸同时还有中央芳香族氨基酸的某些优选的肽的实例。 虽然表6的肽是用特定的保护基团来说明的，注意到，这些基团可以被在此描述的其它保护基团代替，和/或一个或多个示出的保护基团可被除去。
6)在中心处具有芳香族氨基酸或被组氨酸分隔的芳香族氨基酸的小肽。在某些实施方式中，本发明的肽的特征在于暴露在分子的中央的p电子，其容许粒子的水化作用，这容许所述肽粒子捕获促炎症性的氧化的脂质，例如脂肪酸过氧化物和在sn-2位置含有花生四烯酸的氧化产物的磷脂。在某些实施方式中，这些肽由最少4个氨基酸和最多约10个氨基酸组成，优先地(而不是必要地)有一个或多个氨基酸是氨基酸的D-立体异构体，末端氨基酸是疏水的，是因为疏水的侧链，或是因为所述末端氨基酸带有一个或多个疏水保护基团(例如，N-末端被Boc-、Fmoc-、烟酰基-，等等封闭，和C-末端被(tBu)-OtBu基团等封闭)。不是在中央具有酸性或碱性氨基酸，这些肽一般地在中央具有芳香族氨基酸，或在所述肽的中央具有被组氨酸分隔的芳香族氨基酸。本发明的某些优选的肽包括、但不限于表7中所示的肽。表7.在中心处具有芳香族氨基酸、或被一个或多个组氨酸分隔的芳香族氨基酸或芳香族结构域的肽的实例。 虽然表7的肽是用特定的保护基团来说明的，注意到，这些基团可以被在此描述的其它保护基团代替，和/或一个或多个示出的保护基团可被除去。
7)三肽和四肽的概述。为了清楚起见，本发明的许多三肽和四肽以下在表8作总体概述。表8.本发明的某些肽的一般结构。 当期望较长的肽时，X2和X3可以代表结构域(例如，指定类型的两个或多个氨基酸的区域)而不是单独的氨基酸。表8.是说明性的而不是限制性的。使用在此提供的教导，可以容易地鉴定其它适合的肽。
8)成对的氨基酸和二肽。本发明涉及这样的发现，某些氨基酸对，相互联合施用或连接，形成具有在此描述的一种或多种性质的二肽。因而，不限于特定的理论，据信，当所述氨基酸对相互联合施用时，如在此描述的，它们能够在体内参与或诱导微团(micelles)的形成。类似于在此描述的其它小肽，据信，肽对将在体内缔合，表现出包括乙酸乙酯中的高溶解性(例如，大于约4mg/mL)、在pH7.0的水性缓冲液中的溶解性的物理性质。在接触磷脂，例如1，2-双十四酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)时，在水性环境中，据信，所述氨基酸对诱导或参与了直径大约7.5nm(±0.1nm)的粒子的形成，和/或诱导或参与了层叠的双分子层的形成，双分子层尺寸大概3.4到4.1nm，在层叠中的双分子层之间的间隙大约2nm，和/或还诱导或参与大约38nm的多孔结构的形成。此外，进一步相信，所述氨基酸对可以显示一种或多种以下的生理学上相应的性质1.它们将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL或使抗炎性HDL抗炎性更强；2.它们降低动脉壁细胞产生的LDL诱导的单核细胞趋化活性；3.它们刺激前-βHDL的形成和循环；4.它们提高HDL旦固醇；和/或5.它们提高HDL对氧磷酶活性。所述氨基酸对可以作为独立的氨基酸施用(次序地或同时地施用，例如，在组合的制剂中)，或它们可以直接地或经由接头(例如，PEG接头、碳接头、分支的接头、直链接头、杂环的接头、衍生的脂质形成的接头，等等)被共价地偶联。在某些实施方式中，所述氨基酸对经由肽键共价地连接以形成二肽。在各种实施方式中，虽然所述二肽一般地包含各自带有连接的保护基团的两个氨基酸，本发明还包含这样的二肽，其中仅一个氨基酸带有一个或多个保护基团。所述氨基酸对一般地包含氨基酸，其中每个氨基酸被连接到至少一个保护基团(例如，在此描述的疏水保护基团)。所述氨基酸可以是D或L型。在某些实施方式中，其中所述氨基酸包含没有相互连接的对，每个氨基酸带有两个保护基团(例如，如表9中的分子1和2)。表9.说明性的本发明的氨基酸对氨基酸对/二肽1.Boc-Arg-OtBu*2.Boc-Glu-OtBu*3.Boc-Phe-Arg-OtBu**4.Boc-Glu-Leu-OtBu**5.Boc-Arg-Glu-OtBu****这个一般地联合第二氨基酸施用。
**在某些实施方式中，这些二肽相互联合施用。
***在某些实施方式中，这个肽单独地、或者与在此描述的其它肽之一组合施用。通过提供受保护的氨基酸对和/或二肽，然后按照如上所述一种或多种物理的和/或生理学上的性质筛选所述氨基酸对/二肽，可以容易地鉴定出适合的氨基酸对。在某些实施方式中，本发明排除了包含天冬氨酸和苯丙氨酸的氨基酸对和/或二肽。在某些实施方式中，本发明排除了这样的氨基酸对和/或二肽，其中一个氨基酸是(-)-N-[(反-4-异丙基环己烷)羰基]-D-苯丙氨酸(nateglinide)。在某些实施方式中，所述氨基酸包含独立地选自由酸性氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸，等等)、碱性氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸，等等)和非极性氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸，等等)构成的组的对。在某些实施方式中，其中所述第一氨基酸是酸性或碱性的，第二氨基酸是非极性的，和其中所述第二氨基酸是酸性或碱性的，第一氨基酸是非极性的。在某些实施方式中，其中第一氨基酸是酸性的，第二氨基酸是碱性的，反之亦然(参见，例如，表10)。类似的组合可以通过施用二肽的对来获得。因而，例如在某些实施方式中，表9中的分子3和4相互联合施用。
表10.某些通常的肽对。 注意到，这些氨基酸对/二肽是说明性的而不是限制性的。使用在此提供的教导，可以容易地确定其它适合的氨基酸对/二肽。
D)其它的肽修饰体。令人惊讶的发现是，在此描述的肽，特别是当它们掺合了一个或多个D氨基酸时，保持了它们的活性并也可以口服地施用。此外，这种口服施用产生相对有效的摄取和显著的血清半衰期，从而提供了缓解动脉粥样硬化或以炎性过程为特征的其它病变的一种或多种症状的有效方法。使用在此提供的教导，熟练技术人员可以常规地修饰所例举的肽来生产本发明的其它类似的肽。例如，可以对现有氨基酸进行常规的保守或半保守性取代(例如，E替换D)。可以使用Palgunachari et al.(1996)Arteriosclerosis，Thrombosis，&amp; Vascular Biology 16328-338描述的计算方法来预测各种替换对于产生的肽的脂质亲合性的影响。只要保持了α-螺旋结构，所述肽可以被延长或缩短。此外，可以进行替换以使得产生的肽更加类似于受试者物种内源性产生的肽。在某些实施方式中，本发明的肽包含在美国专利4,643,988中描述的“D”型的肽，更优选具有与保护基团偶联的一个或两个末端的“D”型。在某些实施方式中，至少50％的对映体氨基酸是“D”型，更优选至少80％的对映体氨基酸是“D”型，和最优选至少90％乃至所有的对映体氨基酸是“D”型氨基酸。虽然，在某些实施方式中，本发明的肽利用了天然发生的氨基酸或天然发生的氨基酸的D型，用非天然发生的氨基酸(例如，甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍、正亮氨酸、ε-氨基己酸、4-氨基丁酸、四水异喹啉-3-羧酸、8-氨基辛酸、4-氨基丁酸、Lys(N(ε)-三氟乙酰)、α-氨基异丁酸，等等)的替换也是预期的。除了在此描述肽之外，在此拟肽(peptidomimetics)也是预期的。肽类似物通常用于制药工业，作为具有类似于模板肽的性质的非肽药物。这些类型的非肽化合物被称为“肽模拟物(peptide mimetics)”或“拟肽”(Fauchere(1986)Adv.Drug Res.1529；Veber and Freidinger(1985)TINSp.392；和Evans et al.(1987)J.Med.Chem.301229)，通常借助于计算机化的分子建模来开发。结构上类似于治疗上有用的肽的肽模拟物可被用于产生相等的治疗或预防效果。一般地，拟肽在结构上类似于范例多肽(例如，在此描述的4F，SEQ ID NO258)，但是有一个或多个肽键任选地被选自由-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH＝CH-(顺式和反式)、-COCH2-、-CH(OH)CH2-、-CH2SO-等构成的组的键替代，通过本领域已知的方法和以下参考文献中进一步描述的方法Spatola(1983)p.267in Chemistry and Biochemistry of Amino Acids，Peptides，and Proteins，B.Weinstein，eds.，Marcel Dekker，New York，；Spatola(1983)Vega Data 1 (3)Peptide Backbone Modifications.(general review)；Morley(1980)Trends Pharm Sci pp.463-468(general review)；Hudson et al.(1979)Int J Pept Prot Res 14177-185(-CH2NH-，CH2CH2-)；Spatola et al.(1986)Life Sci 381243-1249(-CH2-S)；Hann，(1982)J Chem Soc Perkin TransI 307-314(-CH-CH-，cis and trans)；Almquist et al.(1980)J Med Chem.231392-1398(-COCH2-)；Jennings-White et al.(1982)Tetrahedron Lett.232533(-COCH2-)；Szelke，M.et al.，European Appln.EP 45665(1982)CA9739405(1982)(-CH(OH)CH2-)；Holladay et al.(1983)TetrahedronLett 244401-4404(-C(OH)CH2-)；and Hruby(1982)Life Sci.，31189-199(-CH2-S-))。特别优选的非肽键是-CH2NH-。这种肽模拟物可能比多肽实施方式有显著的优选，包括，例如更为经济的生产、更高的化学稳定性、增强的药理学性质(半衰期、吸收、效力、效果，等等)、降低的抗原性，等等。此外，可以通过本领域(Rizo and Gierasch(1992)Ann.Rev.Biochem.61387)已知的方法，例如，通过添加能形成分子内二硫键使肽环化的内部半胱氨酸残基，来产生包含共有序列或实质上相同的共有序列变体的、在此描述的肽的环状排列或约束的肽(包括环化的肽)。
IX.肽的功能检测本发明的某些肽在此是通过各种化学式(例如，式I，如上)和/或通过特定序列来描述的。然而在某些实施方式中，本发明的优选的肽的特点在于一种或多种以下的功能性质1.它们将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL或使抗炎性HDL抗炎性更强；2.它们降低动脉壁细胞产生的LDL诱导的单核细胞趋化活性；3.它们刺激前-βHDL的形成和循环；4.它们提高HDL胆固醇；和/或5.它们提高HDL对氧磷酶活性。在此公开的特定肽，和/或与在此描述的各种化学式相应的肽，可以容易地按需要测试一种或多种这些活性。按照这些功能性质的每一种的筛选方法对于本领域技术人员是公知的。此外，在此在实施例中说明了这样的筛选。特别地，注意到，在PCT/US01/26497(WO 02/15923)中说明了对单核细胞趋化活性、HDL胆固醇和HDL HDL对氧磷酶活性的检测。用于确定HDL炎症性和/或抗炎性的性质的检测按如下所述进行。
A)测定HDL炎症性/抗炎性特性1)单核细胞趋化活性(MCA)检测制备脂蛋白、人动脉壁共培养物和单核细胞，如早先描述的(VanLenten et al.(2002)Circulation，1061127-1132)测定单核细胞趋化活性(MCA)。在不存在或存在受试者的HDL的情况下，测定标准对照LDL对MCA的诱导。在不存在HDL的情况下的数值被标准化为1.0。在添加HDL后大于1.0的数值表明促炎症性HDL；低于1.0的数值表明抗炎性HDL。
2)无细胞检测所述无细胞检测是早先公开的使用PEIPC作为荧光诱导试剂的方法9的修改形式。简要地，通过葡聚糖硫酸酯法分离HDL。将含有葡聚糖硫酸酯和镁离子的Sigma“HDL胆固醇试剂”(Catalog No.352-3)溶于蒸馏水中(10.0mg/mL)。将五十微升的葡聚糖硫酸酯溶液与500μl测试血浆混和，在室温下孵育5分钟，随后在8,000g离心10分钟。在使用胆固醇检测试剂盒(Cat.No.2340-200，Thermo DMA Company，Arlington，TX)测定胆固醇之后，含有HDL的上清液被用于实验中。我们早先已经报道了(Navabet al.(2001)J Lipid Res，1308-1317)，与通过常规超离心法分离的HDL相比，通过这种方法分离的HDL将生物活性磷脂钝化到类似的程度。为了测定来自病人和对照的HDL样品的炎症性/抗炎性的性质，使用荧光强度方面的变化，所述变化是在不存在或存在测试HDL的情况下作为DCFH被PEIPC氧化的结果。将DCFH-DA以2.0mg/mL溶解在新鲜甲醇中，在室温下孵育并避光保存30分钟，产生DCFH的释放。修改所述检测适合与用平板读取器分析大量的样品。为此，利用平底的、黑色的聚苯乙烯微量滴定板(Microfluor2，Cat.No.14-245-176，Fisher)。将10μl PEIPC溶液(终浓度50μg/ml)，和90μl的含葡聚糖硫酸酯上清液的HDL(终浓度10μg/ml胆固醇)等分到微量滴定板中并混和。然后将平板在37℃在旋转器上孵育1.0小时。然后向每个反应孔添加10μl DCFH溶液(0.2mg/mL)，混合，并在37℃旋转孵育额外的2小时。随后，在485nm的激发波长和530nm的发射波长和515nm的截断，光电倍增器敏感性设置为“中”，用平板读取器(Spectra Max，Gemini XS；Molecular Devices)测定荧光。intra-和interassay变异性的数值分别是5.3±1.7％和7.1±3.2％。在不存在HDL的情况下的数值被标准化到1.0。在添加测试HDL后大于1.0的数值表明促炎症性HDL；低于1.0的数值表明抗炎性HDL。
3)其它步骤通过早先公开的方法(Scheidt-Nave et al.(2001)J Clin EndocrinolMetab.，862032-2042；Piguet et al.(1987)J Experiment Med.，166，1280-1289)测定白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的血浆水平。按照早先描述的(Navab et al.(1997)J Clin Invest，992005-2019)使用试剂盒(Sigma)测定血浆总胆固醇、甘油三酯、LDL-胆固醇、HDL胆固醇和葡萄糖，使用来自Immunodiagnostik(ALPCO Diagnostics，Windham，NH)的夹心酶免疫分析来测定hs-CRP水平(Rifai et al.(1999)Clin Chem.，452136-2141)。用模型I ANOVA确定统计显著性，显著被定义为p＜0.05的值。
4)筛选小肽的物理性质本发明的一个令人惊讶的发现是，许多物理性质预测本发明的小肽(例如，少于10个氨基酸，优选的少于8个氨基酸，更优选的从约3个到约5或6个氨基酸)使得HDL抗炎性更强和缓解哺乳动物中的动脉粥样硬化和/或以炎症性反应为特征的其它病变。如在此说明的，所述物理性质包括在乙酸乙酯中的高溶解性(例如，大于约4mg/mL)，和在pH7.0的水性缓冲液中的溶解性。在接触磷脂，例如1，2-双十四酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)时，在水性环境中，特别有效的小肽形成直径大约7.5nm(±0.1nm)的粒子，和/或形成层叠的双分子层，双分子层尺寸大概3.4到4.1nm，在层叠中的双分子层之间的间隙大约2nm，和/或还形成大约38nm的多孔结构。在某些优选的实施方式中，所述小肽具有低于约900Da的分子量。事实上可以按照一种或多种这些性质来容易地筛选任何小肽，例如，如在此的实施例3中描述的。实际上，含有多于约104、或105，更优选的多于约106或107，和最优选的多于约108或109种小肽的小肽组合文库，可以使用本领域技术人员公知的方法来产生。所述肽文库可以是随机文库，或，做为选择，在某些实施方式中，所述文库包含根据在此提供的一个或多个化学式制造的小肽。然后可以按照如上所述的一种或多种物理性质，例如，使用高流通量筛选法来容易地筛选所述肽文库。在这些分析中测试为阳性的肽很可能具有使得HDL抗炎性更强和在哺乳动物中缓解动脉粥样硬化和/或以炎症性反应为特征的其它病变的能力。注意到，上述筛选方法仅仅是说明性的，而不是限制性的。使用在此提供的教导，可以容易地提供用于肽的期望功能性质的其它检测。
X.肽制备。
A)一般合成方法本发明中使用的肽可以使用标准的化学肽合成技术来化学地合成，或，特别当所述肽不包含“D”氨基酸残基时，所述肽可以容易地被重组表达。当重组表达“D”多肽时，宿主生物体(例如，细菌、植物、真菌细胞，等等)可以被培养在一种环境中，其中专门地以D型向所述生物体提供一种或多种氨基酸。然后在这种系统中重组表达的肽掺入了那些D氨基酸。在某些实施方式中，可以使用识别D氨基酸的修饰的氨基酰基-tRNA合成酶将D氨基酸掺入到重组表达的肽中。在某些优选的实施方式中，所述肽是通过本领域技术人员已知的多种液相或固相的肽合成技术中的任何一种化学地合成的。固相合成是化学合成本发明的多肽的优选的方法，在固相合成中，序列的C-末端氨基酸附着到不溶的支持物上，随后连续的添加序列中余下的氨基酸。固相合成的技术是本领域技术人员公知的，例如，已经由Barany and Merrifield(1963)Solid-Phase Peptide Synthesis；pp.3-284 in The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology.Vol.2Special Methods in PeptideSynthesis，Part A.；Merrifield et al.(1963)J.Am.Chem.Soc.，852149-2156，and Stewart et al.(1984)Solid PhasePeptide Synthesis，2nd ed.Pierce Chem.Co.，Rockford，Ill描述了。在一个实施方式中，所述肽是使用benzhyderylamine树脂(Beckman Bioproducts，0.59mmol的NH2/g树脂)作为固相支持物通过固相肽合成步骤合成的。COOH末端氨基酸(例如，t-丁基羰基-Phe)通过4-(氧甲基)苯乙酰基团附着到固相支持物上。这是比常规的苯甲基酯键更稳定的键，而结束后的肽仍可以通过氢化作用来裂解。使用蚁酸作为供氢体的转移氢化作用被用于这个目的。用于肽合成和合成的肽的分析的详细方案，在伴随Anantharamaiah et al.(1985)J.Biol.Chem.，260(16)10248-10255的缩印增刊中描述了。注意到，在肽、特别是包含D氨基酸的肽的化学合成中，除了期望的全长产物之外，合成通常产生许多截断的肽。纯化过程(例如，HPLC)一般引起全长产物的大量损失。本发明的发现是，特别是在D肽(例如，D-4)的合成当中，为了避免纯化最长形式的一种肽时的损失，可以透析和使用混合物，从而取消最后的HPLC纯化。这种混合物损失了高度纯化的产物的约50％的效力(例如，蛋白产物的每份重量)，但是所述混合物含有约6倍多的肽，因而总活性更高。
B)掺入D型氨基酸。可以通过简单的在化学合成中使用D-型衍生的氨基酸残基，将D-氨基酸掺入到肽中的一个或多个位置。用于固相肽合成的D型残基可以从许多供应商处商业性获得(参见，例如，Advanced Chem Tech，Louisville；Nova Biochem，San Diego；Sigma，St Louis；Bachem California Inc.，Torrance，等)。D-型氨基酸可以被完全地省略，或按期望掺入到肽中的任何位置。因而，例如，在某些实施方式中，所述肽可以包含单个D-氨基酸，而在其它实施方式中，所述肽包含至少两个、一般地至少三个、更一般地至少四个、最一般地至少五个，优选的至少六个、更优选的至少七个、和最优选的至少八个D氨基酸。在特别优选的实施方式中，基本上每隔一个(对映体)氨基酸是D型氨基酸。在某些实施方式中，至少90％、优选的至少90％、更优选的至少95％的对映体氨基酸是D-型氨基酸。在一个特别优选的实施方式中，基本上每隔一个(对映体)氨基酸就是D-型氨基酸。
C)液相合成方法在某些实施方式中，本发明的肽可以使用液相方法容易地合成。在附图1和2中说明了一种这样的合成方案。在这个方案中，A、B和C代表期望的肽中的氨基酸。X-代表永久的α-氨基保护基团。Y代表永久的α-羧基保护基团。如果N-和C-末端具有侧链官能团，字母m和n代表侧链保护基团。侧链保护基团o和p是保护基团，所述保护基团可以在(中性)条件下通过例如使用甲酸铵作为供氢体的催化转移氢化作用(Anantharamaiah and Sivanandaiah(1977)Chem SocPerkin Trans.4901-5；和Babiker et al.(1978)J.Org.Chem.443442-3444)的处理被除去，其中侧链保护基团m和p和α-氨基和α-羧基保护基团是稳定的。HOBT-HBTU代表缩合试剂，在这之下观察到最小的外消旋作用。在存在1-羟基苯并三唑-2(H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲铵六氟磷酸酯(HOBT-HBTU)和少量三级胺例如二异丙基乙胺(DIEA)的情况下，向DMF中活化氨基酸X-A(m)中添加2当量的H2N-B(n)-COO-的DIEA盐，并在室温下搅拌过夜。对于活化的羧酸使用过量的氨基酸，容许反应进行到完成，其中α-氨基是游离的，羧基被暂时保护为DIEA盐。使用水性柠檬酸(10％)将反应混合物酸化，用乙酸乙酯提取。在这个过程中，游离氨基酸留在柠檬酸中。用水冲洗乙酸乙酯后，用5％碳酸氢钠溶液提取N-末端保护的二肽游离酸，并酸化。用乙酸乙酯提取二肽游离酸，将有机层干燥(Na2SO4)，蒸发溶剂，获得所述二肽游离酸。通过按类似方式用适当地保护的氨基酸与所述二肽游离酸反应获得三肽，其中α-氨基是游离的，羧基被暂时保护为DIEA盐。为了获得四肽，使用HOBT-HBTU缩合适当地羧基保护的氨基酸。因为最终的四肽是被保护的肽，在乙酸乙酯中提取缩合后的反应混合物，用水性重碳酸盐(5％)和柠檬酸(5％)仔细洗涤，然后用水洗涤。这些洗涤过程将除去过量的游离酸和游离碱和缩合试剂。然后用乙酸乙酯(或醚)和石油醚沉淀被保护的肽。然后在存在新制备的钯黑(Pd黑)的情况下，使用甲酸铵作为供氢体，使被保护的游离肽经历催化转移氢化作用。这个反应可以在几乎中性条件下进行，因而不影响酸敏感的侧链保护基团。这个过程将除去氨基酸B和C上的保护基团。这个步骤的实施例在下文中给出，使用SEQ ID NO256的合成。注意到，这个反应方案是说明性的而不是限制性的。使用在此提供的教导，其它适合的反应方案对于本领域技术人员是已知的。
D)保护基团。在某些实施方式中，在组分氨基酸和/或末端氨基酸上的一个或多个R基团用保护基团封闭，最优选的是疏水保护基团。不限于特定的理论，本发明的发现是，封闭，特别是本发明的受试肽的氨基和/或羧基末端的封闭，大大地改善了口服递送和显著地提高了血清半衰期。多数的保护基团适合于这种目的。这种基团包括、但不限于乙酰基、酰胺和烃基基团，乙酰基和烃基基团对于N-末端保护是特别优选的，酰胺基团对于羧基末端保护是优选的。在某些实施方式中，所述封闭基团另外可以充当可检测的标记(例如，N-甲基氨基邻甲苯基)。在某些特别优选的实施方式中，所述保护基团包括、但不限于脂肪酸中的烷基链、丙酰基、甲酰基，等等。特别优选的羧基保护基团包括酰胺、酯和成醚保护基团。在一个优选的实施方式中，乙酰基被用于保护氨基末端，酰胺基被用于保护羧基末端。这些保护基团增强了所述肽的成螺旋趋向。某些特别优选的保护基团包括各种长度的烃基，例如，具有式CH3-(CH2)n-CO-的基团，其中n从约3到约20，优选的从约3到约16，更优选的从3到约13，和最优选的从约3到约10。其它保护基团包括，但不限于，N-甲基氨基邻甲苯基、Fmoc、叔丁氧羰基(Boc)、9-芴乙酰基基团、1-芴羧基基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基基团、苄氧基羰基、咕吨基(黄嘌呤)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、乙酰基(Ac)和三氟乙酸基(TFA)。保护/封闭基团对于本领域技术人员是公知的，将这样的基团偶联到包含本发明肽的合适残基的方法也是本领域技术人员公知的(参见，例如Greene et al.，(1991)Protective Groups in Organic Synthesis，2nd ed.，JohnWiley&amp;Sons，Inc.Somerset，N.J.)。在一个优选的实施方式中，例如，当肽在树脂上时在合成期间使用乙酸酐实现乙酰化。酰胺保护可以通过选择用于合成的适当的树脂来实现。在实施例中合成在此描述的肽期间，使用rink酰胺树脂。在完成合成之后，在酸性双功能氨基酸，例如Asp和Glu和碱性氨基酸Lys上的半永久性保护基团，Tyr的羟基上的半永久性保护基团全部被同时除去。使用酸性处理从这种树脂释放的肽显现出N-末端被保护为乙酰基，羧基被保护为NH2，同时除去所有其它的保护基团。
XI.增强肽的摄取/口服利用率。
A)D-氨基酸的使用。也是本发明的令人惊讶的发现的是，当与D-型(即，本发明的肽)联合施用全L氨基酸的肽(例如，不然就具有本发明的肽的序列)时，D-型肽的摄取被提高了。因而，在某些实施方式中，本发明预期在本发明的方法中使用D-型和L-型肽的组合。所述D-型肽和L-型肽可以具有不同的氨基酸序列，然而，在优选的实施方式中，它们都具有在此描述的肽的氨基酸序列，在再更优选的实施方式中，它们具有相同的氨基酸序列。也是本发明的发现的是，本发明的A类两亲螺旋肽的多联体在缓解动脉粥样硬化的一种或多种症状方面也是有效的。包含多联体的单体可以直接偶联在一起或通过接头连接。在某些实施方式中，所述接头是氨基酸接头(例如，脯氨酸)，或肽接头(例如，Gly4Ser3)(SEQ ID NO448)。在某些实施方式中，所述多联体是2体，更优选的是3体，在更优选的是4体，和最优选的是5体、8体、10体、或15体。
B)交替的D-和L-氨基酸。发现，在肽的中央交替氨基酸的立体异型将容许粒子的水化作用，并将更好的容许所述肽粒子捕获促炎症性的氧化的脂质，例如脂肪酸过氧化物和在sn-2位置含有花生四烯酸的氧化产物的磷脂。因而，在某些实施方式中，可以合成在此描述的肽以包含从4个氨基酸到10-15个氨基酸，优选的(但不是必要的)中央(非末端)氨基酸是氨基酸的交替的D和L立体异构体。末端氨基酸可以是疏水的，是因为疏水例链，或是因为氨基酸带有如在此描述的疏水保护基团(例如，N-末端被Boc-、Fmoc-、烟酰基-，等封闭，C-末端被(tBu)-OtBu等封闭)。在表11中例举了这种肽的实例。表11.在中央区域含有交替的D-和L-残基的肽的某些实例。
序列 SEQ ID NOBoc-Lys(Boc)-D-Arg-L-Asp-Ser(tBu)-OtBu 449Boc-Lys(Boc)-L-Arg-D-Asp-Ser(tBu)-OtBu/ 450注意到，虽然在表11中例举了具体的氨基酸序列，交替的D-和L-氨基酸可被用于任何在此描述的肽。
C)生物素衍生的肽。在某些实施方式中，任何在此描述的肽可以附着一个或多个生物素(直接的或经由接头间接的共价偶联)。生物素与肠内钠依赖性多价维生素(multivitamin)转运蛋白相互作用，从而促进口服施用的肽的摄取和生物利用率。生物素可以通过本领域技术人员已知的多种便利方法的任何一种直接地偶联，或通过接头或通过氨基酸的侧链偶联。在某些实施方式中，所述生物素附着到赖氨酸的氨基基团。在表12中例举了许多偶联了生物素的肽。表12.某些优选的肽的实例
XII.药物制剂。为了进行本发明的方法，向例如被诊断为具有动脉粥样硬化的一种或多种症状、或存在动脉粥样硬化的风险的个体施用本发明的一种或多种肽、或氨基酸对、或肽模拟物。所述肽、或氨基酸对、或肽模拟物可以以“天然”形式，或如果需要，以盐、酯、酰胺、前体药物、衍生物等施用，只要所述盐、酯、酰胺、前体药物或衍生物是药理学上适合的，即，在本发明方法中是有效的。可以使用合成有机化学领域的技术人员已知的标准步骤，和例如March(1992)Advanced Organic Chemistry；Reactions，Mechanisms and Structure，4th Ed.N.Y.Wiley-Interscience描述的步骤，来制备活性试剂的盐、酯、酰胺、前体药物及其它衍生物。例如，使用常规方法从游离碱制备酸加成盐，一般地涉及与适合的酸反应。一般地，药物的碱形式被溶解在极性有机溶剂，例如甲醇或乙醇中，向其中添加酸。产生的盐沉淀出来，或通过添加更低极性的溶剂从溶液中产生。用于制备酸加成盐的适合的酸包括有机酸，例如，乙酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、丁二酸、顺丁烯二酸、反丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、苯丙烯酸、苯乙醇酸、甲磺酸、乙烷磺酸、p-甲苯磺酸、水杨酸，等等，以及无机酸，例如，盐酸、氢溴酸、硫磺酸、硝酸、磷酸，等等。可以通过用适合的碱处理，将酸加成盐再转化成游离碱。特别优选的此处的活性剂的酸加成盐是卤族的盐，例如，可以使用盐酸或氢溴酸制备。相反地，可以按类似方式使用药学上可接受的碱，例如，氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙、三甲胺等，制备所述肽或模拟物的碱式盐的制品。特别优选的碱式盐包括碱金属盐，例如，钠盐和铜盐。酯的制备一般地涉及羟基和/或羧基基团的功能化，其可以存在于药物的分子结构内。所述酯一般地是游离醇基，即，来源于式RCOOH的羧酸的部分，的酰基取代的衍生物，其中R是烃基，优选的是低级烃基。如果需要，可以通过常规的氢解或水解步骤将酯再转化成游离酸。酰胺和前体药物也可以使用本领域技术人员公知的技术或在相关文献中描述的技术制备。例如，可以使用适合的胺类反应物从酯制备酰胺，或通过与氨或低级烷基胺反应从酐或酰基氯制备它们。前体药物一般地通过某部分的共价附着来制备，这产生一种化合物，该化合物直到被个体的代谢系统修饰前是治疗上无活性的。在此确定的肽、或氨基酸对、或模拟物对于胃肠外的、表面的、口服的、鼻部的(或吸入)、直肠、或局部施用，例如通过气溶胶或穿皮肤地，对于动脉粥样硬化和/或其症状和/或对于在此确定的一种或多种其它指征的预防和/或治疗，是有用的。取决于施用的方法，药物成分可以以各种单位剂量形式施用。适合的单位剂量形式，包括、但不限于粉未、片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂、栓剂、贴片、鼻喷雾剂、injectibles、可植入的持续释放制剂、脂质复合物，等等。本发明的所述肽、和/或氨基酸对、和/或肽模拟物一般地与药学上可接受的载运体(赋形剂)组合以形成药理学的组合物。药学上可接受的载运体可以含有一种或多种生理学上可接受的化合物，其起作用来，例如，稳定组合物，或提高或降低活性试剂的吸收。生理学上可接受的化合物可以包括，例如，碳水化合物，例如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖，抗氧化剂，例如抗坏血酸或谷胱甘肽，螯合剂，低分子量蛋白，保护和摄取增强剂例如脂质，降低活性试剂的清除或水解作用的组合物，或赋形剂或其它稳定剂和/或缓冲液。其它生理学上可接受的化合物包括润湿剂、乳化剂、分散剂或对于预防微生物的生长或作用特别有用的防腐剂。各种防腐剂是公知的，包括，例如苯酚和抗坏血酸。本领域的技术人员将会理解，药学上可接受的载运体，包括生理学上可接受的化合物的选择取决于，例如，活性试剂的给药途径，和活性试剂的特定物理化学特性。赋形剂优选的是无菌的，一般地不含不合需要的物质。这个组合物可以通过常规的、公知的灭菌技术来灭菌。在治疗性应用中，以足够治愈或至少部分地预防或延滞疾病和/或它的并发症的数量，向病人施用本发明的组合物，所述病人有动脉粥样硬化的一种或多种症状，或存在动脉粥样硬化的风险。足够的实现这个目的的数量被定义为“治疗有效剂量”。对于这种用途有效的数量取决于疾病的严重度和病人健康状态的一般状态。组合物的单次或多次施用取决于所需的剂量和频率，以及病人的耐受度。无论如何，所述组合物应当提供足够数量的本发明的制剂的活性剂来有效地治疗(改善一种或多种症状)病人。肽、或氨基酸对、或模拟物的浓度可以广泛地变化，主要基于液体体积、粘度、体重等，根据选定的特定施用形式和病人的需求来进行选择。然而，一般地选择浓度以提供范围约0.1或1mg/kg/天到约50mg/kg/天和有时更高的剂量。典型的剂量范围从约3mg/kg/天到约3.5mg/kg/天，优选的从约3.5mg/kg/天到约7.2mg/kg/天，更优选的从约7.2mg/kg/天到约11.0mg/kg/天，和最优选的从约11.0mg/kg/天到约15.0mg/kg/天。在某些优选的实施方式中，剂量范围从约10mg/kg/天到约50mg/kg/天。应当理解的是，这种剂量可以变化以在特定受试者或受试者的组中优化治疗服用法。在某些优选的实施方式中，本发明的肽、和/或氨基酸对、和/或肽模拟物是根据本领域技术人员公知的标准方法口服(例如，通过片剂)或作为注射剂施用的。在其它优选的实施方式中，所述肽、或氨基酸对也可以使用常规的穿表皮的药物递送系统来递送，即，穿表皮的“贴片(patches)”，其中活性试剂一般被包含在层状结构内部，层状结构充当了附着到皮肤的药物递送装置。在这种结构中，药物组合物一般地被包含在层、或位于上部垫层之下的“储库(reservoir)”中。应当理解的是，在上下文中术语“储库”是指最终可以递送到皮肤表面的一定量的“活性成分”。因而，例如，“储库”可以包括粘附在所述贴片的垫层上的活性成分，或在本领域技术人员公知的各种不同基质制剂的任何一种中的活性成分。所述贴片可以含有单个储库，或可以含有多个储库。在一个实施方式中，所述储库包括药学上可接受的接触粘合材料的聚合基质，其用来在药物递送期间将该系统贴附在皮肤上。适合的皮肤接触粘合材料的实例包括、但不限于，聚乙烯、聚硅氧烷、聚异丁烯、聚丙烯酸酯、聚氨基甲酸酯，等等。做为选择，含药物的储库和皮肤接触粘合剂独立地和以分离的层存在，粘合剂在储库之下，在这种情况下，可以是如上所述的聚合基质，或可以是液体或水凝胶的储库，或可以采用其它形式。在这些层叠中的垫层，起到了装置的上表面的作用，优选地起到所述“贴片”的基础结构元件的作用，向所述装置提供了它极大的柔性。为所述垫层选择的材料优选的对于所述活性试剂和存在的任何其它材料是基本上不可渗透的。用于表面药物递送的其它优选的制剂包括、但不限于软膏剂和乳膏剂。软膏剂是半固体的制品，一般地基于矿脂或其它石油衍生物。含有选定活性试剂的乳膏剂一般地是粘性液体或半固体乳剂，常常是油混水(oil-in-water)或水混油(water-in-oil)的。乳膏剂膏基一般是可水洗的，并含有油相、乳化剂和水相。所述油相，有时也称为“内部”相，一般地由矿脂和脂肪醇例如十六烷或十八烷醇组成；而水相通常、尽管不是一定的，在体积上超过油相，并一般地含有湿润剂。在乳膏剂制剂中的乳化剂一般地是非离子的、阴离子的、阳离子的或两性的表面活性剂。如本领域技术人员可以理解的，使用的具体软膏剂或乳膏剂的膏基是用于最优化药物递送的。与其它载运体或赋形剂一样，软膏剂膏基应当是惰性的、稳定的、无刺激性和无过敏性的。不同于典型的肽制剂，包含D-型氨基酸的本发明的肽、或氨基酸对甚至可以口服地施用，不需要针对胃酸的蛋白水解作用进行保护，等等。尽管如此，在某些实施方式中，肽的递送可以通过使用保护性赋形剂来增强。一般地通过将多肽与组合物复合使其对酸或酶水解作用有抗性，或通过将多肽封装到适当地抵抗载运体，例如脂质体中，来实现这一点。为了口服递送保护多肽的方法是本领域公知的(参见，例如，美国专利5,391,377,描述了用于口服递送治疗试剂的脂质组合物)。
A)持续释放的制剂。可以通过使用持续释放的蛋白“封装”系统来维持升高的血清半衰期。这种持续释放系统是本领域技术人员公知的。在一个优选的实施方式中，用于蛋白和肽的蛋白酶生物可降解的微球递送系统(Tracy(1998)Biotechnol.Prog.14108；Johnson et al.(1996)，Nature Med.2795；Herbertet al.(1998)，Pharmaceut.Res.15，357)，一种由在聚合物基质中含有蛋白的生物可降解的聚合物微球组成的干燥粉末，可以作为带有或不带其它试剂的干燥制剂被化合。特别地设计蛋白酶微球制造过程来达到高度的蛋白密封效果而维持蛋白的完整性。所述过程由以下组成(1)通过喷雾冻干带有稳定赋形剂的药物溶液从散装(bulk)蛋白制备冻干的蛋白粒子制品，(ii)制备药物-聚合物悬浮液，随后通过超声处理或匀化作用来降低药物粒度，(iii)通过雾化到液氮中生产冷冻的药物-聚合物微球，(iv)用乙醇提取聚合物溶剂，和(v)过滤和真空干燥以产生最后的干燥粉末产物。产生的粉未含有固体形式的蛋白，其被均匀地和严格地分散到多孔聚合物粒子内。最常用于该过程的聚合物，聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)，是生物相容的和生物可降解的。封装可以在低温下实现(例如，-40℃)。在封装期间，蛋白被维持在没有水的固体状态，因而使水诱导的蛋白构象可变性最小化，防止包括水作为反应物的降解反应，和避开了在其中蛋白可能经历变性的有机相水相界面。优选的过程使用了大多数蛋白不能溶解在其中的溶剂，因而产生了高的封装效力(例如，大于95％)。在另一个实施方式中，可以作为“浓缩品(concentrate)”提供溶液的一种或多种组分，例如，在准备用于稀释的保存容器(例如，按预先测量的体积)中，或在准备向一定体积的水中添加的可溶解胶囊剂中。
B)组合的制剂。在某些情况中，联合一种或多种活性试剂(例如，抑制素、β阻断剂、ACE抑制物、脂质，等等)施用本发明的一种或多种肽、和/或氨基酸对。两种试剂(例如，肽和抑制素)可以同时地或次序地施用。当次序地施用时，这样施用两种试剂，从而在相似的时期两种试剂都达到生理学上相应的浓度(例如，从而两种试剂在某个共同时间是有活性的)。在某些实施方式中，同时地施用两种试剂。在这种情况中，在单个组合的制剂中提供两种试剂是方便的。这可以通过本领域技术人员公知的各种方法实现。例如，在片剂制剂中，所述片剂可以包含两层，一层包含例如抑制素，另一层包含例如肽。在定时释放的胶囊剂中，胶囊剂可以包含两个定时释放的珠装置，一个用于肽，一个含有抑制素。上述的制剂和施用方法是说明性的而非限制性的。应当理解的是，使用在此提供的教导，可以容易地设计出其它适合的制剂和施用模式。
XIII.其它的药理学活性试剂。其它的药理学上活性试剂可以与本发明的主要活性试剂，例如肽、或氨基酸对一同递送。在一个实施方式中这种药剂包括、但不限于降低动脉粥样硬化事件和/或其并发症的风险的药剂。这种药剂包括、但不限于β阻断剂、β阻断剂和噻嗪类利尿剂的组合、抑制素、阿斯匹林、ace抑制物、ace受体抑制物(ARBs)，等等。
A)抑制素。令人惊讶的发现是，“同时”与一种或多种抑制素施用本发明的一种或多种肽，协同地增强抑制素的效果。也就是说，抑制素可以以较低的剂量达到类似的效力，从而避免了与这些药物相关的潜在的不良副作用(例如，肌肉消耗)，和/或促使抑制素在任何给定的剂量抗炎性显著增强。抑制素的主要效果是降低LDL-胆固醇水平，并且它们比许多其它种类的药物更能降低LDL-胆固醇。抑制素一般地抑制酶，HMG-CoA还原酶，其在身体内控制胆固醇产生的比率。这些药物一般通过减慢胆固醇的产生和通过提高肝脏除去已经在血液中的LDL-胆固醇的能力来降低胆固醇。这些药物使总胆固醇和LDL-胆固醇极大降低，这似乎大大降低了心脏病发作和心脏病死亡。由于在这些研究中对它们的跟踪纪录和它们在降低LDL-胆固醇方面的能力，当病人需要降胆固醇药物时，抑制素已经成为处方中最常开的药物。使用抑制素的研究已经报道了这些药物在病人中百分之20到60更低的LDL-胆固醇水平。抑制素还降低升高的甘油三酯水平，和产生HDL-胆固醇方面的适度提高。近来已经意识到，抑制素具有抗炎性质，其与实现的脂质降低程度没有直接关系。例如，已经发现，抑制素降低炎症性标志物CRP的血浆水平，相对地与血浆脂质水平方面的变化无关。已经发现抑制素的这种抗炎活性，与LDL降低的程度相比，在预测由抑制素诱导的临床事件减少方面，同样重要或更重要。通常在晚饭或在睡前按单次剂量给予抑制素。这些药物常常在晚上给药，来利用这一事实，身体在晚上比白天制造更多的胆固醇。当与在此描述的肽组合时，组合的肽/抑制素治疗给药方案一般地也在晚上进行。适合的抑制素是本领域技术人员公知的。这种抑制素包括、但不限于torvastatin(Lipitor，Pfizer)、辛伐他汀(Zocor，Merck)，普伐他汀(Pravachol，Bristol-Myers Squibb，氟伐他汀(Lescol，Novartis)、洛伐他汀(Mevacor，Merck)、罗苏伐他汀(Crestor，Astra Zeneca)和匹伐他汀(Sankyo)，等等。组合的抑制素/肽剂量可以对每个病人进行常规的最优化。一般地，抑制素在几周后显示结果，在4到6周有最大的效果。在用抑制素和在此描述的肽之一组合治疗之前，医师为了开始抑制素将获得常规测验，包括LDL-胆固醇和HDL-胆固醇水平。另外，医师还将使用高灵敏度检测来测量病人的HDL的抗炎特性和测定CRP水平。在约4到6周的组合治疗之后，一般地医师将重复这些测验并调整给药方法的剂量来实现最大的脂质降低和最大的抗炎活性。
B)胆固醇吸收抑制物在某些实施方式中，联合一种或多种胆固醇吸收抑制物向受试者施用本发明的一种或多种肽、和/或氨基酸对。所述肽可以在之前、之后或同时地与胆固醇吸收抑制物施用。在后一种情况中，所述胆固醇吸收抑制物可以作为独立的制剂、或作为与一种或多种所述肽的组合的制剂来提供。胆固醇吸收抑制物是本领域技术人员公知的。一种重要的胆固醇吸收抑制物是依泽替米贝，也称为1-(4-氟苯基)-3(R)-[3-(4-氟苯基)-3(S)-羟基丙基]-4(S)-(4-羟苯基)-2-azetidinone(从Merck获得)。依泽替米贝通过抑制小肠的胆固醇吸收来降低血液胆固醇。
C)β阻断剂。适合的β阻断剂包括、但不限于cardioselective(选择性的βl阻断剂)，例如，醋丁洛尔(acebutolol，SectralTM)、阿替洛尔(atenolol，TenorminTM)、倍他洛尔(betaxolol，KerloneTM)、比索洛尔(bisoprolol，ZebetaTM)、美多心安(metoprolol，LopressorTM)，等等。适合的非选择性的阻断剂(相等地阻断β1和β2)包括、但不限于卡替洛尔(carteolol，CartrolTM)、纳多洛尔(nadolol，CorgardTM)、喷布洛尔(penbutolol，LevatolTM)、吲哚洛尔(pindolol，ViskenTM)、卡维地洛(carvedilol，CoregTM)、普萘洛尔(propranolol，InderalTM)、噻吗洛尔(timolol，BlockadrenTM)、labetalol(NormodyneTM，TrandateTM)，等等。适合的β阻断剂和噻嗪类利尿剂的组合包括、但不限于LopressorHCT、ZIAC、Tenoretic、Corzide、Timolide、Inderal LA 40/25、Inderide、Normozide，等等。
D)ACE抑制物。适合的ace抑制物包括、但不限于卡托普利(captopril，例如，Squibb的CapotenTM)、贝那普利(benazepril，例如，Novartis的LotensinTM)、依那普利(enalapril，例如，Merck的VasotecTM)、福辛普利(fosinopril，例如，Bristol-Myers的MonoprilTM)、赖诺普利(lisinopril，例如，Merck的PrinivilTM或Astra-Zeneca的ZestrilTM)、喹那普利(quinapril，例如，Parke-Davis的AccuprilTM)、雷米普利(ramipril，例如，Hoechst Marion Roussel，KingPharmaceuticals的AltaceTM)、咪达普利(imidapril)、perindopril erbumine(例如，Rhone-Polenc Rorer的AceonTM)、群多普利(trandolapril，例如，KnollPharmaceutical的MavikTM)，等等。适合的ARBS(Ace受体阻断剂)包括但不限于，氯沙坦(losartan，例如，Merck的CozaarTM)、厄贝沙坦(irbesartan，例如，Sanofi的AvaproTM)、坎地沙坦(candesartan，例如，Astra Merck的AtacandTM)、缬沙坦(valsartan，例如，Novartis的DiovanTM)等等。
E)基于脂质的制剂。在某些实施方式中，联合一种或多种脂质向受试者施用本发明的肽、和/或氨基酸对。所述脂质可以被配制为活性制剂、和/或作为赋形剂来保护和/或增强所述肽的转运/摄取，或它们可以被分开地施用。不限于特定的理论，本发明的发现是，某些磷脂的施用(例如，口服施用)可以显著地提高HDL/LDL比例。此外，据信，某些中等长度的磷脂是通过不同于涉及普通脂质转运的过程来转运的。因而，与本发明的肽共同施用某些中等长度的磷脂带来了许多益处它们保护了磷脂免于消化或水解作用，它们改善了肽摄取，以及它们提高了HDL/LDL比例。所述脂质可以形成封装本发明的多肽的脂质体，和/或它们可以简单地与所述肽复合/混合。制造脂质体和封装试剂的方法是本领域技术人员公知的(参见，例如，Martin and Papahadiopoulos(1982)J.Biol.Chem.，257286-288；Papahadjopoulos et al.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，8811460-11464；Huang et al.(1992)Cancer Res.，526774-6781；Lasic et al.(1992)FEBS Lett.，312255-258.，等等)。用于这些方法中的优选的磷脂在sn-1和sn-2位置中具有范围从约4个碳到约24个碳的脂肪酸。在某些优选的实施方式中，所述脂肪酸是饱和的。在其它优选的实施方式中，所述脂肪酸可以是不饱和的。在表13中说明了各种优选的脂肪酸。表13.用于D多肽的施用优选的磷脂的sn-1和/或sn-2位置中的优选的脂肪酸。
碳的数目 通用名 IUPAC名称3:0 丙酰基 Trianoic4:0 丁酰基 Tetranoic5:0 戊酰基 Pentanoic6:0 己酰基 Hexanoic7:0 庚酰基 Heptanoic8:0 辛酰基 Octanoic9:0 壬酰基 Nonanoic10:0 癸酰基 Decanoic11:0 十一碳酰基 Undecanoic12:0 十二碳酰基 Dodecanoic13:0 十三碳酰基 Tridecanoic14:0 十四碳酰基 Tetradecanoic15:0 十五碳酰基 Pentadecanoic16:0 十六碳酰基 Hexadecanoic17:0 十七碳酰基 Heptadecanoic18:0 十八碳酰基 Octadecanoic19:0 十九碳酰基 Nonadecanoic20:0 二十碳酰基 Eicosanoic21:0 二十一碳酰基 Heniecosanoic22:0 二十二碳酰基 Docosanoic23:0 二十三碳酰基 Trocosanoic24:0 二十四碳酰基 Tetracosanoic14:1 顺-9-十四碳烯酰基(9-cis)14:1 反-9-十四碳烯酰基(9-trans)16:1 顺-9-十六碳烯酰基(9-cis)16:1 反-9-十六碳烯酰基(9-trans)
在这些位置中的脂肪酸可以是相同的或不同的。特别优选的磷脂在sn-3位置具有磷酸胆碱。
XIV.试剂盒。在本发明的另一个实施方式中提供了用于改善动脉粥样硬化的一种或多种症状，和/或用于有动脉粥样硬化风险的受试者(人或动物)的预防性治疗，和/或用于刺激前-β高密度脂蛋白样粒子的形成和循环，和/或用于抑制骨质疏松症的一种或多种症状的试剂盒。所述试剂盒优选的包括含有本发明的一种或多种所述肽、和/或氨基酸对、和/或肽模拟物的容器。所述肽、和/或氨基酸对、和/或肽模拟物可以以单位剂量制剂(例如，栓剂、片剂、锭、贴片，等等)提供，和/或任选的可以与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。任选的，所述试剂盒可以进一步包含用于治疗心脏病和/或动脉粥样硬化的一种或多种其它试剂。这种试剂包括、但不限于，例如如上所述的，β阻断剂、血管扩张剂、阿斯匹林、抑制素、ace抑制物或ace受体抑制物(ARB)等。在某些优选的实施方式中，所述试剂盒另外包括单独地配制的或与所述肽配制成组合配制形式的抑制素(例如，西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、罗苏伐他汀、匹伐他汀，等等)。一般地，在这种制剂中抑制素的剂量可以比没有协同性肽的情况下一般开处方的抑制素剂量更低。此外，所述试剂盒任选的包括标签和/或指导材料，提供对方法的实际操作或本发明的“治疗”或“预防”的使用的指导(即，方案)。优选的指导材料描述了使用本发明的一种或多种多肽、和/或氨基酸对来缓解动脉粥样硬化的一种或多种症状，和/或预防在有动脉粥样硬化风险的个体中一种或多种这种症状的发作或增加，和/或刺激前-β高密度脂蛋白样粒子的形成和循环，和/或抑制骨质疏松症的一种或多种症状，和/或缓解以炎症性反应为特征的病变的一种或多种症状。所述指导材料也可以，任选的，教导优选的剂量/治疗服用法，反指征(counter indications)等等。虽然这些指导材料一般地包含手写的或印刷的材料，它们并不局限于此。能够存储这种说明和将它们传达到终端用户的任何媒介都是本发明预期的。这种媒介包括、但不限于电子存储媒介(例如，磁盘、磁带、盒式磁带、芯片)、光学媒介(例如，CD ROM)等等。这种媒介可以包括提供这种指导材料的因特网站点地址。
实施例提供以下实施例来说明，而不是限制所要求保护的发明。
实施例1对小肽介导动脉粥样硬化和其它炎症性病变的症状的评估。在此描述的apo A-I模拟物(参见，例如，表1)展现出类似于apo A-I的抗动脉粥样硬化特性，因为它们除去了动脉壁细胞氧化LDL所需的“种子分子”(例如，氧化的磷脂例如Ox-PAPC、POVPC、PGPC和PEIPC，等等)，并且类似于apo A-I，因为它们在小鼠模型中改善了动脉粥样硬化。apo A-I模拟肽(例如，D-4F，SEQ ID NO8)不同于apo A-I是因为，它们类似于apo J在共孵育中也是有活性的(参见，例如，USSN10/120,508和PCT/US03/09988)。这些肽一般地于apo A-I不具有基本上的序列同源性，但是在它们的螺旋结构和它们结合脂质的能力方面具有同源性。在此描述的较小肽(参见，例如，此处的表4-7)类似于天然的apo A-I，是因为它们防止LDL氧化和在与动脉壁细胞的预孵育(pre-incubation)、而不是共孵育(co-incubation)中防止LDL诱导的单核细胞趋化活性(参见，例如，附图3)。在附图3中描述的肽在体内也是有活性的(附图4)。将四肽或D-4F(SEQ ID NO8)以5μg/mL添加到apoE裸小鼠(人动脉粥样硬化的小鼠模型)的饮用水中，或不添加到饮用水中。18小时后对小鼠放血，通过FPLC分离它们的脂蛋白。添加来自接受了无肽饮用水的小鼠的、含有成熟的HDL的馏分或这些馏分之后的FPLC馏分(其中预期有前-βHDL，即在主要HDL峰之后立刻从FPLC柱下来的粒子；HDL之后)，提高了由被添加到人动脉壁细胞共培养物的对照LDL诱导的单核细胞趋化活性(附图4)。与此相反，添加来自在饮用水中接受了四肽或D-4F的小鼠的HDL或HDL后FPLC馏分显著地降低了LDL诱导的单核细胞趋化活性，表明所述四肽和D-4F将这些脂蛋白从促炎症性状态转化到抗炎性状态(附图4)。如附图5所示，取自接受了所述四肽或D-4F的小鼠的LDL，与来自未接受所述肽的小鼠的LDL相比，诱导的单核细胞趋化活性显著降低，证实了口服施用的D-四肽的生物活性。附图6表明，在将D-氨基酸合成的表4的SEQ ID NO258通过胃管滴注到apo E裸小鼠的胃中20分钟或6小时后，采集的HDL从促炎症性的被转化为抗炎性的，并类似于来自接受了D-4F的小鼠的HDL，完全不同于来自接受了一种肽的小鼠的HDL，这种肽与D-4F中一样具有相同的D-氨基酸，但是以一定方式排列以防止A类两亲螺旋的形成从而使这种肽不能结合脂质(杂乱的D-4F)。附图7表明，在口服施用由D-氨基酸合成的D-4F或SEQ IDNO258之后20分钟或6小时后的小鼠LDL，与取自接受所述杂乱的D-4F肽的小鼠的LDL相比，诱导单核细胞趋化活性显著降低。附图8表明，向apoE裸小鼠的食物中添加表4的SEQ ID NO238(全由D-氨基酸合成)18小时，将apoE裸小鼠的促炎症性HDL转化成抗炎性HDL。附图9表明，在体外所述四肽(表4中的SEQ ID NO258)比SEQID NO238有效十倍。如附图3所示，125μg/mL的SEQ ID NO238仅是中度有效的，而在附图9中所示，在体外的预孵育中12.5μg/mL的SEQ ID NO258是高度有效的。在附图10中显示的实验表明，表4的SEQ ID NO243、SEQ IDNO242和SEQ ID NO256也能够将apoE裸小鼠的促炎症性HDL转化成抗炎性HDL。本发明的特定肽的活性取决于如附图11、12和13所示的特定氨基酸替换。SEQ ID NO254与SEQ ID NO258相同，除了在序列中精氨酸和谷氨酸氨基酸的位置是相反的(即，SEQ ID NO254是Boc-Lys(εBoc)-Glu-Arg-Ser(tBu)-OtBu，而SEQ ID NO258是Boc-Lys(εBoc)-Arg-Glu-Ser(tBu)-OtBu)。作为这个表面上微小的变化的结果，在这些检测中SEQ ID NO254比SEQ ID NO258有实质上更低的效果。在附图11和12中描述的实验表明，表4的SEQ ID NO258在将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL、和使LDL降低诱导单核细胞趋化活性方面，比SEQ ID NO254或SEQ ID NO282都更为有效。血清淀粉样蛋白A(SAA)是小鼠中的阳性急性期反应物，类似于人类中的C-反应蛋白(CRP)。附图13中的数据表明，在注射了SEQ IDNO258后的血浆中这种急性期反应物被显著地降低了，在注射SEQ IDNO254和282后降低的程度是稍小的、不显著的。附图14表明，表4中描述的肽如SEQ ID NO258，当全由L-氨基酸合成并口服给予apoE裸小鼠时，将促炎症性HDL转化成抗炎性的，并提高了血浆对氧磷酶活性(附图15)。附图16、17、18和19表明了表4中描述的肽如SEQ ID NO258，当全由D-氨基酸合成并口服给予apoE裸小鼠时，导致HDL具有抗炎性(附图16和17)，降低了LDL-诱导的单核细胞趋化活性(附图17)和提高了血浆HDL-胆固醇(附图18)和提高了HDL对氧磷酶活性(附图19)。这些数据还显示SEQ ID NO238，当全由L-氨基酸合成并口服给予apoE裸小鼠时，没有显著地改变HDL在炎症方面的特性(附图16和17)，也没有显著改变LDL诱导的单核细胞趋化活性(附图17)，也没有显著改变血浆HDL-胆固醇浓度(附图18)，也没有显著改变HDL对氧磷酶活性(附图19)。另外，这些数据显示，当表4的SEQ ID NO238全由D-氨基酸合成并口服给予apo E裸小鼠时，给HDL带来抗炎性(附图16和17)，并降低了LDL诱导的单核细胞趋化活性(附图17)，但这两种变化都不象SEQ ID NO258的那样显著。此外，不同于SEQ ID NO258，表4的SEQ ID NO238当全由D-氨基酸合成时不提高HDL-胆固醇浓度(附图18)，不提高HDL对氧磷酶活性(附图19)。我们断定，表4的SEQ ID NO238当由L-氨基酸合成时，当口服给予时是无效的，但当由D-氨基酸合成时是有效的，但其有效性实质上低于SEQ ID NO258。在此呈现的数据表明，SEQ ID NO238当全由L-氨基酸合成并口给予时一般是无效的，当全由D-氨基酸合成时是有效的，但基本上比相同剂量的全由D-氨基酸合成的口服施用的SEQ ID NO258的有效性低。
实施例2
肽协同增强抑制素活性附图20和21显示了抑制素(普伐他汀)和D-4F之间在apoE裸小鼠中改善动脉粥样硬化方面的显著协同作用。已知小鼠对抑制素有抗性。在饮用水中以20μg/mL接受了普伐他汀的小鼠消费了与70kg人类每天175mg相当的普伐他汀剂量，在饮用水中以50μg/mL接受了普伐他汀的小鼠消费了与70kg人类每天437.5mg相当的普伐他汀剂量。如附图20和21中所示，这些非常高的普伐他汀剂量在apoE裸小鼠中在改善动脉粥样硬化病变方面没有效果。如在附图20和21中所示，单独向apoE裸小鼠的饮用水以2μg/mL或5μg/mL的浓度添加D-4F没有降低动脉粥样硬化病变。这些D-4F剂量分别相当于70Kg人类的17.5mg每天和43.75mg每天的剂量。显著地，如在附图20和21中所示，向apoE裸小鼠的饮用水中一同添加相同浓度的普伐他汀和D-4F基本上消除了这些小鼠中的动脉粥样硬化。这表明抑制素(普伐他汀)和D-4F之间的非常高程度的协同作用。附图22显示了，表4的SEQ ID NO.198和SEQ ID NO.203在apoE裸小鼠中降低LDL和HDL的脂质过氧化物含量方面，与D-4F相比有相当的效果或甚至更有效。这些数据与D-4F和在本申请中描述的肽相一致，所述肽部分地通过隔绝LDL诱导炎症性动脉粥样硬化反应所需的“种子分子”起作用。将附图3到19中显示的数据结合起来，很可能的是，在本申请中描述的肽(例如，表4的SEQ ID NO250、198和SEQ ID NO258)在改善动脉粥样硬化方面与D-4F一样有效或更有效。
实施例3预测能使HDL抗炎性更强和缓解哺乳动物的动脉粥样硬化的新型小有机分子(分子量＜900道尔顿)的物理性质本发明的令人惊讶的的发现是，许多物理性质预测了本发明的小肽的能力，能使得HDL抗炎性更强和缓解哺乳动物的动脉粥样硬化和/或以炎症性反应为特征的其它病变。所述物理性质包括在乙酸乙酯中的高溶解性(例如，大于约4mg/mL)，和在pH7.0的水性缓冲液的溶解性。在接触磷脂，例如1，2-双十四酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)时，在水性环境中，特别有效的小肽形成直径大约7.5nm(±0.1nm)的粒子，和/或形成层叠的双分子层，双分子层尺寸大概3.4到4.1nm，在层叠中的双分子层之间的间隙大约2nm，和/或还形成大约38nm的多孔结构。在某些优选的实施方式中，所述小肽具有低于约900Da的分子量。通过比较两个序列来说明这些物理性质的预言性效果SEQ ID NO 254Boc-Lys(εBoc)-Glu-Arg-Ser(tBu)-OtBu；和SEQ ID NO 258Boc-Lys(εBoc)-Arg-Glu-Ser(tBu)-OtBu为了评估在乙酸乙酯中的溶解性，对每种肽称重，并加入到离心管中，添加乙酸乙酯(HPLC级；蒸发后的残渣＜0.0001％)以得到10mg/mL的浓度。将试管蜡封、涡旋，在室温保持30分钟，每10分钟进行涡旋。然后在10,000rpm将试管离心5分钟，将上清液移到预先称重的试管中。在氩气中蒸发乙酸乙酯，对试管称重来测定已经包含在所述上清液中的肽的数量。溶于上清液中的肽占最初添加的肽的百分比在Y轴上显示。数据是平均值±S.D。对照代表假处理的试管，SEQ ID NO 254和SEQ ID NO 258都是全由D-氨基酸合成的；SEQ ID NO 250是全由L-氨基酸合成的。如在附图23中所示，SEQ ID NO 258极易溶于乙酸乙酯，而SEQID NO 254不是(都是全由D-氨基酸合成的)。另外，附图23中的数据表明，SEQ ID NO 250[Boc-Phe-Arg-Glu-Leu-OtBu](全由L-氨基酸合成)也极易溶于乙酸乙酯。向磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的1mg/mL DMPC悬浮液添加10％脱氧胆酸盐，直到DMPC溶解。添加肽SEQ ID NO 258或SEQ ID NO 254(DMPC∶肽；1∶10；wt∶wt)，将反应混合物透析。透析后，对于SEQ ID NO258溶液仍然是澄清的，但是对于SEQ ID NO254在透析除去脱氧胆酸盐后溶液是混浊的。附图24-26表明，当在水性环境中将SEQ ID NO 258添加到DMPC时，形成直径大约7.5nm的粒子，形成层叠的脂双分子层，双分子层尺寸大概3.4到4.1nm，在层叠中的双分子层之间的间隙大约2nm，还形成大约38nm的多孔结构。特别地，附图24显示了用负染色制备的和在147,420×放大倍率下的电子显微照片。箭头指出了SEQ ID NO 258粒子，测量为7.5nm(它们看起来是小的白色粒子)。如在附图25中说明的，在水性环境下将包含SEQ ID NO 258的肽添加到DMPC形成直径大约7.5nm的粒子(白色箭头)，和层叠的脂质肽双分子层(指向圆盘的圆柱形层叠中的白线的斜纹箭头)，双分子层尺寸大概3.4到4.1nm，双分子层之间的间隙(在圆盘的层叠中白线之间的黑线)大约2nm。附图26显示了在水性环境中添加到DMPC的SEQ ID NO 258的肽形成层叠的脂质-肽双分子层(斜纹箭头)和约38nm的多孔结构(白色箭头)。附图27显示了在水性环境中没有SEQ ID NO 258的DMPC不形成直径大约7.5nm的粒子，或层叠的脂质-肽双分子层，也不形成大约38nm的多孔结构。在如附图24中描述的条件下，SEQ ID NO 254的肽(对于肽的氨基和羧基末端，其与SEQ ID NO 258的肽的不同仅在于精氨酸和谷氨酸的顺序)不形成直径大约7.5nm的粒子或层叠的脂质-肽双分子层，也不形成大约38nm的多孔结构(数据未显示)。因而，在肽中的精氨酸和谷氨酸的顺序显著地改变了它与DMPC相互作用的能力，这一点通过在乙酸乙酯中的溶解度被预测了(即，SEQ ID NO 258的肽高度可溶于乙酸乙酯，并形成直径大约7.5nm粒子，和层叠的脂质-肽双分子层，以及大约38nm的多孔结构，而SEQ ID NO 254的肽很少地溶于乙酸乙酯，在如附图24在描述下条件下不形成这些结构)。除了在附图24中描述的方案之外，如果PBS中的DMPC悬浮液被添加到SEQ ID NO 258的肽(DMPC∶肽；1∶10；wt∶wt)或SEQ ID NO 254的肽(DMPC∶肽；1∶10；wt∶wt)中，在仅高于DMPC的转折温度(transition temperature)(仅高于50℃)和室温之间每小时几个循环地将混合物进行循环，然后放在室温下48小时(数据未显示)，也获得了类似的结果。SEQ ID NO 258的肽的物理性质(而不是SEQ ID NO 254的肽)表明，这种肽具有两亲性质(即，其高度可溶于乙酸乙酯，也可溶于pH7.0的水性缓冲液[数据未显示]，其如上所示的与DMPC相互作用)。本发明的令人惊讶的发现是，高度可溶于乙酸乙酯、并也可溶于pH7.0的水性缓冲液的肽，与DMPC相互作用形成脂质-肽复合物，其显著地类似于由apo A-I与细胞的相互作用形成的初生的HDL粒子(Forte，et al.(1993)J.Lipid Res.34317-324)。表13比较了在体外无脂质的人类apo A-I与CHO-C19细胞的相互作用，和如以上附图4-7指出的SEQ ID NO 258与DMPC的相互作用。表13.如以上的附图24-27中指明的SEQ ID NO 258的肽与DMPC的相互作用，和如Forteet al.(1993)J.Lipid Res.34317-324中描述的无脂质的人类apoA-I与CHO-C-19细胞的相互作用之间的比较。 因而，高度可溶于乙酸乙酯并也可溶于pH7.0的水性缓冲液的在此描述的小肽，与apoA-I相类似地与脂质(DMPC)相互作用，apoA-I具有28,000道尔顿的分子量。附图28-32中显示的分子模型表明了与SEQ ID NO 258相比较的、SEQ ID NO 254的空间特征。在附图28-32中显示的分子模型表明，SEQ ID NO 254的肽和SEQID NO 258的肽在每个分子中都含有极性和非极性部分，但是在两种分子的极性和非极性组分的排布上存在空间差异。作为在分子的空间排布方面的差异的结果，两种分子在乙酸乙酯中的溶解性(附图23)方面，和它们与DMPC相互作用方面(附图24-27)存在差异。附图33-35中的数据表明，对比SEQ ID NO 258的肽和SEQ IDNO 254的肽的物理性质预测了这些分子使得HDL抗炎性更强和当口服给予哺乳动物时缓解动脉粥样硬化的能力。雌性apoE裸小鼠在8周龄给予无添加的饮食(chow)或接受含有如下肽的食物200μg/gm SEQ ID NO 254(+254)或200μg/gm SEQ ID NO258(+258)，它们都是全由D-氨基酸合成的。15周后给小鼠放血，通过FPLC分馏血浆，在人类动脉壁细胞共培养物中测试它们的HDL(mHDL)。向人类动脉壁共培养物中只添加标准人类LDL(100μg/mL的LDL-胆固醇)(LDL)，或不添加(无添加)，或其与50μg/mL的正常人类HDL一同添加(hHDL)或其与50μg/mL的小鼠HDL一同添加(mHDL)，测定产生的单核细胞趋化活性，在Y轴上标绘。附图33显示，在小鼠被饲喂SEQ ID NO258之后，而不是饲喂SEQ ID NO 254之后，来自apo E裸小鼠的HDL被赋予了抗炎性。如在附图34中所示，SEQ ID NO 258的肽而不是SEQ ID NO 254的肽，显著地降低如上所述的apoE裸小鼠的主动脉根(主动脉窦)中的动脉粥样硬化。附图35说明，SEQ ID NO 258而不是SEQ ID NO 254，还显著地降低主动脉的en face制品中的动脉粥样硬化。附图23说明，全由L-氨基酸合成的SEQ ID NO 250在乙酸乙酯中的溶解度(参见以上的附图23)精确地预测了这种分子在apoE裸小鼠中改善动脉粥样硬化的能力。因而，这些小肽的物理性质精确地预测所述肽在apo E裸小鼠中缓解动脉粥样硬化的能力。因而我们教导了小肽，一般地具有小于约900道尔顿的分子量，高度可溶于乙酸乙酯(大于约4mg/mL)，并且还可溶于pH7.0的水性缓冲液，当在水性环境中与磷脂例如1，2-双十四酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)接触时，形成直径大约7.5nm的粒子，和/或形成层叠的双分子层，双分子层尺寸大概3.4到4.1nm，层叠中的双分子层之间的间隙大约2nm，和/或它们还形成大约38nm的多孔结构，当向哺乳动物施用时，使得HDL抗炎性更强和缓解动脉粥样硬化及以炎症性反应为特征的其它病变的一种或多种症状。可理解的是，在此描述的实施例和实施方式仅用于说明性的目的，根据这些进行的各种修改或变化将为本领域的技术人员提供启发，并包括在本申请的精神和范围、以及附随的权利要求的范围内。在此引用的所有出版物、专利和专利申请为了各种目的，以它们的整体引用本文做参考。
权利要求
1.一种改善炎症性状况的一种或多种症状的肽，其中所述肽长度范围从3个到约5个氨基酸；可以以大于约4mg/mL的浓度溶于乙酸乙酯；可溶于pH7.0的水性缓冲液；当在水性环境与磷脂接触时，形成直径大约7.5nm的粒子和形成层叠双分子层，双分子层厚度大概3.4到4.1nm，在层叠中双分子层之间的间隔大约2nm；具有低于约900道尔顿的分子量；将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL或使抗炎性HDL更具抗炎性；和不具有氨基酸序列Lys-Arg-Asp-Ser(SEQ ID NO238)，其中Lys-Arg-Asp和Ser都是L氨基酸。
2.权利要求1的肽，其中所述肽保护磷脂对抗氧化剂的氧化。
3.权利要求2的肽，其中所述氧化剂选自由过氧化氢、13(S)-HPODE、15(S)-HPETE、HPODE、HPETE、HODE和HETE构成的组。
4.权利要求2的肽，其中所述磷脂选自由1-棕榈酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(PAPC)、1-硬脂酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(SAPC))和1-硬脂酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(SAPE)构成的组。
5.一种改善炎症性状况的一种或多种症状的肽，其中所述肽具有式X1-X2-X3n-X4其中n是0或1；X1是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；X4是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；和当n是0时X2是选自由酸性氨基酸、碱性氨基酸和组氨酸构成的组的氨基酸；当n是1时X2和X3独立地是酸性氨基酸、碱性氨基酸、脂肪族氨基酸或芳香族，这样当X2是酸性氨基酸时，X3是碱性氨基酸、脂肪族氨基酸或芳香族氨基酸；当X2是碱性氨基酸时；X3是酸性氨基酸、脂肪族氨基酸或芳香族氨基酸；和当X2是脂肪族或芳香族氨基酸时，X3是酸性氨基酸或碱性氨基酸；所述肽将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL或使抗炎性HDL更具抗炎性；和所述肽不具有氨基酸序列Lys-Arg-Asp-Ser(SEQ ID NO238)，其中Lys-Arg-Asp和Ser都是L氨基酸。
6.权利要求5的肽，其中n是0。
7.权利要求6的肽，其中，X1和X4独立地选自由丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、甲硫氨酸(Met)、带有疏水保护基团的丝氨酸(Ser)、β-萘基丙氨酸、α-萘基丙氨酸、正亮氨酸、环己基丙氨酸、带有疏水保护基团的苏氨酸(苏氨酸)、带有疏水保护基团的酪氨酸(Tyr)、带有疏水保护基团的赖氨酸(Lys)、带有疏水保护基团的精氨酸(Arg)、带有疏水保护基团的鸟氨酸(Orn)、带有疏水保护基团的天冬氨酸(Asp)、带有疏水保护基团的半胱氨酸(Cys)和带有疏水保护基团的谷氨酸(Glu)构成的组。
8.权利要求7的肽，其中X1选自由Glu、Leu、Lys、Orn、Phe、Trp和norLeu构成的组；X2选自由Asp、Arg和Glu构成的组；和X4选自由Ser、Thr、Ile、Leu、Trp、Tyr、Phe和norleu构成的组。
9.权利要求7的肽，其中X1选自由Glu、Leu、Lys、Orn、Phe、Trp和norLeu构成的组；X2选自由Lys、Arg和His构成的组；和X4选自由Asp、Arg和Glu构成的组。
10.权利要求6的肽，其中X1带有疏水保护基团。
11.权利要求10的肽，其中所述疏水保护基团选自由聚乙二醇(PEG)、叔丁氧羰基(Boc)、Fmoc、烟酰基、OtBu、苯甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酯基、甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、N-甲基邻氨基苯甲酰、和3到20碳烃基、酰胺、3到20碳烃基基团、9-芴乙酰基基团、1-芴羧基基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基基团、苄氧基羰基(也称为苄酯基)、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、三氟乙酰基(TFA)、4-[N-{1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)-3-甲基二丁基)-氨基}苯甲基酯(ODmab)、α-烯丙酯(OAll)、2-苯基异丙基酯(2-PhiPr)、1-[4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-基-亚基)乙基(Dde)构成的组。
12.权利要求11的肽，其中所述疏水保护基团选自由Boc、Fmoc、烟酰基和OtBu构成的组。
13.权利要求10的肽，其中X4带有疏水保护基团。
14.权利要求13的肽，其中所述疏水保护基团选自由聚乙二醇(PEG)、叔丁氧羰基(Boc)、Fmoc、烟酰基、OtBu、苯甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酯基、甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、N-甲基氨基邻甲苯基、和3到20碳烃基、酰胺、3到20碳烃基基团、9-芴乙酰基基团、1-芴羧基基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基基团、苄氧基羰基(也称为苄酯基)、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、三氟乙酰基(TFA)、4-[N-{1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)-3-甲基二丁基)-氨基}苯甲基酯(ODmab)、α-烯丙酯(OAll)、2-苯基异丙基酯(2-PhiPr)、1-[4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-基-亚基)乙基(Dde)构成的组。
15.权利要求14的肽，其中所述肽的N-末端被选自由Boc-、Fmoc-和烟酰基-构成的组的保护基团封闭。
16.权利要求14的肽，其中所述肽的C-末端被选自由tBu和OtBu构成的组的保护基团封闭。
17.权利要求6的肽，其中所述肽包含表3中的肽的氨基酸序列。
18.权利要求6的肽，其中所述肽是来自表3的肽。
19.权利要求6的肽，其中所述肽包含至少一个D-氨基酸。
20.权利要求6的肽，其中所述肽包含的全部是D-氨基酸。
21.权利要求6的肽，其中所述肽包含交替的D-和L-氨基酸。
22.权利要求6的肽，其中所述肽包含的全部是L-氨基酸。
23.权利要求6的肽，其中所述肽与药理学上可接受的赋形剂混合。
24.权利要求6的肽，其中所述肽与适合于向哺乳动物口服施用的药理学上可接受的赋形剂混合。
25.权利要求6的肽，其中所述多肽作为药学上可接受的赋形剂中的单位制剂提供。
26.权利要求6的肽，其中所述多肽作为定时释放制剂提供。
27.权利要求6的肽，其中所述肽保护磷脂对抗氧化剂的氧化。
28.权利要求27的肽，其中所述氧化剂选自由过氧化氢、13(S)-HPODE、15(S)-HPETE、HPODE、HPETE、HODE和HETE构成的组。
29.权利要求27的肽，其中所述磷脂选自由1-棕榈酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(PAPC)、1-硬脂酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(SAPC)、1-硬脂酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(SAPE)构成的组。
30.权利要求6的肽，其中所述肽与生物素偶联。
31.权利要求5的肽，其中n是0或1；和X2和X3独立地是酸性氨基酸或碱性氨基酸，这样当X2是酸性氨基酸时，X3是碱性氨基酸，和当X2是碱性氨基酸时，X3是酸性氨基酸。
32.权利要求31的肽，其中，X1和X4独立地选自由丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、甲硫氨酸(Met)、带有疏水保护基团的丝氨酸(Ser)、β-萘基丙氨酸、α-萘基丙氨酸、正亮氨酸、环己基丙氨酸、带有疏水保护基团的苏氨酸(苏氨酸)、带有疏水保护基团的酪氨酸(Tyr)、带有疏水保护基团的赖氨酸(Lys)、带有疏水保护基团的精氨酸(Arg)、带有疏水保护基团的鸟氨酸(Orn)、带有疏水保护基团的天冬氨酸(Asp)、带有疏水保护基团的半胱氨酸(Cys)和带有疏水保护基团的谷氨酸(Glu)构成的组。
33.权利要求32的肽，其中X2和X3独立地选自由Asp、Glu、Lys、Arg和His构成的组。
34.权利要求32的肽，其中X2和X3独立地选自由Asp、Arg和Glu构成的组。
35.权利要求33的肽，其中X1带有疏水保护基团。
36.权利要求35的肽，其中所述疏水保护基团选自由聚乙二醇(PEG)、叔丁氧羰基(Boc)、Fmoc、烟酰基、OtBu、苯甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酯基、甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、N-甲基氨基邻甲苯基、和3到20碳烃基、酰胺、3到20碳烃基基团、9-芴乙酰基基团、1-芴羧基基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基基团、苄氧基羰基(也称为苄酯基)、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、三氟乙酰基(TFA)、4-[N-{1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)-3-甲基二丁基)-氨基}苯甲基酯(ODmab)、α-烯丙酯(OAll)、2-苯基异丙基酯(2-PhiPr)、1-[4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-基-亚基)乙基(Dde)构成的组。
37.权利要求35的肽，其中所述疏水保护基团选自由Boc、Fmoc、烟酰基和OtBu构成的组。
38.权利要求35的肽，其中X4带有疏水保护基团。
39.权利要求38的肽，其中所述疏水保护基团选自由聚乙二醇(PEG)、叔丁氧羰基(Boc)、Fmoc、烟酰基、OtBu、苯甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酯基、甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、N-甲基氨基邻甲苯基、和3到20碳烃基、酰胺、3到20碳烃基基团、9-芴乙酰基基团、1-芴羧基基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基基团、苄氧基羰基(也称为苄酯基)、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、三氟乙酰基(TFA)、4-[N-{1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)-3-甲基二丁基)-氨基}苯甲基酯(ODmab)、α-烯丙酯(OAll)、2-苯基异丙基酯(2-PhiPr)、1-[4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-基-亚基)乙基(Dde)构成的组。
40.权利要求35的肽，其中所述肽的N-末端被选自由Boc-、Fmoc-和烟酰基-构成的组的保护基团封闭。
41.权利要求35的肽，其中所述肽的C-末端被选自由tBu和OtBu构成的组的保护基团封闭。
42.权利要求31的肽，其中所述肽包含表4中的肽的氨基酸序列。
43.权利要求31的肽，其中所述肽是来自表4的肽。
44.权利要求31的肽，其中所述肽包含至少一个D-氨基酸。
45.权利要求31的肽，其中所述肽包含的全部是D-氨基酸。
46.权利要求31的肽，其中所述肽包含交替的D-和L-氨基酸。
47.权利要求31的肽，其中所述肽包含的全部是L-氨基酸。
48.权利要求31的肽，其中所述肽与药理学上可接受的赋形剂混合。
49.权利要求31的肽，其中所述肽与适合于向哺乳动物口服施用的药理学上可接受的赋形剂混合。
50.权利要求31的肽，其中所述多肽作为药学上可接受的赋形剂中的单位制剂提供。
51.权利要求31的肽，其中所述多肽作为定时释放制剂提供。
52.权利要求31的肽，其中所述肽保护磷脂对抗氧化剂的氧化。
53.权利要求31的肽，其中所述肽与生物素偶联。
54.权利要求5的肽，其中n是0或1；和X2、X3独立地是酸性、碱性、或脂肪族氨基酸，X2或X3之一是酸性或碱性氨基酸，这样当X2是酸性或碱性氨基酸时，X3是脂肪族氨基酸；和当X3是酸性或碱性氨基酸时，X2是脂肪族氨基酸。
55.权利要求54的肽，其中，X1和X4独立地选自由丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、甲硫氨酸(Met)、带有疏水保护基团的丝氨酸(Ser)、β-萘基丙氨酸、α-萘基丙氨酸、正亮氨酸、环己基丙氨酸、带有疏水保护基团的苏氨酸(苏氨酸)、带有疏水保护基团的酪氨酸(Tyr)、带有疏水保护基团的赖氨酸(Lys)、带有疏水保护基团的精氨酸(Arg)、带有疏水保护基团的鸟氨酸(Orn)、带有疏水保护基团的天冬氨酸(Asp)、带有疏水保护基团的半胱氨酸(Cys)和带有疏水保护基团的谷氨酸(Glu)构成的组。
56.权利要求55的肽，其中X2和X3独立地选自由Asp、Arg、Lys、Leu、Ile和Glu构成的组。
57.权利要求55的肽，其中X1带有疏水保护基团。
58.权利要求57的肽，其中所述疏水保护基团选自由聚乙二醇(PEG)、叔丁氧羰基(Boc)、Fmoc、烟酰基、OtBu、苯甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酯基、甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、N-甲基氨基邻甲苯基、和3到20碳烃基、酰胺、3到20碳烃基基团、9-芴乙酰基基团、1-芴羧基基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基基团、苄氧基羰基(也称为苄酯基)、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、三氟乙酰基(TFA)、4-[N-{1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)-3-甲基二丁基)-氨基}苯甲基酯(ODmab)、α-烯丙酯(OAll)、2-苯基异丙基酯(2-PhiPr)、1-[4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-基-亚基)乙基(Dde)构成的组。
59.权利要求57的肽，其中所述疏水保护基团选自由Boc、Fmoc、烟酰基和OtBu构成的组。
60.权利要求57的肽，其中X4带有疏水保护基团。
61.权利要求60的肽，其中所述疏水保护基团选自由聚乙二醇(PEG)、叔丁氧羰基(Boc)、Fmoc、烟酰基、OtBu、苯甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酯基、甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、N-甲基氨基邻甲苯基、和3到20碳烃基、酰胺、3到20碳烃基基团、9-芴乙酰基基团、1-芴羧基基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基基团、苄氧基羰基(也称为苄酯基)、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、三氟乙酰基(TFA)、4-[N-{1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)-3-甲基二丁基)-氨基}苯甲基酯(ODmab)、α-烯丙酯(OAll)、2-苯基异丙基酯(2-PhiPr)、1-[4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-基-亚基)乙基(Dde)构成的组。
62.权利要求57的肽，其中所述肽的N-末端被选自由Boc-、Fmoc-和烟酰基-构成的组的保护基团封闭。
63.权利要求57的肽，其中所述肽的C-末端被选自由tBu和OtBu构成的组的保护基团封闭。
64.权利要求54的肽，其中所述肽包含表5中的肽的氨基酸序列。
65.权利要求54的肽，其中所述肽是来自表5的肽。
66.权利要求54的肽，其中所述肽包含至少一个D-氨基酸。
67.权利要求54的肽，其中所述肽包含的全部是D-氨基酸。
68.权利要求54的肽，其中所述肽包含交替的D-和L-氨基酸。
69.权利要求54的肽，其中所述肽包含的全部是L-氨基酸。
70.权利要求54的肽，其中所述肽与药理学上可接受的赋形剂混合。
71.权利要求54的肽，其中所述肽与适合于向哺乳动物口服施用的药理学上可接受的赋形剂混合。
72.权利要求54的肽，其中所述多肽作为药学上可接受的赋形剂中的单位制剂提供。
73.权利要求54的肽，其中所述多肽作为定时释放制剂提供。
74.权利要求54的肽，其中所述肽保护磷脂对抗氧化剂的氧化。
75.权利要求54的肽，其中所述肽与生物素偶联。
76.权利要求5的肽，其中n是0或1；和X2、X3独立地是酸性、碱性、或芳香族氨基酸，X2或X3之一是酸性或碱性氨基酸，这样当X2是酸性或碱性氨基酸时，X3是芳香族氨基酸；和当X3是酸性或碱性氨基酸时，X2是芳香族氨基酸。
77.权利要求76的肽，其中，X1和X4独立地选自由丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、甲硫氨酸(Met)、带有疏水保护基团的丝氨酸(Ser)、β-萘基丙氨酸、α-萘基丙氨酸、正亮氨酸、环己基丙氨酸、带有疏水保护基团的苏氨酸(苏氨酸)、带有疏水保护基团的酪氨酸(Tyr)、带有疏水保护基团的赖氨酸(Lys)、带有疏水保护基团的精氨酸(Arg)、带有疏水保护基团的鸟氨酸(Orn)、带有疏水保护基团的天冬氨酸(Asp)、带有疏水保护基团的半胱氨酸(Cys)和带有疏水保护基团的谷氨酸(Glu)构成的组。
78.权利要求77的肽，其中X2和X3独立地选自由Asp、Arg、Glu、Trp、Tyr、Phe和Lys构成的组。
79.权利要求76的肽，其中X1带有疏水保护基团。
80.权利要求79的肽，其中所述疏水保护基团选自由聚乙二醇(PEG)、叔丁氧羰基(Boc)、Fmoc、烟酰基、OtBu、苯甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酯基、甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、N-甲基氨基邻甲苯基、和3到20碳烃基、酰胺、3到20碳烃基基团、9-芴乙酰基基团、1-芴羧基基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基基团、苄氧基羰基(也称为苄酯基)、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、三氟乙酰基(TFA)、4-[N-{1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)-3-甲基二丁基)-氨基}苯甲基酯(ODmab)、α-烯丙酯(OAll)、2-苯基异丙基酯(2-PhiPr)、1-[4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-基-亚基)乙基(Dde)构成的组。
81.权利要求79的肽，其中所述疏水保护基团选自由Boc、Fmoc、烟酰基和OtBu构成的组。
82.权利要求79的肽，其中X4带有疏水保护基团。
83.权利要求82的肽，其中所述疏水保护基团选自由聚乙二醇(PEG)、叔丁氧羰基(Boc)、Fmoc、烟酰基、OtBu、苯甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酯基、甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、N-甲基氨基邻甲苯基、和3到20碳烃基、酰胺、3到20碳烃基基团、9-芴乙酰基基团、1-芴羧基基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基基团、苄氧基羰基(也称为苄酯基)、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、三氟乙酰基(TFA)、4-[N-{1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)-3-甲基二丁基)-氨基}苯甲基酯(ODmab)、α-烯丙酯(OAll)、2-苯基异丙基酯(2-PhiPr)、1-[4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-基-亚基)乙基(Dde)构成的组。
84.权利要求79的肽，其中所述肽的N-末端被选自由Boc-、Fmoc-和烟酰基-构成的组的保护基团封闭。
85.权利要求79的肽，其中所述肽的C-末端被选自由tBu和OtBu构成的组的保护基团封闭。
86.权利要求76的肽，其中所述肽包含表6中的肽的氨基酸序列。
87.权利要求76的肽，其中所述肽是来自表6的肽。
88.权利要求76的肽，其中所述肽包含至少一个D-氨基酸。
89.权利要求76的肽，其中所述肽包含的全部是D-氨基酸。
90.权利要求76的肽，其中所述肽包含交替的D-和L-氨基酸。
91.权利要求76的肽，其中所述肽包含的全部是L-氨基酸。
92.权利要求76的肽，其中所述肽与药理学上可接受的赋形剂混合。
93.权利要求76的肽，其中所述肽与适合于向哺乳动物口服施用的药理学上可接受的赋形剂混合。
94.权利要求76的肽，其中所述多肽作为药学上可接受的赋形剂中的单位制剂提供。
95.权利要求76的肽，其中所述多肽作为定时释放制剂提供。
96.权利要求76的肽，其中所述肽保护磷脂对抗氧化剂的氧化。
97.权利要求76的肽，其中所述肽与生物素偶联。
98.一种改善炎症性状况的一种或多种症状的肽，其中所述肽具有式X1-X2-X3-X4-X5其中X1是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；X5是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；和X2、X3和X4独立地选自芳香族氨基酸或组氨酸；和所述肽将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL或使抗炎性HDL更具抗炎性。
99.权利要求98的肽，其中，X1和X5独立地选自由丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、甲硫氨酸(Met)、带有疏水保护基团的丝氨酸(Ser)、β-萘基丙氨酸、α-萘基丙氨酸、正亮氨酸、环己基丙氨酸、带有疏水保护基团的丝氨酸(丝氨酸)、带有疏水保护基团的酪氨酸(Tyr)、带有疏水保护基团的赖氨酸(Lys)、带有疏水保护基团的精氨酸(Arg)、带有疏水保护基团的鸟氨酸(Orn)、带有疏水保护基团的天冬氨酸(Asp)、带有疏水保护基团的半胱氨酸(Cys)和带有疏水保护基团的谷氨酸(Glu)构成的组。
100.权利要求99的肽，其中X2、X3和X4独立地选自由Phe、Val、Trp、Tyr和His构成的组。
101.权利要求98的肽，其中X1带有疏水保护基团。
102.权利要求101的肽，其中所述疏水保护基团选自由聚乙二醇(PEG)、叔丁氧羰基(Boc)、Fmoc、烟酰基、OtBu、苯甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酯基、甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、N-甲基氨基邻甲苯基、和3到20碳烃基、酰胺、3到20碳烃基基团、9-芴乙酰基基团、1-芴羧基基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基基团、苄氧基羰基(也称为苄酯基)、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、三氟乙酰基(TFA)、4-[N-{1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)-3-甲基二丁基)-氨基}苯甲基酯(ODmab)、α-烯丙酯(OAll)、2-苯基异丙基酯(2-PhiPr)、1-[4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-基-亚基)乙基(Dde)构成的组。
103.权利要求101的肽，其中所述疏水保护基团选自由Boc、Fmoc、烟酰基和OtBu构成的组。
104.权利要求101的肽，其中X5带有疏水保护基团。
105.权利要求104的肽，其中所述疏水保护基团选自由聚乙二醇(PEG)、叔丁氧羰基(Boc)、Fmoc、烟酰基、OtBu、苯甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酯基、甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、N-甲基氨基邻甲苯基、和3到20碳烃基、酰胺、3到20碳烃基基团、9-芴乙酰基基团、1-芴羧基基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基基团、苄氧基羰基(也称为苄酯基)、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、三氟乙酰基(TFA)、4-[N-{1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)-3-甲基二丁基)-氨基}苯甲基酯(ODmab)、α-烯丙酯(OAll)、2-苯基异丙基酯(2-PhiPr)、1-[4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-基-亚基)乙基(Dde)构成的组。
106.权利要求98的肽，其中所述肽的N-末端被选自由Boc-、Fmoc-和烟酰基-构成的组的保护基团封闭。
107.权利要求98的肽，其中所述肽的C-末端被选自由tBu和OtBu构成的组的保护基团封闭。
108.权利要求98的肽，其中所述肽包含表7中的肽的氨基酸序列。
109.权利要求98的肽，其中所述肽是来自表7的肽。
110.权利要求98的肽，其中所述肽包含至少一个D-氨基酸。
111.权利要求98的肽，其中所述肽包含的全部是D-氨基酸。
112.权利要求98的肽，其中所述肽包含交替的D-和L-氨基酸。
113.权利要求98的肽，其中所述肽包含的全部是L-氨基酸。
114.权利要求98的肽，其中所述肽与药理学上可接受的赋形剂混合。
115.权利要求98的肽，其中所述肽与生物素偶联。
116.一种改善炎症性状况的一种或多种症状的肽，其中所述肽长度范围从5个到11个氨基酸；末端氨基酸是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；非末端氨基酸形成至少一个酸性结构域和至少一个碱性结构域；和所述肽将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL或使抗炎性HDL更具抗炎性。
117.一种改善炎症性状况的一种或多种症状的肽，其中所述肽长度范围从5个到11个氨基酸；末端氨基酸是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；非末端氨基酸形成至少一个酸性结构域或一个碱性结构域，和至少一个脂肪族结构域；和所述肽将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL或使抗炎性HDL抗炎性更强。
118.一种改善炎症性状况的一种或多种症状的肽，其中所述肽长度范围从5个到11个氨基酸；末端氨基酸是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；非末端氨基酸形成至少一个酸性结构域或一个碱性结构域，和至少一个芳香族结构域；和所述肽将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL或使抗炎性HDL抗炎性更强。
119.一种改善炎症性状况的一种或多种症状的肽，其中所述肽长度范围从6个到11个氨基酸；末端氨基酸是疏水氨基酸和/或带有疏水保护基团；非末端氨基酸形成至少一个芳香族结构域，或由一个或多个组氨酸分隔的两个或多个芳香族结构域；和所述肽将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL或使抗炎性HDL抗炎性更强。
120.一种改善炎症性状况的一种或多种症状的氨基酸对，其中所述氨基对包含带有至少一个保护基团的第一氨基酸；和带有至少一个保护基团的第二氨基酸；其中所述第一氨基酸和所述第二氨基酸是不同种类的氨基酸，和其中所述氨基酸对将促炎症性HDL转化成抗炎性HDL或使抗炎性HDL抗炎性更强。
121.权利要求120的氨基酸对，其中所述氨基酸对，当在水性环境与磷脂接触时，形成直径大约7.5nm的粒子和形成层叠的双分子层，双分子层尺寸大概3.4到4.1nm，在层叠中双分子层之间的间隔大约2nm。
122.权利要求120的氨基酸对，其中所述第一和第二氨基酸独立地选自由酸性氨基酸、碱性氨基酸和非极性氨基酸构成的组。
123.权利要求122的氨基酸对，其中所述第一氨基酸是酸性的或碱性的和所述第二氨基酸是非极性的，或所述第一氨基酸是非极性的和所述第二氨基酸是酸性的或碱性的。
124.权利要求122的氨基酸对，其中两个氨基酸都是酸性的。
125.权利要求122的氨基酸对，其中两个氨基酸都是碱性的。
126.权利要求120的氨基酸对，其中所述氨基酸对直接地或通过接头共价地偶联在一起。
127.权利要求126的氨基酸对，其中所述氨基酸通过肽键连接从而形成二肽。
128.权利要求120的氨基酸对，其中所述氨基酸对被混合在一起，而不是共价连接的。
129.权利要求120的氨基酸对，其中所述保护基团选自由聚乙二醇(PEG)、叔丁氧羰基(Boc)、Fmoc、烟酰基、OtBu、苯甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酯基、甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、N-甲基氨基邻甲苯基、和3到20碳烃基、酰胺、3到20碳烃基基团、9-芴乙酰基基团、1-芴羧基基团、9-芴羧基基团、9-芴酮-1-羧基基团、苄氧基羰基(也称为苄酯基)、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲基苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苯甲基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)乙基(Dde)、2，6-二氯苯甲基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、三氟乙酰基(TFA)、4-[N-{1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己亚基)-3-甲基二丁基)-氨基}苯甲基酯(ODmab)、α-烯丙酯(OAll)、2-苯基异丙基酯(2-PhiPr)、1-[4，4-二甲基-2，6-二氧环己-1-基-亚基)乙基(Dde)构成的组。
130.权利要求120的氨基酸对，其中所述第一氨基酸被选自由Boc-、Fmoc-和烟酰基-构成的组的保护基团封闭，所述第二氨基酸被选自由tBu和OtBu构成的组的保护基团封闭。
131.权利要求128的氨基酸对，其中每个氨基酸带有至少两个保护基团。
132.氨基酸对，其中每个氨基酸被封闭，第一保护基团选自由Boc-、Fmoc-和烟酰基-构成的组，第二保护基团选自由tBu和OtBu构成的组。
133.氨基酸对，其中每个氨基酸被Boc和OtBu封闭。
134.权利要求120的氨基酸对，其中所述氨基酸对形成选自由Phe-Arg、Glu-Leu和Arg-Glu构成的组的二肽。
135.权利要求120的氨基酸对，其中所述氨基酸对形成选自由Boc-Arg-OtBu、Boc-Glu-OtBu、Boc-Phe-Arg-OtBu、Boc-Glu-Leu-OtBu和Boc-Arg-Glu-OtBu构成的组的二肽。
136.一种药物制剂，包含根据权利要求1、5、6、31、54、76、98、116、117和119的一种或多种肽，或根据权利要求120的氨基酸对；和药学上可接受的赋形剂。
137.权利要求136的药物制剂，其中所述肽以有效剂量存在。
138.权利要求136的药物制剂，其中所述肽在定时释放的制剂中。
139.权利要求136的药物制剂，其中所述制剂被配制为单位剂量制剂。
140.权利要求136的药物制剂，其中所述制剂被配制用于口服施用。
141.权利要求136的药物制剂，其中所述制剂被配制为用于通过选自由口服施用、吸入、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注射、穿表皮的施用、吸入施用和肌肉注射构成的组的途径施用。
142.一种试剂盒，包含含有根据权利要求1、5、6、31、54、76、98、116、117和119的一种或多种肽，或根据权利要求120的氨基酸对的容器；和教导在治疗以炎症为特征的病变中使用所述肽或氨基酸对的指导材料。
143.权利要求142的试剂盒，其中所述病变是选自由动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、红斑狼疮、多发性结节性动脉炎、骨质疏松症、阿尔茨海默氏病、慢性阻塞性肺病、哮喘、多发性硬化、糖尿病和病毒疾病构成的组的病变。
144.在哺乳动物中缓解动脉粥样硬化的一种或多种症状的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1、5、6、31、54、76、98、116、117和119的肽，或根据权利要求120的氨基酸对。
145.权利要求144的方法，其中所述肽在药学上可接受的赋形剂中。
146.权利要求144的方法，其中所述肽联合脂质施用。
147.权利要求144的方法，其中所述肽在适合于口服施用的药学上可接受的赋形剂中。
148.权利要求144的方法，其中所述肽作为单位剂量制剂施用。
149.权利要求144的方法，其中所述施用包括通过选自由口服施用、吸入、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注射、穿表皮的施用和肌肉注射构成的组的途径施用所述肽。
150.权利要求144的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为有动脉粥样硬化的一种或多种症状的哺乳动物。
151.权利要求144的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为存在中风或动脉粥样硬化的风险的哺乳动物。
152.权利要求144的方法，其中哺乳动物是人类。
153.权利要求144的方法，其中所述哺乳动物是非人哺乳动物。
154.缓解炎症性病变的一种或多种症状的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1、5、6、31、54、76、98、116、117和119的肽，或根据权利要求120的氨基酸对。
155.权利要求154的方法，其中所述炎症性病变是选自由动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、红斑狼疮、多发性结节性动脉炎、骨质疏松症、阿尔茨海默氏病、多发性硬化、慢性阻塞性肺病、哮喘、糖尿病和病毒疾病构成的组的病变。
156.权利要求154的方法，其中所述肽在药学上可接受的赋形剂中。
157.权利要求154的方法，其中所述肽联合脂质施用。
158.权利要求154的方法，其中所述肽在适合于口服施用的药学上可接受的赋形剂中。
159.权利要求154的方法，其中所述肽作为单位剂量制剂施用。
160.权利要求154的方法，其中所述施用包括通过选自由口服施用、吸入、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注射、穿表皮的施用和肌肉注射构成的组的途径施用所述肽。
161.权利要求154的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为存在中风的风险的哺乳动物。
162.权利要求154的方法，其中哺乳动物是人类。
163.权利要求154的方法，其中哺乳动物是非人哺乳动物。
164.在哺乳动物中增强抑制素的活性的方法，所述方法包括与所述抑制素一同向所述哺乳动物联合施用有效量的权利要求1、5、6、31、54、76、98、116、117和119的肽，或根据权利要求120的氨基酸对。
165.权利要求164的方法，其中所述抑制素选自由西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、罗苏伐他汀和匹伐他汀构成的组。
166.权利要求164的方法，其中所述肽同时地与所述抑制素施用。
167.权利要求164的方法，其中在所述抑制素之前施用所述肽。
168.权利要求164的方法，其中在所述抑制素之后施用所述肽。
169.权利要求164的方法，其中所述肽和/或所述抑制素作为单位剂量制剂施用。
170.权利要求164的方法，其中所述施用包括通过选自由口服施用、吸入、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注射、穿表皮的施用和肌肉注射构成的组的途径施用所述肽和/或所述抑制素。
171.权利要求164的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为有动脉粥样硬化的一种或多种症状的哺乳动物。
172.权利要求164的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为存在中风或动脉粥样硬化的风险的哺乳动物。
173.权利要求164的方法，其中哺乳动物是人类。
174.权利要求164的方法，其中哺乳动物是非人哺乳动物。
175.在哺乳动物中缓解与动脉粥样硬化相关的一种或多种症状的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的抑制素；和有效量的权利要求1、5、6、31、54、76、98、116、117和119的肽，或根据权利要求120的氨基酸对；其中所述抑制素的有效量比没有所述肽的情况下施用抑制素的有效量低。
176.权利要求175的方法，其中所述肽的有效量比没有所述抑制素的情况下施用所述肽的有效量低。
177.权利要求175的方法，其中所述抑制素选自由西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀构成的组。罗苏伐他汀和匹伐他汀。
178.权利要求175的方法，其中所述肽同时地与所述抑制素施用。
179.权利要求175的方法，其中在所述抑制素之前施用所述肽。
180.权利要求175的方法，其中在所述抑制素之后施用所述肽。
181.权利要求175的方法，其中所述肽和/或所述抑制素作为单位剂量制剂施用。
182.权利要求175的方法，所述施用包括口服施用所述组合物。
183.权利要求175的方法，其中所述施用是通过选自由口服施用、吸入、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注射、穿表皮的施用、吸入施用和肌肉注射构成的组的途径。
184.权利要求175的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为有动脉粥样硬化的一种或多种症状的哺乳动物。
185.权利要求175的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为存在中风或动脉粥样硬化的风险的哺乳动物。
186.权利要求175的方法，其中哺乳动物是人类。
187.权利要求175的方法，其中哺乳动物是非人哺乳动物。
188.一种药物制剂，所述制剂包含抑制素和/或依泽替米贝；和根据权利要求1、5、6、31、54、76、98、116、117和119的任何一项的肽或肽的多联体，或根据权利要求120的氨基酸对。
189.权利要求188的药物制剂，其中所述肽和/或所述抑制素以有效剂量存在。
190.权利要求189的药物制剂，其中所述抑制素的有效量比没有所述肽的情况下施用所述抑制素的有效量低。
191.权利要求189的药物制剂，其中所述肽的有效量比没有所述抑制素的情况下施用所述肽的有效量低。
192.权利要求189的药物制剂，其中所述依泽替米贝的有效量比没有所述肽的情况下施用所述依泽替米贝的有效量低。
193.权利要求189的药物制剂，其中所述肽的有效量比没有所述依泽替米贝的情况下施用所述肽的有效量低。
194.权利要求188的药物制剂，其中所述抑制素选自由西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、罗苏伐他汀和匹伐他汀构成的组。
195.权利要求188的药物制剂，其中所述依泽替米贝、所述抑制素和/或所述肽在定时释放的制剂中。
196.权利要求188的药物制剂，其中所述制剂被配制为单位剂量制剂。
197.权利要求188的药物制剂，其中所述制剂被配制用于口服施用。
198.权利要求188的药物制剂，其中所述制剂被配制为用于通过选自由口服施用、吸入、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注射、穿表皮的施用、吸入施用和肌肉注射构成的组的途径施用。
199.权利要求188的药物制剂，其中所述制剂进一步包含一种或多种磷脂。
200.在哺乳动物中降低或抑制骨质疏松症的一种或多种症状的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用根据权利要求1、5、6、31、54、76、98、116、117和119的一种或多种肽，或根据权利要求120的氨基酸对，其中所述肽或氨基酸对以足够降低或消除骨质疏松症的一种或多种症状的浓度施用。
201.权利要求200的方法，其中所述肽以足够降低或消除骨骼的脱钙作用的浓度施用。
202.权利要求200的方法，其中所述肽以足够诱导骨骼的复钙作用的浓度施用。
203.权利要求200的方法，其中所述肽与药理学上可接受的赋形剂混合。
204.权利要求200的方法，其中所述肽与适合于向哺乳动物口服施用的药理学上可接受的赋形剂混合。
全文摘要
本发明提供了改善动脉粥样硬化的一种或多种症状的新型的肽。所述肽经由口服途径是高度稳定的和易于施用的。所述肽对于刺激前－β高密度脂蛋白样粒子的形成和循环， 和/或促进脂质转运和解毒，是有效的。本发明还提供了在哺乳动物中跟踪肽的方法。此外，所述肽抑制骨质疏松症。当与抑制素施用时，所述肽增强抑制素的活性，允许以显著更低的剂量使用抑制素，和/或使得抑制素在任何给定的剂量抗炎性显著增强。
文档编号A61K38/07GK1867348SQ200480029870
公开日2006年11月22日 申请日期2004年8月10日 优先权日2003年8月11日
发明者艾伦·M·福格尔曼, 加塔达哈利·M·阿南萨拉梅亚, 穆罕麦德·纳瓦布 申请人:加利福尼亚大学董事会, 亚拉巴马大学研究基金会