专利名称：一种含sn的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种血管活性肠肽衍生物药物及其制备方法，尤其是一种含SN3类配体的血管活性肠肽衍生物药物及其制备方法。
背景技术：
血管活性肠肽(VIP)是一个具有广泛生物活性的28个氨基酸的天然肽。近年来的研究报告显示血管活性肠肽受体(VPAC受体)存在各种恶性肿瘤细胞中，而且受体密度比生长激素抑制素受体密度高。Virgolini(Virgolini I，Raderer，Kurtaran A，et al.123I-vasocactiveintesitinal peptide(VIP)receptor scanningupdate of imaging resultsin patients with adeocarinoma and endocrine tumor of the gastrointestinaltract.Nucl Med Bio，1996，23685-692)等学者的研究结果表明血管活性肠肽受体显像对常见的上皮源性肿瘤的检测明显优于生长激素抑制素受体显像。
Pallea(Pallela VR，Thakur ML，Chakder S，et al.99mTc-labeledvasoactive intestinal peptide receptor agonistfunctional studies.J NuclMed，1999，40352-360)等作者合成了含N4类陪体的VIP衍生物，其方法是在天然VIP的碳末端引入一个人工合成的氨基酸-γ-氨基丁酸作为连接VIP和N4陪体的四个氨基酸Gly-Gly-(D)-Ala-Gly。其28+5肽的VIP衍生物取名为TP3654，其生物活性和肿瘤定位结果均比较理想。但其最大的缺陷是在4h的肾ID％/g摄取高达21.17±2.27，而此时肿瘤摄取为0.24±0.08。而放射性碘标记的VIP肿瘤摄取低，且其放射性碘可能占据了VIP的活性基团，从而影响起活性。
发明内容本发明所要解决的技术问题就在于提供一种含SN3类配体的血管活性肠肽衍生物药物。其能够减少放射性在肾脏的摄取，降低对显像的影响。
本发明的另一个目的在于提供一种含SN3类配体的血管活性肠肽衍生物药物的制备方法。
为解决上述问题，本发明采用如下技术方案一种含SN3类配体的血管活性肠肽衍生物药物，其特征在于该衍生物是由VIPSN3与放射性同位素99mTc形成稳定的螯合物99mTc-VIPSN3，其中，VIPSN3的结构式为VIP-Aba*-C1-C2-C3-C4，结构式中C1、C2、C3、C4中的一个为含巯基的氨基酸，如半胱氨酸，Cys，其余三个为亲水性的氨基酸，如丙氨酸，Ala；甘氨酸，Gly等。其中的放射性同位素99mTc可以由188Re或186Re代替。
一种制备含SN3类配体的血管活性肠肽衍生物药物的方法，包括如下步骤(1)用化学合成法合成含SN3类配体VIP衍生物VIPSN3；(2)将步骤(1)合成的VIPSN3进行纯化分离，使其纯度大于80％；(3)将经步骤(2)分离的VIPSN3进行放射性同位素99mTc标记，得到99mTc-VIPSN3。
另外，上述制备方法的步骤(3)中，还可以由188Re或186Re代替99mTc进行放射性同位素标记，得到188Re-VIPSN3或186Re-VIPSN3。
本发明含SN3类配体的血管活性肠肽衍生物药物，其中合成的VIPSN3具有天然VIP相似的生物活性，能在肿瘤中有较好的摄取，肿瘤能清晰显像，肾脏摄取放射性比N4类配体的TP3654摄取低，而肿瘤摄取要高，从而使得肿瘤显像更加清晰、使诊断更加准确。注射99mTc-TP3654后24h，肿瘤摄取为0.26±0.01，而在同样条件下注射99mTc-VIPSN3后24h肿瘤摄取为0.58±0.15，是99mTc-TP3654的2倍左右，而肾脏的摄取99mTc-Tp3654高达9.63±0.23，此时99mTc-VIPSN3在肾脏的摄取为3.50±0.11，比前者低将近3倍，使肿瘤的显像更清晰，而肾脏中的放射性摄取大大降低。同时提高了肿瘤与血的比值，注射99mTc-VIPSN3后24h瘤血比值为3.5左右，而在同样条件下注射99mTc-TP3654后24h瘤血比值为2.5左右。另外，瘤肾比值提高了将近6倍，瘤心比值提高了1.6倍，瘤胃比值提高了将近2倍。具体见表1。
表1注射99mTc-VIPSN3和99mTc-TP3654后24h T/NT比值变化比较
图1为注射99mTc-VIPN4后24h，荷CL187肠癌裸鼠的γ显像；图2为注射99mTc-VIPSN3后24h，荷CL187肠癌裸鼠的γ显像。
具体实施方式下面结合附图，进一步详细说明本发明的具体实施方式
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本发明含SN3类配体的血管活性肠肽衍生物药物可以是如下结构99mTc-VIPSN3，其中，VIPSN3的结构式为VIP-Aba*-C1-C2-C3-C4，结构式中C1、C2、C3、C4中的一个为含巯基的氨基酸，其余三个为亲水性的氨基酸，可以相同也可以不同，如结构式1VIP-Aba*-Cys-Gly-(D)-Ala-Gly，结构式2VIP-Aba*-Cys-Gly-Gly-(D)-Ala，结构式3VIP-Aba*-Gly-Cys-(D)-Ala-Gly，结构式4VIP-Aba*-Gly-(D)-Ala-Cys-Gly，结构式5VIP-Aba*-Gly-(D)-Ala-Gly-Cys，结构式6VIP-Aba*-Cys-Gly-(D)-Ala-Gly。
本发明含SN3类配体的血管活性肠肽衍生物药物的制备方法包括如下步骤(1)通过WANG氏树脂法进行多肽VIPSN3的合成，结构式His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn-Aba*-Cys-Gly-(D)-Ala-Gly。
(2)采用HPLC将经步骤(1)合成的多肽VIPSN3进行纯化分离，其产品纯度为95％，该纯度在80％以上是可行的；(3)将经步骤(2)分离的VIPSN3进行放射性同位素99mTc标记，得到99mTc-VIPSN3。
具体标记条件为取5.0×10-2g的葡庚糖酸钠(GH)加入5.0×10-5g的SnCl2.H2O(1.0×10-5L的0.005mol/L HCl)，充氮气除氧后加入370MBq的新鲜淋洗的99mTcO4-溶液，摇匀后，立即加入到含1.0×10-4gVIPSN3的PH值为11左右的磷酸缓冲溶液(充氮)中。振摇30min后加入0.1mol/L的PH5.2的磷酸缓冲溶液调节PH至7左右。标记率的测定采用双层析体系展开测定。体系1采用ITLC-SG(快速硅胶薄层层析-硅胶纸)测定，展开剂∶吡啶∶醋酸∶水＝3∶5∶1.5(体积比)，标记物和游离99mTc在前沿，胶体在原点。体系2采用ITLC-SG测定，展开剂为丙酮，标记物和胶体在原点，游离在99mTcO4-前沿。结果显示99mTc标记VIPSN3的标记率大于90％。
分别从尾静脉注射99mTc标记的VIPSN3和TP3654于两个相同的荷CL187人肠癌裸鼠，注射体积为0.1ml，其中含放射性11.1MBq，含活性肽VIPSN3或TP3654为0.3-0.4μg。于注射后4小时和24小时解剖，分别取各主要脏器，如血、心、肝、脾、肾、肺、胃、肠、肌肉、骨骼等的肿瘤组织，称重，并测定放射性计数，并计算ID％/g。其结果显示注射99mTc-VIPSN3后瘤/血、瘤/肌肉的比值则分别从4h的1.99±0.38、6.12±1.33上升到24h的3.55±1.02、10.33±2.95。比99mTc-VIPN4在肿瘤中有更好的浓聚，在肾脏中的摄取99mTc-VIPSN3明显低于99mTc-VIPN4，但在肝脏的摄取99mTc-VIPSN3比99mTc-VIPN4高。两种标记肽的T/NT比值均随着时间的延长而升高。注射99mTc-VIPSN3和99mTc-VIPN4后4h和24h荷CL187肠癌裸鼠的体内分布n＝5，见表2。
表2注射99mTc-VIPSN3和99mTc-VIPN4后4h和24h荷CL187肠癌裸鼠的体内分布 本发明的制备方法中，由188Re或186Re代替99mTc进行放射性同位素标记，从而得到188Re-VIPSN3或186Re-VIPSN3的标记方法和标记条件与用99mTc进行标记基本相同。
动物显像见图1、图2。图1为注射99mTc-VIPN4后24h，荷CL187肠癌裸鼠在针空准直器下的γ显像，图2为注射99mTc-VIPSN3后24h，荷CL187肠癌裸鼠在针空准直器下的γ显像，图中T为肿瘤，K为肾脏。从图中可以看出，在用药后24h，注射99mTc-VIPN4肾脏摄取很高，影响周围的显像，但肿瘤还是能比较清晰地显示；而注射99mTc-VIPSN3肾脏摄取明显要低，肿瘤显像清晰。
权利要求
1.一种含SN3类配体的血管活性肠肽衍生物药物，其特征在于该衍生物是由VIPSN3与放射性同位素99mTc形成稳定的螯合物99mTc-VIPSN3，其中，VIPSN3的结构式为VIP-Aba*-C1-C2-C3-C4，结构式中C1、C2、C3、C4中的一个为含巯基的氨基酸，其余三个为亲水性的氨基酸。
2.根据权利要求1所述的含SN3类配体的血管活性肠肽衍生物药物，其特征在于其中的放射性同位素99mTc可以由188Re或186Re代替。
3.一种制备根据权利要求1所述的含SN3类配体的血管活性肠肽衍生物药物的方法，包括如下步骤(1)用化学合成法合成含SN3类配体VIP衍生物VIPSN3；(2)将步骤(1)合成的VIPSN3进行纯化分离，使其纯度大于80％；(3)将经步骤(2)分离的VIPSN3进行放射性同位素99mTc标记，得到99mTc-VIPSN3。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中VIPSN3的纯度为95％。
5.一种制备根据权利要求2所述的含SN3类配体的血管活性肠肽衍生物药物的方法，包括如下步骤(1)用化学合成法合成含SN3类配体VIP衍生物VIPSN3；(2)将步骤(1)合成的VIPSN3进行纯化分离，使其纯度大于80％；(3)将经步骤(2)分离的VIPSN3进行放射性同位素188Re或186Re标记，得到188Re-VIPSN3或186Re-VIPSN3。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中VIPSN3的纯度为95％。
全文摘要
本发明涉及一种含SN
文档编号A61K51/00GK1679969SQ200510011139
公开日2005年10月12日 申请日期2005年1月7日 优先权日2005年1月7日
发明者杨志, 顾晋, 李振甫, 张宏, 赵军 申请人:北京肿瘤医院