专利名称：猴头菌丝体寡糖在制药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及猴头菌丝体寡糖的用途，尤其涉及在制药领域中的用途。
背景技术：
本发明所称的猴头菌丝体(Hericium erinocens(Bull)eers)为小刺猴头菌的发酵产物.其菌丝体浸膏多年来作为原料药应用于临床。
我国市场上以猴头菌丝体培养浸膏为原料制成的药品有胃乐新冲剂。尽管该制剂对胃、十二指肠溃疡、慢性胃炎等显示出良好的疗效，但对菌丝体中有效成分的提取、分离、纯化方法及活性成分的基本化学组成等问题仍未得到解决，长期以来一直制约着猴头菌丝体的开发和利用。
通过对猴头菌丝体中有效成分的提取、分离、纯化得到了猴头菌丝体寡糖，其基本化学结构为HPGPC分析结果表明，该化合物的分子量分布在0.36-1.5×103，说明该化合物主要为寡糖类成分；理化性质结果表明，糖的含量占90％左右；组成糖分析结果表明，该化合物主要由Man，Glc两种单糖组成，摩尔比为1∶5；液—质结果表明，该化合物主要由2-7个单糖连接的寡糖构成，其中双糖和三糖各占20％左右，其它为四糖、五糖、六糖、和七糖，还有少量的单糖。双糖、四糖、五糖均有两种构型，六糖有三种构型，三糖和七糖有一种构型。采用HPLC法，氨基柱纯化分离得到的双塘、三糖，利用NMR，LC-MS，GG-MS，GC及甲基化分析，推测双糖是以α-Glcl→4a-Glc和a-Glcl→6Man(或a-Manl→6Glc)两种形式存在，三糖是α以-Glcl→4α-Glcl→6a-Glc形式存在。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供猴头菌丝体寡糖的用途，即在制药中的应用。
实际上本发明提供猴头菌丝体寡糖作为制备治疗胃部疾病的药中的应用。
为了更好地理解本发明，下面给出猴头菌丝体寡糖的提取方法，以及药理试验来说明其在制药领域中的用途。
方法1将猴头菌丝体发酵浸膏10k8，加水1-2倍稀释，搅拌，离心，离心液加乙醇至醇浓度为80％，离心，收集沉淀，加蒸馏水配成水溶液，对透析膜分子量范围8仟-1万水透析，收集透析外液，浓缩至浸膏1kg，冷冻干燥，得猴头菌丝体寡糖800g。
方法2取猴头菌丝发酵浸膏10kg，加水1-2倍稀释，搅拌，离心，离心液加乙醇至醇浓度为80％，离心，收集沉淀1kg，加蒸馏水配成水溶液，通过DEAE-SephadexA50离子交换树脂柱，分别用蒸馏水洗脱，收集洗脱液，浓缩至浸膏，冷冻干燥，得猴头菌丝体寡糖780g。
方法3取猴头菌丝发酵浸膏10kg，加水1-2倍稀释，搅拌，离心，离心液加乙醇至醇浓度为80％，离心，收集沉淀1kg，加蒸馏水配成水溶液。通过分子量范围在8仟-1万的中空纤维超滤，得到寡糖800g。
经过药理学实验筛选，上述化合物具有治疗急、慢性胃炎，胃溃疡，慢性萎缩性胃炎效果。
按药剂学方法，猴头菌丝体寡糖能够制备多种临床药物制剂作为治疗急、慢性胃炎，胃溃疡，慢性萎缩性胃炎的药物，所说的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型，特别是作为各种口服剂型。
本发明的药物含有治疗有效量的上述化合物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可以接受的载体。
上文的载体是指药学领域常规的药物载休，包括稀释剂、赋形刑、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体。
本发明药物可以通过口服、直肠、静脉、肌肉注射或胃肠外给药方式施用于这种治疗的患者。按照药学领域的常规生产方法制备各种剂型如片剂、颗粒剂、冲剂、胶囊、栓剂、喷雾剂、缓释剂和注射剂。也可使其活性成分或组合物与多种载体或药物混合，制成所需剂型。
下述的药理实验证实了猴头菌丝体寡糖的药物制剂具有治疗急、慢性胃炎，胃溃疡，慢性萎缩性胃炎的药理活性。
一、猴头菌提取物对乙酸所致损伤型胃溃疡的影响摘要本实验观察猴头菌寡糖对乙酸所致损伤型胃溃疡大鼠的影响。分别连续灌胃给予乙酸所致损伤型胃溃疡大鼠480mg/kg猴头菌寡糖14天，对乙酸所致损伤型胃溃疡均有显著的抑制作用。
药物阳性药为胃乐新，由白求思医大药厂生产，批号041205。
动物220-260g雄性大鼠。购自中国人民解放军208医院动物室。
方法取大鼠禁食不禁水48小时，乙醚麻醉，仰位固定，腹部去毛，碘酒、酒精消毒，剑突下正中开2.5cm左右的切口，用弯止血钳在右肝脏下方将十二指肠轻轻勾出，将胃部轻轻拉出腹外，在胃的腹侧面胃体部与幽门窦交界处，用0.25ml注射器刺入大鼠胃浆膜下0.4-0.5mm，注入10％醋酸溶液0.05ml，将胃轻轻送回，缝合腹壁肌层及皮肤，消毒后常规饲养，于术次日起，分组，连续给药14天，末次给药2h，断头，结扎幽门和贲门，胃浸于1％甲醛液中，固定10分钟，沿胃大弯剪开，外翻洗涤，在注射醋酸溶液相应部位的粘膜面观察溃疡形成情况，以溃疡最长径和最短径的均值作为溃疡直径，计算溃疡指数。见表。
表.猴头多糖提取物对乙酸所致损伤型胃溃疡的影响
注n＝8，X±SD。※P＜0.05，※※※P＜0.001。
小结480mg/kg猴头菌寡糖14天，对乙酸所致损伤型胃溃疡均有显著的抑制作用。480mg/kg对乙酸所致损伤型胃溃疡的抑制作用尤其显著。
二，猴头菌提取物对应激性胃溃疡的影响摘要采用应激性胃溃疡模型比较猴头多糖提取物与胃乐新的抗溃疡作用。
分别连续灌胃给予大鼠480mg/kg猴头菌寡糖15天，结果猴头菌寡糖具有明显的抗溃疡作用。
动物Wister大鼠32只，购自白求思医科大学动物室。
药物阳性药为胃乐新，由白求思医大药厂生产，批号041205。
方法取大鼠50只，随机分为5组，每组10只，每天灌胃给予480mg/kg猴头菌寡糖及胃乐新各一次，对照组给予常水，连续给予15天，第14天给药后将大鼠饥饿32h，次日下午16时用乙醚麻醉，将大鼠四肢用蝇绑在铁笼上，同时将绑完的大鼠头朝下，垂直放置18h，将动物拉颈处死。将其胃的贲门及幽门结扎，取全胃，并向内注入1％福尔马林固定5min后，沿胃大弯剪开，平展于玻璃扳上，观察判断等级。
结果对照组为3.87±0.35，480mg/kg猴头菌寡糖为2.38±1.51(P＜0.05)，胃乐新为2.13±1.13(P＜0.001)。
由此可见猴头菌寡糖有非常明显的抗溃疡作用。
三、猴头菌提取物对大鼠慢性萎缩性胃炎实验研究摘要采用主动免疫加灌服胆汁及热水的综合方法观察猴头菌寡糖对大鼠慢性萎缩性胃炎CAG的治疗作用，结果X mg/kgHl、X mg/kgL2可明显改善CAG大鼠胃粘膜的变薄，并使胃黏膜固有腺体增多，有良好的治疗CAG的作用。
关键词慢性萎缩性胃炎CAG、猴头菌寡糖。
1.实验材料及方法1.1动物Wistar雄性大鼠，购自长春高新医学动物实验研究中心，合格10-5112，体重220-260g。
1.2药物阳性药为胃乐新，由白求恩医大药厂生产，批号041205。
1.3模型的制备1.3.1佐剂抗原的制备取160-180gWistar大鼠，将其饥饿24h后处死取胃黏膜，每只鼠胃黏膜加生理盐水3ml，利用组织匀浆机将其打匀，然后加入等体积液体石腊制备成均匀的乳剂，备用。
1.3.2模型的制备取220-260g大鼠90只，在每只大鼠2点背部皮下注射佐剂抗原2ml，每点1ml，2周后重复1次，再1周后又重复1次，共免疫3次；自免疫起每隔3天给人鼠灌服猪胆汁2ml/只(胆汁∶甘油＝1∶1)；同时除灌服猪胆汁当天外，每天连续灌服35天55℃热水。
1.3.3动物处理首次免疫35天处死10只大鼠取胃作组织形态学检测，可见胃黏膜腺体变薄，胃腺体减少，个别胃可见有溃疡、出血、粘膜下大量细胞浸润。
1.3.4分组及给药将余下大鼠随机分为六组，即模型对照组，每天给予常水4ml/只，480mg/kg胃乐新，480mg/kg猴头菌寡糖，每天给药1次，连续给药30天，并于每周称重1次。
1.3.5对胃粘膜病理组织中变化的影响动物自胃窦沿小弯至贲门取材，包埋切片。采用x2检验。
2.结果2.1对胃黏膜组织形态学的影响从附表及表2可见，模型组胃黏膜变薄、腺体减少等现象的阴性率还是明显高于给药组，并伴有大量炎细胞浸润从肌层增厚而猴头菌寡糖对上述现象均有明显的抑制作用而且未见肌层增厚现象。
2.2对慢性萎缩性胃炎大鼠体重变化的影响见表3表2.表明，对慢性萎缩性胃炎大鼠体重的变化无影响。
小结上述结果表明，猴头菌糖蛋白对大鼠慢性萎缩性胃炎有一定的治疗作用。
表1.对慢性萎缩性胃炎胃粘膜组织形态学的影响
注同表1。
表2.对慢性萎缩性胃炎大鼠体重变化的影响
从以上结果可以得出本发明的优点在于有效部位明确，结构清楚，服用量少，对于治疗急、慢性胃炎，胃溃疡，慢性萎缩性胃炎有显著的疗效。并优于阳性对照药。
具体实施例方式实施例1将猴头菌丝体发酵浸膏10kg，加水1-2倍稀释，搅拌，离心，离心液加乙醇至醇浓度为80％，离心，收集沉淀，加蒸馏水配成水溶液，对透析膜分子量范围8仟-1万水透析，收集透析外液，浓缩至浸膏1kg，冷冻干燥，得粉状猴头菌寡糖800g，装入药瓶中密封，消毒制成产品。
实施例2取猴头菌丝发酵浸膏10kg，加水1-2倍稀释，搅拌，离心，离心液加乙醇至醇浓度为80％，离心，收集沉淀1kg，加蒸馏水配成水溶液，通过DEAE-SephadexA50离子交换树脂柱，分别用蒸馏水洗脱，收集洗脱液，浓缩至浸膏，冷冻干燥，得猴头菌寡糖780g，制成XXX，装入药瓶中密封，消毒制成产品。
实施例3取猴头菌丝发酵浸膏10kg，加水1-2倍稀释，搅拌，离心，离心液加乙醇至醇浓度为80％，离心，收集沉淀1kg，加蒸馏水配成水溶液。通过分子量范围在8仟-1万的中空纤维超滤，得到寡糖800g，制成XXX，装入药瓶中密封，消毒制成产品。
权利要求
1.猴头菌丝体寡糖在制备治疗胃部疾病的药中的应用。
2.猴头菌丝体寡糖在制备治疗胃炎疾病的药中的应用。
3.猴头菌丝体寡糖在制备治疗胃溃疡疾病的药中的应用。
4.猴头菌丝体寡糖在制备治疗慢性萎缩性胃炎疾病的药中的应用。
5.一种猴头菌丝体寡糖的提取方法，将猴头菌丝体发酵浸膏10k8，加水1-2倍稀释，搅拌，离心，离心液加乙醇至醇浓度为80％，离心，收集沉淀，加蒸馏水配成水溶液，对透析膜分子量范围8仟-1万水透析，收集透析外液，浓缩至浸膏1kg，冷冻干燥，得猴头菌丝体寡糖800g。
6.一种猴头菌丝体寡糖的提取方法，取猴头菌丝发酵浸膏10kg，加水1-2倍稀释，搅拌，离心，离心液加乙醇至醇浓度为80％，离心，收集沉淀1kg，加蒸馏水配成水溶液，通过DEAE-SephadexA50离子交换树脂柱，分别用蒸馏水洗脱，收集洗脱液，浓缩至浸膏，冷冻干燥，得猴头菌丝体寡糖。
7.一种猴头菌丝体寡糖的提取方法，取猴头菌丝发酵浸膏10kg，加水1-2倍稀释，搅拌，离心，离心液加乙醇至醇浓度为80％，离心，收集沉淀1kg，加蒸馏水配成水溶液。通过分子量范围在8仟-1万的中空纤维超滤，得到猴头菌丝体寡糖。
全文摘要
一种猴头菌丝体寡糖在制药中的应用，涉及猴头菌丝体寡糖的用途，将猴头菌丝体发酵浸膏加水稀释，搅拌，离心，离心液加乙醇至醇，离心，收集沉淀，加蒸馏水配成水溶液，对透析膜透析，收集透析外液，浓缩至浸膏，得猴头菌丝体寡糖。其有效部位明确，结构清楚，服用量少，对于治疗急、慢性胃炎，胃溃疡，慢性萎缩性胃炎有显著的疗效。
文档编号A61P1/04GK1771974SQ20051001725
公开日2006年5月17日 申请日期2005年11月2日 优先权日2005年11月2日
发明者高其品, 姜瑞芝 申请人:白求恩医科大学制药厂