专利名称：脑苷肌肽冻干粉及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗急性颅脑损伤、急性脑卒中和脑出血的脑苷肌肽冻干粉及其制备方法。
背景技术：
脑苷肌肽中含有神经节苷酯和小分子多肽物质，临床上用于治疗急性颅脑损伤、急性脑卒中和脑出血。具有较好催醒作用，提高患者生存质量，降低死亡率，促进和改善脑功能的预后效果。临床上常用的是脑苷肌肽注射液，在贮存过程中易产生聚合物，引起一些过敏反应。
发明内容
本发明的目的是提供一种脑苷肌肽冻干粉及制备工艺，以提高脑苷肌肽药物的稳定性和临床用药的安全性。
本发明脑苷肌肽冻干粉含有有效成分唾液酸神经节苷酯钠GM1和兔肌肉提取物的小分子多肽以及药物制剂上可接受的赋型剂，唾液酸神经节苷酯钠与小分子多肽的重量配比为50～100∶1～10，赋型剂添加量是小分子多肽溶液和唾液酸神经节苷酯钠混合液总体积的20％～70％，所说的赋型剂选自甘露醇、聚乙二醇、葡聚糖或乳糖中的一种或一种以上。
脑苷肌肽冻干粉 按如下步骤制备将唾液酸神经节苷酯钠GM1与兔肌肉提取物的小分子多肽按比例组合，添加适量的赋型剂，经除菌、除热源处理，制成脑苷肌肽溶液，将该溶液按成品规定量(即内含兔肌肉提取多肽5～50mg唾液酸神经节苷酯50～500μg)进行分装，将上述分装好的脑苷肌肽溶液冷冻至-20℃～-40℃，当温度冷却至-35℃时，真空度达1～10Pa抽真空，保温4小时后；在4Pa的真空度下，逐渐以每小时1℃提高温度。当到达5℃～40℃即可。冻干完毕，开启冻干机的升降机将胶塞完全压入西林瓶中，然后通入无菌空气，开箱取出冻干好的产品。所得的冻干粉为白色或为淡黄色疏松块状物。本品溶解后成无色或淡黄色澄明液体。
本发明脑苷肌肽冻干粉，能提高神经节苷酯和小分子多肽物质的药物稳定性，确保临床用药的疗效，同时也有利于药品的贮藏、运输。
具有制备工艺简单，所提取的兔肌肉多肽成分活性高、唾液酸神经节苷酯的纯度高，通过有效成分的定量检测，可有效地控制产品质量，保证临床的有效性和安全性。
具体实施例方式
实施例1 脑苷肌肽冻干粉的制备①制备唾液酸神经节苷酯钠GM1按重量取动物脑组织，组织捣碎，加入2～8倍量的丙酮(0℃以下)搅拌，0～-10℃放置12～20小时，收取沉淀，置40℃～60℃真空干燥，得丙酮粉。取丙酮粉，加入4～10倍量的氯仿、甲醇和水的混合液(比例为1∶2∶1.3)，搅拌6～10小时，然后离心、过滤，收集滤液，加入适量水，使溶液变为乳状液，静置分层，取上清，此上清液于40℃～45℃减压浓缩至原液体积的1/3，得神经节苷酯浓缩液。按100ml加0.2mg的比例向该浓缩液中加入氢氧化钠，加热至60℃，水解45～60分钟，冷却，即得单唾液酸神经节苷脂钠的水解液。取D101型大孔树脂，填柱，将水解液上样，依次用20倍柱体积水、2倍柱体积20％甲醇洗脱，收集洗脱液。将洗脱液减压蒸馏除去甲醇，浓缩至原体积的1/2，冷却，静置过夜，过滤，得沉淀物。再将沉淀物用8～10倍水溶解，经冷冻干燥，得唾液酸神经节苷脂钠，以唾液酸计算含量不得低于18％。
②制备小分子多肽物质按重量取合格兔肉，剪去脂肪和结缔组织，用注射用水洗净，经组织捣碎，捣碎时加注射用水匀浆，将匀浆组织液置-25℃～-35℃下冰冻10～20小时。然后将冻结的组织液于常温下解冻，再放置-35℃以下冰藏10～20小时。取出冻结的组织液于30℃～40℃水浴融化，用适量NaOH调PH6.0～7.0，加热至90℃以上变性，保温30min，冰水冷却。将组织液在4℃下高速离心，时间15min/次，收集上清液，用3000～10000道尔顿分子筛截留，收集超滤液，即得兔肌肉提取的小分子多肽溶液，其多肽含量不得低于3.5mg/ml。
③制备脑苷肌肽冻干粉将以上制得的唾液酸神经节苷酯钠GM1溶液与兔肌肉提取的小分子多肽溶液按比例组合，并按二溶液总体积20～70％的量添加赋型剂，本例中选用赋型剂为葡聚糖和乳糖，经除菌、除热源处理，制成脑苷肌肽溶液，将该溶液按成品规定量(即内含兔肌肉提取多肽5～50mg∶唾液酸神经节苷酯50～500μg)进行分装，将上述分装好的脑苷肌肽溶液冷冻至-20℃～-40℃，抽真空达1～10Pa，保温4小时后，逐渐以每小时1℃提高温度。当到达室温即可。冻干完毕，开启冻干机的升降机将胶塞完全压入西林瓶中，然后通入无菌空气，开箱取出冻干好的产品。所得的冻干粉为白色或为淡黄色疏松块状物。本品溶解后成无色或淡黄色澄明液体。其产品规格有①每瓶6.4mg多肽∶100μg唾液酸；②16mg多肽∶250μg唾液酸；③32mg多肽∶500μg唾液酸。
实施例2脑苷肌肽冻干粉特殊安全性试验按上述工艺制备的产品，进行动物安全性试验，其试验方法和结果如下①受试药物注射用脑苷肌肽，淡黄色粉末，规格每瓶含6.4mg(多肽)、100μg(唾液酸)。由海南惠普森医药生物技术有限公司提供。
②试验动物大耳白兔3只，♀/♂皆用，体重2.0～2.5kg，一级，由四川省医学实验动物管委会试验动物养殖中心提供并提供全价颗粒饲料。动物合格证号川质动管14号。豚鼠60只，♀/♂各半，体重200～250g，一级，由四川省医学实验动物管委会试验动物养殖中心提供并提供全价颗粒饲料。动物合格证号川质动管14号。试验条件合格证三级，室温18～24℃，相对湿度60～68％。
③安全性实验方法与结果a.溶血试验取兔心血10ml，去纤维蛋白，置刻度离心管加入适量的生理盐水，2000rpm/min离心，10min/次，弃上清液，生理盐水洗涤5次，至离心后上清液无色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2％混悬液。取试管7支，按规定配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理氯化钠溶液，混匀后，于37℃恒温箱中放置30min，分别加入不同量的药液，摇匀后，置37℃恒温箱中，开始分别于30、60min，2、3、4h观察各管有无溶血及RBC凝集现象。
表1 试剂与试管名称标号
表2 注射用脑苷肌肽体外对红细胞的溶血作用
注“+”表示溶血；“-”表示不溶血。
结果如表为阴性，不溶血。
b.静脉血管刺激试验家兔3只，♀/♂均可，固定于兔箱内，左侧耳缘静脉滴注N.S(对照组)，右侧耳缘静脉滴注0.21mg(多肽计)脑苷肌肽，滴注量均为4.07mg(多肽计)/kg，速度为20滴/min。1次/日，连续5天。末次给药24h后，解剖左右侧兔耳，肉眼及病理观察耳缘静脉注射部位有无刺激反应。
结果肉眼观察对照组和实验组左右两耳滴注部位未见明显的血管扩张、红肿等刺激反应现象；病理组织学检查也未见异常。表明注射用脑苷肌肽对家兔静脉血管无明显的刺激性。
c.家兔肌肉刺激试验家兔3只，♀/♂均可，分别在其左右大腿外侧四头肌部位剪毛，用记号笔画一直径1cm的圆标记，无菌操作，在各兔圈内右侧注射3.2mg(多肽计)/ml的脑苷肌肽1.0ml/只，左侧注射N.S1.0ml/只，连续3天，末次给药24h后，处死动物。观察注射部位四头肌有无红肿、充血、肌肉变性等刺激反应症状；取注射部位肌肉作组织病理学检查。
结果3只家兔两侧注射部位肌肉均无肉眼可见异常；组织病理学检查，肌纤维未见充血、水肿、炎细胞浸润。表明脑苷肌肽对家兔肌肉无刺激性。
d.豚鼠全身过敏试验豚鼠60只，随机分为3.2mg(多肽)/ml脑苷肌肽组、10％卵白蛋白阳性对照组、N.S阴性对照组3组，20只/组，♀/♂各半。脑苷肌肽组豚鼠间日腹腔注射(i.p)给药0.5ml/只，连续3次。10％卵白蛋白阳性对照组、N.S阴性对照组相同方法注射。第1次给药后14天、21天各组各取10只，♀/♂各半。由后肢足背静脉注射(i.v)本组受试液1ml/只，参考中国药典，观察给药后15min内有无竖毛、喷嚏、干呕、咳嗽、呼吸困难、颤音、抽搐或死亡等过敏反应。
表3 注射用脑苷肌肽对豚鼠全身过敏作用
结果脑苷肌肽组和N.S组于末次给药14天和21天i.v.给药后15min内除14天出现2只竖毛、1只咳嗽、21天3只竖毛、1只呼吸急促外，其余均未出现竖毛、喷嚏、干呕、咳嗽、呼吸困难、颤音、抽搐或死亡等过敏反应现象，而阳性组动物在注射卵蛋白液体后2～3min内均出现上述症状。表明豚鼠全身过敏性试验结果为阴性，无明显致敏性。
结论根据上述实验结果表明，注射用脑苷肌肽无溶血和RBC聚集作用。多次静脉滴注未见对家兔静脉血管的明显刺激作用。多次肌肉注射也未见对家兔肌肉的明显刺激作用。对豚鼠全身过敏试验结果证明，注射用脑苷肌肽无致敏性。
权利要求
1.脑苷肌肽冻干粉，含有效成分唾液酸神经节苷酯钠、兔肌肉提取的小分子多肽，以及药物上可接受的赋型剂，其特征是唾液酸神经节苷酯钠与小分子多肽的重量配比为50～100∶1～10，赋型剂添加量是兔肌肉组织提取的多肽溶液液和唾液酸神经节苷酯混合液总体积的20％～70％，所说的赋型剂包括甘露醇、聚乙二醇、葡聚糖、乳糖。
2.一种权利要求1的脑苷肌肽冻干粉的制备方法，其特征是按如下步骤制备将唾液酸神经节苷酯钠与兔肌肉提取的小分子多肽按比例组合，添加适量的赋型剂，经除菌、除热源处理，制成脑苷肌肽溶液，将该溶液按成品规定量分装，将分装好的脑苷肌肽溶液冷冻至-20℃～-40℃，真空度达1～10Pa抽真空，保温4小时后，逐渐以每小时1℃提高温度，当到达5℃～40℃即可，冻干完毕，开启冻干机的升降机将胶塞完全压入西林瓶中，然后通入无菌空气，开箱取出冻干好的产品。
全文摘要
本发明涉及用于一种治疗急性颅脑损伤、急性脑卒中和脑出血的药物脑苷肌肽冻干粉，含有效成分唾液酸神经节苷酯钠、兔肌肉提取的小分子多肽，以及药物上可接受的赋型剂，唾液酸神经节苷酯钠与小分子多肽的重量配比为50～100∶1～10，赋型剂添加量是兔肌肉组织提取的多肽溶液液和唾液酸神经节苷酯混合液总体积的20％～70％，包括甘露醇、聚乙二醇、葡聚糖、乳糖。本剂能提高神经节苷酯和小分子多肽物质的药物稳定性，确保临床用药的疗效，同时也有利于药品的贮藏、运输。
文档编号A61P43/00GK1733293SQ20051009404
公开日2006年2月15日 申请日期2005年8月26日 优先权日2005年8月26日
发明者李志林, 黄瑶, 蔡鹤其 申请人:李志林