专利名称：新型抗血管生成药n的制作方法
技术领域：
本发明涉及新型化合物2-(取代的芳基甲基)-3-(取代的苯基)-2H-引唑并合成了1-(取代的芳基甲基)-3-(取代的苯基)-1H-吲唑，其具有用作抗血管生成药的潜力。
背景技术：
在先前的工作中，我们报道了4-(1-苄基-1H-吲唑-3-基)苯甲酸乙酯(YD-3)是蛋白酶激活的受体(PAR)-4-依赖性活化的选择性有效抑制剂。1，2，3我们还发现YD-3有效地抑制凝血酶-诱导的Ca++信号和血栓素的生成4。由于凝血酶和血栓素在病理性血栓形成中起重要作用，YD-3选择性抑制凝血酶-诱导的血栓素生成的能力可能具有治疗血栓形成疾病的疗效。
近来，在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中发现YD-3及其主要代谢物——4-(1-苄基-1H-吲唑-3-基)苯甲酸(CHS-6)抑制血管内皮生长因子(VEGF)-诱导的细胞增殖、迁移以及脉管形成。在体内测定中，它们在基质胶塞动物模型(Matrigel plug animal model)中抑制VEGF-诱导的血管生成。5因此，这两个化合物被认为是开发新型抗血管生长药的有希望的候选物。
在本文中合成了先前未知的YD-3衍生物的N2-区域异构体并报道了它们的抗血管生成活性。
发明简介本发明合成了一种具下式的新颖化合物 其中Ar1是苯基、吡啶基或嘧啶基；Ar2是苯、吡啶或嘧啶；R1是H、C1～C6烷基、羧基、C1～C6烷氧基羰基、卤代羰基、羟基C1～C6烷基、 CONH-(CH2)n-COOH或 R2和R3独立是H、Cl、F、Br、OH、O-R、 O-(CH2)n-COOH或 R4是H、C1～C6烷基、(CH2)n-Ar或 其中R5、R6、R7、R8、R9和R独立是H、卤素、羟基或C1～C6烷基；Ar是卤素、C1～C6烷基或C1～C6烷氧基取代的C6～14芳基或呋喃基；且n＝1～6。
本发明亦揭示一种本发明的新颖化合物或其药学上可接受的盐在制备提供抗血管生成活性的药物中的应用。
本发明亦揭示一种本发明的新颖化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
较佳的，Ar2是苯。
较佳的，Ar1是苯基。
较佳的，R4是CH2-Ar，其中Ar是苯基、卤代苯基、甲基苯基或甲氧基苯基。
较佳的，R2和R3是氢。
较佳的，R1是C1～C6烷基、羧基、C1～C6烷氧基羰基、羟基C1～C6烷基、 其中R5和R6独立是H、羟基或C1～C6烷基。更佳的，R1是甲基。
附图简介附
图1显示合成本发明的2-(取代的芳基甲基)-3-(取代的苯基)-2H-吲唑和1-(取代的芳基甲基)-3-(取代的苯基)-1H-吲唑的化学反应。
附图2显示本发明化合物24的结构及其HMBC波谱。
附图3显示本发明化合物25的结构及其HMBC波谱。
附图4显示合成本发明化合物35-40的化学反应。
附图5显示体外测定结果(抑制DNA合成)。在不存在或存在(基础组或对照组)30μM测试样品(YD-3，10，15，17，21，25，26)下孵化人脐静脉内皮细胞，然后加入血管内皮升至因子(VEGF)(除了基础组)以诱导DNA合成，使用[3H]胸苷合并测定进行检测。
附图6显示体外测定结果(抑制DNA合成)。在不存在或存在(基础组或对照组)10μM测试样品(YD-3，10，15，17，21，25，26)下孵化人脐静脉内皮细胞，然后加入血管内皮升至因子(VEGF)(除了基础组)以诱导DNA合成，使用[3H]胸苷合并测定进行检测。给出了均值±S.E.(n＝5)。
附图7显示体外测定结果(抑制DNA合成)。在不存在或存在(基础组或对照组)1μM测试样本(YD-3，10，15，17，21，25，26)下孵化人脐静脉内皮细胞，然后加入血管内皮升至因子(VEGF)(除了基础组)以诱导DNA合成，使用[3H]胸苷合并测定进行检测。给出了均值±S.E.(n＝5)。
附图8显示体内测定结果的相片(抑制脉管形成)。在预先涂有基质胶(10mg/ml)的滑腔(chamberslide)上培养人脐静脉内皮细胞。不使用(基础组或对照组)或使用测试样品(YD-3，10，15，17，21，25，26)处理细胞，然后加入血管内皮生长因子(VEGF)以诱导脉管形成。所有照片以100倍放大拍照。
附图9显示血管生成作用的定量分析。裸鼠皮下注射包含150ng/ml血管内皮生长因子(VEGF)的基质胶塞。口服给药小鼠媒介物或测试样品(YD-3，10，15，17，21，25，26)。给药七天后，安乐处死动物并从小鼠体内切除胶塞，采用血红蛋白监测试剂盒(Sigma)使用血红蛋白浓度作为参数测量血管生成效果。给出了均值±S.E.(n＝3)。
发明详述为了寻找新型抗血管生成化合物，使用3-(取代的苯基)-1H-吲唑(10，11)作为关键中间体并合成了它们的N2-取代的芳基甲基衍生物(15，17，19，21，23，25，26，28，30，32，34，35-40)。
在三乙胺存在下，1-(N-吗啉代)环己烯首先经取代的芳基甲基氯化物处理，然后使用稀HCl水解得到相应的2-氧基-环己基取代的苯基酮(6，7)，随后经水合肼处理提供相应的3-(取代的苯基)-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑(8，9)。然后通过在Pd/C上催化脱氢而氧化化合物8和9，得到相应的3-(取代的苯基)-1H-吲唑(10，11)。化合物10和11经各种取代的芳基甲基氯化物烷基化生成所需的2-(取代的芳基甲基)-3-(取代的苯基)-2H-吲唑(15，17，19，21，23，25，26，28，30，32，34，35-40)和1-(取代的芳基甲基)-3-(取代的苯基)-1H-吲唑(14，16，18，20，22，24，27，29，31，33)。这些化合物的结构通过它们的IR，UV和NMR波谱数据确证。
评价了3-(4-甲基苯基)-1H-吲唑(10)和N2-(取代的苄基)-3-(4-甲基苯基)吲唑(15，17，21，25，26)的抗血管生成活性。大多数N2-取代的苄基衍生物显示了较4-(1-苄基-1H-吲唑-3-基)苯甲酸乙酯(YD-3)更卓越的活性。其中，2-(4-氯苄基)-3-(4-甲基苯基)-2H-吲唑(15)、2-(4-甲基苄基)-3-(4-甲基苯基)-2H-吲唑(21)和2-(4-甲氧基苄基)-3-(4-甲基苯基)-2H-吲唑(25)显示了有意义的抗血管生成活性并值得进一步的研究。
流程1举例说明了N2-(取代的芳基甲基)-3-(取代的苯基)吲唑(15，17，19，21，23，25，26，28，30，32，34)的合成，示于附图1中。开始时，在Et3N存在下使用取代的苯甲酰氯(2，3)处理1-(N-吗啉代)环己烯(1)从而生成相应的4-[2-(取代的苯甲酰基)环亚己基]吗啉-4-铵(4，5)，然后经20％HCl酸化并加热得到相应的2-氧基环己基取代的苯基酮(6，7)。接着，化合物6和7与水合肼在室温下缩合得到相应的3-(取代的苯基)-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑(8，9)。接着化合物8和9经Pd/C脱氢，升温，得到相应的关键中间体——3-(取代的苯基)-1H-吲唑(10，11)。然后，通过在EtOH中与各种取代的芳基甲基氯化物处理使得化合物10和11烷基化，并在EtONa存在下得到相应的N1-和N2-区域异构体(14～34)。为了避免描述所有所得区域异构体的结构确认中的冗余，在如下代表性实施例中仅提供了化合物24(mp67～69℃)和25(mp113～115℃)的详细结果确证。
对于化合物24和25，元素分析和质谱数据[m/z，328(M+)]确认它们的分子式均为C22H20NO，暗示了它们可能是N1-和N2-(对-甲氧基苄基)区域异构体。尽管IR、UV、MS和1D-NMR波谱分析不能区别它们，使用它们的HMBC波谱成功地确证了它们的异构体结构。如附图2和3所示，化合物24N-CH2-部分的信号显示C-7a-，2″-和6″-信号的3J-相关。相反，化合物25N-CH2-部分的信号显示了其C-3，2″-和6″-信号的3J-相关。基于上面的HMBC数据，化合物24(mp67～69℃)确认为N1-(对-甲氧基苄基)-3-(4-甲基苯基)吲唑，化合物25(mp113～115℃)确认为N2-(对-甲氧基苄基)-3-(4-甲基苯基)吲唑。此外，通过(Z)-(4-甲基苯基)(苯基)甲基酮(4-甲氧基苄基)腙(13)与Pb(OAc)4和BF3Et2O的CH2Cl2溶液的反应还可得到化合物24。其它N-(取代的芳基甲基)衍生物的结构可通过相似的波谱分析过程而确定。
比较这些区域异构体的物理和波谱数据后，发现所有N1-区域异构体的熔点相对低于它们相应的N2-区域异构体。同一类型的区域异构体中观察到相似的波谱样式。例如在所有N1-区域异构体(14，16，18，20，22，24，27，29，31，33)的1H NMR(DMSO-d6)波谱中，出现在低场的四个质子信号分别与它们的H-4，H-2’，H-6’和H-7相关性良好，以同样次序的降低化学位移。
相反，发现N2-区域异构体(15，17，19，21，23，25，26，28，30，32，34)的1H NMR和13C NMR波谱均与它们相应的N1-区域异构体有轻微地差别。在N2-区域异构体中，它们的四个低场质子分别被指定为H-7，H-4，H-2’和H-6’，以同样次序的降低化学位移。
值得指出的是，当进行相关区域异构体结构确认时，我们观察到上述区域异构体mp和NMR的差别可用作有价值的参数。
如流程2所示，示于附图4中，当4-[1-(取代的苄基)-1H-吲唑-3-基]苯甲酸乙酯(28，30)经10％NaOH水解时，以高收率得到相应的酸(35，36)。允许化合物36与SOCl2反应得到酰氯(37)，其经羟胺处理得到酰胺(38)。我们试图从化合物26制备化合物35，通过使用各种氧化剂比如CrO3或KMnO4处理化合物26，但是没有得到所需的化合物(35)，而得到不易分离的化合物的混合物。
试验部分所有的溶剂和试剂均经商业获得且无需进一步纯化而使用。通过薄层色谱检测反应，使用具有荧光指示剂的Merck板。在硅胶上进行柱色谱。
熔点经Yanaco MP-500D熔点仪测定，未经校正。IR波谱经ShimadzuIR-440和Nicolet Impact 400 FT-IR分光光度计记录，经KBr压片。NMR波谱经Bruker Avance DPX-200 FT-NMR分光计获得，使用CDCl3和DMSO-d6作为溶剂。使用了如下缩写s，单峰；d，二重峰；dd，双二重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；以及br，宽峰。MS经HP 5995 GC-MS仪测量。UV光谱经Shimadzu UV-160A UV-Vis记录分光光度计记录，使用甲醇溶液。元素分析(C，H，N)经Perkin-Elmer 2400 Series II CHNS/O分析仪进行且所得结果在计算值的±0.4％范围内。
3-(4-甲基苯基)-1H-吲唑(10)(A).于45℃向1-(N-吗啉代)环己烯(1)(33.4g，0.2mol)和三乙胺(28mL)的CHCl3(100mL)溶液中逐滴加入4-甲基苯甲酰氯(2)(26.42ml，0.2mol)的CHCl3(40mL)溶液。允许该反应混合物反应3h。然后加入20％HCl，回流加热该混合物5h，然后静置冷至室温。收集CHCl3层并使用H2O洗涤，经MgSO4干燥后蒸发。残留物经石油醚洗涤，干燥得到2-氧基环己基-4-甲基苯基酮(6，21.2g，49％)。
(B)将化合物6(13.01g，0.06mol)溶解于MeOH(100mL)中，然后于30±2℃逐滴加入4ml的85％NH2NH2.H2O。允许该混合物反应30min，然后真空浓缩直至残留约35mL溶液。允许该残留物在冷却下沉淀。固体沉淀物经石油醚洗涤，干燥得到3-(4-甲基苯基)-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑(8，12.39g，97％收率)，mp57.4～59.9℃。
(C)向化合物8(12.3g，0.058mol)的反式-十氢萘(反式-萘烷)溶液加入10％Pd/C(2.7g)，回流加热该混合物4h，然后在油浴中真空浓缩直至残留约20mL的溶液。趁热向残留物中加入石油醚(80mL)，通过振荡充分混合该混合物。允许该混合物在冷却下沉淀从而得到3-(4-甲基苯基)-1H-吲唑(10，9.85g，82％收率)。
mp106～107℃；MS(EI，70eV)m/z208(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)233.4(3.850)，246.0(4.223)，311.6(4.251)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.47(3H，s， 4’-CH3)，7.19～7.29(2H，m，H-5，H-7)，7.34～7.38(3H，m，H-6，H-3’，5’)，7.93(2H，d，J＝8.0Hz，H-2’，6’)，8.03(1H，d，J＝8.1Hz，H-4)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ 21.33(4’-CH3)，110.26(C-7)，120.92(C-3a)，121.17(C-4、C-5)，126.70(C-6)，127.60(C-2’，6’)，129.62(C-3’，5’)，130.65(C-1’)，138.02(C-4’)，141.66(C-7a)，145.68(C-3).C14H12N2的分析计算值C，80.74；H，5.81；N，13.45.测定值C，80.70；H，5.75；N，13.40。
4-(1H-吲唑-3-基)苯甲酸乙酯(11)按照10的制备方法处理4-(氯羰基)苯甲酸乙酯得到11(0.94g，88.9％)。
mp133～135℃；MS(EI，70eV)m/z 266(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ1.33(3H，t，J＝7.0Hz，CH3)，4.32(2H，q，J＝7.0Hz，OCH2)，7.20～7.27(1H，m，H-5)，7.38～7.45(1H，m，H-6)，7.62(1H，d，J＝8.4Hz，H-7)，8.08(2H，d，J＝8.4Hz，H-3’，5’)，8.12(1H，d，J＝9.2Hz，H-4)，8.16(2H，d，J＝8.4Hz，H-2’，6’)，13.47(1H，s，NH).C16H14N2O2的分析计算值C，72.16；H，5.30；N，10.52.测定值C，72.18；H，5.29；N，10.52。
1-(4-氯苄基)-3-(4-甲基苯基)-1H-吲唑(14)和2-(4-氯苄基)-3-(4-甲基苯基)-2H-吲唑(15)向化合物10(4.16g，0.02mol)的无水EtOH(30mL)溶液中加入EtONa(2.72g，0.04mol)。于30±2℃搅拌该混合物1.5h。逐滴加入4-氯苄基氯(6.44g，0.04mol)，回流加热混合物1.5h。趁热滤除所形成的固体沉淀物并使用CHCl3洗涤数次。合并滤液并真空浓缩除去溶剂。残留物经色谱分离(硅胶-CHCl3)生成化合物14(3.1g，47％)和化合物15(0.23g，3％)。
化合物14mp79.9～82.3℃；MS(EI，70eV)m/z 332(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)232.2(3.769)，244.6(4.079)，313.4(4.099)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.35(3H，s，4’-CH3)，5.52(2H，S，CH2)，7.06～7.28(9H，m，芳香H)，7.79(2H，d，J＝8.1Hz，H-2’，6’)；13CNMR(50MHz，CDCl3)δ21.33(4’-CH3)，52.26(CH2)，109.34(C-7)，121.08(C-4)，121.59(C-5)，122.13(C-3a)，126.48(C-6)，127.38，128.48，128.85，129.52，130.61(C-1’)，133.52(C-4″)，135.42(C-1″)，137.82(C-4’)，140.95(C-7a)，144.52(C-3).C21H17N2的分析计算值C，75.78；H，5.15；N，8.42.测定值C，75.74；H，5.13；N，8.41。
化合物15mp107.4～109.5℃；MS(EI，70eV)m/z 332(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)232.4(3.683)，244.8(3.996)，314.6(4.056)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.45(3H，s，4’-CH3)，5.59(2H，s，CH2)，7.01～7.32(10H，m，芳香H)，7.57(1H，d，J＝8.4Hz，H-4)，7.74(1H，d，J＝8.7Hz，H-7)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ21.17(4’-CH3)，53.38(CH2)，117.13(C-7)，120.23(C-4)，121.09(C-3a)，121.68(C-5)，126.25(C-1’)，126.35(C-6)，128.14，128.63，129.30，129.57，133.38(C-4″)，135.22(C-1″)，136.48(C-3)，138.89(C-4’)，148.15(C-7a).C21H17N2的分析计算值C，75.78；H，5.15；N，8.42.测定值C，75.69；H，5.10；N，8.38。
1-(3-氯苄基)-3-(4-甲基苯基)-1H-吲唑(16)和2-(3-氯苄基)-3-(4-甲基苯基)-2H-吲唑(17)如在化合物14和15的制备方法中，允许化合物10(10.4g，0.05mol)、EtONa(6.8g，0.1mol)和3-氯苄基氯(16.1g，0.1mol)反应从而得到化合物16(7.1g，43％)和17(0.76g，5％)。
化合物16mp66.6～68℃；MS(EI，70eV)m/z 332(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)233.2(3.797)，245.4(4.09)，313.0(4.107)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.32(3H，s，4’-CH3)，5.48(2H，s，CH2)，6.98～6.99(1H，m，H-4″)，7.05～7.25(8H，m，芳香H)，7.78(2H，d，J＝8.1Hz，H-2’，6’)，7.92(1H，d，J＝8.1Hz，H-4)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ21.30(4’-CH3)，52.24(CH2)，109.27(C-7)，121.09(C-4)，121.56(C-5)，122.09(C-3a)，125.20(C-4″)，126.50(C-6)，127.18(C-6″)，127.37(C-2’，6’)，127.87(C-2″)，129.49(C-3’，5’)，129.95(C-5″)，130.57(C-1’)，134.53(C-3″)，137.80(C-4’)，138.93(C-1″)，140.97(C-7a)，144.56(C-3).C21H17N2的分析计算值C，75.78；H，5.15；N，8.42.测定值C，75.68；H，5.09；N，8.39。
化合物17mp98～100℃；MS(EI，70eV)m/z 332(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)232.2(3.706)，244.2(4.007)，313.4(4.047)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.37(3H，s，4’-CH3)，5.51(2H，s，CH2)，6.86～7.29(10H，m，芳香H)，7.50(1H，dd，J＝1.0，8.4Hz，H-4)，7.67(1H，dd，J＝0.9，8.7Hz，H-7)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ21.36(4’-CH3)，53.64(CH2)，117.36(C-7)，120.44(C-4)，121.26(C-3a)，121.91(C-5)，125.08(C-4″)，126.39(C-1’)，126.58(C-6)，127.10(C-6″)，127.95(C-5″)，129.51(C-2’，6’)，129.78(C-3’，5’)，129.96(C-2″)，134.59(C-3″)，136.79(C-3)，138.84(C-4’)，139.13(C-1″)，148.37(C-7a).C21H17N2的分析计算值C，75.78；H，5.15；N，8.42.测定值C，75.72；H，5.13；N，8.41。
1-(2-氯苄基)-3-(4-甲基苯基)-1H-吲唑(18)和2-(2-氯苄基)-3-(4-甲基苯基)-2H-吲唑(19)如在化合物14和15的制备方法中，允许化合物10(10.4g，0.05mol)、EtONa(6.8g，0.1mol)和2-氯苄基氯(16.1g，0.1mol)反应从而得到18(7.3g，44％)和化合物19(0.58g，3％)。
化合物18mp77.6～78.8℃；MS(EI，70eV)m/z 332(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)232.4(3.659)，245.4(3.94)，312.6(3.995)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.35(3H，s，4’-CH3)，5.69(2H，s，CH2)，6.70～7.35(9H，m，芳香H)，7.81(2H，d，J＝8.1Hz，H-2’，6’)，7.96(1H，d，J＝8.1Hz，H-4)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ21.30(4’-CH3)，50.00(CH2)，109.44(C-7)，121.12(C-4)，121.50(C-5)，121.94(C-3a)，126.52(C-6)，127.10(C-5″)，127.37(C-2’，6’)，128.31(C-3″)，128.75(C-4″)，129.34(C-6″)，129.49(C-3’，5’)，130.66(C-1’)，132.24(C-2″)，134.67(C-1″)，137.79(C-4’)，141.32(C-7a)，144.69(C-3).C21H17N2的分析计算值C，75.78；H，5.15；N，8.42.测定值C，75.57；H，4.79；N，8.49。
化合物19mp131.3～137.8℃；MS(EI，70eV)m/z 332(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)232.8(3.691)，244.6(4.007)，314.8(4.06)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.43(3H，s，4’-CH3)，5.74(2H，s， CH2)，6.63～7.40(10H，m，芳香H)，7.64(1H，d，J＝8.5Hz，H-4)，7.76(1H，d，J＝8.7Hz，H-7)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ21.33(4’-CH3)，51.95(CH2)，117.43(C-7)，120.55(C-4)，121.12(C-3a)，121.94(C-5)，126.33(C-1’)，126.57(C-6)，127.28(C-5″)，127.84(C-3″)，128.78(C-4″)，129.19(C-2’，6’)，129.20(C-6″)，129.80(C-3’，5’)，131.73(C-2″)，135.04(C-1″)，137.23(C-3)，139.01(C-4’)，148.56(C-7a).C21H17N2的分析计算值C，75.78；H，5.15；N，8.42.测定值C，75.74；H，5.10；N，8.38。
1-(4-甲基苄基)-3-(4-甲基苯基)-1H-吲唑(20)和2-(4-甲基苄基)-3-(4-甲基苯基)-2H-吲唑(21)
如在化合物14和15的制备方法中，允许化合物10(4.16g，0.02mol)、EtONa(2.72g，0.04mol)和4-甲基苄基氯(6.33g，0.045mol)反应从而得到化合物20(3.1g，50％)和化合物21(0.4g，6％)。
化合物20mp79.6～82.3℃；MS(EI，70eV)m/z 312(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)232.8(3.806)，243.4(4.090)，313.8(4.096)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.21(3H，s)，2.34(3H，s)，5.53(2H，s，CH2)，6.99～7.26(9H，m，芳香H)，7.80(2H，d，J＝8.1Hz，H-2’，6’)，7.92(1H，d，J＝8.1Hz，H-4)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ21.07，21.31，52.85(CH2)，109.62(C-7)，120.86(C-4)，121.44(C-5)，122.10(C-3a)，126.22(C-6)，127.14，127.38，129.32，129.46，130.83(C-1’)，133.90(C-1″)，137.34(C-4″)，137.62(C-4’)，140.95(C-7a)，144.10(C-3).C22H20N2的分析计算值C，84.58；H，6.45；N，8.97.测定值C，84.55；H，6.41；N，8.93。
化合物21mp107.5～109.3℃；MS(EI，70eV)m/z 312(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)33.8(3.723)，243(4.046)，266.0(3.883)，314.6(4.06)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.31(3H，s)，2.45(3H，s)，5.60(2H，s，CH2)，6.98～7.39(10H，m，芳香H)，7.48(1H，dd，J＝1.0，8.4Hz，H-4)，7.66(1H，dd，J＝0.9，8.7Hz，H-7)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ21.06，21.34，54.03(CH2)，117.39(C-7)，120.40(C-4)，121.28(C-3a)，121.62(C-5)，126.23(C-6)，126.73(C-1’)，126.90，129.30，129.62，133.98(C-1″)，136.49(C-3)，137.32(C-4″)，138.83(C-4’)，148.29(C-7a).C22H20N2的分析计算值C，84.58；H，6.45；N，8.97.测定值C，84.48；H，6.39；N，8.88。
1-(2-甲基苄基)-3-(4-甲基苯基)-1H-吲唑(22)和2-(2-甲基苄基)-3-(4-甲基苯基)-2H-吲唑(23)如在化合物14和15的制备方法中，允许化合物10(4.16g，0.02mol)、EtONa(2.72g，0.04mol)和2-甲基苄基氯(6.33g，0.045mol)反应从而得到化合物22(3.05g，49％)和化合物23(0.28g，4％)。
化合物22mp114.1～116.5℃；MS(EI，70eV)m/z 312(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)33.2(3.814)，244.8(4.092)，314.2(4.128)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.33(3H，s)，2.34(3H，s)，5.57(2H，s，CH2)，6.72～6.75(1H，d，芳香H)，6.97～7.25(9H，m，芳香H)，7.80(2H，dd，J＝1.8，8.2Hz，H-2’，6’)，7.95(1H，dd，J＝1.0，8.1Hz，H-4)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ19.35，21.31，51.27(CH2)，109.61(C-7)，120.92(C-4)，121.49(C-5)，121.96(C-3a)，126.20(C-4″)，126.28(C-6)，127.30(C-5″)，127.36(C-2’，6’)，127.63(C-3″)，129.47(C-3’，5’)，130.42(C-6″)，130.78(C-1’)，134.90(C-2″)，135.70(C-1″)，137.67(C-4’)，141.28(C-7a)，144.14(C-3).C22H20N2的分析计算值C，84.58；H，6.45；N，8.97.测定值C，84.57；H，6.41；N，8.95。
化合物23mp125～128.8℃；MS(EI，70eV)m/z 312(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)232.6(3.695)，243.4(3.995)，315.2(4.102)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.16(3H，s)，2.35(3H，s)，5.54(2H，s，CH2)，6.52～6.55(1H，d，芳香H)，6.98～7.30(9H，m，芳香H)，7.55(1H，d，J＝8.4Hz，H-4)，7.67(1H，d，J＝8.7 Hz，H-7)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ19.07，21.33，52.21(CH2)，117.46(C-7)，120.45(C-4)，121.14(C-3a)，121.73(C-5)，126.30(C-4″)，126.44(C-6，5″)，126.67(C-1’)，127.46(C-3″)，129.27(C-2’，6’)，129.71(C-3’，5’)，130.10(C-6″)，134.54(C-2″)，135.46(C-1″)，126.84(C-3)，138.85(C-4’)，148.41(C-7a).C22H20N2的分析计算值C，84.58；H，6.45；N，8.97.测定值C，84.49；H，6.41；N，8.91。
1-(4-甲氧基苄基)-3-(4-甲基苯基)-1H-吲唑(24)和2-(4-甲氧基苄基)-3-(4-甲基苯基)-2H-吲唑(25)如在化合物14和15的制备方法中，允许化合物10(10.4g，0.05mol)、EtONa(6.8g，0.1mol)和4-甲氧基苄基氯(23.5g，0.15mol)反应从而得到化合物24(7.3g，46％)和化合物25(0.49g，3％)。
方法A化合物24mp66.3～69.1℃；MS(EI，70eV)m/z 328(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)232.8(4.801)，243.4(4.107)，313.8(4.091)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.31(3H，s，4’-CH3)，3.63(3H，s，4″-OCH3)，5.59(2H，s，CH2)，6.81(2H，d，J＝8.6Hz，H-3″，5″)，7.18(1H，dd，J＝7.5，7.5Hz，H-5)，7.24(2H，d，J＝8.6Hz，H-2″，6″)，7.28(2H，d，J＝8.0Hz，H-3’，5’)，7.38(1H，dd，J＝7.6，7.6Hz，H-6)，7.68(1H，d，J＝8.6Hz，H-7)，7.87(2H，d，J＝8.0Hz，H-2’，6’)，8.00(1H，d，J＝8.2Hz，H-4)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ21.12(4’-CH3)，51.76(CH2)，55.26(4″-OCH3)，110.53(C-7)，114.20(C-3″，5″)，121.28(C-3a)，121.35(C-4)，121.51(C-5)，126.61(C-6)，127.08(C-2’，6’)，129.16(C-2″，6″)，129.60(C-1″)，129.80(C-3’，5’)，130.82(C-1’)，137.51(C-4’)，140.98(C-7a)，143.02(C-3)，159.02(C-4″).C22H20N2的分析计算值C，80.46；H，6.14；N，8.53.测定值C，80.43；H，6.11；N，8.50。
化合物25mp113.6～115℃；MS(EI，70eV)m/z 328(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)232.8(3.769)，243.0(4.083)，313.8(4.065)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.37(3H，s，4’-CH3)，3.66(3H，s，4″-OCH3)，5.50(2H，s，CH2)，6.80(2H，d，J＝8.7Hz，H-3″，5″)，6.97(2H，d，J＝8.7Hz，H-2″，6″)，7.03(1H，dd，J＝7.5，7.5Hz，H-5)，7.26(1H，dd，J＝8.0，8.0Hz，H-6)，7.35(2H，d，J＝8.1Hz，H-3’，5’)，7.40(2H，d，J＝8.2Hz，H-2’，6’)，7.49(1H，d，J＝8.5Hz，H-4)，7.62(1H，d，J＝8.7Hz，H-7)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ21.15(4’-CH3)，53.47(CH2)，55.27(4″-OCH3)，114.13(C-3″，5″)，117.28(C-7)，120.41(C-4)，120.96(C-3a)，121.85(C-5)，126.28(C-6)，126.41(C-1’)，128.65(C-2″，6″)，129.26(C-1″)，129.57(C-2’，6’)，130.05(C-3’，5’)，135.69(C-3)，138.74(C-4’)，147.70(C-7a)，158.87(C-4″).C22H20N2的分析计算值C，80.46；H，6.14；N，8.53.测定值C，80.42；H，6.13；N，8.51。
方法B向(4-甲基苯基)(苯基)甲基酮(12)(1.9g，0.01mol)的甲醇溶液中加入4-甲氧基苄基肼(4.5g，0.035mol)和乙酸(0.5mL)。回流该混合物2h。冷却后，浓缩该混合物并使用CHCl3萃取残留物，经稀HCl洗涤，随后经水洗涤，干燥并真空浓缩得到(Z)-(4-甲基苯基)(苯基)甲基酮(4-甲氧基苄基)腙(13)。接着，将上述苄基腙溶解于CH2Cl2(50ml)的溶液中并逐滴加至Pb(OAc)4(14.1g，0.03mol)的CH2Cl2(200mL)溶液中。滴加完全后，该混合物于30±2℃反应30min，加入BF3.Et2O(包含47％的BF361mL)。该混合物回流30min后加入冰水中猝灭。有机层经水洗涤，MgSO4干燥并蒸发。残留物经柱色谱法(硅胶-甲苯)纯化生成化合物24(0.6g)。通过与方法A所得样品比较其IR和NMR确证了该产物。
2-苄基-3-(4-甲基苯基)-2H-吲唑(26)如在化合物14和15的制备方法中，允许化合物10(6.24g，0.03mol)、EtONa(4.08g，0.06mol)和苄基氯(10.18g，0.08mol)反应从而得到化合物26(0.45g，5％)。
化合物26mp110.7～111.3℃；MS(EI，70eV)m/z 298(M+)；UV，λmax(CHCl3)nm(logε)233.2(3.641)，243(3.956)，314.6(3.972)；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.37(3H，s，4’-CH3)，5.50(2H，s，CH2)，6.92～7.23(10H，m，芳香H)，7.48(1H，d，J＝8.4Hz，H-4)，7.66(1H，d，J＝8.7Hz，H-7)；13C NMR(50MHz，CDCl3)δ21.36(4’-CH3)，53.56(CH2)，117.31(C-7)，120.42(C-4)，121.27(C-3a)，121.86(C-5)，126.43(C-1’)，126.53(C-6)，128.32，128.82，129.49，129.75，133.56(C-1″)，135.41(C-4″)，136.67(C-3)，139.07(C-4’)，148.34(C-7a)。C20H18N2的分析计算值C，80.46；H，6.14；N，8.53.测定值C，84.50；H，6.02；N，9.34.
4-(1-苄基-1H-吲唑-3-基)苯甲酸乙酯(27)和4-(2-苄基-2H-吲唑-3-基)苯甲酸乙酯(28)如在化合物14和15的制备方法中，允许化合物11(4.26g，0.016mol)、EtONa(3.54g，0.052mol)和苄基氯(20.36g，0.16mol)反应从而得到化合物27(3.09g，54.3％)和化合物28(0.50g ，8.8％)。
化合物27mp79～81℃；MS(EI，70eV)m/z 356(M+)；UV，λmax(MeOH)nm(logε)320(4.6)，211(4.7)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ1.32(3H，t，J＝7.1Hz，CH3)，4.33(2H，q，J＝7.1Hz，OCH2)，5.75(2H，s，CH2)，7.22～7.30(6H，m，H-5，2″，3″，4″，5″，6″)，7.44(1H，t，J＝7.0Hz，H-6)，7.78(1H，d，J＝8.5Hz，H-7)，8.06～8.10(2H，m，H-3’，5’)，8.12(1H，d，J＝7.5Hz，H-4)，8.15～8.18(2H，m，H-2’，6’).C23H20N2的分析计算值C，77.51；H，6.14；N，5.66.测定值C，77.48；H，5.68；N，7.88。
化合物28mp112～113℃；MS(EI，70eV)m/z 356(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ1.31(3H，t，J＝7.1Hz，CH3)，4.33(2H，q，J＝7.1Hz，OCH2)，5.70(2H，s，CH2)，6.98～7.04(2H，m，H-2″，6″)，7.09～7.14(1H，m，H-5)，7.19～7.24(3H，m，H-3″，4″，5″)，7.27～7.34(1H，m，H-6)，7.56(1H，d，J＝8.4Hz，H-4)，7.69(3H，d，J＝8.3Hz，H-7，2’，6’)，8.09(2H，d，J＝8.3Hz，H-3’，5’).C23H20N2的分析计算值C，77.51；H，6.14；N，5.66.测定值C，77.49；H，5.65；N，7.87。
4-[1-(4-氟苄基)-1H-吲唑-3-基]苯甲酸甲酯(29)和
4-[2-(4-氟苄基)-2H-吲唑-3-基]苯甲酸甲酯(30)如在化合物14和15的制备方法中，允许化合物11(4.26g，0.016mol)、MeONa(2.81g，0.052mol)和4-氟苄基氯(23.1mL，0.16mol)反应从而得到化合物29(3.35g，58.2％)和化合物30(0.58g，10.1％)。
化合物29mp118～120℃；MS(EI，70eV)m/z 360(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ3.87(3H，s，CH3)，5.74(2H，s，CH2)，7.09～7.18(2H，m，H-3″，5″)，7.27～7.32(3H，m，H-5，2″，6″)，7.35～7.391(1H，m，H-6)，7.82(1H，d，J＝8.5Hz，H-7)，8.06-8.18(5H，m，H-4，2’，3’，5’，6’).C22H17N2的分析计算值C，73.32；H，4.75；N，7.77.测定值C，73.31；H，4.74；N，7.78。
化合物30mp121～122℃；MS(EI，70eV)m/z 360(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ3.89(3H，s，CH3)，5.70(2H，s，CH2)，7.06～7.15(5H，m，H-5，2″，3″，5″，6″)，7.28～7.36(1H，m，H-6)，7.57(1H，d，J＝8.4Hz，H-4)，7.67～7.73(3H，m，H-7，2’，6’)，8.12(2H，d，J＝8.3Hz，H-3’，5’).C22H17N2的分析计算值C，73.32；H，4.75；N，7.77.测定值C，73.29；H，4.74；N，7.79。
4-[1-(2-氟苄基)-1H-吲唑-3-基]苯甲酸乙酯(31)和4-[2-(2-氟苄基)-2H-吲唑-3-基]苯甲酸乙酯(32)如在化合物14和15的制备方法中，允许化合物11(4.26g，0.016mol)、EtONa(3.54g，0.052mol)和2-氟苄基氯(23.1mL，0.16mol)反应从而得到化合物31(3.40g，56.9％)和化合物32(0.38g，6.4％)。
化合物31mp102～103℃；MS(EI，70eV)m/z 374(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ1.33(3H，t，J＝7.1Hz，CH3)，4.33(2H，q，J＝7.1Hz，OCH2)，5.80(2H，s，CH2)，7.11～7.32(5H，m，H-5，3″，4″，5″，6″)，7.44～7.52(1H，m，H-6)，7.80(1H，d，J＝8.5Hz，H-7)，8.05～8.16(5H，m，H-4，2’，3’，5’，6’).C23H19N2的分析计算值C，73.78；H，5.11；N，7.48.测定值C，73.76；H，5.09；N，7.49。
化合物32mp94～96℃；MS(EI，70eV)m/z 374(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ1.34(3H，t，J＝7.1Hz，CH3)，4.35(2H，q，J＝7.1Hz，OCH2)，5.74(2H，s，CH2)，7.00～7.17(4H，m，H-5，3″，4″，5″)，7.27～7.35(2H，m，H-6，6″)，7.57(1H，d，J＝8.4Hz，H-4)，7.66(1H，d，J＝8.7Hz，H-7)，7.76(2H，d，J＝8.3Hz，H-2’，6’)，8.13(2H，d，J＝8.3Hz，H-3’，5’).C23H19N2的分析计算值C，73.78；H，5.11；N，7.48.测定值C，73.81；H，5.13；N，7.50。
4-[1-(2-呋喃甲基)-1H-吲唑-3-基]苯甲酸甲酯(33)和4-[2-(2-呋喃甲基)-2H-吲唑-3-基]苯甲酸甲酯(34)如在化合物14和15的制备方法中，允许化合物11(4.26g，0.016mol)、MeONa(2.81g，0.052mol)和呋喃甲基氯(15.9mL，0.16mol)反应从而得到化合物33(3.03g，54.7％)和化合物34(0.42g，7.9％)。
化合物33mp99～101℃；MS(EI，70eV)m/z 332(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ3.87(3H，s，CH3)，5.76(2H，s，CH2)，6.40(1H，dd，J＝1.9，3.1Hz，H-4’)，6.55(1H，d，J＝3.1Hz，H-3’)，7.24～7.32(1H，m，H-5)，7.44～7.52(1H，m，H-6)，7.56～7.57(1H，m，H-2’)，7.85(1H，d，J＝8.5Hz，H-7)，8.06～8.16(5H，m，H-4，2″，3″，5″，6″).C21H18N2的分析计算值C，72.28；H，4.85；N，8.43.测定值C，72.31；H，4.86；N，8.41。
化合物34mp140～143℃；MS(EI，70eV)m/z 332(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ3.90(3H，s，CH3)，5.68(2H，s，CH2)，6.32(1H，d，J＝3.2Hz，H-4’)，6.36(1H，dd，J＝1.9，3.2Hz，H-3’)，7.05～7.13(1H，m，H-5)，7.26～7.33(1H，m，H-6)，7.53～7.54(1H，m，H-2’)，7.58～7.68(2H，m，H-4，7)，7.81(2H，m，J＝8.3Hz，H-2″，6″)，8.16(2H，d，J＝8.3Hz，H-3″，5″).C21H18N2的分析计算值C，72.28；H，4.85；N，8.43.测定值C，72.30；H，4.87；N，8.43。
4-(2-苄基-2H-吲唑-3-基)苯甲酸(35)化合物28(1.0g，0.0028mol)悬浮于10％NaOH中并回流1h。该反应混合物经10％HCl酸化。过滤所形成的结晶并从95％EtOH中重结晶得到化合物35(0.83g，90.8％)。
化合物35mp159～163℃；MS(EI，70eV)m/z 328(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ5.71(2H，s，CH2)，6.98～7.03(2H，m，H-2″，6″)，7.07～7.15(1H，m，H-5)，7.21～7.35(4H，m，H-6，3″，4″，5”)，7.58(1H，d，J＝8.4Hz，H-4)，7.69(3H，d，J＝8.2Hz，H-7，2’，6’)，8.10(2H，d，J＝8.2Hz，H-3’，5’)，13.18(1H，br，OH).C21H16N2的分析计算值C，76.81；H，4.91；N，8.53.测定值C，76.83；H，4.93；N，8.52。
4-[2-(4-氟苄基)-2H-吲唑-3-基]苯甲酸(36)如在化合物35的制备方法中，允许化合物30(0.5g，0.0013mol)和10％NaOH反应处理得到化合物36(0.44g，92.6％)。
化合物36mp237～239℃；MS(EI，70eV)m/z 346(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ5.69(2H，s，CH2)，7.06～7.14(5H，m，H-5，2″，3″，5″，6″)，7.27～7.35(1H，m，H-6)，7.57(1H，d，J＝8.4Hz，H-4)，7.68(3H，d，J＝8.4Hz，H-7，2’，6’)，8.11(2H，d，J＝8.4Hz，H-3’，5’).C21H15N2的分析计算值C，72.82；H，4.37；N，8.09.测定值C，72.83；H，4.39；N，8.07。
4-(2-苄基-2H-吲唑-3-基)-N-羟基苯甲酰胺(38)向35(1.0g，0.003mol)的CH2Cl2(100mL)溶液中加入SOCl2(5mL)。回流该混合物16h并蒸发。残留物经石油醚洗涤得到37(0.82g，71.4％)。
向37的甲苯(30mL)溶液中加入羟胺(10mL，0.151mol)。回流该混合物30min并蒸发。过滤所形成的固体并在50％EtOH中重结晶得到化合物38(0.41g，39.7％)。
化合物38mp201～203℃；MS(EI，70eV)m/z 343(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ5.69(2H，s， CH2)，6.98～7.03(2H，m，H-2″，6″)，7.07～7.14(1H，m，H-5)，7.22～7.35(4H，m，H-6，3″，4″，5″)，7.56(1H，d，J＝8.4Hz，H-4)，7.62～7.69(3H，m，H-7，2’，6’)，7.92(2H，d，J＝8.4Hz，H-3’，5’)9.15(1H，s， NH)，11.36(1H，s，OH).C21H17N3的分析计算值C，73.45；H，4.99；N，12.24.测定值C，73.47；H，5.02；N，12.23。甲醇(39)通过在无水THF(50mL)中搅拌无水氯化钙(2.0g，0.018mol)和硼氢化钠(2.0g，0.052mol)4h首先制备硼氢化钙。然后于25℃逐滴加入溶解于THF(5mL)中的化合物28(1.0g，0.0028mol)。回流该混合物6h并使用冰水(300mL)猝灭，真空蒸发并过滤得到固体产物。该固体在硅胶上经柱色谱法纯化，使用正己烷/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到化合物39(0.68g，76.9％)。
化合物39mp148～149℃；MS(EI，70eV)m/z 314(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ4.59(2H，d，J＝5.7Hz，CH2)，5.34(1H，t，J＝5.7Hz，OH)，5.65(2H，s，N-CH2)，6.99～7.06(2H，m，H-2″，6″)，7.06～7.11(2H，m，H-5)，7.22～7.33(4H，m，H-6，3″，4″，5″)，7.50～7.55(5H，m，H-4，2’，3’，5’，6’)，7.64(1H，d，J＝8.7Hz，H-7).C21H18N2的分析计算值C，80.23；H，5.79；N，8.92.测定值C，80.25；H，5.79；N，8.92。
{4-[2-(2-呋喃甲基)-2H-吲唑-3-基]苯基}甲醇(40)如在化合物39的制备方法中，允许化合物34(1.0g，0.003mol)、氯化钙(2.0g，0.018mol)和硼氢化钠(2.0g，0.052mol)反应得到化合物40(0.71g，77.3％)。
化合物40mp129～130℃；MS(EI，70eV)m/z 304(M+)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ4.63(2H，d，J＝5.7Hz，CH2)，5.37(1H，t，J＝5.7Hz，OH)，5.61(2H，s，N-CH2)，6.32(1H，d，J＝3.2Hz，H-5’)，6.39(1H，dd，J＝1.9，3.2Hz，H-4’)，7.01～7.24(1H，m，H-5)，7.24～7.32(1H，m，H-6)，7.50～7.64(7H，m，H-3’，4，7，2″，3″，5″，6″).C19H16N2的分析计算值C，74.98；H，5.30；N，9.20.测定值C，74.97；H，5.32；N，9.22。
细胞培养根据Jaffe等的原则分离人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，通过胶原酶从人脐索静脉获得该细胞，并在75cm2塑料烧瓶中在包含20％FBS、15μg/mL内皮细胞生长补充物(ECGs)的M199中进行培养。根据免疫染色评价，通过检测CD31(PECAM-1)证明它们是内皮细胞。在2至5段所用的HUVECs中进行试验。胸苷合并测定融合的HUVECs经胰蛋白酶作用，悬浮于补充有20％FBS的DMEM中，并以1.0×104细胞每孔种于96-孔板中。24h后，使用PBS洗涤该细胞两次并使用2％FBS-M199培养基饥饿24h。该细胞与或不与指示剂和生长因子(VEGF；10ng/mL)一起孵化24h并收获。收获前，使用[3H]胸苷(2μCi/mL)孵化细胞4h，使用Filter-Mate(Packard)收获，检测合并的免疫活性。
体内基质胶塞测定给裸鼠(6周龄)皮下注射500μL4℃含有或不含有YC-1和生长因子(150ng/mL VEGF)的基质胶(Becton Dickinson，Bedford，MA)。注射后，该基质胶快速形成胶塞。7天后，可轻易地拉开小鼠皮肤从而暴露该基质胶塞，其保持原样未动。标记并拍摄定量的差别后，测量血红蛋白，作为血管形成的指征，使用Drabkin方法(Drabkin试剂盒525，Sigma，St.Louis，MO)。从平行测定的已知血红蛋白量计算.血红蛋白的浓度。
结果和讨论抗血管生成活性在本研究中，选择了3-(4-甲基苯基)-1H-吲唑(10)和五个上述N2-区域异构体，即化合物15，17，21，25和26用于评价它们在体外对于VEGF-诱导的细胞增殖、VEGF-诱导的HUVECs形成和在体内对于新血管形成的作用。结果报道如下。
对于VEGF-诱导的HUVECs细胞增殖的作用使用[3H]胸苷合并测定评价了测试化合物对于VEGF-诱导的HUVECs细胞增殖的作用，结果示于附图5～附图7中。在10和30μM的浓度下(附图5，附图6)。所有测试化合物(10，15，17，21，25，26)和阳性对照(YD-3)均显示了显著的抑制作用。当它们的浓度低至1μM(附图4)时，只有化合物15，21和25保持了较阳性对照YD-3更好的活性。
对于VEGF-诱导的HUVECs脉管形成的作用如附图8所示，不含抑制剂，使用10mg/ml VEGF处理HUVECs导致其形成毛细管样结构。相比之下，加入化合物15，17，21，25和26导致显著阻碍了VEGF-诱导的脉管形成。其中，证明化合物15，21和25的抑制活性较其它测试化合物以及YD-3更强。
在体内对于新血管形成的作用在本研究中使用了体内基质胶塞测定以定量测定测试化合物的抗血管生成作用。如附图9所示，证明所有五个N2-衍生物(15，17，21，25，26)均具有显著的抗血管生成活性。其中，15，21和25显示了较阳性对照YD-3更强的效能。
对我们的测试化合物的抗血管生成活性分析引起了重要的发现在测试吲唑的N2-苄基对位引入Cl，CH3或OCH3明显有利于它们的抗血管生成活性。这三个有效的抗血管生成化合物(15，21，25)值得进一步的研究。
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权利要求
1.下式化合物 其中Ar1是苯基、吡啶基或嘧啶基；Ar2是苯、吡啶或嘧啶；R1是H、C1～C6烷基、羧基、C1～C6烷氧基羰基、卤代羰基、羟基C1～C6烷基、 、CONH-(CH2)n-COOH或 R2和R3独立是H、Cl、F、Br、OH、O-R、 O-(CH2)n-COOH或 R4是H、C1～C6烷基、(CH2)n-Ar或 其中R5、R6、R7、R8、R9和R独立是H、卤素、羟基或C1～C6烷基；Ar是卤素、C1～C6烷基或C1～C6烷氧基取代的C6～14芳基或呋喃基；且n＝1～6。
2.如权利要求1的化合物，其中Ar2是苯。
3.如权利要求2的化合物，其中Ar1是苯基。
4.如权利要求2的化合物，其中R4是CH2-Ar，其中Ar是苯基、卤代苯基、甲基苯基或甲氧基苯基。
5.如权利要求2的化合物，其中R2和R3是氢。
6.如权利要求3的化合物，其中R1是C1～C6烷基、羧基、C1～C6烷氧基羰基、羟基C1～C6烷基、 ，其中R5和R6独立是H、羟基或C1～C6烷基。
7.如权利要求6的化合物，其中R1是甲基。
8.如权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备提供抗血管生成活性的药物中的应用。
9.如权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
10.如权利要求8或9的应用，其中Ar2是苯。
11.如权利要求10的应用，其中Ar1是苯基。
12.如权利要求10的应用，其中R4是CH2-Ar，其中Ar是苯基、卤代苯基、甲基苯基或甲氧基苯基。
13.如权利要求10的应用，其中R2和R3是氢。
14.如权利要求11的应用，其中R1是C1～C6烷基、羧基、C1～C6烷氧基羰基、羟基C1～C6烷基、 ，其中R5和R6独立是H、羟基或C1～C6烷基。
15.如权利要求14的应用，其中R1是甲基。
全文摘要
合成了新型化合物2－(取代的芳基甲基)－3－(取代的苯基)－2H－吲唑和1－(取代的芳基甲基)－3－(取代的苯基)－1H－吲唑，并可用作抗血管生成药。
文档编号A61P35/00GK1962640SQ20051011587
公开日2007年5月16日 申请日期2005年11月10日 优先权日2004年11月16日
发明者郭盛助, 黄丽娇, 李芳裕, 邓哲明, 石美玲, 陈华鑫 申请人:永信药品工业股份有限公司