专利名称：降低肌萎缩性侧索硬化中神经变性的方法和组合物的制作方法
技术领域：
本公开内容涉及改善或治疗神经变性过程或疾病的至少一个症状的组合物和方法。
背景技术：
在任何指定时间，多至30,000美国人遭受几乎总是致命的肌萎缩性侧索硬化症(ALS)的折磨。ALS，还称为Lou Gehrig病，是一种攻击大脑和脊髓中运动神经元并导致肌肉软弱和萎缩的进行性神经变性疾病。早期症状包括灵巧度和步态的丧失。随着疾病的发展，患者变得麻痹并需要呼吸支持。诊断后，ALS患者的预计寿命通常是3到5年，死亡的首要原因是丧失呼吸功能。
仅仅部分地了解ALS的病因学。家族的(遗传的)病例仅占全部ALS患者的约5％-10％。在这个亚组的ALS患者中，五分之一携带有目前为止确定的唯一的基因缺陷(SOD1基因突变)。突变等位基因导致产生被认为对运动神经元有毒的蛋白质。大多数病例，即剩余的90％-95％，好像自然地发生并且没有可以确认的模式。因此，ALS似乎能在任何时候侵袭任何人。几乎没有或不存在有效的治疗。
发明内容
因此，已经出现了对改善或消除神经变性过程或疾病(包括但不限于ALS)进展的组合物和方法的需求。
本公开内容涉及改善或治疗神经变性过程或疾病的至少一个症状的组合物和方法。例如，在一些实施方案中，本公开内容提供改善或消除神经变性过程或疾病进展的组合物和方法。在本公开内容的一些实施方案中，可向患有进行性神经变性病症的对象施用澄清稳定的胆汁酸溶液。根据一些实施方案，胆汁酸溶液可进一步包含另外一种药物(例如利鲁唑)。在一些实施方案中，可向患有肌萎缩性侧索硬化症的对象施用本公开内容的胆汁酸溶液。根据一些实施方案，胆汁酸和利鲁唑共施用可产生超过单独施用两种药物的惊人地改善结果。在一些实施方案中，本公开内容的胆汁组合物和利鲁唑共施用可降低一些实施方案中利鲁唑的毒性或副作用。
本公开内容的组合物可包含(1)胆汁酸、胆汁酸衍生物、胆汁酸盐或与胺缀合的胆汁酸，(2)水，和(3)足够量的水溶性淀粉转化产物，使得胆汁酸和淀粉转化产物在选定pH范围内的任何pH值保持在溶液中。
本公开内容还涉及一种组合物，其包含(1)胆汁酸、胆汁酸衍生物、胆汁酸盐或与胺缀合的胆汁酸，(2)水，和(3)足够量的水溶性非淀粉多糖，使得胆汁酸和多糖在选定pH范围内的任何pH值保持在溶液中。
本公开内容进一步涉及一种药物组合物，其包含(1)胆汁酸、胆汁酸衍生物、胆汁酸盐或与胺缀合的胆汁酸，(2)水，(3)药学上适量的药物化合物，和(4)足够量的水溶性淀粉转化产物或水溶性非淀粉多糖，使得胆汁酸、药物化合物和碳水化合物在选定pH范围内的任何pH水平保持在溶液中。根据一些非限定性实施方案，所述药物化合物可以是当施用给患有神经变性疾病的对象时具有有益作用的任何药物。根据本公开内容的一个非限定性实施方案，所述药物化合物可以是利鲁唑或药学活性或可活化的利鲁唑代谢物、前药、衍生物或类似物。
本公开内容进一步涉及胆汁酸组合物的溶液剂型。这些溶液剂型的优点包括改善了胆汁酸生物利用度及其可吸收性。溶液剂型的其他优点包括改善了药物化合物生物利用度及其可吸收性。
在本公开内容的一些实施方案中，提供了一种组合物，其包含(1)胆汁酸、胆汁酸衍生物、胆汁酸盐或与胺缀合的胆汁酸，(2)水，和(3)足够量的碳水化合物，使得胆汁酸成分和碳水化合物在选定pH范围内的任何pH保持在溶液中，其中所述碳水化合物是水溶性淀粉转化产物和水溶性非淀粉多糖的组合。在含有可溶性非淀粉多糖和高分子量淀粉转化产物的实施方案中，各自的量是一定的，使得它们在组合物中组合在一起时足够使如果存在的胆汁酸成分、高分子量淀粉转化产物、可溶性非淀粉多糖和药物化合物在选定pH范围内的任何pH值保持在溶液中。
在本公开内容的一些实施方案中，提供了一种组合治疗组合物，其可提高对药物的反应强度或药物功效。更具体而言，向患有神经变性病症的对象施用含有胆汁酸和利鲁唑的本公开内容的组合物可具有大于单独施用两种药物的相加作用。
部分地参考下述说明和附图，可了解本公开内容的一些具体实施方案，其中图1A是预计寿命并且以动物死亡时的存活时间百分率表示其结果；图1B是转杆试验并且以每周(直到死亡时)它们从杆上滑落之前，在杆上的保留时间表示其结果；图2是显示野生型细胞、A4V细胞和G93A细胞的细胞存活率检测结果的条形图，其中所述细胞是未处理的(左面组)或用200nM本公开内容的溶解的UDCA溶液培养(中间组)，或用20μM本公开内容的溶解的UDCA溶液培养(右面组)；图3是显示野生型细胞、A4V细胞和G93A细胞的细胞存活率检测结果的条形图，其中所述细胞是未处理的(左面组)或用500μM S-亚硝基谷胱苷肽(GSNO；中间组)培养，或用500μM GSNO培养，随后用20μM本公开内容的UDCA溶液培养(右面组)。
图4A是显示未处理的A4V细胞(对照细胞)的显微图；图4B是显示用500μM S-亚硝基谷胱苷肽(GSNO)培养的A4V细胞的显微图；
图4C是显示用500μM GSNO培养，接着用20μM本公开内容的溶解的UDCA溶液培养的A4V细胞的显微图；图4D是显示未处理的G93A细胞的显微图；图4E是显示用500μM GSNO培养的G93A细胞的显微图；和图4F是显示用500μM GSNO培养，接着用20μM本公开内容的溶解的UDCA溶液培养的G93A细胞的显微图；具体实施方式
约85％-90％的成年期发病的ALS患者没有所述疾病的家族史。这种明显地随机或偶然的事件已导致一些从业者将这些病例确认为散发性ALS(SALS)。相比较，在约10％-15％的患者中，ALS可作为常染色体显性病症遗传。这些病例已被确认为家族性ALS(FALS)。在约五分之一的FALS病例中，突变基因是细胞质酶，即Cu/Zn超氧化物歧化酶-1(SOD)。Cu/Zn SOD中90个以上的突变已被确认并且横跨30个位点。这些突变可引起新的导致FALS的不良功能，而不仅仅是消弱基因产物的正常功能。例如，在利用过度表达突变型人Cu/Zn SOD(A4V、G93A、G85R、G37R)的转基因小鼠的试验中，SOD1活性的丧失与疾病的发作或严重程度无关。
具有SOD1突变的FALS患者的症状和病理与SALS患者很像。表达突变型SOD1的小鼠的运动神经元临床进程和病理改变也与在SALS患者中发现的显著相似，表明了SALS和FALS神经变性机制可能具有共同的成分。线粒体在调节细胞生命和死亡的许多代谢及凋亡途径中起关键作用。线粒体还是内在凋亡级联的起始位点，其可被通过caspase依赖或非caspase依赖方式起作用的促凋亡因子的释放而激活。线粒体功能障碍可直接参与ALS的发病机理。线粒体功能障碍通过使运动神经元易感染钙介导的兴奋毒性、增加活性氧类物质的生成和/或启动内在凋亡途径从而引起运动神经元死亡。
线粒体功能障碍可导致促凋亡因子例如细胞色素C、凋亡诱导因子(AIF)以及endo G从单个线粒体的量子释放，这可能响应局部钙介导的毒性，例如，在兴奋性突触情况下。这种局部毒性可引起亚细胞区室例如树突分枝或轴突分枝的死亡。这种亚细胞区室变性可能不足以引起细胞立即死亡，但是可在一段时间内扩散到细胞体。与这种情况一致，在ALS中，运动神经元死亡之前，轴突从末端到近端方向(往回死亡(dying back))变性并且树突开始萎缩。由于神经元具有复杂的亚细胞分枝，这种细胞死亡机制可能是神经变性独有的，并且与其它细胞类型中的典型细胞死亡机制相比，其进展可能相对较慢。因此，这可能是死亡过程中的任何时间，只有少数细胞实际上死于凋亡。
可在细胞培养和转基因小鼠模型中研究SOD1突变引起的运动神经元变性。体外分析中，在错义突变中，例如人Cu/Zn超氧化物歧化酶基因(hSOD1)中的G93A(93位甘氨酸变成丙氨酸)和A4V(4位丙氨酸变成缬氨酸)，可观察到扩散性和渐进性运动神经元死亡。例如，使用MTT分析和台盼蓝染色评价神经元分化后24小时的野生型、G93A以及A4V hSOD1的细胞存活率。存活率随时间显著降低。在野生型细胞中，神经元分化后48小时，存活率显著降至(85.91±9.08％)(P＜0.05)，神经元分化后72小时，存活率显著降至59.41±13.54％(P＜0.01)。神经元分化后24小时，与野生型细胞(100±6.97％)相比较，G93A(63.71±6.25％)以及A4V细胞的存活率(58.85±7.83％)下降更多。神经元分化后48小时，G93A细胞的存活率降至23.12±8.96％，A4V细胞的存活率降至20.79±8.07％(P＜0.01)。神经元分化后72小时，这些突变细胞几乎全部死亡，存活率约为0％。这些结果表明hSOD1中G93A或A4V突变使得运动神经元更脆弱。根据这些结果，在一些实施方案中，可在约24小时进行根据本公开内容进行的分析，以避免大幅度降低存活率，这可能在更晚的时间点出现。
转基因小鼠表达G93A或A4V出现了严重的运动神经元变性综合征，不管SOD活性正常或超出正常。相比较，这些症状可能不出现在Cu/Zn SOD敲除或过表达的小鼠中。
一氧化氮(NO)可在中枢神经系统的生理和病理过程中起作用，线粒体可能是脑中NO毒性的主要靶。NO可与超氧阴离子相互作用形成反应性过氧亚硝酸阴离子，所述反应性过氧亚硝酸阴离子可通过氧化损伤、干扰能量代谢、钙稳态、以及线粒体功能引起细胞死亡。这种毒性可被NOS抑制剂和一氧化氮清除剂即过氧亚硝酸阴离子和羟基自由基清除剂阻止。
S-亚硝基谷胱苷肽(GSNO)可以是有用的NO供体，其可在生理条件下缓慢并自发地释放NO。GSNO可以是体内的NO储库和/或转运工具。GSNO代谢酶可从细菌到人进行保存。氧化应激过程中在内皮细胞和星形胶质细胞中可产生内源性GSNO，可能位于大鼠的小脑中。因此，GSNO可能是内源性NO储库(reservoir)并在脑中起到一种或多种作用。有趣的是，当用GSNO处理细胞时，可观察到显著的凋亡。
与野生型蛋白质相比较，一些FALS突变型Cu/Zn SOD酶可在体外引起过氧化物酶活性显著升高。过氧亚硝酸阴离子，它是超氧阴离子(O2)和一氧化氮(NO)的产物，与突变型SOD的Cu2+反应，产生硝离子，这导致蛋白质硝化以及后来的神经毒性；ALS患者的运动神经元显示硝基酪氨酸免疫反应性升高。过氧化物酶活性升高可增加损伤神经元的羟基自由基的生成。
在一些实施方案中，本公开内容的胆汁酸组合物可缺少现有的UDCA商业剂型的一个或多个不利特征。此外，在一些实施方案中，本公开内容的胆汁酸组合物可改善和/或治疗ALS和/或晚期ALS的至少一个症状。根据本公开内容的一些实施方案，胆汁酸剂型可适用于或能适用于口服或胃肠外施用。在一些实施方案中，本公开内容的胆汁酸组合物可包含UDCA完整分子和水溶性淀粉转化产物(例如，淀粉水解的产物)。根据本公开内容的一些实施方案，胆汁酸组合物可溶解在水中并可在任意pH值保持在水溶液中而不沉淀。
在一些实施方案中，UDCA在本公开内容的溶液中的溶解度可高于商业UDCA的约3,000倍(0.15mol对比0.05mmol)并且可高于TUDCA300倍。在一些实施方案中，本公开内容的溶液向血液、脑、胃、十二指肠、空肠、回肠和/或结肠递送溶解的UDCA。在一些实施方案中，口服和胃肠外剂型可包含，例如，500mg UDCA并且可具有高于现有的商业UDCA形式的至少8倍的Cmax，短于现有的商业UDCA形式的约4-6倍的Tmax。
此外，根据一些实施方案，本公开内容的胆汁组合物可在任意pH值不含有任何沉淀，并可起到全身药物的作用。根据一些实施方案，溶液可与一种或多种药物化合物同时施用(例如，治疗活性的抗ALS的药物化合物)。在一些实施方案中，本公开内容的胆汁组合物与另一种药物化合物一起施用，可以(a)增加对所述药物化合物的响应强度，(b)增加所述药物化合物的功效，(c)降低所述药物化合物的所需剂量，和/或(d)降低所述药物化合物的毒性。根据施用途径和时间，还可单独地施用本公开内容的溶液。
在一些实施方案中，本公开内容的溶液可用于治疗或改善ALS疾病和/或晚期ALS疾病。例如，本公开内容的溶液可包含降低运动神经元死亡的药物化合物，例如对氨基水杨酸异烟肼(抑制结核菌药)、苄噻嗪(利尿剂、抗高血压药)、氢化泼尼松(糖皮质激素)、薄荷醇局部止痛剂(antipuritic)、萘磺酸甲苄咔啉(H1，抗组胺剂)、三氯噻嗪(利尿剂、抗高血压药)、土霉素(抗菌药)、硫酸魁蛤素(Arcaine sulfate)(NOS抑制剂，NMDA抑制剂，抗原虫剂)、红霉素(抗菌药)、谷胱甘肽(重金属中毒，抗氧化剂)、三甲呋豆素(黑化剂(Melanizing agent)，抗银屑病药)、盐酸布酚宁(外周血管扩张剂)、去甲西泮(镇静剂，弱安定剂)、盐酸嘧啶二胺(抗组胺剂)、丙戊酸钠(抗惊厥剂)、氨基比林(退热药，镇痛药)、磺胺甲二唑(抗菌药)、氟哌利多(精神抑制药)、2-硫脲嘧啶抗甲状腺剂(抑制药)、犬尿烯酸(维生素B缺乏疾病的营养品)、夫西地酸(抗菌药)、亚叶酸钙(抗贫血药、叶酸拮抗剂的解毒剂)、硫酸司巴丁(催产剂)、苦杏仁苷(抗炎药，试验用抗肿瘤药)、盐酸丙吗卡因(麻醉药、局部)、呋塞米(利尿剂、抗高血压药)、双硝米特(抗原虫剂)、布地缩松(抗炎药)、夫洛丙酮(解痉药)、氟氢缩松(糖皮质激素，抗炎药)、N-甲酰甲硫氨酰苯丙氨酸(趋化肽)、硫喷妥钠(麻醉药)、达克普隆(抗消化性溃疡药)、溴苯乙胺(去甲肾上腺素释放抑制剂)、头孢孟多酯钠(抗微生物药)、丙氧咪唑(oxybendazole)(抗蠕虫药)、环亮氨酰甘氨酸(抑制麻醉剂引起的多巴胺R敏感性)、达者仑钠(骨骼肌松弛药)、四氢对醌(角质层分离剂)、哌嗪(抗蠕虫药)、七叶苷(Aesculin)(抗炎药)、炔孕酮(孕激素)、二甲双酮(抗惊厥剂)、灰黄霉素(抗真菌药，抑制中期有丝分裂，与聚合微管和相关蛋白相互作用)、醋胺沙罗(止痛剂，退热剂)、盐酸槟榔次碱(GABA激动剂)、二盐酸腐胺(鸟氨酸脱羧酶抑制剂，细胞生长因子)、盐酸依米丁(抗阿米巴药)、抑制RNA、DNA和蛋白质的合成)、氨苯磺胺(抗菌药)、含羞草碱(脱毛剂)、乙酰胆碱(心抑制剂，缩瞳剂，外周血管扩张剂)、甲磺酸碘磷定(胆碱酯酶复活药)、赖氨酰色氨酰-赖氨酸(醋酸盐结合DNA)、海可皂苷元(类固醇前体)、醋酸氢化泼尼松(糖皮质激素)、阿苯哒唑(抗蠕虫药)、氢氯噻嗪(利尿剂)、盐酸去甲金霉素(抗菌药)、呋喃西林(局部抗感染)、双氯青霉素钠(抗菌药)、α-生育酚(维生素E缺乏)、盐酸四环素(抗阿米巴药，抗菌药，抗立克次氏体药)、非诺贝特(抗高脂血症药)、丙磺舒(促尿酸尿制剂)、维A酸(角质层分离剂)、对乙酰氨基酚(止痛药，退热药)、盐酸白毛莨分碱(强心剂，子宫内稳态)、d[-精氨酸-2]醋酸高托尔芬(止痛药，NMDANMDA激动剂)、头孢美唑钠(抗微生物药)、病毒唑(抗病毒药)、O-苄基-L-丝氨酸(氨基酸衍生物)、印防己毒素(兴奋剂，惊厥剂，GABAR拮抗剂，鱼毒素)、羟乙卡因(局部麻醉剂)、磺胺噻唑(抗菌药)、三氯氮芥(抗肿瘤药，细胞毒剂)、萘丁美酮(抗炎药)、氯霉素(抗菌药，抗立克次氏体药，抑制蛋白质合成)、利鲁唑、人参及其提取物，甘草甜素和甘草酸、carboquinone的衍生物、辅酶Q10、肌酸、胰岛素样生长因子-1、米诺环素、mecamserin、扎利罗登(xaliproden)、加巴喷丁、右美沙芬、他仑帕奈(talampanel)、IL-1、TR-500、丙环司坦、脑源性神经营养因子、巴氯芬、替扎尼定、苯二氮类、格隆溴铵、阿托品、奎宁、苯妥英和吗啡。
喂食给大鼠的疏水性胆汁盐可引起肝脏中的凋亡。此外，共施用熊去氧胆酸(UDCA)可抑制体内肝细胞凋亡。肝细胞和非肝源细胞的凋亡都可被多种因素例如疏水性的酸、乙醇、转化生长因子-α、Fas激动性抗体或冈田酸诱导。令人惊讶地，UDCA可通过调节线粒体膜紊乱、Bax转位和/或细胞色素C释放来减少凋亡并表现细胞保护作用。
熊去氧胆酸(3□-7□-二羟基-5□-胆烷酸；UDCA)是无毒的亲水性胆汁酸并且通常存在于人胆汁中，虽然浓度低，仅为总胆汁酸的约3％。UDCA是美国食品与药品监督管理局(FDA)批准的唯一可用于治疗多种胆汁郁积病症的药物。
UDCA是熊胆汁的主要成分，可用作治疗及预防许多类型肝病的药剂。目前，其医疗用途包括溶解射线可透的胆石和多种胆汁郁积病症，其中包括原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、妊娠期肝内胆汁淤积症、胆囊纤维化相关的肝病、多种小儿肝病、和肝脏的慢性移植物抗宿主病。
UDCA的药理学作用可包括以剂量依赖方式用UDCA替换和/或置换有毒的胆汁酸、剂量依赖方式的细胞保护作用、剂量依赖方式的细胞膜稳定作用/保护作用，剂量依赖方式的抗凋亡作用、剂量依赖方式的细胞内糖皮质激素受体激活引起的免疫调节作用、抑制NF-κB以及抑制一氧化氮合酶引起的抗炎作用、以剂量依赖方式刺激胆汁分泌、以剂量依赖方式刺激胞吐作用和插入小管膜转运蛋白。
实际上UDCA在pH 1-8是不溶解的。其质子化形式的溶解度为约0.05mM。其与牛磺酸缀合的代谢物(TUDCA；0.45mM)的溶解度高于UDCA的溶解度约10倍。此外，TUDCA是仅有的当质子化时溶解度相对较低的胆汁酸。口服施用后，由于晶体UDCA是不溶解的，约30％-60％的UDCA通过非离子型被动扩散沿着空肠和回肠段被吸收并通过主动转运机制被回肠吸收，并且由于结晶状UDCA的不溶性，只有少量(被吸收剂量的20％)在结肠吸收，由于UDCA的非离子型分子的水溶性低并且亲脂性比离子型胆汁盐类高，使得其溶解非常慢并且溶解不完全，因此可分配到生物膜中。
一旦被肝细胞吸收，UDCA可与TUDCA和GUDCA相缀合，后两者是人分泌的胆汁酸并通过肝脏首过清除排泄。因此，它们在体循环中的血液水平非常低。胆汁酸经历广泛的肝循环，或游离UDCA还可通过肝细胞分泌到胆汁中，在此它可以被胆管细胞主动和有效地重吸收。UDCA和GUDCA通过主动和被动转运机制被吸收，而与牛磺酸缀合的UDCA(TUDCA)可在回肠末段被主动转运。
在一些实施方案中，UDCA每日剂量超过10±12mg/kg可能不再进一步增加其胆汁中的比例，这是由于大量UDCA可通过小肠细菌的7-酮-石胆酸生物转化成CDCA。作为替代，UDCA可通过7β-羟基的差向异构作用转化成CDCA并进一步转化为石胆酸(LCA)。因此，随UDCA剂量的增加，UDCA的吸收降低。
在一些实施方案中，施用本公开内容的组合物可在肝脏中、体循环中和/或脑中达到足量的UDCA以产生治疗作用。在一些实施方案中，本公开内容的溶液显示可显著增加UDCA的水溶性、增加膜通透性、防止UDCA差向异构成CDCA。
在疾病早期阶段，在睡眠时通过给予呼吸治疗以及在疾病进展中和吞咽变得更加困难时通过维持良好营养的替代饮食法可提高ALS患者的存活时间和生活质量。迄今为止，仅仅利鲁唑这一种药物已经被美国食品与药品监督管理局批准用于治疗ALS。然而，接受利鲁唑的患者的寿命仅仅延长几个月。干细胞和基因治疗的相关研究是具有希望的新领域，但是还没有加强对治疗医师可行的选择。
不受任何特定作用机制的限制，本公开内容提供了可改善神经变性过程的澄清、稳定的可溶解胆汁酸的溶液。在本公开内容的一些实施方案中，所述组合物包含利鲁唑。利鲁唑(已得到FDA批准的治疗ALS的唯一药物)可通过降低信号转导过程中谷氨酸释放量起作用。已经在两个主要的对照临床试验中初步证实了利鲁唑的功效。该药物的最常见的不良事件是恶心、呕吐、厌食、腹泻、虚弱、嗜睡、眩晕、口感异常、腹部疼痛和头晕眼花。其中，在接受较高剂量的患者中，眩晕、腹泻、恶心、口感异常和厌食似乎更常见。在开始利鲁唑治疗的3个月内，通常观察到血清转氨酶水平升高。然而，这些水平在治疗2-6个月之后消退。建议在利鲁唑治疗的第一年监测血清转氨酶水平。
胆汁酸可用作细胞内信号转导剂，其调节细胞运输、改变细胞内Ca2+水平以及激活细胞表面受体。熊去氧胆酸(UDCA)是已经证实具有治疗肝胆管病症临床疗效的亲水性胆汁酸。UDCA在体内可迅速与甘氨酸或牛磺酸相缀合以来分别产生甘氨熊去氧胆酸和牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)。UDCA及其衍生物和缀合物可通过抑制凋亡起到细胞保护剂的作用。
由于谷氨酸神经毒性可通过凋亡导致细胞死亡，阻断凋亡可减慢急性和慢性神经变性过程。在本公开内容的一些实施方案中，胆汁组合物阻断P53介导的毒性作用。在本公开内容的一些实施方案中，胆汁组合物阻断氧化过程介导的毒性作用。
本公开内容涉及一种水溶液，其包含(i)一种或多种可溶性胆汁酸、水溶性胆汁酸衍生物、胆汁酸盐或与胺缀合的胆汁酸(全体称为“胆汁酸”)，(ii)水，和(iii)足够量的一种或多种水溶性淀粉转化产物或或水溶性非淀粉多糖，以产生在所需pH范围内的任意pH值都不产生沉淀的溶液。所述组合物可包含自身具有药物效力的胆汁酸或胆汁酸盐。本公开内容的配方可用作递送药物材料的载体、佐剂或增强剂，所述药物材料在所需pH范围内保持溶解在本公开内容的组合物中。作为替代，根据本公开内容的一些实施方案，所述组合物可包含不完全溶解的非胆汁酸药物。
在一些实施方案中，所述胆汁酸和所述碳水化合物在从酸性到碱性的任意pH值保留在溶液中而不沉淀可能是本公开内容的一个优点。这些胆汁酸水溶液体系基本上没有沉淀或颗粒。本公开内容的又一个优点是，添加强酸或碱之后甚至在50℃的加速条件储存下观察几个月后，所述水溶液体系证实没有例如澄清度、颜色或气味变化的物理外观变化。
在本公开内容的一些实施方案中，口服施用所述胆汁酸水溶液体系时，其通过胃肠道到达小肠，暴露于酸性胃液和碱性肠液而不产生胆汁酸沉淀。这些溶解的胆汁酸配方证实小肠中完整的溶液体系可被有效并完全吸收，并因此经历肠肝循环。根据本公开内容的一个实施方案，某些胆汁酸的羧酸侧链可质子化(非离子化)、是离子化的或者是简单的羧酸，胆汁酸溶解性(例如沉淀和物理外观的变化)均受其影响。
胆汁酸羧酸侧链的离子化状态可显著影响胆汁酸在一些水溶液体系中的疏水性和亲水性。在本公开内容的一些实施方案中，可通过调整pH值操纵那种离子化状态来控制胆汁酸的毒性、吸收和两亲性。一种或多种胆汁酸可溶解在这些水溶液体系中作为治疗活性剂、药物佐剂、药物载体或药物溶解度增强剂。这些水溶液体系可制备成口服消费品、灌肠剂、漱剂、含漱剂、鼻制剂、耳制剂、注射剂、冲洗剂、局部用皮肤制剂、其它局部用制剂和化妆品制剂，它们具有期望的pH而且长时间后没有沉淀或物理外观变性的缺点。
可溶性胆汁酸是任意类型的水溶性胆汁酸。胆汁酸盐是胆汁酸的任意水溶性盐。胆汁盐展示出更强的溶解磷脂和胆固醇的能力并且因此是较好的清洁剂。越疏水的胆汁盐，可能越对膜有害，包括体内和体外。通过上述的胆汁酸和胺反应可形成胆汁酸的水溶解的盐，所述胺包括但不限于脂肪族游离胺例如曲恩汀、二乙撑三胺、四乙烯五胺；碱性氨基酸例如精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸；氨；氨基糖例如D-葡糖胺、N-烷基葡糖胺；季铵衍生物例如胆碱；杂环胺例如哌嗪、N-烷基哌嗪、哌啶、N-烷基哌啶、吗啉、N-烷基吗啉、吡咯烷、三乙醇胺和三甲醇胺。根据本公开内容，胆汁酸的水溶性金属盐、胆汁酸和环糊精的包合物及其衍生物和水溶性O-磺化胆汁酸也被包括为可溶性胆汁酸盐。
根据本公开内容的一些实施方案，可溶性胆汁酸衍生物可以是与相应的未衍生化胆汁酸相比，能一样溶解在水溶液中或更易溶解在水溶液中的那些衍生物。胆汁酸衍生物包括但不限于在胆汁酸的羟基和羧酸基与其它官能团形成的衍生物，所述官能团包括但不限于卤素和氨基。可溶性胆汁酸可包括胆汁酸的游离酸形式和HCl、磷酸、柠檬酸、乙酸、氨或精氨酸的一种组合的水溶液制剂。
根据可用于本公开内容的教导，可以使用的胆汁酸包括但不限于熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、胆酸、猪去氧胆酸、去氧胆酸、7-氧代石胆酸、石胆酸、碘代去氧胆酸、iocholic acid、牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、牛磺石胆酸、甘氨熊去氧胆酸、牛磺胆酸、甘氨胆酸和它们在甾核上羟基或羧酸基处的衍生物。
在本公开内容的一些实施方案中，一个优点可能在于，在溶液中递送胆汁酸达到比现有的商业制剂更高的体内胆汁酸水平。因此，与先前的制剂相比，可更全面地实现胆汁酸的治疗潜能。其中胆汁不完全溶解的现有制剂达到的体内胆汁酸水平较低并且需要施用大量的胆汁酸。由于胆汁酸完全溶解在本发明的制剂中，因此可实现更高的体内胆汁酸水平，甚至在施用较低剂量的情况下。
在本公开内容的一些实施方案中，多种胆汁酸可用于单一配方中。两种或多种不同疏水活性的胆汁盐的混合物可起到中间疏水活性的单一胆汁盐的作用。因此，两种不同疏水活性的胆汁酸混合物的清洁性能和毒性通常介于单个的成分之间。
两种或多种不同疏水活性的胆汁盐的混合物可起到中间疏水活性的单一胆汁盐的作用。因此，两种不同疏水活性的胆汁酸混合物的清洁性能和毒性通常介于单个的成分之间。
适用于本公开内容的碳水化合物包括水溶性淀粉转化产物和水溶性非淀粉多糖。根据本公开内容的一些实施方案，水溶性淀粉转化产物包括在各种pH值条件下直接由淀粉部分或不完全水解得到的碳水化合物。非限定性实例包括麦芽糊精、糊精、液体葡萄糖、玉米糖浆固体(液体葡萄糖干粉)和可溶性淀粉(例如麦芽糊精或玉米糖浆固体)。在一些实施方案中，可以使用MALTRINM200(玉米糖浆固体)和MALTRINM700(麦芽糊精)，可以使用GPC，Grain ProcessingCorporationof Muscatine，Iowa生产的上述两种物质。为了该实施方案的目的，术语“玉米糖浆”包含玉米糖浆和液体葡萄糖。如果淀粉转化产物是聚合的，聚合物具有至少一个还原末端和至少一个非还原末端并且可以是直链的或支链的。分子量可从约100个质量单位到超过106个质量单位。高分子量水溶性淀粉转化产物是分子量超过105的那些。
根据本公开内容的一些实施方案，水溶性非淀粉多糖可在各种pH条件下通过多种水解或合成机制得到。非限定性实例包括葡聚糖、瓜尔胶、果胶、不能消化的可溶性纤维。如果是聚合的，聚合物具有至少一个还原末端和至少一个非还原末端。所述聚合物可以是直链或支链的。分子量从约100个质量单位到超过106个质量单位。优选分子量超过105个质量单位。
本公开内容的实施方案中所用的高分子量水溶性淀粉转化产物和/或可溶性非淀粉多糖的量至少是使得制剂中所选的胆汁酸溶解在所需浓度和所需pH值范围可溶的量。在本公开内容的一些实施方案中，防止UDCA沉淀所需的麦芽糊精和UDCA的近似最小重量比是6∶1(即100mL水中每0.2g UDCA需要1.2g麦芽糊精，每1gUDCA需要6g，以及每2gUDCA需要12g)。在本公开内容的一些实施方案中，麦芽糊精的近似最小量是每200mg鹅去氧胆酸需要30g，每200mg 7-酮石胆酸需要12g，每200mg胆酸需要10g，每200mg去氧胆酸需要50g。在本公开内容的一些实施方案中，防止胆汁酸从本公开内容的水溶液剂型中沉淀所需的液体葡萄糖(市售淡玉米糖浆(light corn syrup))和UDCA的近似最小重量比是约25∶1(即100mL水中每500mg UDCA需要12.5g液体葡萄糖，200mL水中每1g熊去氧胆酸需要25g)。在本公开内容的一些实施方案中，防止胆汁酸从本公开内容的水溶液剂型中沉淀所需的液体葡萄糖干粉(玉米糖浆固体，例如MALTRINM200)的近似最小量是100mL水中每1g熊去氧胆酸需要30g液体葡萄糖干粉，200mL水中每2g熊去氧胆酸需要约60g。在本公开内容的一些实施方案中，防止胆汁酸从本公开内容的水溶液剂型中沉淀所需的可溶性非淀粉多糖的近似最小量是100mL水中每500mg熊去氧胆酸需要50g瓜尔胶，100mL水中每500mg熊去氧胆酸需要80g果胶。高分子量水溶性淀粉转化产物或可溶性非淀粉多糖的最小需要量主要由溶液配方中胆汁酸的绝对量决定，而不是由浓度决定。
在本公开内容的一些实施方案中，除了淀粉转化产物和/或非淀粉多糖以外，配方可包含环糊精。作为替代，在一些实施方案中，本公开内容的组合物可不含有环糊精。
在本公开内容的一些实施方案中，所述配方进一步包含膳食纤维。膳食纤维的非限定性实例包括瓜尔胶、果胶、洋车前子(psyllium)、燕麦胶、大豆纤维、燕麦麸、玉米麸、纤维素和麦麸。
在本公开内容的一些实施方案中，所述配方进一步包含乳化剂。对于本公开内容的目的，术语“乳化剂”包含乳化剂和悬浮剂。乳化剂的非限定性实例包括瓜尔胶、果胶、阿拉伯胶、角叉菜胶、羧甲基纤维素钠、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯醇、聚维酮、黄蓍胶、黄原胶、脱水山梨酸酯(Sorbian ester)。
所述配方不产生其胆汁酸、淀粉转化产物、可溶性非淀粉多糖或其药物化合物沉淀的选的pH范围可以是水溶液体系可达到的pH水平的任意范围。优选地这个范围为约pH1-约pH14，更优选为约pH1-约pH10。还更优选范围是水溶液体系中可达到的pH水平范围的任意亚组，在所述范围内根据施用方法，所述水溶液体系足够使得药物配方从制剂到施用，到身体吸收都保持在溶液中。因此，所述组合物可用作药物配方，其中所述药物化合物在口腔、胃和肠道的常规pH中保持在溶液中，而不沉淀。在本公开内容的一些实施方案中，虽然胆汁酸在酸性条件下通常不溶解，但是胆汁酸在酸性条件下仍作为游离胆汁酸保持溶解状态。
在本公开内容的一些实施方案中，所述药物是利鲁唑。其它药物化合物的非限定性实例包括激素、激素拮抗剂、止痛药、退热药、抗炎药、免疫活性药物、抗肿瘤药物、抗生素、抗炎剂、拟交感神经药、抗感染药、抗肿瘤剂和麻醉剂。另外的非限定性实例包括靶向或影响胃肠道、肝脏、心血管系统和呼吸系统的药物。药物化合物的另外非限定性实例包括胰岛素、肝素、降钙素、氨苄西林、善得定、枸橼酸西地那非、骨化三醇、双氢速甾醇、阿朴吗啡(ampomorphine)、育亨宾(yihimbim)、曲唑酮、阿昔洛韦、盐酸金刚胺、盐酸金刚乙胺、西多福韦(cidofovir)、甲磺酸地拉韦定、地达诺新、泛昔洛韦、forscarnet sodium，氟尿嘧啶、更昔洛韦钠、碘苷、干扰素-α，拉米夫定，奈韦拉平、喷昔洛维、利巴韦林、司他夫定、三氟尿苷、盐酸伐昔洛韦(valacyclovir HCl)、扎西他宾、齐多夫定、硫酸莫地那韦、利托那韦、甲磺酸奈非那韦、甲磺酸沙奎那韦、d-青霉胺、氯喹、羟氯喹、金硫葡糖、硫代苹果酸金钠、金诺芬、左旋咪唑、DTC、异丙肌苷、甲基肌苷单磷酸盐、胞壁酰二肽、二氮嗪、盐酸肼苯哒嗪、米诺地尔、双嘧达莫、盐酸苯氧丙酚胺、烟酸、盐酸布酚宁、酚妥拉明、甲磺酸多沙唑嗪、盐酸哌唑嗪，盐酸特拉唑嗪(terazocin HCl)、盐酸可乐定、硝苯地平、脉导敏、胺碘酮、乙酰水杨酸、维拉帕米、地尔硫、尼索地平、伊拉地平、苄普地尔、硝酸异山梨酯、戊四硝酯、硝酸甘油、西米替丁、法莫替丁、尼扎替丁、雷尼替丁、兰索拉唑、奥美拉唑、米索前列醇、硫糖铝、盐酸胃复安、红霉素、铋化合物、前列地尔、沙丁胺醇、吡布特罗、硫酸特布他林、沙美特罗、氨茶碱、甘油茶碱、麻黄碱、乙诺那林、新异丙肾上腺素、异丙肾上腺素、间羟异丙肾上腺素、n-docromil、oxy triphylline、茶碱、比托特罗、非诺特罗、布地奈德、氟尼缩松、丙酸倍氯米松、丙酸氟地松、可待因、硫酸可待因、磷酸可待因、氢溴酸右美沙芬、曲安奈德、孟鲁司特钠、扎鲁司特、苯噻羟脲、色甘酸钠、异丙托溴铵、奈多罗米纳苯甲酸盐、盐酸苯海拉明、重酒石酸二氢可待因酮、盐酸美沙酮、硫酸吗啡、乙酰半胱氨酸、愈创木酚甘油醚、碳酸铵、氯化铵、酒石酸锑钾、甘油、水合萜品氢氧化物、棕榈酸考福西利、阿托伐他汀钙、西立伐他汀钠(cervastatin sodium)、氟伐他汀钠、洛伐他汀、普伐他汀钠、斯伐他汀、picrorrhazia kurrva、穿心莲(andrographis paniculata)、辣木(moringa oleifera)、阔荚合欢(albizzia lebeck)、鸭嘴花(adhatavasica)、姜黄(curcuma longa)、苦瓜(momordica charantia)、匙羹藤(gymnema sylvestre)、阿江榄仁(terminalia arjuna)、印楝(azadirachtaindica)、心叶青牛胆(tinosporia cordifolia)、甲硝唑、两性霉素B、克霉唑、氟康唑、卤普罗近、酮康唑、灰黄霉素、伊曲康唑、盐酸特比萘酚、硝酸益康唑、咪康唑、制霉菌素、硝酸奥昔康唑、硝酸硫康唑、盐酸西替利嗪、地塞米松、氢化可的松、氢化泼尼松、可的松、儿茶素及其衍生物、甘草甜素、甘草酸、倍他米松、ludrocortisone acetate、氟尼缩松、丙酸氟地松甲基泼尼松龙、生长激素释放抑制因子、赖脯胰岛素(lispro)、胰高血糖素、胰岛素原、不溶性胰岛素、拜糖平、氯磺丙脲、格列吡嗪、格列本脲、盐酸二甲双胍、瑞格列奈、甲磺丁脲、氨基酸、秋水仙碱、磺吡酮、别嘌呤醇、吡罗昔康、托美汀钠、吲哚美辛、布洛芬、双氟尼酸、甲灭酸、萘普生和曲恩汀。
可包含在配方中的药物化合物的另外实例是加入到所述配方中时能保持溶解的任意化合物。当配方中含有另外的药物化合物，溶液中的胆汁酸可用作佐剂、载体、或某些治疗活性剂的溶解度的增强剂，其包括但不限于胰岛素(pH7.4-7.8)、肝素(pH5-7.5)、降钙素、氨苄西林、金刚烷胺、金刚乙胺、西地那非、硫酸新霉素(pH5-7.5)、阿朴吗啡、育亨宾、曲唑酮、利巴韦林、紫杉醇及其衍生物、视黄醇和维A酸，并且在酸性和/或碱性条件下是可溶解的和稳定的，并可根据需要添加到本公开内容的某些胆汁酸浓度的水溶液剂型中。某些治疗活性剂包括但不限于盐酸二甲双胍(pH5-7)、盐酸雷尼替丁、西米替丁、拉米夫定、盐酸西替利嗪(pH4-5)、金刚烷胺、金刚乙胺、西地那非、阿朴吗啡、育亨宾、曲唑酮、利巴韦林和地塞米松、氢化可的松、氢化泼尼松、曲安奈德、可的松、烟酸、牛磺酸、维生素、天然氨基酸、儿茶酚及其衍生物、甘草提取物及其主要成分例如甘草甜和甘草酸、水溶性铋化合物(例如酒石酸铋钠)，并可根据需要将在酸性和/或碱性条件下可溶解的和稳定的那些添加到本公开内容的含有熊去氧胆酸的水溶液剂型配方中。
可用pH调节剂实施本公开内容的一些实施方案。非限定性实例包括HCl、H3PO4、H2SO4、HNO3、CH3COOH、柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乳酸、磷酸、eidetic acid和碱。
在本公开内容的一些实施方案中，所述配方可用于治疗人和哺乳动物疾病。本公开内容预期治疗ALS、ALS相关病症和其它神经变性病症。本公开内容的溶液还可用于治疗胃肠道病症、肝病、胆石和高脂血症。肝病的非限定性实例包括酒精性肝病和非酒精性肝病。胃肠道病症的非限定性实例包括慢性胃炎、反流性胃炎和消化性溃疡。非酒精性肝病的非限定性实例包括原发性胆汁性肝硬化、急性和慢性肝炎、原发性硬化性胆管炎、慢性活动性肝炎和肝脏脂肪堆积过多。本公开内容还预期治疗病毒性、细菌性和真菌性疾病。在本公开内容的一些实施方案中，施用配方以治疗和/或根除幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori)感染。在本公开内容的一些实施方案中，施用配方以治疗和/或根除丙型肝炎病毒感染、甲型流感病毒感染、丙型流感病毒感染、1型副流感、仙台病毒、风疹病毒和伪狂犬病病毒。在本公开内容的一些实施方案中，施用配方以治疗急性或慢性炎性疾病。炎性疾病的非限定性实例包括支气管炎、慢性咽炎和慢性扁桃体炎。在本公开内容的一些实施方案中，施用配方以治疗高胆固醇血症。
在本公开内容的一些实施方案中，改进所述配方使得其可作为液体、固体、粉末或片剂施用。在本公开内容的一些实施方案中，所述配方包含在非肠道溶液(例如注射液、溶液剂、糖浆、稠糖浆或糊剂)中。糖浆的非限定性实例是麦芽糊精的浓度小于500g/L的麦芽糊精溶液。糖浆的非限定性实例是麦芽糊精的浓度为500g/L-1.0kg/L，其中包括端值的麦芽糊精溶液。稠糖浆的非限定性实例是麦芽糊精的浓度为1.0kg/L-1.2kg/L，其中包括端值的麦芽糊精溶液。糊剂的非限定性实例是麦芽糊精的浓度大于1.2kg/L的麦芽糊精溶液。
可通过在各种pH和温度水平测量制剂中随时间过去相关胆汁酸浓度来评价本公开内容的剂型配方的稳定性，所述制剂包含可溶性的胆汁酸、高分子量的水溶性淀粉转化产物和水。可根据需要调整各种胆汁酸的保留时间(高效液相色谱)以允许独立地分析复杂样品(即含有多种胆汁酸的样品)中存在的各种胆汁酸。还可通过评价试验溶液的光散射特性进行稳定性试验。此外，还可使用确定的加速试验条件。
对本公开内容的溶液进行的所有稳定性试验是令人满意的，因为HPLC测量的胆汁酸浓度在各种pH水平下随时间没有一点变化。尤其是，检测的所有胆汁酸溶液配方在稳定性试验中显示出极好结果，在试验期间没有沉淀及外观变化。一些配方保持稳定超过2年。尽管添加了在盐酸溶液中稳定并可溶的治疗及化学活性剂，在加速条件的各种pH下，被检测的根据本公开内容的水溶液剂型均没有物理或化学变化。因此，这些水溶液体系可能是非常有价值的治疗活性胆汁酸制剂的药物剂型，和/或药物递送制剂，其中胆汁酸通过在各种pH条件下没有稳定性问题(包括酸性条件下的沉淀)的胶束形成，起到药物佐剂、药物载体、或药物溶解度增强剂的作用。
使用本公开内容的溶液和50μM过氧化氢和/或顺铂处理人神经元细胞。过氧化氢是强氧化剂。顺铂刺激活性氧(ROS)的产生，所述活性氧干扰抗氧化防御体系。然后通过检测MTT还原来分析细胞存活率，细胞增殖和凋亡。使用外源性ROS和H2O2的几个研究尤其显示，将人和大鼠外周血管平滑肌细胞(VSMCs)暴露于相对低水平的氧化应激下，短时间促进细胞生长，而长时间暴露于较高浓度下通过凋亡或坏死导致细胞死亡。
使用MTT分析评价过氧化氢和本公开内容的溶液处理细胞或者过氧化氢处理细胞的细胞存活率。用本公开内容的溶液(0.2mg/ml溶解的UDCA)和过氧化氢(50μM)处理的细胞表现出最高的细胞存活率(与对照100％相比，75％)。而在过氧化氢(50μM)单独处理的细胞中观察到最低的细胞存活率(与对照100％相比，26％)。发现这些结果呈剂量依赖形式。
以同样方法评价顺铂存在下的细胞存活率。在顺铂(20μM)和本公开内容的溶液(1mg/ml可溶性UDCA)处理的细胞中观察到最高的细胞存活率(与对照100％相比，87％)。而在顺铂(20μM)单独处理的细胞中观察到最低的细胞存活率(与对照100％相比，35％)。发现这些结果也呈剂量依赖形式。根据MTT分析，本公开内容的溶液可几乎完全阻断过氧化氢引起的氧化细胞毒性以及可完全阻断顺铂引起的氧化细胞毒性。总之，本公开内容的溶液具有强抗氧化性能并无细胞毒性。
实施例结合下面的实施例可理解本公开内容的一些实施方案。然而，本领域技术人员可容易地了解具体的材料、组合物，所述结果仅仅举例说明本公开内容，而不希望，也不应用于限制本公开内容的范围及其各种实施方案。
实施例1胆汁酸溶液的制备首先将UDCA(60g)溶解在500mL NaOH(6.7g)溶液中制备胆汁酸的贮备液。接下来，向所得的澄清溶液中加入375g麦芽糊精，分步进行强力搅拌。然后通过逐滴加入HCl和高通量超声(750W，20kHz)调节pH至7.0-7.2。然后用注射用蒸馏水将体积调至1.0L。最后，用0.22μGP express plus滤膜在无菌条件下过滤并灭菌所得的澄清溶液。(该过滤对灭菌是重要的，但是由于所述溶液已经是澄清的，所以对于去除颗粒物质是不重要的)。根据标准药房实践制备所需UDCA浓度的这种溶液的稀释液。
实施例2胆汁酸溶液的制备首先将UDCA(25g)溶解在400mL NaOH(2.7g)溶液中制备胆汁酸的贮备液。接下来，向所得的澄清溶液中加入745g麦芽糊精，分步进行强力搅拌。向所得的溶液中加入100mL含有0.95g对羟基苯甲酸甲酯和0.3g亚硫酸氢钠的保存溶液，随后搅拌。然后用药用级水将体积调至1.0L。最后，用适当的过滤装置过滤所得的澄清的溶液。(由于所述溶液已经是澄清的，所以该过滤不是为了去除颗粒物质而进行的)。根据标准药房实践制备所需UDCA浓度的这种溶液的稀释液。
实施例3动物试验转基因大鼠；本实施例所用的转基因动物是携带甘氨酸93-丙氨酸突变(G93A)的杂合性hSOD1。该品系表现出含有拷贝数减少的hSOD1的B6SJL-TgN(SOD1-G93A)1Gur(The Jackson Lab.，Bar Harbor，ME，USA)，购于Jackson实验室。转基因小鼠，其能过表达含有ALS患者中确定的突变的人SOD1基因，形成成人期发病的、进行性动作恶化。这些转基因小鼠被认为是所述疾病的模型并已用于测试延迟疾病进行和死亡率的许多策略。
为了评价本发明对ALS的潜在益处，每周两次口服施用240mg/kg溶解UDCA的本发明溶液，G93A转基因小鼠70天龄时开始并持续到死亡。
预计寿命及其结果；图1显示对照小鼠(n＝8)和经处理小鼠(n＝8)的平均预计寿命。澄清溶液(25mg/kg)将平均存活时间从对照小鼠的134.8天增加到经处理小鼠的146.6天，死亡延迟了13天。这与G93A小鼠的寿命增加8.81％相对应。
旋转棍试验及其结果；使用旋转棍评价运动行为。将小鼠置于棍上，与棍的旋转方向相反，迫使它们保持朝前运动以防止向后从棍上滑落。学习几天后，小鼠能保持在15r.p.m旋转速率的旋转棍上。每周测试小鼠1次。在每次旋转棍试验中每只小鼠进行3次试验，记录滑落前在棍上的保留时间(潜伏期)。从3次试验中选择在棍上的最高停留时间作为运动行为的测量值。
经处理小鼠的运动行为随疾病的发展显著提高，而未处理小鼠的运动行为随疾病的进行下降越来越快。在第112天(p＝0.01)、第119天(0.001)、第126天(p＝0.01)、第133天(p＝0.001)和第140天(p＝0.043)，未处理小鼠和经处理小鼠的运动行为差异非常显著。
结论；70天龄(在SOD1-G93A大鼠中证实是广泛开始进行性细胞骨架改变的阶段)被认为是ALS的临床发作。这些数据证实溶解的UDCA溶液在ALS小鼠模型中显著延长寿命，延迟麻痹的发作并减慢肌肉力量相关功能参数的发展。另外，天龄大于70天的较老模型施用溶解UDCA后运动行为提高，这已证实本发明的溶液可治疗晚期ALS疾病并恢复运动行为。
实施例4细胞存活试验为了评价溶解的UDCA溶液对野生型细胞、G93A细胞和A4V细胞的保护作用，神经元分化后，用含有200nM或20μM的溶解的UDCA溶液处理这些细胞，然后培养24h。使用MTT分析和台盼蓝染色测定溶解的UDCA溶液对野生型细胞、G93A细胞和A4V细胞的保护作用。如图2所示，可用细胞存活的百分率表示细胞存活率。
已知GSNO与细胞凋亡有关。为了评价溶解的UDCA在野生型细胞、hSOD1中含有G93A和A4V突变的细胞中对抗GSNO的抗凋亡作用，用500μM GSNO培养野生型细胞、G93A细胞和A4V细胞24小时以诱导凋亡，然后测定细胞存活率。接下来用20μM溶解的UDCA培养这些被凋亡诱导的野生型细胞、G93A细胞和A4V细胞24小时并使用MTT分析和台盼蓝染色测定细胞存活率。如图3所示，可用细胞存活的百分率表示细胞存活率。
细胞培养将VSC4.1.(腹侧脊髓4.1；运动神经元-神经母细胞瘤杂交细胞)保持在含有Sato′s成分(Sigma，St.Louis，MD)及2％热灭活新生牛血清(HyClone，Logan，UT)的Dulbecco′smodified Eagles培养基/F-12生长培养基(Gibco，Grand Island，NY)中。它们在聚-(L-鸟氨酸)-预涂的培养皿(Falcon，Franklin lakes，NJ)中进行对数生长期生长。细胞铺满后，将细胞以1×10n(n＝4)个细胞/孔的密度铺于96-孔板中(NUNC，Denmark)。对于免疫印迹，将1×10n(n＝5)个细胞接种在100mm培养皿中(Falcon，Franklin Lakes，NJ)。
构建并确定稳定的细胞系将野生型(对照)或突变型(G93、A4V)人Cu/Zn SOD-1 cDNA克隆到pcDNA 3.0的BamHI和EcoRII位点。将不含有插入物的空载体用作对照。细胞被转染(Superfect，Qiagen，Valencia，CA)并维持在含有浓度为400mg/ml的G418(Gibco，GrandIsland，NY)的培养基中。使用抗人SOD1多克隆抗体(Calbiochem，LaJolla，CA)通过Western印迹分析证明人SOD1(WT，突变体)的表达后，将单菌落或混合菌落用于该试验。这些细胞系在与VSC4.1细胞相同的条件下生长。
MTT分析和台盼蓝染色以评价保护作用及其结果；将溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)吸收到细胞内并通过线粒体琥珀酸脱氢酶转化成甲 。因此，甲 的累积直接反映线粒体活性并间接反映细胞存活率。因此，将神经分化的细胞(野生型细胞(对照)、G93A细胞、A4V细胞)以1×10n(n＝4)个细胞/孔的密度铺于96-孔板中。为了评价G93A或A4V突变对存活率的作用，用含有1mM双丁酰cAMP和0.025μg/ml艾菲地可宁的培养基培养铺板的细胞，作为浓度的函数评价野生型细胞、G93A细胞和A4V细胞的存活率。为了评价溶解的UDCA对存活率的保护作用，将200nM和20μM溶解的UDCA加入到所述培养基中。在培养的第24小时，将培养基(200μL)加入到各个孔中，之后，加入50μL 2mg/mL MTT(Sigma，Saint Louis，MO，USA)。随后，从各个孔中移去220μL溶液，然后向各个孔中加入150μL二甲基亚砜。最后，通过微孔板混合器溶解孔中的颗粒10分钟后，在ELISA读板上540nm读取光密度(OD)。使用无细胞培养测量的OD校正结果。对于台盼蓝染色，将10μL台盼蓝溶液加入到从各个板中收集的10μL细胞中，培养所述细胞2分钟。通过血球计计算未染色的活细胞。以细胞存活的百分率表示细胞存活率。
当用200nM溶解的UDCA处理时，与未处理的野生型细胞(对照，100％)相比较，野生型细胞、G93A细胞和A4V细胞的存活率分别为100％、130％和115％。在高于200nM浓度100倍的溶解UDCA(20μM)浓度下，与未处理的野生型细胞(对照，100％)相比较，野生型细胞、G93A细胞和A4V细胞的存活率分别为89％、133％和101％。这个试验数据显示溶解的UDCA对G93A细胞和A4V细胞具有保护作用，并且对野生型细胞、G93A细胞和A4V细胞无毒。
DAPI染色以评价GSNO诱导的凋亡及其结果；如下进行4′，6-联脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)染色以评价凋亡。分化后，用500μMGSNO或不用GSNO培养野生型细胞、G93A细胞和A4V细胞24小时，然后在265g离心所述细胞2分钟，将4％中性甲醛缓冲液加入到细胞沉淀物中。将50μL等分试样的细胞悬浮物置于载玻片上并在室温下干燥。在PBS中清洗固定的细胞，空气干燥，并用DNA特异性荧光染料，DAPI(Sigma，Saint Louis，MO，USA)染色20分钟。用PBS冲洗附着的细胞，空气干燥，并用90％甘油固定。在Olympus荧光显微镜下观察所述载玻片(图片)。以细胞存活的百分率表示细胞存活率。
DAPI染色显示，与野生型细胞的凋亡细胞百分率(8％)相比较，G93A细胞和A4V细胞的凋亡细胞百分率(分别是19％对比25％)显著提高。G93A细胞和A4V细胞中经历凋亡的细胞百分率提高证实了GSNO对G93A细胞和A4V细胞的凋亡作用显著大于对野生型细胞的凋亡作用。
MTT分析和台盼蓝染色以评价溶解的UDCA的抗凋亡作用及其结果；将溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)吸收到细胞内并通过线粒体琥珀酸脱氢酶转化成甲 。因此，甲 的累积直接反映线粒体活性并间接反映细胞存活率。因此，将神经分化的细胞(野生型细胞(对照)、G93A细胞、A4V细胞)以1×10n(n＝4)个细胞/孔的密度铺于96-孔板中。用含有1mM双丁酰cAMP和0.025μg/mL艾菲地可宁的培养基培养铺板的细胞，随后用500μM GSNO或不用GSNO再培养24小时。为了评价溶解的UDCA对细胞的抗凋亡作用，将200nM和20μM溶解的UDCA加入到所述培养基中。在培养的第24小时，将培养基(200μL)加入到各个孔中后，加入50μL 2mg/mL MTT(Sigma，Saint Louis，MO，USA)。随后，从各个孔中移去220μL溶液，然后向各个孔中加入150μL二甲基亚砜。最后，通过微孔板混合器溶解孔中的颗粒10分钟后，在ELISA读板上540nm读取光密度(OD)。使用无细胞培养测量的OD校正结果。对于台盼蓝染色，将10μL台盼蓝溶液加入到从各个板中收集的10μL细胞中，培养所述细胞2分钟。通过血球计计算未染色的活细胞。以细胞存活的百分率表示细胞存活率。
S-亚硝基谷胱甘肽诱导的凋亡引起的G93A细胞和A4V细胞存活率降低显著大于野生型细胞存活率降低。与野生型细胞相比较，在G93A细胞和A4V细胞中，溶解的UDCA引起的GSNO处理(凋亡)细胞存活率的提高显著大于野生型细胞存活率的提高。更具体而言，用500μMGSNO再培养后24小时，与野生型细胞(92％)相比较，G93A和A4V突变体的存活率分别是81％和75％。加入溶解的UDCA继续培养后，野生型细胞的存活率从92％增加到98％，G93A细胞的存活率从81％增加到100％，A4V细胞的存活率从75％增加到115％。
这个试验证实溶解的UDCA溶液可保护G93A细胞和A4V细胞免于NO-介导的凋亡并可恢复凋亡介导的损伤的ALS细胞。
改善和/或治疗神经变性疾病和/或运动神经元疾病症状的其它等同或替代方法和/或组合物是本领域普通技术人员应当理解的。例如，可根据诊断和/或治疗的不同大小(例如儿童和成人)的对象、具有另外过敏症或病症的对象和/或过敏和/或症状严重变化的对象来衡量方法和剂量。此外，可随时间(例如每月或每季度)波动调整方法和剂量。希望这些等价物和替代以及明显的变动和改进也包括在本公开内容的范围内。例如，所提供的值和/或范围终点不希望严格限制所有实施方案。而且，本领域普通技术人员应当理解，没有单一的实施方案、用途和/或优点希望是完全控制或排除另外的实施方案、用途和/或优点。例如，执业医师可认为是彼此参考的情况。而本公开内容包括ALS的遗传学、生物化学和细胞生物学的当前理解的广泛信息以及胆汁酸的代谢，进一步的工作可揭示这些理解方面是不准确或不完全的。因此，本领域技术人员应当理解，本公开内容，不管是整体或部分，不被特定的模型或作用机制所限制。此外，本领域技术人员应当理解可以使用其它的等同或替代的组合物和方法。例如，尽管已公开许多化合物可与胆汁酸施用，还可包括其它的化合物。而且，可在施用胆汁酸组合物时同时施用药物或这两种可同时或在重叠时期(例如在同一小时、同一天或同一周)施用。因此，前述的公开内容用于举例说明而不是限制下述权利要求举例说明的本公开内容的范围。
权利要求
1.一种改善或治疗对象的神经变性疾病的至少一个症状的方法，所述方法包括向对象施用澄清水溶液，所述澄清水溶液包含(a)第一材料，其选自胆汁酸、胆汁酸的水溶性衍生物、胆汁酸盐和通过酰胺键与胺缀合的胆汁酸；(b)碳水化合物，其选自水溶性淀粉转化产物或水溶性非淀粉多糖；(c)水，其中所述第一材料和所述碳水化合物在选定pH值范围内针对溶液的所有pH值均保持在溶液中。
2.根据权利要求1的方法，其中所述神经变性疾病选自帕金森病、亨廷顿舞蹈症、阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化、中风和脊髓损伤。
3.根据权利要求2的方法，其中所述神经变性疾病是肌萎缩性侧索硬化。
4.根据权利要求3的方法，其中所述肌萎缩性侧索硬化是晚期肌萎缩性侧索硬化。
5.根据权利要求1的方法，其中所述症状选自寿命缩短和麻痹。
6.根据权利要求1的方法，其中对象是哺乳动物。
7.根据权利要求1的方法，其中对象是人。
8.根据权利要求1的方法，其中所述第一材料以治疗活性量存在。
9.根据权利要求1的方法，其中所述第一材料选自鹅去氧胆酸、胆酸、猪去氧胆酸、去氧胆酸、7-氧代石胆酸、石胆酸、碘代去氧胆酸、iocholic acid、牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、牛磺胆酸、甘氨胆酸和它们在甾核上羟基或羧酸基处的衍生物、它们的盐或它们与胺的缀合物。
10.根据权利要求1的方法，其中所述水溶性淀粉转化产物选自麦芽糊精、糊精、液体葡萄糖、玉米糖浆固体和可溶性淀粉。
11.根据权利要求1的方法，其中所述选定的pH范围是约1-约10，其中包括端值。
12.根据权利要求1的方法，其中所述第一材料是熊去氧胆酸或熊去氧胆酸的钠盐。
13.根据权利要求1的方法，其中所述水溶性淀粉转化产物是麦芽糊精。
14.根据权利要求1的方法，其中所述水溶性非淀粉多糖选自葡聚糖、瓜尔胶、果胶、不能消化的可溶性纤维。
15.一种改善或治疗对象的运动神经元疾病的至少一个症状的方法，所述方法包括向对象施用澄清水溶液，所述澄清水溶液包含(a)第一材料，其选自胆汁酸、胆汁酸的水溶性衍生物、胆汁酸盐和通过酰胺键与胺缀合的胆汁酸；(b)碳水化合物，其选自水溶性淀粉转化产物或水溶性非淀粉多糖；(c)水，其中所述第一材料和所述碳水化合物在选定pH值范围内针对溶液的所有pH值均保持在溶液中。
16.根据权利要求15的方法，其中所述运动神经元疾病选自肌萎缩性侧索硬化、进行性延髓麻痹、假性球麻痹、原发性侧索硬化、进行性肌萎缩和小儿麻痹后遗症。
17.根据权利要求16的方法，其中所述运动神经元疾病是肌萎缩性侧索硬化。
18.根据权利要求17的方法，其中所述肌萎缩性侧索硬化是晚期肌萎缩性侧索硬化。
19.根据权利要求15的方法，其中所述症状选自寿命缩短和麻痹。
20.根据权利要求15的方法，其中对象是哺乳动物。
21.根据权利要求15的方法，其中对象是人。
22.根据权利要求15的方法，其中所述第一材料以治疗活性量存在。
23.根据权利要求15的方法，其中所述第一材料选自鹅去氧胆酸、胆酸、猪去氧胆酸、去氧胆酸、7-氧代石胆酸、石胆酸、碘代去氧胆酸、iocholic acid、牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、牛磺胆酸、甘氨胆酸和它们在甾核上羟基或羧酸基处的衍生物、它们盐或它们与胺的缀合物。
24.根据权利要求15的方法，其中所述水溶性淀粉转化产物选自麦芽糊精、糊精、液体葡萄糖、玉米糖浆固体和可溶性淀粉。
25.根据权利要求15的方法，其中所述选定的pH范围是约1-约10其中包括端值。
26.根据权利要求15的方法，其中所述第一材料是熊去氧胆酸或熊去氧胆酸的钠盐。
27.根据权利要求15的方法，其中所述水溶性淀粉转化产物是麦芽糊精。
28.根据权利要求15的方法，其中所述水溶性非淀粉多糖选自葡聚糖、瓜尔胶、果胶、不能消化的可溶性纤维。
29.一种改善或治疗对象的神经变性疾病的至少一个症状或运动神经元疾病的至少一个症状的方法，所述方法包括向对象施用药物化合物；和向对象施用澄清水溶液，所述澄清水溶液包含(a)第一材料，其选自胆汁酸、胆汁酸的水溶性衍生物、胆汁酸盐和通过酰胺键与胺缀合的胆汁酸；(b)碳水化合物，其选自水溶性淀粉转化产物或水溶性非淀粉多糖；(c)水，其中所述第一材料和所述碳水化合物在选定pH值范围内针对溶液的所有pH值均保持在溶液中。
30.根据权利要求29的方法，其中所述对象是哺乳动物。
31.根据权利要求29的方法，其中所述对象是人。
32.根据权利要求29的方法，其中施用药物化合物和施用澄清水溶液同时进行。
33.根据权利要求29的方法，其中施用药物化合物和施用澄清水溶液在指定时期内的不同时刻进行。
34.根据权利要求33的方法，其中在施用澄清水溶液之前施用药物化合物。
35.根据权利要求33的方法，其中在施用澄清水溶液之后施用药物化合物。
36.根据权利要求29的方法，其中所述施用药物化合物还包括施用多个剂量的所述药物化合物。
37.根据权利要求29的方法，其中所述施用澄清水溶液还包括施用多个剂量的所述澄清水溶液。
38.根据权利要求37的方法，其中所述施用药物化合物还包括施用多个剂量的所述药物化合物。
39.根据权利要求38的方法，其中所述施用药物化合物还包括在施用澄清水溶液之后施用至少一个剂量的所述药物化合物。
40.根据权利要求38的方法，其中所述施用药物化合物还包括在施用澄清水溶液之前施用至少一个剂量的所述药物化合物。
41.根据权利要求38的方法，其中所述施用澄清水溶液还包括在施用药物化合物之后施用至少一个剂量的所述澄清水溶液。
42.根据权利要求38的方法，其中所述施用澄清水溶液还包括在施用药物化合物之前施用至少一个剂量的所述澄清水溶液。
43.根据权利要求38的方法，其中所述施用澄清水溶液和所述施用药物化合物在各个剂量下均同时进行。
44.根据权利要求43的方法，其中所述澄清水溶液还包含所述药物化合物。
45.根据权利要求29的方法，其中所述第一材料以治疗活性量存在。
46.根据权利要求29的方法，其中所述第一材料选自鹅去氧胆酸、胆酸、猪去氧胆酸、去氧胆酸、7-氧代石胆酸、石胆酸、碘代去氧胆酸、iocholic acid、牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、牛磺胆酸、甘氨胆酸和它们在甾核上羟基或羧酸基处的衍生物、它们的盐或它们与胺的缀合物。
47.根据权利要求29的方法，其中所述水溶性淀粉转化产物选自麦芽糊精、糊精、液体葡萄糖、玉米糖浆固体和可溶性淀粉。
48.根据权利要求29的方法，其中所述选定的pH范围是约1-约10，其中包括端值。
49.根据权利要求29的方法，其中所述第一材料是熊去氧胆酸或熊去氧胆酸的钠盐。
50.根据权利要求29的方法，其中所述水溶性淀粉转化产物是麦芽糊精。
51.根据权利要求29的方法，其中所述水溶性非淀粉多糖选自葡聚糖、瓜尔胶、果胶、不能消化的可溶性纤维。
52.根据权利要求29的方法，其中所述神经变性疾病或运动神经元疾病选自帕金森病、亨廷顿舞蹈症、阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化、中风、脊髓损伤、进行性延髓麻痹、假性球麻痹、原发性侧索硬化、进行性肌萎缩和小儿麻痹后遗症。
53.根据权利要求52的方法，其中所述神经变性疾病或运动神经元疾病是肌萎缩性侧索硬化。
54.根据权利要求29的方法，其中所述药物化合物降低运动神经元死亡。
55.根据权利要求54的方法，其中所述降低运动神经元死亡的药物化合物选自对氨基水杨酸异烟肼、苄噻嗪、氢化泼尼松、薄荷醇、萘磺酸甲苄咔啉、三氯噻嗪、土霉素、硫酸魁蛤素(Arcainesulfate)、红霉素、谷胱甘肽、三甲呋豆素、盐酸布酚宁、去甲西泮、盐酸嘧啶二胺、丙戊酸钠、氨基比林、磺胺甲二唑、氟哌利多、2-硫脲嘧啶、犬尿烯酸、夫西地酸、亚叶酸钙、硫酸司巴丁、苦杏仁苷、盐酸丙吗卡因、呋塞米、双硝米特、布地缩松、夫洛丙酮、氟氢缩松、抗炎药)、N-甲酰甲硫氨酰苯丙氨酸、硫喷妥钠、达克普隆、溴苯乙胺、头孢孟多酯钠、丙氧咪唑(Oxybendazole)、环亮氨酰甘氨酸、达者仑钠、四氢对醌、哌嗪、七叶苷(Aesculin)、炔孕酮、二甲双酮、灰黄霉素、醋胺沙罗、盐酸槟榔次碱、二盐酸腐胺、盐酸依米丁、氨苯磺胺、含羞草碱、乙酰胆碱、甲磺酸碘磷定、赖氨酰色氨酰-赖氨酸、海可皂苷元、醋酸氢化泼尼松、阿苯哒唑、氢氯噻嗪、盐酸去甲金霉素、呋喃西林、双氯青霉素钠、α-生育酚、盐酸四环素、非诺贝特、丙磺舒、维A酸、对乙酰氨基酚、盐酸白毛莨分碱、d[-精氨酸-2]醋酸高托尔芬、NMDA、头孢美唑钠、病毒唑、O-苄基-L-丝氨酸、印防己毒素、羟乙卡因、磺胺噻唑、三氯氮芥、萘丁美酮、氯霉素、利鲁唑、人参及其提取物，甘草甜素和甘草酸、carboquinone的衍生物、辅酶Q10、肌酸、胰岛素样生长因子-1、米诺环素、mecamserin、扎利罗登(xaliproden)、加巴喷丁、右美沙芬、他仑帕奈(talampanel)、IL-1、TR-500、丙环司坦、脑源性神经营养因子、巴氯芬、替扎尼定、苯二氮类、格隆溴铵、阿托品、奎宁、苯妥英和吗啡。
56.权利要求29的方法，其中所述药物化合物选自激素、激素拮抗剂、止痛药、退热药、抗炎药、免疫活性药物、抗肿瘤药物、抗生素、抗炎剂、拟交感神经药、抗感染药、抗肿瘤剂和麻醉剂。
57.权利要求29的方法，其中所述药物化合物选自胰岛素、肝素、降钙素、氨苄西林、善得定、枸橼酸西地那非、骨化三醇、双氢速甾醇、阿朴吗啡(ampomorphine)、育亨宾(yohimbin)、曲唑酮、阿昔洛韦、盐酸金刚胺、盐酸金刚乙胺、西多福韦(cidofovir)、甲磺酸地拉韦定、地达诺新、泛昔洛韦、forscarnet sodium，氟尿嘧啶、更昔洛韦钠、碘苷、干扰素-α，拉米夫定，奈韦拉平、喷昔洛维、利巴韦林、司他夫定、三氟尿苷、盐酸伐昔洛韦(valacyclovir·HCl)、扎西他宾、齐多夫定、硫酸莫地那韦、利托那韦、甲磺酸奈非那韦、甲磺酸沙奎那韦、d-青霉胺、氯喹、羟氯喹、金硫葡糖、硫代苹果酸金钠、金诺芬、左旋咪唑、DTC、异丙肌苷、甲基肌苷单磷酸盐、胞壁酰二肽、二氮嗪、盐酸肼苯哒嗪、米诺地尔、双嘧达莫、盐酸苯氧丙酚胺、烟酸、盐酸布酚宁、酚妥拉明、甲磺酸多沙唑嗪、盐酸哌唑嗪，盐酸特拉唑嗪(terazocinHCl)、盐酸可乐定、硝苯地平、脉导敏、胺碘酮、乙酰水杨酸、维拉帕米、地尔硫、尼索地平、伊拉的平、苄普地尔、硝酸异山梨酯、戊四硝酯、硝酸甘油、西米替丁、法莫替丁、尼扎替丁、雷尼替丁、兰索拉唑、奥美拉唑、米索前列醇、硫糖铝、盐酸胃复安、红霉素、铋化合物、前列地尔、沙丁胺醇、吡布特罗、硫酸特布他林、沙美特罗(salmetrol)、氨茶碱、甘油茶碱、麻黄碱、乙诺那林、新异丙肾上腺素、异丙肾上腺素、间羟异丙肾上腺素、n-docromil、oxy triphylline、茶碱、比托特罗、非诺特罗、布地奈德、氟尼缩松、丙酸倍氯米松、丙酸氟地松、可待因、硫酸可待因、磷酸可待因、氢溴酸右美沙芬、曲安奈德、孟鲁司特钠、扎鲁司特、苯噻羟脲、色甘酸钠、异丙托溴铵、奈多罗米苯甲酸钠、盐酸苯海拉明、重酒石酸二氢可待因酮、盐酸美沙酮、硫酸吗啡、乙酰半胱氨酸、愈创木酚甘油醚、碳酸铵、氯化铵、酒石酸锑钾、甘油、水合萜品、棕榈酸考福西利、阿托伐他汀钙、西立伐他汀钠(cervastatinsodium)、氟伐他汀钠、洛伐他汀、普伐他汀钠、斯伐他汀、picrorrhazia kurrva、穿心莲(andrographis paniculata)、辣木(moringa oleifera)、阔荚合欢(albizzia lebeck)、鸭嘴花(adhatavasica)、姜黄(curcuma longa)、苦瓜(momordica charantia)、匙羹藤(gymnema sylvestre)、阿江榄仁(terminalia arjuna)、印楝(azadirachta indica)、心叶青牛胆(tinosporia cordifolia)、甲硝唑、两性霉素B、克霉唑、氟康唑、卤普罗近、酮康唑、灰黄霉素、伊曲康唑、盐酸特比萘酚、硝酸益康唑、咪康唑、制霉菌素、硝酸奥昔康唑、硝酸硫康唑、盐酸西替利嗪、地塞米松、氢化可的松、氢化泼尼松、可的松、儿茶素及其衍生物、甘草甜素、甘草酸、倍他米松、ludrocortisone acetate、氟尼缩松、丙酸氟地松甲基泼尼松龙、生长激素释放抑制因子、赖脯胰岛素(lispro)、胰高血糖素、胰岛素原、不溶性胰岛素、拜糖平、氯磺丙脲、格列吡嗪、格列本脲、盐酸二甲双胍、瑞格列奈、甲磺丁脲、氨基酸、秋水仙碱、磺吡酮、别嘌呤醇、吡罗昔康、托美汀钠、吲哚美辛、布洛芬、双氟尼酸、甲灭酸、萘普生和曲恩汀。
58.一种澄清水溶液，其包含(a)第一材料，其选自胆汁酸、胆汁酸的水溶性衍生物、胆汁酸盐和通过酰胺键与胺缀合的胆汁酸；(b)碳水化合物，其选自水溶性淀粉转化产物或水溶性非淀粉多糖；(c)药学有效量的降低运动神经元死亡的药物化合物；和(d)水，其中所述第一材料、所述碳水化合物和利鲁唑在选定pH值范围内针对溶液的所有pH值均保持在溶液中。
59.根据权利要求58的澄清水溶液，其中所述第一材料以神经保护量存在。
60.根据权利要求58的澄清水溶液，其中所述药物化合物在选定范围内针对所有pH值均保持在溶液中。
61.根据权利要求58的澄清水溶液，其中所述第一材料是熊去氧胆酸。
62.根据权利要求58的澄清水溶液，其中所述第一材料是熊去氧胆酸的钠盐。
63.根据权利要求58的澄清水溶液，其中所述第一材料选自鹅去氧胆酸、胆酸、猪去氧胆酸、去氧胆酸、7-氧代石胆酸、石胆酸、碘代去氧胆酸、iocholic acid、牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、牛磺胆酸、甘氨胆酸和它们在甾核上羟基或羧酸基处的衍生物、它们的盐或它们与胺的缀合物。
64.根据权利要求58的澄清水溶液，其中所述选定的pH范围是约1-约10，其中包括端值。
65.根据权利要求58的澄清水溶液，其中所述水溶性淀粉转化产物选自麦芽糊精、糊精、液体葡萄糖、玉米糖浆固体和可溶性淀粉。
66.根据权利要求58的澄清水溶液，其中所述水溶性淀粉转化产物是麦芽糊精。
67.根据权利要求58的澄清水溶液，其中所述水溶性非淀粉多糖选自葡聚糖、瓜尔胶、果胶、不能消化的可溶性纤维。
68.根据权利要求58的澄清水溶液，其中所述药物化合物选自对氨基水杨酸异烟肼、苄噻嗪、氢化泼尼松、薄荷醇、萘磺酸甲苄咔啉、三氯噻嗪、土霉素、硫酸魁蛤素(Arcaine sulfate)、红霉素、谷胱甘肽、三甲呋豆素、盐酸布酚宁、去甲西泮、盐酸嘧啶二胺、丙戊酸钠、氨基比林、磺胺甲二唑、氟哌利多、2-硫脲嘧啶、犬尿烯酸、夫西地酸、亚叶酸钙、硫酸司巴丁、苦杏仁苷、盐酸丙吗卡因、呋塞米、双硝米特、布地缩松、夫洛丙酮、氟氢缩松、抗炎药)、N-甲酰甲硫氨酰苯丙氨酸、硫喷妥钠、达克普隆、溴苯乙胺、头孢孟多酯钠、丙氧咪唑(Oxybendazole)、环亮氨酰甘氨酸、达者仑钠、四氢对醌、哌嗪、七叶苷(Aesculin)、炔孕酮、二甲双酮、灰黄霉素、醋胺沙罗、盐酸槟榔次碱、二盐酸腐胺、盐酸依米丁、氨苯磺胺、含羞草碱、乙酰胆碱、甲磺酸碘磷定、赖氨酰色氨酰-赖氨酸、海可皂苷元、醋酸氢化泼尼松、阿苯哒唑、氢氯噻嗪、盐酸去甲金霉素、呋喃西林、双氯青霉素钠、α-生育酚、盐酸四环素、非诺贝特、丙磺舒、维A酸、对乙酰氨基酚、盐酸白毛莨分碱、d[-精氨酸-2]醋酸高托尔芬、NMDA、头孢美唑钠、病毒唑、O-苄基-L-丝氨酸、印防己毒素、羟乙卡因、磺胺噻唑、三氯氮芥、萘丁美酮、氯霉素、利鲁唑、人参及其提取物，甘草甜素和甘草酸、carboquinone的衍生物、辅酶Q10、肌酸、胰岛素样生长因子-1、米诺环素、mecamserin、扎利罗登(xaliproden)、加巴喷丁、右美沙芬、他仑帕奈(talampanel)、IL-1、TR-500、丙环司坦、脑源性神经营养因子、巴氯芬、替扎尼定、苯二氮类、格隆溴铵、阿托品、奎宁、苯妥英和吗啡。
全文摘要
本公开内容涉及一种或多种胆汁酸和水溶性淀粉转化产物或非淀粉多糖的澄清水溶液。本公开内容的溶液可结合对患有神经变性疾病和/或运动神经元疾病的对象具有治疗作用的药物化合物向对象施用。在一些实施方案中，所述疾病是肌萎缩性侧索硬化。
文档编号A61P25/28GK101048164SQ200580037307
公开日2007年10月3日 申请日期2005年10月31日 优先权日2004年11月1日
发明者柳署弘 申请人:柳署弘