专利名称：单独的性甾体前体或与选择性雌激素受体调节剂和 /或与雌激素和 /或 5型 c g m p磷 ...的制作方法
技术领域：
选择性雌激素受体调节剂(SERM ) Acolbifene ( EM-652 ) 是最初开发用于预防和治疗乳腺癌的苯并吡喃衍生物(Gauthier等 人，1997， J Med Chem, 40: 2117-2122)。 Acolbifene是所有已知化 合物中对ER具有最高亲和力的化合物(Gauthier etal， l997， J Med Chem， 40: 2117-2122; Labrie等人，1999， J Steroid Biochem Mol Biol， 69(1-6): 51-84; Tremblay等人，1997， Mol. Endocrinol" 11: 353-365)，并且其在ERa和Er(3上都产生了活性(Tremblay等人， 1998， Endocrinology, 139: 111-118)。该化合物至少在大鼠的乳腺 和子宫内膜显示了纯的和高效的抗雌激素活性，同时降低了血清胆固
醇和甘油三酯并预防骨丢失(Labrie等人，1999， J Steroid Biochem Mol Biol， 69(1-6): 51-84)。而且，已经证明给予DHEA，不仅不妨 碍，而且在棵小鼠中产生了与纯抗雌激素Acolbifene对人乳房肿瘤生 长相同的额外的抑制作用(Dauvois等人，1991， Cancer Res， 51: 3131-3135; Luo等人，1997， Endocrinology, 138: 4435- 4444 )。 DHEA 和Acolbifene的联合治疗已经被提出作为乳腺癌的有益化学预防和治 疗途径(Labrie， 2001， Ref Gynecol Obstet， 8: 317-322 )。事实上， DHEA对人乳腺癌异种移植物在棵小鼠中生长的抑制作用支持了其用 作激素替代疗法(Dauvois等人，1991， Cancer Res， 51: 3131-3135; Couillard等人，1998， J Natl Cancer Inst， 90: 772-778)。在一个实施方案中，本发明涉及治疗或降低患阴道干燥 的风险的方法，包括在需要所述治疗或所属甾体前体的个体或患者中 增加选自脱氢表雄甾酮(DHEA)、硫酸脱氢表雄酮(DHEA-S)和雄 甾-5-烯-3(5,17^二醇(5-二醇)的性甾体前体的水平，且进一步包括给予 所属患者治疗有效量的选择性雌激素受体调节剂(SERM)作为联合 治疗的部分。在另一实施方案中，优选的是选择性雌激素受体调节剂为 下式的三苯乙烯衍生的化合物
<formula>formula see original document page 17</formula>
其中D是-OCH2CH2N(R3)R4或-CH-CH-COOH (R;和114都独立 地选自Cl-C4烷基，或者R3、 114和它们结合的氮原子一起为选自吡 咯烷并、二甲基-l-吡咯烷并、甲基-l-吡咯烷基、哌啶子基、六亚甲
基亚氨基和吗啉代的环状结构)；
其中E和K独立地是氢或羟基； 其中J是氢或卤素。
特别地，选择性雌激素受体调节剂是他莫昔芬、OH-他莫昔芬、 屈洛昔芬、托瑞米芬、Iodoxifene和GW 5638。-5,6，7,8-四氢萘-2-醇，D-(-)-酒石酸盐(拉索昔芬)和(3，4-反式-2，2-二甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯烷-l-基)乙氧基)苯基)-7-曱氧 基色满。在另一实施方案中，优选的是选择性雌激素受体调节剂具 有下式结构
其中A和R2独立地是氢、羟基或在体内转变为羟基的部分； 其中Z是二价封闭部分，特别地，Z选自-O-、 -NH-、 4-和-(:112-; 其中R100是通过4-10个插入原子将L隔离B环的二价部分； 其中L是选自-SO-、 -CON-、 -N-和-SON-的二价或三价极性部
分；
其中&选自氢、q到Cs的烃或连接G:和L以形成5-到7-元杂 环的二价部分、和卣素或前述基团的不饱和衍生物。
其中G2不存在或选自氢、C,到Cs的烃或连接G!和L以形成5-到7-元杂环的二价部分、和卣素或前述基团的不饱和衍生物；
其中G3选自氢、甲基和乙基。
更特别的是，优选下述通式结构的苯并吡喃衍生物
其中D是-0<:11201^(113)114 ( R3和114都独立地选自C广C4烷基， 或R3、 R4和它们结合的氮原子一起为选自吡咯烷并、二曱基-l-吡咯 烷子基、甲基-l-吡咯烷基、哌啶子基、六亚甲基亚氨基、吗啉代、环 的环状结构)。
其中R,和R2独立地选自氢、羟基、和在体内转变为羟基的部优选的选择性雌激素受体调节剂是 Acolbifene
ci
雷洛昔芬、阿佐昔芬、他莫昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、Iodoxifene、 GW5638、 TSE-424、 ERA-923和拉索昔芬。
附图的简要说明
0028]
图1表示从外口 (阴道口 )(第1节段)到子宫水平(第 7节段)(阴道部子宫)，沿着大鼠阴道的纵轴分成7个橫节段。
0029图2表示9组大鼠第5节段的阴道上皮组织形态学。Bar in(J)， 40jim。
(A) 作为雌激素作用的典型，动情期周期大鼠的复层鳞状上皮由四 个主要的层组成1个细胞层的基底层(b)， 6到7个细胞层的棘层(s) 和5到6层颗粒层(g)覆盖角质层(c)形成紧密填充的扁平角质化细胞。
(B) 用受雌激素-妊娠前影响的发情前期的周期大鼠举例说明粘液 化。在大多数第2到7节段，1层基底细胞层(b)净皮5到6个细胞层的
棘层(s)覆盖，底层粘液化(m)包括3-4层粘液细胞。
(C) 在OVX对照中，基底细胞层(b)被1层萎缩立方细胞(a)覆盖。
(D) 用日口服剂量的Acolbifene治疗OVX大鼠的阴道上皮，(2.5 mg/kg)显示萎缩，而外层低柱状粘液细胞(m)覆盖着基底细胞层(b)。
(E) 用日口服剂量的倍美力(0.5 mg/kg)治疗的OVX大鼠的阴道 上皮。与动情期发现的相比，OVX-诱导的萎缩被雌激素模式代替。
(F) 在接受倍美力+Acolbifene的OVX动物中，尽管观察到了较大 的粘液细胞，与AcoIbifene-治疗的动物的形态学相似，萎缩占优势。
(G) 接着在2x2 cm的背部皮肤上每日1次表皮应用DHEA ( 80 mg/kg)治疗OVX动物，观察到由3-5层的粘液细胞(m)构成的肥大 上皮覆盖着基底层(b)。 一些内陷成为该上皮的特征(箭头)。
(H) 在用DHEA+Acolbifene-治疗的动物的阴道上皮的大多数区 域，粘液细胞(m)层停留在基底细胞层(b)，尽管在许多区域，许多层 粘液细胞覆盖着基底细胞层。 一些内陷成为该上皮的特征(箭头)。
(I) 用DHEA+倍美力治疗在3只动物中导致混合上皮，该混合上 皮由被3-5层粘液细胞(m)覆盖的3到7个细胞层-厚复层鳞状上皮(s) 组成。在2只动物中，复层鳞状上皮的区域是主要的(插入)。Bar in insert, 30拜。
(J)当联合DHEA 、 倍美力和 Acolbifene 时，上皮与 DHEA+Acolbifene组的相似。图3表示OVX动物的阴道粘膜，在(A)中，显示了以伴随 上皮内微脓肿(M)的病灶白细胞浸润为特征的严重炎症变换和，在(B) 中，显示了以上皮厚度减少和作为上皮完全消失显现的溃疡为特征的 病灶腐蚀。
0031图4显示了 Acolbifene对阴道上皮内层第1节段(外部 开放)的雌激素样作用，相关组进行比较。在动情期未受损大鼠(A) 和倍美力-治疗的动物(D)中，上皮为10-15层的厚度且角质化，在OVX 对照组(B)中，上皮厚度减少到4-6层，并且没有角质化(没有看见颗 粒层)，而在Acolbifene-治疗的动物(C)中，厚度恢复到9-11层，且角 质化。
0032图5显示了单独或联合用DHEA、倍美力和Acolbifene治 疗OVX动物36周厚，大鼠阴道第5节段水平上三个不同阴道间隔的 厚度0im): a)上皮，b)固有层，c)肌层和d)总厚度。增加动情期和动 情前期正常无伤动物作为参考对照。具有相同字母的组在p<0.05下没 有统计学差异。
0033图6显示了第5节段图解的固有层胶原纤维的紧密度，如 低(A)，中(B)或高(C)。
0034图7显示了三个阴道间隔的显微照片(E)上皮，(L)固有 层和(M)肌层，在不同的组中，在大鼠阴道的第5节段水平强调相对 肌层厚度。用条分开的3个阴道壁层表明最佳地评价了不同组的厚度 分布。A)未受损的，B)OVX，和用C)Acolbifene治疗的OVX， D)倍 美力，E)倍美力十Acolbifene ， F)DHEA ， G)DHEA十Acolbifene ， H)DHEA+倍美力，1)DHEA+倍美力+Acolbifene。本发明的选择性雌激素受体调节剂具有有下述特征的分子 式a)被1到2个插入碳原子间隔的两个芳环，两个芳环都未被取代 或者被羟基或在体内转变为羟基的基团取代；和b)具有芳环和叔胺官 能团或其盐的侧链。-N，N-二甲基乙胺)(可从Zeneca， UK获得)、托瑞米芬 (可从Orion-Farmos Pharmaceutica， Finland, or Schering-Plough获 得)、屈洛昔芬和雷洛昔芬(Eli Lilly and Co., USA)、阿佐昔芬(LY 335563)和LY 353381(Eli Lilly and Co" USA)、Ospemifene(FC 1271)(可 从 Orion-Farmos Pharmaceutica ， Finland 获 得 )、 Iodoxifene(SrnithKline Beecham， USA)、左美洛昔芬(3,4-反式-2,2-二 曱基-3-苯基-4-[4-(2-(2-( p比咯烷-l-基)乙氧基)苯基)-7-甲氧基色 满(Novo Nor disk, A/S， Denmark),其公开于Shalmi等人WO 97/25034， WO 97/25035， WO 97/25037， WO 97/25038;和Korsgaard 等人WO 97/25036中)、GW-5638(被Willson等人，1997， Endocrinol, 138(9): 3901-3911公开)、由Aventis(France)开发的SERM 3339和"引 哚衍生物(Miller等人EP 0802183A1公开)和TSE-424和由Wyeth Ayers(USA)开发，公开于JP 10036347中的ERA画923(American home products corporation)和公开于WO 97/32837中的非甾体雌激素衍生 物。
0056当需要效能时使用的任何SERM都可以使用，如制造者 推荐的那些。合适的剂量在本领域中是已知的。任何商业上可获得的 其它非甾体抗雌激素都可根据本发明使用。可以使用任何具有与 SERMs相似活性的化合物(例如雷洛昔芬)。 1个优选的前列腺素是由NexMed(美国)以商品名"Alprox-TD"推向市场的前列腺素El。将各只灌注动物的未受损阴道后固定(post-fixed)在10%中 性緩沖福尔马林中。然后将各个阴道分成7个相等的横节段，如图1 所示，常规处理，并完全包埋在同一个石蜡块中。在石蜡块内部，将 7个阴道圆柱状节段按照它们原来的解剖位置的顺序放置，并与石蜡 块表面垂直定向放置，然后在横切面上切割各节段。每只动物都切割 4nm厚的石蜡切片，并用苏木精-曙红染色，以进行形态学检查。
组织形态测定术
在第5节段上进行不同阴道层的测量(图1)，该第5节段 大约在中间区域和阴道部子宫(第7节段)之间的一半位置处。发现该 第5节段具有典型的上皮表面和足够厚的平滑肌。用DC-330 3CCD 彩色照相机(Dage-MTI， Michigan City, IN, USA)拍照，并用Image-Pro Plus 3.0软件(Media Cybernetics, Silver Spring, MD， USA)进行定 量。如jJ:匕， <吏用x5物镜(Leica Microsystems, Willowdale， Ont.， Canada),从上皮层和肌层的典型区域中得到了每层3-4个厚度的测 量结果，和3个阴道层总共的测量结果。如此测量总的阴道厚度、上 皮层厚度和肌层厚度。从总的阴道厚度中减去上皮层和肌层的厚度得 到固有层的厚度。
免疫组织化学为了精确详细的检查大鼠阴道壁的三个层，也就是上皮 层、固有层和肌层，首先检查沿着纵轴获得的7个节段(图1)。虽然 在各组之间观察到了显著的形态差异，但是一般而言，在同一组的所 有动物中差异是一致的，并且第2、 3、 4、 5、 6和7节段已经显示出 了相似的上皮形态。观察到的极少数例外的情况将在后面提及。因此 将第5节段用于举例说明各种处理对阴道上皮的影响。将阴道内胶原纤维的紧密程度分为低度、中度和高度(图 6)，如在接近上皮的地方所观察到的。《低度》和《中度紧密》分别与松 弛地或较不松弛地聚集在一起的粗胶原纤维的存在有关，而《高度紧 密》是用于描述紧密填充的精细胶原纤维的术语，这样的胶原纤维显 示出了光滑的有织紋的外观。在所有的动物中，相对于胶原的量存在 有相对较少比例的纤维细胞，它们主要表现为鳞状和萎缩。沿着阴道的固有层厚度的可见光学显微镜检查普遍揭示了 第1节段是中等厚度，而在第2-4节段中较厚。在第5-7节段中，厚 度渐进地增大到与笫1节段相似的水平。在第5节段中测量到的固有 层厚度的对应平均值(图5B)表明，OVX导致固有层厚度显著增大(在 未受损组中是76 ± 2 nm对135 ± 28 pm)，而Acolbifene引起了非显 著的减小(60 ± 8 nm)。在OVX动物中在倍美力或倍美力+Acolbifene 给药以后观察到的增加维持在低于未受损组的水平(100 ± 9 jim和90+3 Hm，分别相对于135±28 nm)。 DHEA的给药也导致了固有层厚度的 统计学非显著的增加(96 ± 20 nm)，并且Acolbifene的加入导致了厚 度进一步增加(136 士 17 nm)，达到了未受损动物的水平。用倍美力
+DHEA处理OVX动物显著增大了厚度(144 ± 14 nm)，当与单独DHEA 给药相比时。最后，用倍美力+DHEA+Acolbifene处理的动物显示出 厚度(99 ± 9 fim)类似于单独用DHEA处理的组，并且低于倍美力 十DHEA组，虽然这种差别在统计学上并不显著。在可能的三联组合中，马雌激素倍美力的目标是作用于脑 以緩解血管舒缩症状。事实上，纯选择性抗雌激素Acolbifene与雌激 素联合给药以中和雌激素不希望出现的外周效应的益处已经由Labrie 等人充分描述了 (Labrie等人，2003， Endocrinol, 144(11): 4700-4706)。 在本研究中，当Acolbifene对OVX动物施用时，由SERM引起的最 典型的形态学特征是覆盖基底细胞层的壁对齐的小粘液细胞浅层的出 现，这是在倍美力+Acolbifene组中略微更显著的模式，这种模式在用 Acolbifene处理的所有组中仍然具有优势，包括当把SERM加入到 DHEA中时。在未成年大鼠(Anderson and Kang， 1975， Am J anat， 144(2): 197画207)和成年大鼠(Yoshida等人，1998， Cancer Lett, 134(1): 43-51)中已经报道了在抗雌激素处理下的阴道上皮粘液化。虽然已经 将这种形态模式与黄体酮引起的粘液化进行了对比(Anderson and Kang， 1975， Am J anat， 144(2): 197-207)，但是由抗雌激素引起的 上皮粘液化的分子机制仍然是未知的。由于DHEA在外周组织中转变成了雄激素和雌激素二者 之一或这二者，所以在本研究中用DHEA处理OVX动物后观察到的
用，这种作用可以在上皮水平掩盖任何可能的共存的少量雌激素作 用。先前的研究已经显示出了大鼠阴道内相同的粘液化作用(Sourla 等人，1998， J Steroid Biochem. Mol. Biol" 66(3): 137-149)。在那 项先前的研究中，阴道内应用DHEA取得了显著的作用，其剂量比 DHEA应用于背部皮肤之后产生作用所需的剂量低十倍。目前的数据表明在大鼠阴道内共同存在有主要的雄激素作 用和次要的雌激素作用。而且，目前的结果得到了 OVX动物阴道上 皮的观察结果的很好的支持，所述动物接受同样局部应用的DHEA， 和我们的研究中所用的相比，还加上皮下剂量的抗雄激素氟他胺 (FLU)(未公布的结果)。的确，由DHEA的雄激素成分产生的粘液化 的雄激素作用被FLU完全逆转了，并且产生了复层鳞状上皮，这是 典型的雌激素作用(数据未显示)。如果DHEA在大鼠阴道中具有特殊 的雄激素作用(粘液化)，那么这种作用将被FLU逆转，然后又会观察 到与OVX动物类似的萎缩的上皮。在性腺切除的雄性和雌性大鼠中 进行的先前的研究已经清楚地证明了 DHEA的处理会导致对前列腺、 精嚢和子宫产生刺激的雄激素和/或雌激素作用，这取决于所研究的乾 组织(Labrie等人，1988， Endocrinol, 123: 1412-1417)。其它研究已经证明了 DHEA对大鼠乳腺(Sourla等人， 1998， Endocrinol, 139: 753-764)、皮肤皮脂腺(Sourla等人，2000， J Endocrinol, 166(2): 455- 462)和骨矿物质密度(Martel等人，1998， J Endocrinol, 1S7: 433-442)的作用几乎是唯一的雄激素作用。然而， 大鼠阴道内DHEA的雌激素作用的存在先前已经在用该化合物处理过 的未成熟大鼠中通过诱导阴道开放和早熟排卵而证明过了 ，而DHT， 一种不能芳构化成雌激素的雄激素，没有产生这种作用(Knudsen and Mahesh， 1975， Endocrinol, 97(2): 458-468)。大鼠阴道组织使雄激 素尤其是Testo芳构化的能力很有可能解释DHEA在该器官中的大部 分雌激素作用(Lephart等人，1989， Biol Reprod， 40(2): 259-267)。 雄甾-5-烯-3(3，17|3-二醇(5-二醇)，已知与雌激素受体结合的一种DHEA 代谢产物(Shao等人，1950， JBiolChem， 250: 3095-3100; Poortman 等人，1975， J Clin Endocrinol Metab， 40(3): 373-379; Van Doorn 等人，1981， Endocrinol, 108: 1587-1594; Adams等人，1981， Cancer Res, 41: 4720-4726)，也可能促成雌激素作用(Poulin and Labrie， 1986， Cancer Res， 46: 4933-4937)。因此，抗雌激素Acolbifene与DHEA 的计划联用将会避免5-二醇的任何不希望的刺激作用。另一方面，通 过防止骨流失，acolbifene还将显示出额外的益处(Martel等人，2000， J Steroid Biochem Mol Biol， 74(1-2): 45-56)。在我们的知识的最大范围之内，先前还没有研究显示出 DHEA对固有层胶原纤维的紧密度和形态具有刺激作用，范围缩d、一 些，甚至没有显示出对肌层的刺激作用。这种DHEA-衍生的雄激素 和雌激素作用对于绝经后女性的阴道功能可能会具有有益的影响，并 且将为5型磷酸二酯酶抑制剂如昔多芬或tadalafil的作用提供所需的 底物，所述作用有可能是经由雄激素或雌激素-诱导的内皮一氧化氮合 酶(eNOS)-介导的促进阴道平滑肌舒张(综述在Munarriz等人，2003， J Urol, 170(2 Pt 2): S40-S44, Discussion S44-S45)。事实上，已经发
现了 Acolbifene引起了人类和大鼠上皮细胞的eNOS(Simoncini等人， 2002， Endocrinol, 143(6): 2052-2061)。已经进行了各种尝试来解决阴道干燥的问题，该问题通常 与性交困难和性快感丧失相关联。举例来说，通常开出局部阴道雌激 素制剂的药方来提供緩解，但是子宫内膜可能被非对抗性雌激素刺激 (Mattson等人，1989， Maturitas， 11: 217-222)。在切除子宫的绝经 后女性中，ERT仍然被使用，但公知具有发展成乳腺癌的增加的风险。 而且，ERT通过增加性激素结合球蛋白而降低血浆雄激素水平，这可
能会引起相对的卵巢和肾上腺雄激素缺乏，从而为同时存在的生理雄 激素替代创造了额外的理论(Casson等人，1997， Obstet Gynecol,
90(6): 995-998).
实施例2
方法
动物和处理最后一次给药后24小时，在异氟烷麻醉下通过放血将动
物处死。收集阴道并在切除后立即将其浸入10%中性緩冲福尔马林。 然后将阴道切成7个横节段(用于Acolbifene、 ERA-923和TSE-424)， 或者只将样品切成中部横节段(雷洛昔芬、拉索昔芬或LY 363381)。 然后常规处理各节段，并包埋在石蜡块中。适当的时候，将所有节段 按照它们原来的解剖位置的顺序放置在石蜡块中，并与石蜡块表面垂 直定向放置，从而能在橫切面上切割各节段。每只动物都切割4 nm 厚的石蜡切片，并用苏木精-曙红染色，以进行形态学检查。实验开始时，使用体重大约250-275 g的10到12周龄的 雌性 Sprague-Dawley 大鼠(CrL:CD⑧(SD)Br)(Charles River Laboratory, St-Constant， Canada)。在实验开始前使动物适应环境 条件(温度22 ± 3。C;湿度50 ± 20%; 12-h光照國12-h黑暗循环， 在07:15h开灯)至少一周。将动物单独圏养，并可自由接近水和啮齿 动物食物(Lab Diet 5002， Ralston Purina, St-Louis， MO)。本实验 是根据保护和使用实验动物的CCAC指南进行的，该指南是由加拿大 动物保护理事会(CCAC)和实验动物保护鉴定和委派协会(AAALAC) 批准的。将总共25只雌性大鼠随机分成5组，分组如下1)3只切 除卵巢的不受影响的对照组(OVX); 2)4只OVX+安慰剂栓剂；3)6只 OVX+0.33 mg DHEA栓剂；4)6只OVX+0.66 mg DHEA栓剂；5)6只 OVX+1.00 mg DHEA栓剂。在研究的第1天，在异氟烷-诱导麻醉下 将所有组的动物都进行双侧卵巢切除(OVX)。在研究的第5天开始将 一个栓剂插入阴道，并持续每天一次，直至研究的第18天，总共处 理14天。将栓剂轻轻地放在阴道开口处，然后在小光滑玻璃棒的帮 助下在阴道内小心推大约2-3 mm，玻璃棒用70%乙醇消毒，并在各 只动物使用之间使其干燥。如图15中所示，与OVX不受影响的组相比，安慰剂组的 阴道鳞状复层上皮稍微厚一些，第4节段具有4-8个细胞层。然而在 第6节段中，观察到了在OVX不受影响的组中发现的相同的形态， 即2-3个上皮细胞层。和OVX不受影响的动物一样，在整个阴道中 可以发现小柱状粘液细胞病灶集中点，当与OVX不受影响的动物相 比时稍微多一些。在该组的4只动物中，3只动物在外部的3个节段 中出现了轻度炎症改变。
DHEA 0.33 mg /栓剂如图18中所示，在这一组中，DHEA的作用在第2节段 中也可辨别，但这种作用在第3-4和5节段中显著增大，在第3-4和 5节段中观察到了非常大量的肥大粘液细胞，这种作用在第6-7和8 节段中很緩慢地减小，在第6-7和8节段中观察到了非常大量的对齐 得很好的粘液细胞。因此，在第4节段中，复层鳞状上皮具有3-9个 细胞层。覆在3-4个鳞状细胞层上面的肥大粘液细胞覆盖了 50-70% 的阴道表面，而对齐得很好的粘液细胞则覆盖了 5-30%的阴道表面。 不分泌粘液的区域分散在分泌粘液的细胞之间。在第6节段中，上皮 厚度也减小了，且由2-4个细胞层组成。覆在1-3个鳞状细胞层上面 的肥大粘液细胞覆盖了大约30-100%的阴道表面，而对齐得很好的粘 液细胞则覆盖了 0-70%。还观察到了极少数散在的不分泌粘液的区 域。在6只处理过的动物中，它们中的4只在4个外部节段中出现了
轻度炎症。 结论
1. 用于大鼠阴道内处理的赋形剂具有令人想要的特性
a. 在标有刻度的模具中很容易制备；
b. 完全溶解DHEA微粉的极好的能力，从而确保标准化剂量；
c. 阴道粘膜没有显著的组织反应和形态改变在前3-4个节段中 只观察到了轻微的厚度增加，这很可能是由于插入栓剂所用的操作手 法的问题。
2. DHEA以最低试验剂量(0.33 mg /栓剂)对阴道上皮形态产生了 影响。这种影响从第3节段到第5节段变得最大，然后逐渐减小至在 笫7节段消失。
3. 在0.66 mg /栓剂的DHEA剂量下，这种作用也在第3节段中 存在，并在第6节段中仍然很强。
4. 在1.00 mg /栓剂的DHEA剂量下，这种作用从第2_3节段到 邻近子宫颈的深阴道皱褶处都很强。
药物组合物实施例在上述制剂中其它的SERMs(托瑞米芬、Ospemifene、雷 洛昔芬、阿佐昔芬、拉索昔芬、TSE-424、 ERA-923、 EM-800、 SERM 3339、 GW-S。S)可替换Acolbifene，其它的性甾体抑制剂可替换 DHEA，其它的雌激素可替换倍美力，其它类型的5 cGMP磷酸二酯 酶抑制剂或前列腺素El可替换昔多芬或Tadalafil。可包括一种以上 的SERM或一种以上的前体或雌激素或5型cGMP磷酸二酯酶抑制 剂，在这种情况下加起来的重量百分数优选是上述实施例中给出的单 个前体或单SERM的重量百分数。已经以优选的实施方案和实施例的方式描述的本发明，但 并不因此而受限制。本领域的技术人员将容易地辨别出较宽的适用性 和仅受专利权利要求限制的本发明的范围。
权利要求
1.治疗或降低绝经后女性获得影响阴道固有层和/或肌层的问题的可能性的方法，所述方法包括给予有所述治疗需求的患者选自脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄甾酮、雄甾-5-烯-3β，17β-二醇和4-雄甾烯-3，17-二酮的性甾体前体。
2. 权利要求1的方法，进一步包括作为联合治疗一部分的给予 所述患者治疗有效量的选择性雌激素受体调节剂的步骤。
3. 权利要求1或2的方法，进一步包括作为联合治疗一部分的 给予所述患者治疗有效量的雌激素的步骤。
4. 治疗或降低绝经后女性获得阴道炎症可能性的方法，所述方 法包括给予所述患者治疗有效量的选择性雌激素受体调节剂。
5. 增加绝经后女性阴道上皮中粘液细胞的数量和大小的方法， 所述方法包括给予所述患者治疗有效量的选择性雌激素受体调节剂。
6. 权利要求l、 2或3的方法，其中，阴道疾病是选自阴道干燥、 性交困难和性功能障碍的疾病。
7. 增加绝经后女性阴道壁固有层中胶原纤维的紧密度的方法， 所述方法包括给予有所述治疗需求的患者选自脱氬表雄酮、硫酸脱氢 表雄甾酮、雄甾-5-烯-3(5，17|3-二醇和4-雄甾烯-3，17-二酮的性甾体前 体。
8. 增加绝经后女性阴道壁肌层厚度的方法，所述方法包括给予 有所述治疗需求的患者选自脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄甾酮、雄甾-5-烯-3p，17p-二醇和4-雄甾烯-3，17-二酮的性甾体前体。
9. 治疗或降低绝经后女性获得性功能障碍的可能性的方法，所 述方法包括给予有所述治疗需求的所述患者治疗有效量的选择性雌激 素受体调节剂，进一步包括作为联合治疗一部分的给予所述患者治疗 有效量的5型CGMP磷酸二酯酶抑制剂或前列腺素的步骤。
10. 权利要求9的方法，进一步包括给予所述患者治疗有效量的 选自脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄甾酮、雄甾-5-烯-3卩，17p-二醇和4-雄 甾烯-3，17-二酮的性甾体前体的步骤。
11. 任一前述权利要求l、 2、 3、 7和8的方法，其中，性甾体前 体是脱氢表雄酮。
12. 任一前述权利要求l、 2、 3、 7和8的方法，其中，性甾体前体是硫酸脱氢表雄甾酮。
13. 任一前述权利要求l、 2、 3、 7和8的方法，其中，性甾体前 体是雄甾-5-烯-3卩，17卩-二醇。
14. 权利要求9的方法，其中，5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂选 自昔多芬(l-[[3-(4，7-二氢-l-甲基-7-氧代-3-丙基-lH吡唑并[4，3-d嘧啶-5-基)-4-乙氧基苯基磺酰基-4-曱基哌溱)、Tadalafil(6R，12aR)-6-(l,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3,6，7，12，12a-六氢-2-曱基吡溱并[l，，2':1，6] 吡啶并[3,4-bp引哚-l，4-二酮、DA-8159、 EMR-62203、 TA-1790、 UK-371800和SCH画446132。
15. 权利要求9的方法，其中，前列腺素是前列腺素El(前列地 尔；(11a，13E，15S)-ll，15-二羟基-9-氧代前列腺-13-烯-l-酸))。
16. 阴道应用的药物组合物，包括a) 药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体；b) 治疗有效量的选自脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄酮和雄齒-5-烯-3(3，17(3-二醇的性甾体前体。
17. 药物组合物，包括a) 药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体；b) 治疗有效量的至少一种选择性雌激素受体调节剂，和c) 治疗有效量的至少一种5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂。
18. 药物组合物，包括a) 药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体；b) 治疗有效量的至少 一种选择性雌激素受体调节剂；c) 治疗有效量的至少一种5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂，和d) 治疗有效量的至少一种选自脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄酮和雄 甾-5-烯-3p，17p-二醇的性甾体前体。
19. 药盒，包括包含治疗有效量的至少一种选自前列腺素El、昔 多芬和Tadalafil的5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂的第一容器，和进 一步包括包含治疗有效量的至少一种选择性雌激素受体调节剂的第二 容器。
20. 药盒，包括包含治疗有效量的至少一种选自脱氢表雄酮、硫 酸脱氢表雄酮、雄甾-5-烯-3p，17p-二醇的性齒体前体的第一容器，和 进一步包括包含治疗有效量的至少一种选择性雌激素受体调节剂的第 二容器和包含治疗有效量的至少一种5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂 或前列腺素El的第三容器。
21. 前述权利要求2到5， 9， 17到20， 42和43的方法、药物组 合物或药盒，其中，选择性雌激素受体调节剂具有有下述特征的分子 式a) 两个芳环被1到2个插入碳原子间隔，两个芳环都未被取代或者被羟基或在体内转变为羟基的基团取代；b) 具有芳环和叔胺官能团或其盐的侧链。
22. 权利要求21的方法、药物组合物或药盒，其中，侧链选自和
23. 权利要求21的方法、药物组合物或药盒，其中，两个芳环都 是苯基，且侧链具有选自次曱基、亚曱基、-CO、 -O-和-S-、芳环和 叔胺官能团或其盐的部分。
24. 权利要求21的方法、药物组合物或药盒，其中，选择性雌激 素受体调节剂选自苯并^吩衍生物、三苯乙烯衍生物、丐l哚衍生物、 苯并p比喃f斤生物、5，6，7，8-四氢萘和苯并二氢p比喃t斤生物。
25. 权利要求21的方法、药物组合物或药盒，其中，选择性雌激 素受体调节剂是下式的苯并噻吩衍生的化合物 其中A和R2独立地选自氢、羟基、和在体内转变为羟基的部分；其中R3和R4独立地选自Cl-C4烷基，或者其中的Rj、 Rj和它 们结合的氮， 一起为选自吡咯烷子基、二甲基-l-吡咯烷子基、甲基-l-吡咯烷基、哌啶子基、六亚甲基亚氨基和吗啉代的任何结构；其中A选自國CO画、画CHOH和-CH2画；其中B选自次苯基、吡啶亚基和-环C4H2N2-。
26. 权利要求25的方法、药物组合物或药盒，其中，选择性雌激 素受体调节剂选自雷洛昔芬、阿佐昔芬(LY353381)和LY 335563。
27. 权利要求21的方法、药物组合物或药盒，其中，选择性雌激 素受体调节剂下式的三苯乙烯衍生的化合物其中D是-0 12<:112]\(113)114或-CENCH-COOH(R3和R4都独立 地选自Cl-C4烷基，或者R3、 R4和它们结合的氮原子一起为选自吡 咯烷并、二甲基-l-吡咯烷子基、甲基-l-吡咯烷基、哌啶子基、六亚曱 基亚氨基和吗啉代的环状结构)；其中E和K独立地是氢或羟基；其中J是氢或卣素。
28. 权利要求27的方法、药物组合物或药盒，其中，选择性雌激 素受体调节剂是他莫昔芬、OH-他莫昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、 Iodoxifene和GW 5638。
29. 权利要求21的方法、药物组合物或药盒，其中，选择性雌激 素受体调节剂是下式的吲咮衍生的化合物其中D选自-OCH2CH2N(R7)R8 、 -CH=CH-CO N(R7)R8 、 -CC-(CH2) -N(R7)R8(R7和Rs都独立地选自C广C6烷基、或R7、 118和它们 结合的氮原子一起为选自吡咯烷并、二甲基-l-吡咯烷子基、曱基-l-吡 咯烷基、哌啶子基、六亚曱基亚氨基、吗啉代的环状结构)；其中X选自氢和C1-C6烷基；其中Rp R2、 R3、 R4、 Rs和Rs独立地选自氢、羟基、C广Q 烷基、和在体内转变为羟基的部分。
30. 权利要求29的方法、药物组合物或药盒，其中，选择性雌激 素受体调节剂是TSE-424和ERA- 923。
31. 权利要求21的方法、药物组合物或药盒，其中，选择性雌激 素受体调节剂是下式化合物其中R,和R2独立地选自氢、羟基、和在体内转变为羟基的部分；其中Rs和&独立地是氢或C广Q烷基；其中D是-OCH2CH2N(iyR4( 113和114都独立地选自(^-<:4烷基， 或者R3、 R4和它们结合的氮原子一起为选自吡咯烷并、二曱基-l-吡 咯烷子基、曱基-l-吡咯烷基、哌啶子基、六亚甲基亚氨基、吗啉代的 环状结构)。其中X选自-0-和-CH2-。
32. 权利要求31的方法、药物组合物或药盒，其中，化合物选自 (-)-顺式-(5R，6S)-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-l-基乙氧基)苯基-5，6，7，8-四氢 萘-2-醇，D-(-)-酒石酸盐(拉索昔芬)和(3，4-反式-2，2-二曱基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯烷-l-基)乙氧基)苯基)-7-曱氧基色满。
33. 权利要求21的方法、药物组合物或药盒，其中，选择性雌激 素受体调节剂具有下述结构其中R,和R2独立地是氢、羟基或在体内转变为羟基的部分; 其中Z是二价封闭部分；其中R100是通过4-10个插入原子将L隔离B环的二价部分； 其中L是选自-SO-、 -CON-、 -N-和-SON-的二价或三价极性部分；其中G,选自氢、C,到Cs的烃或连接G2和L以形成5-到7-元杂 环的二价部分、和卣素或前述基团的不饱和衍生物；其中G2不存在或选自氢、C，到Cs的烃或连接^和L以形成5-到7-元杂环的二价部分、和卣素或前述基团的不饱和衍生物；其中&选自氢、甲基和乙基。
34, 权利要求33的方法、药物组合物或药盒，其中，Z选自-O-、 國NH-、 S-和画CH2-。
35. 权利要求33的方法、药物组合物或药盒，其中，化合物是下 述通式结构的苯并吡喃矛汴生物其中D是-OCH2CH2N(R3)R4(R3和114都独立地选自(>(:4烷基， 或R3、 R4和它们结合的氮原子一起为选自吡咯烷并、二曱基-l-吡咯 烷子基、甲基-l-吡咯烷基、哌啶子基、六亚甲基亚氨基、吗啉代、环 的环状结构)。其中A和R2独立地选自氢、羟基和在体内转变为羟基的部分。
36.权利要求35的方法、药物组合物或药盒，其中，苯并吡喃衍生物是在碳2上具有绝对构型S的旋光性化合物或其药学可接受的盐，所述化合物具有下述分子结构 其中A和112独立地选自羟基和在体内转变为羟基的部分； 其中R"是选自饱和的、不饱和的或取代的吡咯烷基，饱和的、 不饱和的或取代的哌咬子基，饱和的、不饱和的或取代的哌梵基，饱 和的、不饱和的或取代的吗啉代，含氮环状部分，含氮多环部分和 NRaRb(Ra和Rb独立地是氢、直连或支链CVC6烷基、直连或支链<:2-<:6链烯基和直连或支链cvc6炔基)。
37. 权利要求36的方法、药物组合物或药盒，其中，所述化合物 或盐基本上不含(2R)-对映异构体。
38. 权利要求35的方法、药物组合物或药盒，其中，苯并吡喃衍 生物是选自乙酸、已二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、富 马酸、氢碘酸、氢溴酸、盐酸、双氢氯噻噪酸、羟萘甲酸、乳酸、马 来酸、甲磺酸、甲基硫酸、1，5-萘二磺酸、硝酸、棕榈酸、三曱基醋 酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对苯二曱酸、对-甲苯磺酸 和戊酸的酸的盐。
39. 任一前述权利要求2到5， 9， 17到20， 42和43的方法、药 物组合物或药盒，其中，所述选择性雌激素受体调节剂是Acolbifene 。
40.任一前述权利要求2到5， 9， 17到20， 42和43的方法、药 物组合物或药盒，其中，所述选择性雌激素受体调节剂选自雷洛昔芬、阿佐昔芬、他莫昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、Iodoxifene、 GW 5638、 TSE-424、 ERA-923和拉索昔芬。
41. 权利要求l的方法，其中性甾体前体是阴道内给药的。
42. 权利要求16的药物组合物，另外包括治疗有效量的至少一种 选择性雌激素受体调节剂。
43. 权利要求42的药物组合物，另外包括治疗有效量的至少一种 雌激素。
全文摘要
治疗或降低包括人在内的温血易感动物获得阴道功能障碍的新的方法，特别是阴道干燥和性交困难，导致行功能障碍和低性欲和性能，包括给予性甾体前体。进一步给予雌激素或选择性雌激素受体调节剂，特别是选自雷洛昔芬、阿佐昔芬、他莫昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、lodoxifene、GW 5638、TSE-424、ERA-923和拉索昔芬，更加特别的是具有通式(I)结构的化合物明确地公开了式(I)用于医学治疗和/或抑制上述一些疾病的发展。还公开了用于递送活性成分的药物组合物和对本发明有用的药盒。
文档编号A61K31/519GK101106999SQ200580043744
公开日2008年1月16日 申请日期2005年10月20日 优先权日2004年10月20日
发明者F·拉布里, L·伯格, M·埃尔-阿尔菲 申请人:恩多研究公司