专利名称：具有抗炎性作用及改善血液流变性和抑制血栓形成的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类复方化学药品(新药I(5)类)开发研究，具体涉及具有抗炎性作用及改善血液流变性和抑制血栓形成的复方药物。
背景技术：
1.昔布类(--coxib)药物为选择性非甾体抗炎药(NSAIDs)，也即高选择性环氧化酶-2(Cox-2)抑制剂，对环氧化酶-1(Cox-1)的抑制作用弱，因此，昔布类而减少了NSAIDs常见的胃肠道不良反应的发生率，具有抗炎作用明显，对胃肠道刺激作用轻微等优点，在全球销量很大。2004年，一篇资深综述从临床研究和药理学依据中得出结论Cox-2抑制剂的应用有可能增加心血管疾病的危险性[1]。由于罗非昔布(rofecoxib)引起病人心血管不良事件发生率增加，2004年9月30日美国默克公司宣布对罗非昔布进行全球撤市，昔布类的用药安全性突现出来。将罗非昔布和塞来昔布分别与安慰剂对照，实验发现两个药都会增加心血管事件的发病率[2]。在近期地实验中发现，塞来昔布组有86名患者出现了血栓性心血管疾病，其中70％是心肌缺血和心肌梗死，30％出现了脑中风。但是这些发病者中有56％患者有心血管病史，说明塞来昔布有使之恶化的可能[3]。研究表明，Cox-2选择性抑制剂能够增强血小板的活性，从而启动血栓性事件的发生[4]。实验和临床研究已表明，Cox-2呈表达在肾、血管内皮等一些具有重要生理功能的组织上，依赖Cox-2生成的类前列腺素不仅参与疼痛或炎症信号的调节，而且还维持血管的完整性。尤其是具有血管舒张及抗血小板活性的前列环素(PGI2)是通过Cox-2生成的，当Cox-2被抑制时PGI2水平将降低至正常水平的50％以下[5]。有研究表明，塞来昔布能降低健康人尿和血中PGI2的水平，增加了血栓形成的危险[6]。2005年2月发表的关于用塞来昔布(celecoxib)预防腺瘤的实验(APC)中显示，与安慰剂对比，塞来昔布(辉瑞制药有限公司产品)引起致死性或非致死性心血管事件的危险性明显增加，有16个服用这两个剂量的病人出现心血管事件，其致死性或非致死性的危险性是安慰剂组的2.5倍，同时，在出现血栓事件患者中大都患有心血管疾病，提示塞来昔布可能加重原有的心血管疾病，美国国家癌症机构已经中止了APC实验中所采用的塞来昔布的剂量400，800毫克/天。
许多研究认为，主要是由于此类药物抑制了PGI2的生成，致使TXA2升高，从而调节血小板聚集性的PGI2/TXA2平衡紊乱，此外，近年来大量文献资料表明，缺血性心脑血管疾病患者血液粘度异常增高，比正常人高出5到6倍。因此多数学者认为血液粘度升高也是导致缺血性心脑血管疾病的主要危险因素之一，从而心脑血管血栓形成的危险性增加。
2、研究表明，亚硒酸钠(Se)可以使PGI2升高，Valentrovic等人发现缺硒时主动脉合成PGI2明显减少[7]。Schiavon等报道给健康志愿者补硒6周后PGI2合成增多，进一步研究发现加Se可使猪主动脉内皮培养细胞PGI2生成增加[8]。给正常大鼠补硒后大鼠主动脉内皮细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性增高同时PGI2生成增多[9]，研究表明，硒以GSH-Px形式参与AA的脂氧酶代谢通路，催化过氧化氢廿碳四烯酸(HPETE)转化为羟化廿碳四烯酸(HETE)[10]，而HPETE为动脉内皮PGI2合成酶抑制剂。此外，Se还可以通过使GSH-Px活性升高使氧化物水平降低而抑制环氧酶活性使TXA2生成减少[11]。基于以上两个作用，Se可使PGI2/TXA2比值增加，产生血小板聚集的抑制作用。
3、体外研究发现，双密达莫对血小板黏附无影响，但能抑制血小板聚集。双密达莫通过抑制环核苷酸磷酸二酯酶活性而增加血小板内cAMP浓度，而增强PGI2的作用。近来有关文献报道双密达莫具有良好的抗炎作用[12]。
以下是申请人检索的相关参考文献
1.Clark DWJ，Layton D，Shakir SAW.Do some inhibitors of COX-2 increase the risk ofthromboembo-lic events？Linking all of the data analysed in this report.Drug Saf 2004；27(7)427-56；
2.Drazen JM.COX II inhibitorsa lesson in unexpected problems for her help andrheumatology exper-tise in assessing the[online].Available from URLhttp//www.nejm.org[Accessed 2005 Feb 15]；
3.Mira H.W，Peter H.，Rachael M.，et al.Incidence of Thrombotic Cardiovascular Eventsin Patients Tak-ing Celecoxib Compared with Those Taking Rofecoxib Interim Results fromthe New Zealand Inten-sive Medicines Monitoring Programme.Drug study 2005；28(5)435-442；
4.Pidgeon GP，Tamosiuniene R，Chen G，et alIntravascular thrombosis afterhypoxia-induced pulm-onary hypertensionRegulation by cyclooxygenase-2.Circulation2004；1102701-2707
5.Florian Krtz，Thomas M.，Schiele et al.Selective COX-2 Inhibitors and Risk ofMyocardial Infarction.J Vasc Res 2005；42312-324；
6.杨藻宸主编药理学和药物治疗学人民卫生出版社第59章抗血小板药997-998；
7.Doni MG，The serum selenium loncentration of patients with alute myocardialintarction，Haemostasis，1983，13248；
8.Schiouon R，Arterial walls generate prostaglandin endoperoxide a substance，ThrombRes，1986，36340；
9.Valentrovic MA，Platelet glutathione peroxidase activity as an index of selenium statusin rats，J Toxiol Environ Health，1985，15193；
10.Bryant RW，Prostalyclin and thrombox ane synthase new aspects of hemethiocatecatelysis，J Biol Chem 1982，25714937；
11.Cuidi G，The relation of selenium glutathione peroxydase and the release ofthromboxane X2，Jlabclin Med，1984，104574；
12.Weyrich AS，Denis MM，Kuhlmann-Eyre JR，Spencer EDDipyridamole selectivelyinhibits inflame-matory gene expression in platelet-monocyte aggregates circulation2005FEB 8111(5)633-642。
发明内容
本发明的目的在于，提供一类具有抗炎性作用及改善血液流变性和抑制血栓形成的药物，该药物能够在协同抗炎作用的同时，还具有良好的协同改善血液流变性和抑制血栓形成的作用。
为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案
具有抗炎性作用及改善血液流变性和抑制血栓形成的药物，其特征在于，该药物由塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫三种药物中的两种或两种以上构成，其中
塞来昔布、亚硒酸钠和双密达莫组成塞来昔布复方，其重量配伍比例为塞来昔布∶亚硒酸钠∶双密达莫＝1∶0.0013∶2.3；或
塞来昔布和亚硒酸钠组成塞来昔布复方，其重量配伍比例为塞来昔布∶亚硒酸钠＝1∶0.0013；或
塞来昔布和双密达莫组成塞来昔布复方，其重量配伍比例为塞来昔布∶双密达莫＝1∶2.3；或
亚硒酸钠和双密达莫组成双密达莫复方，其重量配伍比例为亚硒酸钠∶双密达莫＝0.000565∶1。
经申请人对上述药物复方的研究证明，塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫均具有抗佐剂性关节炎作用；上述3个复方塞来昔布(塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫，塞来昔布+亚硒酸钠；塞来昔布+双密达莫)和双密达莫复方(双密达莫+亚硒酸钠)也具有抗炎性关节炎作用。复方塞来昔布(塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫，塞来昔布+双密达莫)的抗早期炎症作用较单用塞来昔布明显。
申请人将尽快完成申报新药的相关工作。
具体实施例方式
一、复方塞来昔布组方研究
1.研究目的
塞来昔布的最重要不良反应是促进血栓形成，引起心脑血管梗塞。本研究以减轻塞来昔布促血栓形成的不良反应为目的，以健康大鼠血栓形成为观察指标，研究塞来昔布与亚硒酸钠及双密达莫的交互作用，以期寻找对血栓形成有良好抑制作用的塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫的复方组方及其组方比例。
2.实验材料
2.1药品及试剂
塞来昔布由辉瑞制药有限公司生产(批号BK050609)，亚硒酸钠购于郑州福润德工贸有限公司(批号041121)，双密达莫由山西临汾制药厂生产(批号0512031)，
2.2仪器
1.体外血栓形成仪(9103-B)，由中科院传感技术公司生产。
2.扭力天平、显微镜、游标卡尺、滤纸等。
2.3动物
健康成年♂SD大鼠，体重250±25g，动物和饲料由西安交通大学医学院试验动物中心提供(二级动物合格证号陕医动字08-005)。
3.实验方法
3.1权重配方设计
利用体外血栓形成实验，通过DAS软件的权重配方设计将塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫按照三因素六水平进行配伍设计，如表1-1所示；
表1-1.权重配方设计表
3.1进行分组及体外血栓形成及血栓指数测定法
取42只健康成年♂SD大鼠(体重200±25g)按体重均衡随机分为7组，每组6只，其中6组为不同配比的用药组，另1组为空白对照组。各组用药容量均为1ml/100g。根据权重配方设计表安排的剂量(见表1-2)灌胃给药，每日灌胃一次，连续10天，于第10天给药后一个小时，从大鼠颈总动脉取血，将1.8ml未抗凝血快速注入体外血栓形成仪中的硅化塑料环，立刻将环套于血栓形成仪转盘上，以(17±1)rpm(线速度437mm/s)的转速旋转，旋转环与地面夹角为74°，旋转15min后取下，将环中血栓倒在滤纸上，吸去余血，用游标卡尺测血栓长度L(mm)，用扭力天平称其湿重W(mg)，并依公式血栓指数计算Q值。
表1-2.塞来昔布、亚硒酸钠及双密达莫的配方设计表
3.3数据分析
所得权重配方数据均用DAS软件(DAS，ver1.0)药物相互作用模块进行分析。
4.实验结果
由于DAS软件药物相互作用分析时比较的是最大效应，而本实验的目的是观察塞来昔布、亚硒酸钠及双密达莫三药配伍时对血栓形成的抑制效应，故现将血栓指数Q进行倒数转换后(1/Q)再用DAS软件分析，得出三药配伍的优化剂量，结果如表1-3、1-4所示
表1-3.三药配伍对血栓指数Q值的影响(E1/Q的均数，SD1/Q的标准差)
表1-4.三药以血栓指数Q的倒数(1/Q)为指标的组方剂量优化
各组分在组方中的作用及其相互作用定性分析
5、结果分析
DAS数据处理的结果显示，在以塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫三药组方对血栓形成的影响中，双密达莫是主药(权重指数b＝1.853，且P＝0.011)，而亚硒酸钠的作用也比较明显(b＝1.811，且P＝0.037)，也可作为主药；塞来昔布(权重指数b＝-0.067，且P＝0.071)具有促血栓形成趋势。
此外，在6个配伍组中，第二组血栓指数倒数(1/Q)的均数为最大(1/Q的均数X＝0.078)，反之，Q的均数最小，即药效最好。除此，结果显示亚硒酸钠与双密达莫配伍中对抑制血栓形成有协同性，所以针对减少塞来昔布促血栓形成副作用的目的，选用双密达莫和(或)亚硒酸钠与塞来昔布配伍。
6、结论
理论优化组方为①塞来昔布12mg/kg+亚硒酸钠16μg/kg+双密达莫28mg/kg，三者的理论配伍比例为1∶0.0013∶2.3；②塞来昔布12mg/kg+亚硒酸钠16μg/kg，二者的理论配伍比例为1∶0.0013；③塞来昔布12mg/kg+双密达莫28mg/kg，二者的理论配伍比例为1∶2.3；④亚硒酸钠16μg/kg+双密达莫28mg/kg，二者的理论配伍比例为0.000565∶1。
二、复方塞来昔布抗大鼠佐剂性关节炎作用及其拆方研究
1.研究目的
以前面实验结果为基础，将塞来昔布、亚硒酸钠与双密达莫按1∶0.0013∶2.3的比例配伍成4个复方(塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫；塞来昔布+亚硒酸钠；塞来昔布+双密达莫；双密达莫+亚硒酸钠)，研究复方药物经拆方后对大鼠佐剂性关节炎的影响及其交互作用。
2.实验材料
2.1药品及试剂
塞来昔布由辉瑞制药有限公司生产(批号BK050609)，亚硒酸钠购于郑州福润德工贸有限公司(批号041121)，双密达莫由山西临汾制药厂生产(批号0512031)，弗氏完全佐剂购于Sigma公司(批号R051124)。
2.2实验仪器20ml注射器，三角架，三通管，容量吸管；
2.3实验动物SD大鼠，雄性，体重175～225g，动物和饲料由西安交通大学医学院试验动物中心提供(二级动物合格证号陕医动字08-005)。
3.实验方法和结果
3.1方法
根据药物效应拆方分析实验需要，将健康成年雄性SD大鼠随机分为11组，每组10只，分别为
(1)空白对照组NS 20ml/kg；
(2)模型组NS 20ml/kg；
(3)塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫(cele.+Se+Dm)大剂量组24mg/kg+32μg/kg+56mg/kg；
(4)塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫(cele.+Se+Dm)中剂量组12mg/kg+16μg/kg+28mg/kg；
(5)塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫(cele.+Se+Dm)小剂量组6mg/kg+8μg/kg+14mg/kg；
(6)塞来昔布+亚硒酸钠(cele.+Se).中剂量组12mg/kg+16μg/kg；
(7)塞来昔布+双密达莫(cele.+Dm)中剂量组12mg/kg+28mg/kg；
(8)亚硒酸钠+双密达莫(se+Dm).中剂量组16μg/kg+28mg/kg；
(9)塞来昔(cele)中剂量组12mg/kg；
(10)亚硒酸钠(se)中剂量组16μg/kg；
(11)双密达莫(Dm)中剂量组28mg/kg。
大鼠适应性饲养5天后，每鼠于右后足跖皮下注射0.1mL弗氏完全佐剂致炎，给药组大鼠于佐剂注射后第19天按上述分组和剂量给药，每天一次，连续给药d14，于给药前及给药后d1、d3、d5、d7、d14根据容积法量取各鼠左、右后足踝容积。
大鼠左、右足踝容积的差值即为肿胀度，计算肿胀度的均值，按以下公式计算肿胀抑制率。
3.2数据统计
所得数据用DAS统计软件(DAS，ver1.0)模块中时序性资料组间t-test进行比较。
3.3实验结果
按上述11组分组观察佐剂型关节炎大鼠踝关节肿胀度，并以炎症模型组为对比组，统计关节肿胀度的变化，进而分析复方药物(塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫；塞来昔布+亚硒酸钠；塞来昔布+双密达莫；双密达莫+亚硒酸钠)和单化合物药物(塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫)对炎症的影响；再以塞来昔布组为对比组进行拆方分析。
表2-1复方塞来昔布拆方后在不同时间对大鼠足跖肿胀的治疗作用(x±S，n＝10)
:表示对比组，-P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01，以变化率进行统计。
(续表2-1)
表2-2复方塞来昔布拆方后在不同时间对大鼠足跖肿胀的治疗作用(x±S，n＝10)
:表示对比组，-P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01，以变化率进行统计。
研究发现，模型组大鼠发生了足跖肿胀，且肿胀度随后逐渐明显，在d5达到高峰，在d14足跖肿胀仍明显存在(P＜0.01)，说明佐剂关节炎模型复制成功。
在给药后d1、d3、d5、d7、d14，给药9组(复方塞来昔布3个剂量，塞来昔布+亚硒酸钠，塞来昔布+双密达莫，亚硒酸钠+双密达莫，塞来昔布，亚硒酸钠，双密达莫)均可使大鼠足跖肿胀度减轻；d1后各组肿胀度变化率不大，只有复方中剂量组较明显，具有统计学意义(P＜0.05)；随着给药时间延长，各给药组抑制大鼠足跖肿胀(抑制率)的作用趋于明显(见表2-3)。研究表明，塞来昔布、亚硒酸钠和双密达莫均具有独立的抗炎性关节肿胀作用；以塞来昔布为主组成的复方(塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫，塞来昔布+亚硒酸钠，塞来昔布+双密达莫，亚硒酸钠+双密达莫)也具有抗炎、抗关节肿胀作用。(表2-1，表2-2)
拆方分析表明，在炎症早期(d1)复方药物(塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫，塞来昔布+双密达莫)的作用大于塞来昔布单独使用的作用，说明复方药物中各组分发挥了相互促进作用。
各给药组随着时间对大鼠足跖肿胀度抑制率大小见表2-3；从图2-1、2-2、2-3均可看出复方药物和单独3个药的对大鼠佐剂性关节炎的抑制率随着时间的延长呈上升趋势。
表2-3复方塞来昔布拆方后不同时间对大鼠足跖肿胀的抑制率(n＝10)
4.小结
1、成功建立了佐剂性关节炎，炎症反应在d5达高峰。
2、塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫均具有抗佐剂性关节炎作用；3种药组成的复方(塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫，塞来昔布+双密达莫，双密达莫+亚硒酸钠)也具有抗炎性关节炎作用，其作用随用药时间延长而明显。
3、在炎性关节炎早期，复方药物(塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫，塞来昔布+双密达莫)的抗炎作用较单用塞来昔布明显。
三、复方塞来昔布对大鼠佐剂性关节炎血液流变性及血栓形成的影响
有研究表明，塞来昔布能降低健康人尿和血中PGI2的水平，增加了血栓形成的危险。这些研究证明了理论上的推测选择性Cox-2抑制剂能够增强血小板的活性，从而能够启动血栓性事件的发生。近年来大量文献资料表明血液粘度升高也是导致缺血性心脑血管疾病的主要危险因素之一。此外，有研究表明AA大鼠的血液流变学指标明显异常，表现为各切变率下的全血粘度、还原粘度、血浆粘度、压积、血沉、血沉方程值都显著增高，说明大鼠在关节炎时血液处于浓、粘、凝、聚状态。
1.目的
观察佐剂诱导大鼠关节炎中塞来昔布是否具有增加血小板活性及对血液流变学产生影响，并研究其与亚硒酸钠、双密达莫配伍对血液流变学的影响，以期减少塞来昔布的血栓性副作用。
2..材料
2.1药品和试剂
塞来昔布由辉瑞制药有限公司生产(批号BK050609)，亚硒酸钠购于郑州福润德工贸有限公司(批号041121)，双密达莫由山西临汾制药厂生产(批号0512031)，枸橼酸钠由西安化学试剂厂生产(批号030608)，肝素钠由江苏徐州生物化学制药厂生产(批号0602113)，草酸铵由西安化学试剂厂生产(批号021009)，TXB2，PGI2放免试剂盒购于苏州大学医学院血液病实验室(批号060428)。
2.2仪器
LBY-N6K型普利生全自动清洗血液流变仪，由北京普利生仪器有限公司生产，切变率分别为10、60、1501/S；F-3型高速微量离心机；读数显微镜，由长春第一光学仪器厂生产；体外血栓形成仪(9103-B)、血小板粘附仪(9103-A)，均由中科院传感技术公司生产，LXJ-II型离心沉淀机，上海医用分析仪器厂；γ放射免疫计数仪，上海二六二厂。
2.3实验动物
健康成年♂SD大鼠，体重250±25g，动物和饲料由西安交通大学医学院试验动物中心提供(二级动物合格证号陕医动字08-005)
3.实验方法
3.1分组
取健康SD♂大鼠110只，体重250±25g，按体重随机均衡分为11组，分组同上。将浓度为10mg.mL-1的佐剂于每鼠右后足跖皮下注射0.1mL致炎。给药组大鼠于佐剂注射后于第19天按剂量给药，模型组和空白对照组则给于生理盐水灌胃，每天一次，灌胃容量均为10ml/kg体重，连续给药14d。于第15天，停食12小时后，对空腹大鼠进行血液流变学指标的测定。
3.2血液流变学实验
将各组大鼠用乌拉坦(20％)5ml/kg腹腔注射麻醉，分离颈动脉由颈总动脉插管取血8ml。其中3.5ml血迅速注入肝素抗凝管(抗凝管制备方法肝素钠用蒸馏水配制成溶液，浓度为31.25单位/ml血，用微量加样器加入试管底部，放入烘箱内烘干备用)中，摇匀后，置入35℃的恒温水浴箱备用；1.5ml血迅速注入枸橼酸钠抗凝管(制备方法枸橼酸钠用生理盐水配制成浓度为3.8％的溶液，取0.13ml加入硅化试管中)，摇匀备用，1.1ml用于测体外血栓形成指数，1.5ml则用于检测血浆TXB2，PGI2含量。
1)全血及血浆粘度的测定取1ml肝素抗凝血注入粘度计数筒内，转换高、中、低切变率开关，从计算机上直接读取高、中、低切变率粘度粘度值。做完全血粘度后黏度仪自动清洗，将剩余的2.5ml肝素抗凝血用离心机离心15分钟，转速为3000rpm，取1ml血浆注入黏度计数筒内测血浆粘度。
2)血沉及红细胞压积的测定取底端平整的毛细管，插入刚混匀的肝素抗凝血中，待血进入毛细管内4/5处，封住下端口，下端插入橡皮泥中，垂直竖立，并计时，1小时后用血沉，压积板读出血沉值(温氏法)。将测定血沉的毛细离心管，用3F-3型高速微量离心机离心5分钟，转速为12000rpm，再用血沉，压积板读出红细胞积值。
3)血小板粘附率测定将1ml枸橼酸钠抗凝血加入容量为5ml的长颈圆球形玻璃瓶中，将其置于血小板粘附仪转盘上，以5rpm的转速旋转15分钟后，再用定量取血管分别吸取20μl旋转前和旋转后的抗凝血注入1％的草酸铵稀释剂0.4ml中，测定旋转前后血中的血小板板数，然后按下式计算
4)红细胞变形性的测定
5)体外血栓形成及血栓指数测定法将1.1ml未抗凝血快速注入硅化塑料环内(体外血栓形成仪附件)，立刻将环套于血栓形成仪转盘上，以(17±1)rpm(线速度437mm/s)的转速旋转，旋转环与地面夹角为74°，旋转15min后取下，将环中血栓倒在滤纸上，吸去余血，用游标尺测其长度，扭力天平称其湿重，并依公式血栓指数计算Q值，式中L为血栓长度(mm)，W为血栓湿重(mg)。
6)血浆中TXB2、PGF1α测定
制备标本将前述1.5ml血用2％EDTA溶液按1∶9比例抗凝，以3000转/分离心30分钟，吸取上清液置于低温冰箱保存。
TXB2、PGF12测定操作步骤
①TXB2标准品用缓冲液倍比稀释成2.5～160pg/0.1ml 7个管，将TXB2抗血清、TXB2示踪剂加入缓冲液10ml稀释。将制备好的待测样品取出复溶。
②按下表所示操作
从第3管起离心3000rpm30分钟，吸弃上清后测定沉淀的放射性。
③将制备好的各管标记后送同位素室测定样本中TXB2、PGF1α含量。
④计算结果
3.3统计分析
数据用SPSS分析，实验结果以x±s表示，组间比较用t检验。
4.实验结果
4.1佐剂性关节炎大鼠血液流变性改变
表3-1数据说明，与正常对照组比较，佐剂性关节炎大鼠的全血高切粘度、中切、低切粘度、红细胞IR值、红细胞聚集指数、血栓指数Q，血小板黏附率均增高且具有高度统计学意义(P＜0.01)；佐剂性关节炎大鼠的红细胞压积、血沉则无明显改变。以上结果与文献报道相一致，说明佐剂性关节炎血瘀症模型复制成功。
表3-1.血瘀症模型复制情况(x±S，n＝10)
与正常对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01
4.2塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫及其复方对佐剂性关节炎大鼠全血切粘度的影响
表3-2表明，与模型组比较，除塞来昔布无明显性作用外，亚硒酸钠、双密达莫及其组成的复方塞来昔布(Cele+Se+Dm)(高、中、低剂量)和其他2药组成的复方(Cele.+Se；Cele.+Dm；Se.+Dm)均可使佐剂性关节炎血瘀症模型的高、中、低切变率全血黏度均降低，且具非常显著的统计学意义(P＜0.01)，说明他们对血液流变性具有良好的该善作用。
与塞来昔布组(17mg/kg)比较，其与亚硒酸钠、双密达莫组成的各种复方的作用均大于塞来昔布组，特别是复方塞来昔布(Cele+Se+Dm)的低剂量组(8.5mg 11.5μg；20mg/kg)降低高、中、低切变率全血黏度的作用仍然大于塞来昔布组(17mg/kg)，说明药物产生了良好的相互作用。
表3-2塞来昔布、亚硒酸钠及双密达莫及其复方对全血黏度的影响(x±S，n＝10)
:表示对比组，-P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01。
4.3塞来昔布、亚硒酸钠及双密达莫及其复方对红细胞刚性指数IR的影响
红细胞刚性指数IR值表示红细胞的脆性，与红细胞的变形能力呈反比关系。红细胞刚性指数IR值见表3-3。
与模型组比较，由塞来昔布、亚硒酸钠及双密达莫组成的任何复方(Cele+Se+Dm，Cele.+Se；Cele.+Dm；Se.+Dm)均可使佐剂关节炎大鼠的红细胞刚性指数IR值均明显降低，且具有高度统计学意义(P＜0.01)；此外，亚硒酸钠单独作用也可使IR值明显降低，且具有高度统计学意义(P＜0.01)；而双密达莫组、塞来昔布组IR值变化无统计学意义。
表3-3.塞来昔布、亚硒酸钠及双密达莫及其复方对IR值的影响(x±S，n＝10)
:表示对比组，-P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01。
拆方分析与塞来昔布组比较，同比剂量的塞来昔布+双密达莫(Cele.+Dm)降低IR值的作用显著性提高，说明塞来昔布与双密达莫协同增加红细胞的变形能力；与亚硒酸钠比较，同比剂量的亚硒酸钠+双密达莫(Se.+Dm)降低IR值的作用显著性提高，说明亚硒酸钠与双密达莫协同增加红细胞的变形能力；与双密达莫比较，同比剂量的亚硒酸钠+双密达莫(Se.+Dm)、塞来昔布+双密达莫+亚硒酸钠(Cele+Se+Dm)降低IR值的作用显著性提高，说明塞来昔布、亚硒酸钠和双密达莫协同增加红细胞的变形能力，其中硒可能起到关键作用。
4.4塞来昔布、亚硒酸钠及双密达莫复方对血小板黏附率及血栓指数Q的影响
与模型组比较研究发现，塞来昔布(Cele)、亚硒酸钠(Se)、双密达莫(Dm)及其复方(Cele+Se+Dm、Cele.+Se、Cele.+Dm、Se.+Dm)均可降低血小板黏附率和血栓指数Q值(P＜0.01)。见表3-4。
表3-4.塞来昔布、亚硒酸钠及双密达莫及其复方对血小板黏附率和血栓指数的影响
x±S，n＝10，:表示对比组，-P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01
与塞来昔布组比较研究发现，塞来昔布对血小板黏附率及血栓指数Q的抑制作用弱于亚硒酸钠和双密达莫；由3药组成的复方(Cele+Se+Dm)在同比剂量时抗血小板黏附作用明显强于塞来昔布单独使用时；由3药组成的复方在同比剂量时降低血栓指数Q方面也明显强于塞来昔布单独使用时，由2药组成的复方(Cele.+Se，Cele.+Dm)在同比中剂量和低剂量时也明显强于塞来昔布单独使用时。研究表明，复方药物在对血小板黏附率及血栓指数Q的抑制作用时发挥了良好的相互作用，其中微量的亚硒酸钠可能起到重要作用。见表3-4。
4-5复方塞来昔布拆方后对血浆TXA2/PGI2比值的影响
表3-5所揭示得信息量很大，与模型组比较，在炎症时PGI2的含量和相对量(TXB2/PGI2)均增加；塞来昔布可使炎症大鼠PGI2降低和TXA2/PGI2比值增加，对抗炎症变化；复方塞来昔布(Cele+Se+Dm)在较大剂量时(高、中剂量)使TXB2和PGI2均降低，但TXA2/PGI2比值却在增加。
表3-5.复方塞来昔布拆方对血浆TXA2，PGI2水平的影响x±S，n＝10
:表示对比组，-P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01
研究表明，塞来昔布可明显增加TXA2/PGI2比值，有可能增加发生血栓性心血管不良反应的危险性；与同比剂量的塞来昔布单用相比，复方塞来昔布(Cele+Se+Dm)具有更强的降低TXB2作用，因此增加TXA2/PGI2比值的作用较弱；同比剂量的塞来昔布+亚硒酸钠复方(Cele+Se)也在增加TXB2和PGI2时，也具有增加TXA2/PGI2比值的作用较弱的特点；未观察到同比剂量的塞来昔布与双密达莫复方(Cele+Dm)具有这样的特点。与塞来昔布单用比较，复方塞来昔布(Cele+Se+Dm或Cele+Se)增加TXA2/PGI2比值的作用较弱，从而降低了塞来昔布心血管不良反应的危险性。
5、小结
5.1、在佐剂性关节炎大鼠模型上，观察到血液流变性的不良变化和血栓形成加剧，包括全血粘度增大，红细胞变形能力降低，血小板黏附增强，血栓指数Q值增大等变化。佐剂性关节炎大鼠PGI2的含量和TXB2/PGI2比值降低。
5.2、亚硒酸钠、双密达莫具有改善大鼠佐剂性关节炎模型血液流变性(高、中、低切变全血粘度降低，红细胞变形能力增加)的作用；复方塞来昔布各种组方(Cele+Se+Dm、Cele+Se、Cele+Dm)和双密达莫硒(Se+Dm)也具有改善大鼠血液流变性的作用。说明复方塞来昔布作用优于塞来昔布单独使用。
5.3、亚硒酸钠、双密达莫具有降低大鼠佐剂性关节炎模型血栓指数Q值和抑制血小板黏附率的作用，复方塞来昔布各种组方(Cele+Se+Dm、Cele+Se、Cele+Dm)也具有降低血栓指数Q值和抑制血小板黏附率的作用，说明复方塞来昔布作用优于塞来昔布单用。双密达莫硒(Se+Dm)同样具有降低血栓指数Q值和抑制血小板黏附率的作用。
5.4、塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫均可使大鼠佐剂性关节炎模型TXB2/PGI2比值增加，其中塞来昔布作用最明显(与文献报道一致)；复方塞来昔布(Cele+Se+Dm，Cele+Se)升高TXB2/PGI2比值的作用显著性低于塞来昔布单独使用，说明复方塞来昔布引起血栓性疾病的危险显著性低于塞来昔布单用。
四、研究结论
1、复方塞来昔布优化组方为①塞来昔布12mg/kg+亚硒酸钠16μg/kg+双密达莫28mg/kg，三者的配伍比例为1∶0.0013∶2.3；②塞来昔布12mg/kg+亚硒酸钠16μg/kg，二者的配伍比例为1∶0.0013③塞来昔布12mg/kg+双密达莫28mg/kg，二者的配伍比例为1∶2.3；④双密达莫28mg/kg+亚硒酸钠16μg/kg，二者的配伍比例为1∶0.00057。
2、塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫均具有抗佐剂性关节炎作用；3个复方塞来昔布组方(塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫，塞来昔布+亚硒酸钠；塞来昔布+双密达莫)和双密达莫硒(双密达莫+亚硒酸钠)也具有抗炎性关节炎作用。复方药物(塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫，塞来昔布+双密达莫)的抗早期炎症作用较单用塞来昔布明显。
3、亚硒酸钠、双密达莫组方具有改善大鼠佐剂性关节炎模型血液流变性和抑制血栓形成的良好作用，塞来昔布无上述作用复方塞来昔布3个组方(Cele+Se+Dm、Cele+Se、Cele+Dm)和双密达莫硒(Dm+Se)均具有改善大鼠血液流变性和抑制血栓形成的良好作用。
4、结论复方塞来昔布(塞来昔布+亚硒酸钠+双密达莫，塞来昔布+亚硒酸钠；塞来昔布+双密达莫)和双密达莫硒(双密达莫+亚硒酸钠)组方合理，克服了塞来昔布的促血栓形成的缺点，在发挥协同抗炎作用的同时，还具有良好的协同改善血液流变性和抑制血栓形成的作用。
权利要求
1.一种具有抗炎性作用及其协同改善血液流变性和抑制血栓形成的药物，其特征在于，该药物由塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫三种药物中的两种或三种构成，其中
塞来昔布、亚硒酸钠和双密达莫组成塞来昔布复方，其重量配伍比例为塞来昔布∶亚硒酸钠∶双密达莫＝1∶0.0013∶2.3；或
塞来昔布和亚硒酸钠组成塞来昔布复方，其重量配伍比例为塞来昔布∶亚硒酸钠＝1∶0.0013；或
塞来昔布和双密达莫组成塞来昔布复方，其重量配伍比例为塞来昔布∶双密达莫＝1∶2.3；或
亚硒酸钠和双密达莫组成双密达莫复方，其重量配伍比例为亚硒酸钠∶双密达莫＝0.000565∶1。
全文摘要
本发明公开了一类具有抗炎作用及其协同改善血液流变性和抑制血栓形成的药物，该药物由塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫三种药物中的两种或三种构成四种复方，经申请人对上述药物复方的研究证明，塞来昔布、亚硒酸钠、双密达莫均具有抗佐剂性关节炎作用；上述3个塞来昔布复方和双密达莫复方也具有抗炎性关节炎作用。复方塞来昔布的抗早期炎症作用较单用塞来昔布明显。本发明的复方塞来昔布和双密达莫硒组方合理，克服了塞来昔布的促血栓形成的缺点，在发挥协同抗炎作用的同时，还具有良好的协同改善血液流变性和抑制血栓形成的作用。
文档编号A61K31/519GK1872087SQ20061004299
公开日2006年12月6日 申请日期2006年6月19日 优先权日2006年6月19日
发明者袁秉祥, 唐俊杰 申请人:西安交通大学