苯酚衍生物和它们调控pkb活性的用途的制作方法

专利名称：苯酚衍生物和它们调控pkb活性的用途的制作方法
苯酚f斤生物和它们调控PKB活性的用途本发明涉及可用作蛋白激酶B (PKB/Akt)的抑制剂和/或活化剂的新化 合物。从而，这些化合物可用于治疗癌症。磷酸肌醇3-激酶(PI 3-激酶)是具有脂激酶活性的一进化保守族酶，其 响应于细胞外刺激能产生一系列具有信号传导潜能的3-磷酸化磷酸肌醇脂 质。所导致的PI3-激酶活性的细胞作用是多样的，包括DNA合成、趋化 性、葡萄糖转运和嚢泡运输(vesicle trafficking)。 PI 3-激酶本身通过多种机 理活化，所述机理包括受体酪氨酸激酶、Ras和异源三聚体G-蛋白。负责一些上述作用的PI 3-激酶的效应器是蛋白激酶B (PKB/Akt)—哺 乳动物的病毒癌蛋白v-akt的同系物(Staal 1987)。响应于生长因子刺激通 过3-磷酸肌醇与有助于其在两个不同部位磷酸化和随后活化的其PH结构 域结合PKB被募集到质膜。第一个磷酸化部位、即苏氨酸-308(T308)位于 PKB的活化环(activation loop)中，被磷酸肌醇-依赖性激酶-1 (PDK-1)磷酸 化。第二个部位、即丝氨酸-473(S473)位于C-末端疏水性调节结构域中， 被尚未鉴定的激酶磷酸化(Chang,Lee等人，2003)。迄今为止，已经假定了 多种S473候选激酶，包括PDK-1、促分裂原活化蛋白激酶-活化蛋白激酶 2、整联蛋白连接激酶(ILK)和PKB本身(Brazil, Park等人，2002; Hill, Feng 等人，2002)。仍然有待确定是这些激酶中的任何一种还是迄今为止尚未鉴 定的激酶负责该特定部位的磷酸化。AGC激酶族的其它蛋白激酶如蛋白激 酶C 8 (PKC8)和p70"K通过它们的同源残基的磷酸化而共享类似的活化 机理(Newton 2003)。所有上述激酶的活化均易受LY294002和渥曼青霉素 对PI3-激酶抑制的影响。PKB的效应器包括Bad、 GSK-3 (糖原合成酶激 酶-3)和mTOR (雷帕霉素的哺乳动物靼标)(Vivanco和Sawyers 2002)。 mTOR是蛋白合成的调节剂并且在PKC5活化中起作用(Parekh， Ziegler 等人，2000)。与PI 3-激酶类似，已经使用药理学物质来帮助对mTOR信号传导进行研究。雷帕霉素通过与FKBP12结合抑制mTOR的活性，从
而抑制mTOR末端的事件(Sabers， Martin等人，1995)。
因此，磷酸肌醇信号传导是控制细胞死亡、存活和命运的关键因素。
特别是细胞存活是一种重要的对抗癌症的天然防御机理。细胞存活是由磷
酸肌醇3-激酶产物控制的，其又转而活化^f皮称为PKB或Akt的特定的蛋
白激酶。PKB/Akt被其它激酶磷酸化，随后导致其自身催化能力的完全活
化并从而通过该蛋白激酶级联推进细胞存活信号。阐明PKB砩酸化控制中
的要素已经成为许多研究小组和药物开发团队的工作焦点。
我们现在已经发现了能抑制和/或活化PKB的化合物。
因此，在第一个方面，本发明提供了下式的化合物和其可药用的盐在
制备用于调控PKB活性的药物中的用途
<formula>formula see original document page 10</formula>其中
R1是C15烷氧基、OCOC13烷基、0(CH2)20(CH2)20(CH2)2OMe、 0(CH2)20(CH2)20(CH2)2OH或OH;
R2是H、 (CH2)nOH、 OCH3、 Hal或
<formula>formula see original document page 10</formula>R1
或
R2
R3是H或(CH2)nOH;且
R4是任选地被一个或多个Hal、 OH、 COCH3、 NH2、 NHCH3、 NHMe、 NMe2、 OCOCH3、 C02H或其酯或酰胺取代的d.6烷基， 其中n是l-5。在本发明的上下文中，囟素指的是F、 Cl、 I或Br,优选地是C1、 I 或Br。
对于本发明的目的而言，烷基指的是1至6个碳原子的直链和支链烷 基，包括但不限于甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、仲-丁基、异 丁基、叔-丁基、正-戊基、正-己基。具体而言，烷基指的是具有l、 2、 3、 4、 5或6个碳原子的基团。术语烷基还包括环烷基，包括但不限于环丙基、 环丁基、CBb-环丙基、CH;r环丁基、环戊基或环己基。具体而言，环烷基 指的是具有3、 4、 5或6个碳原子的基团。环烷基可任选地,皮取代或与一 个或多个碳环基团或杂环基团稠合。
如本文所讨论的这样，发现本发明的化合物可用作PKB的抑制剂和/ 或活化剂，并且从而可用作用于治疗癌症的物质。特别是发现本文所述的 化合物可用于其中涉及PKB上调的癌症，更特别是其中涉及PKB上调以 及PTEN突变的癌症。因此，所述化合物的特定靶标是癌症如卵巢癌、乳 癌、前列腺癌、甲状腺癌和胰腺癌。
发现本文所公开的作为活化剂的那些化合物可用于预防细胞死亡。因 此，发现它们可用于治疗变性性障碍、不能再生的那些组织、即分别为神 经元(阿尔茨海默病、中风等)或心脏(梗死、缺氧)和骨骼肌(运动损伤)组织 的变性性疾病(Glass 2003; Matsui, Nagoshi等人，2003; Tatton， Chen等人， 2003)。
因此，在第二个方面，本发明提供了包含一种或多种本文所定义的化 合物并任选地包含一种或多种可药用的稀释剂、载体和/或赋形剂的药物制 剂。
本发明的组合物可以以每个剂量含有预定量的各活性成分的单位剂量 形式存在。该类单位可适于提供5-100mg/天的所述化合物，优选5-15mg/ 天、10-30mg/天、25-50mg/天、40-80mg/天或60-100mg/天。对于式I化合 物而言，提供100-1000mg/天的剂量，优选提供100-400mg/天、300-600mg/ 天或500-1000mg/天的剂量。该类剂量可以以单剂量的形式或者以多个离 散剂量的形式被提供。最终的剂量当然将取决于所治疗的病症、施用途径和患者的年龄、体重和情况，并且将由医生决定。
本发明的主题最优选地是以适宜的组合物形式进行施用。作为适宜的 组合物，可以提及的是通常用于全身或局部施用药物的所有组合物。可药 用的载体应当基本上是惰性的，以便不与活性成分发生相互作用。合适的
惰性载体包括水、醇、聚乙二醇、矿物油或石油凝胶(petroleumgel)、丙二 醇等。所述药物制剂可以被配制用于以对于人或兽药应用而言任何方便的 方式进4亍施用。
如下文所详细讨论的那样，本发明的药物组合物特别是可被配制用于 以固体或液体形式进行施用，包括适于下列施用的那些(l)口服施用，例 如，兽用顿服药(水性或非水性溶液剂或混悬剂)、片剂、大丸剂、散剂、 颗粒剂、应用于舌的糊剂；(2)胃肠外施用，例如，以例如无菌溶液剂或混 悬剂的形式通过皮下、肌内或静脉内注射进行胃肠外施用；(3)局部应用， 例如，以应用于皮肤的乳膏剂、软骨剂或喷雾剂的形式进行局部应用；或 (4)阴道内或直肠内施用，例如，以阴道栓、乳青剂或泡沫剂的形式进行阴 道内或直肠内施用。但是，在某些实施方案中，可以将主题物质简单地溶 解或混悬在无菌水中。在某些实施方案中，药物制剂是非致热性的，即不 会升高患者的体温。本文所用的短语"有效量，，指的是可在动物中有效产 生一些所需作用的一种或多种物质、材料或包含一种或多种本发明的物质 的组合物的量。^H人的是当用一种物质来获得治疗作用时，包含"有效量，， 的实际剂量将根据许多情况进行变化，所述情况包括所治疗的具体病症、 疾病的严重程度、患者的大小和健康状况、施用途径等。熟练的医学从业 者可以用医学领域众所周知的方法容易地确定适宜的剂量。在本文中短语 "可药用的，，用于指在合理的医学判断范围内适合用于与人类和动物的组 织接触而不会引起过度的毒性、刺激、变态反应或其它问题或适应征、同 时具有合理的益处/风险比的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
本文所用的短语"可药用的载体"指的是在将所述主题物质从一个器 官或机体的一个部分携带或转运到另一个器官或机体的另一个部分时所涉 及的可药用的材料、组合物或介质，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。各载体在能与制剂的其它成分相容的意义上必须是
"可接受的"。可用作可药用载体的材料的一些实例包括(l)糖类，如乳 糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉类，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其 衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉状西黄蓍胶； (5)麦芽糖；(6)明胶；(7)滑石粉；(S)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡类；(9)油 类，如花生油、棉子油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；(10) 二醇类，如丙二醇；(ll)多元醇类，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇； (12)酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)緩沖剂，如氢氧化镁 和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原的水；(17)等张盐水；(18)林格氏液； (19)乙醇；(20)磷酸盐緩冲溶液；和(21)药物制剂中所用的其它无毒的相容 性物质。在某些实施方案中， 一种或多种所述物质可含有碱性官能团，如 氨基或烷基氨基，并且因此能与可药用的酸形成可药用的盐。
在这一方面，术语"可药用的盐"指的是本发明的化合物的相对无毒 的无机和有机酸加成盐。这些盐可以在本发明的化合物的最后分离和纯化 过程中原位制备，或者可以通过单独地将游离碱形式的本发明的纯化的化 合物与合适的有机酸或无机酸进行反应并分离出由此形成的盐来制备。代 表性的盐包括氢溴化物、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、 乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、 乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸 盐、酒石酸盐、萘酸盐(napthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐和 十二烷基磺酸盐等(Berge， Bighley等人，1977)。所述物质的可药用的盐包 括所述化合物的常规的无毒的盐或季铵盐，例如由无毒的有机酸或无机酸 形成的盐。例如，该类常规的无毒的盐包括衍生自无机酸如盐酸、氩溴酸、 硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的那些；和由有机酸如乙酸、丙酸、琥珀 酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈 酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸(salicyclic acid)、 对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二 磺酸、草酸、羟乙磺酸(isothionic acid)等制得的盐。在其它情况下， 一种或多种物质可含有一个或多个酸性官能团，因此能与可药用的碱形成可药 用的盐。这些盐同样可以在化合物的最后分离和纯化过程中原位制备，或 者通过单独地将游离酸形式的纯化的化合物与合适的碱如可药用的金属阳 离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐、与氨或者与可药用的有机伯、仲或 叔胺进4于反应来制备。
代表性的碱金属或碱土金属盐包括锂、钠、钾、钾、镁和铝盐等。可 用于形成碱加成盐的代表性的有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、
二乙醇胺、旅，秦等(参见例如Berge等人，同上)。在组合物中还可以存在湿 润剂、乳化剂和润滑剂如十二烷J^fL酸钠和硬脂酸镁以及着色剂、释放剂、 包衣剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。可药用的抗氧化 剂的实例包括(l)水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢 钠、偏亚石危酸氢钠、亚石克酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，如棕榈酸抗坏血酸 酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、 丁化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、掊酸丙酯、 a-生育酚等；和(3)金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、 酒石酸、磷酸等。
本发明的制剂包括适于口服、鼻、局部(包括口含和舌下)、直肠、阴 道和/或胃肠外施用的那些。制剂可以方便地以单位剂量形式存在并且可以 用制药领域众所周知的任何方法来制备。可以与载体材料组合以制备单剂 量形式的活性成分的量将根据所治疗的主体、具体的施用方式而变化。可 以与载体材料组合以制备单剂量形式的活性成分的量一般是产生治疗作用 的化合物量。 一般而言，以百分之一为单位，该量为约1%至约99%的活 性成分，优选地为约5°/0至约70%，最优选地为约10%至约30%。制备这 些制剂或组合物的方法包括将活性剂与载体以及任选的 一种或多种辅助成 分结合到一起的步骤。 一般而言，制剂是通过将本发明的物质与液体载体 或研细的固体载体或与这二者均匀地且紧密地结合到一起、然后如果必要 将产品成型来制备的。
本发明的适于口服施用的制剂可以a嚢剂、扁嚢剂、丸剂、片剂、 锭剂(使用进行了矫味的基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)、散剂、颗粒剂的形式，或者可以是在水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂的形 式，或者可以是水包油型或油包水型液体乳剂的形式，或者可以是酏剂或糖浆剂的形式，或者可以是软锭剂(pastaie)(使用惰性基质，如明胶和甘油 或蔗糖和阿拉伯胶)的形式和/或可以是漱口剂的形式等，其各自含有预定 量的本发明的化合物作为活性成分。本发明的化合物也可以以大丸剂、药 糖剂或糊剂的形式进行施用。在本发明的用于口服施用的固体剂型(胶嚢 剂、片剂、丸剂、糖衣丸、散剂、颗粒剂等)中，活性成分与一种或多种可 药用的载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或下列物质中的任何一种混合(1) 填充剂或增量剂，如淀粉类物质、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸； (2)粘合剂，如，例如羧曱基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗 糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，如甘油；(4)崩解剂，如琼脂、碳酸钓、马 铃薯淀粉或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶解阻滞剂，如 石蜡；(6)吸收促进剂，如季铵化合物；(7)湿润剂，如，例如鲸蜡醇和甘油 单硬脂酸酯；(8)吸收剂，如高岭土和膨润土； (9)润滑剂，如滑石粉、硬脂 酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠以及其混合物；和(IO) 着色剂。在胶嚢剂、片剂和丸剂的情况下，药物组合物还可以包含緩冲剂。 使用诸如乳糖或奶糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂，相似类 型的固体组合物也可用作软和硬填充明胶胶囊的填充剂。片剂可以通过压 制或模制来制备，任选地使用一种或多种辅助成分。压制片可以用粘合剂 (例如明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例 如淀粉羟乙酸钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂来制备。模 制片可以通过在合适的机器中将用惰性载体稀释剂润湿的粉状化合物混合 物模制来制备。本发明的药物组合物的片剂和其它固体剂型如糖衣丸、胶嚢剂、丸剂 和颗粒剂可任选地#_刻痕或者用包衣和外壳如肠溶衣以及药物配制领域中 众所周知的其它包衣来制备。还可以将它们使用例如提供所需释放性质的 不同比例的羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、脂质体和/或微球进行配 制以緩^^或控制释力文其中的活性成分。可以通过例如用截留细菌的滤器进行过滤或通过掺入在使用前即刻被溶解在无菌水或一些其它无菌注射溶媒 中的无菌固体组合物形式的灭菌剂来对其进行灭菌。这些组合物还可任选 地含有遮光剂，可以是仅在胃肠道的某些部分中或者优选地在胃肠道的某 些部分中释》文活性成分、任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可以 使用的包埋組分的实例包括聚合物和蜡类。活性成分还可以是微嚢化的形 式，如果适宜，该微嚢化的形式可以具有一种或多种上述赋形剂。本发明 的化合物的用于口服施用的液体剂型包括可药用的乳剂、微乳、溶液剂、 混悬剂、糖浆剂和酏剂。除活性成分外，所述液体剂型还可含有本领域常 用的惰性稀释剂如例如水或其它溶剂、稳定剂和乳化剂如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、节醇、苯曱酸节酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油类(特 别是棉子油、花生油、玉米油、胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、 四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯以及其混合物。除惰性稀 释剂外，口服組合物还可包含助剂如湿润剂、乳化剂和助混剂、甜味剂、 矫味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。除活性化合物外，混悬剂还可含有助 混剂如例如乙氣基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶 纤维素、偏氢氧化铝(aluminum metahydroxide)、膨润土、琼脂和西黄蓍 胶以及其混合物。用于直肠或阴道施用的本发明的药物组合物的制剂可以是栓剂的形 式，其可以通过将一种或多种本发明的化合物与一种或多种合适的非刺激 性赋形剂或载体混合来制备，所述赋形剂或载体包括例如可可脂、聚乙二 醇、栓剂蜡或水杨酸酯，并且其在室温下是固体但是在体温下是液体，因 此，其将在直肠或阴道腔内熔化并释放活性剂。适于阴道施用的本发明的 制剂还包括含有本领域已知适宜的该类载体的阴道栓、卫生栓、乳膏剂、 凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂。用于本发明的化合物的局部或透皮施用 的剂型包4錄剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳骨剂、洗剂、凝胶剂、溶液 剂、贴剂和吸入剂。可以将活性化合物在无菌条件下与可药用的栽体和可 能需要的任何防腐剂、緩冲剂或抛射剂混合。除本发明的活性化合物外，软骨剂、糊剂、乳骨剂和凝胶剂还可含有赋形剂如动物和植物脂肪、油类、蜡类、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素 衍生物、聚乙二醇、硅氧烷类、膨润土、硅酸、滑石粉和氧化锌或其混合 物。除本发明的化合物外，散剂和喷雾剂还可含有赋形剂如乳糖、滑石粉、 硅酸、氢氧化铝、硅酸钩和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂还可 含有常规抛射剂如氯氟烃类和挥发性的未被取代的烃类如丁烷和丙烷。透 皮贴剂具有向机体控制递送本发明的化合物的另外的优点。该类剂型可以 通过将活性剂溶解或分散在适当的溶媒中来制备。还可以使用吸收促进剂 来增加活性剂通过皮肤的流量。可以通过提供控速膜或将化合物分散于聚 合物基质或凝胶中来控制该类流动的速率。在本发明的范围内还涵盖眼用制剂、眼骨剂、散剂、溶液剂等。本发 明的适于胃肠外施用的药物组合物包含一种或多种本发明的化合物和一种 或多种可药用的无菌等张的水性或非水性溶液、分散物、混悬液或乳液或者可在使用前即刻被重构到无菌的可注射的溶液或^:物中的无菌粉末， 其可含有抗氧化剂、緩冲剂、抑菌剂、使制剂与预期接受者的血液等张的 溶质或助混剂或增稠剂。可用在本发明的药物组合物中的合适的水性和非 水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)以 及其合适的混合物、植物油类如橄榄油和可注射的有机酯类如油酸乙酯。 可以例如通过使用包衣材料如卵磷脂、在分散物的情况下通过维持所需的 粒度和通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。这些组合物还可以含有助剂如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可 以通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂例如尼泊金酯、氯丁醇、山梨酸苯酯 (phenol sorbic acid)等来确保预防微生物的作用。还可能需要在组合物中包 含等张化剂如糖类、氯化钠等。此外，还可以通过包含延迟吸收的物质如 单硬脂酸铝和明胶来实现可注射的药物形式的延迟吸收。在一些情况下， 为了延长活性剂的作用，需要由皮下或肌内注射来减緩活性剂的吸收。这 可以通过使用水溶性差的结晶或无定形材料的液体混悬剂来实现。活性剂 的吸收速率则取决于其溶出速率，其溶出速率转而又可取决于晶体大小和 晶形。或者，通过将活性剂溶解或混悬在油性介质中来实现胃肠外施用的活性剂的延迟吸收。可注射的贮库形式是通过形成主题化合物在可生物降 解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中的微嚢基质来制备。根据活性剂与聚合物 的比例以及所用的具体聚合物的性质，可以控制活性剂释放的速率。其它 可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。可注射的贮库制剂 也通过将活性剂捕获在可与机体组织相容的脂质体或微乳中来制备。当本文所述的化合物以药物的形式被施用于人和动物时，它们可以以其本身的形式或者以含有例如0.1至99.5%(更优选0.5至卯％)的活性成分 和可药用载体的药物组合物的形式被给予。除上述组合物外，还可以使用 含有适宜量的治疗物的覆盖物例如硬膏剂、绷带、敷料、纱布垫等。如上 文所详细描述的那样，治疗性组合物可以在支架、装置、假体和移植物上 被施用/递送。在第三个方面，本发明提供了用在药物中的、特别是用于治疗癌症的 本文所定义的化合物。般的常规知识容易地合成。此外，下列化合物是新的并且形成了本发明的第四个方面ci ci<formula>formula see original document page 19</formula><formula>formula see original document page 20</formula><formula>formula see original document page 21</formula>其中R5是d-s烷氧基或OH;R6是任选地被Hal、 NHCH3、 C02H或其酯或酰胺取代的d.s烷基；且R7和R8独立地是(CH2)qOH,其中q是2-5 。 还提供了该类化合物在制备用于调控PKB活性的药物中的用途。现在将参考下面的实施例来对本发明进行描述，但是绝不应将这些实 施例曲解为对本发明范围的限制。本发明的每个方面的优选特征在已作必 要调整的情况下也适用于其它各方面。这些实施例涉及附图
，其中图l提供了本发明的化合物；图2提供了蛋白印迹的结果，说明了当用多种本发明的化合物进行处 理时PKB的磷酸化；图3说明了本发明的化合物Q诱导PKB的磷酸化。在PKB在S473 上的磷酸化用FITC标记的磷酸-特异性抗体的绿色染色的增加来表示且核 经dapi染色的情况下，绿色和蓝色荧光通道的重叠显示为红色的假色。上 面一组如所示的那样，将々几饿的Cos6细胞用血清和/或15ng/ml cQ处理 IO分钟。下面一组e)将々几饿的Cos6细胞用非刺激浓度(0.2ng/ml)的胰岛 素进行处理。f)用500nMPTEN抑制剂RV001进行预处理、之后进行胰岛 素攻击足以诱导PKB的磷酸化，而g) 15照/ml cQ抑制PI(3，4，5)P3介导的 PKB活化。h)用lOOnM PI3-激酶抑制剂LY29400预孵育30分钟增加cQ 诱导的PKB磷酸化(与c相比)；图4说明了化合物Q抑制胰岛素-刺激的肌动蛋白重塑。红色(F-肌动蛋白)和蓝色(核)荧光通道重叠。如所显示的那样，将饥饿的Cos6细胞用 15jig/ml cQ和/或5pg/ml胰岛素刺激10分钟。c)将细胞用100|nM LY294002 预孵育30分钟，之后进行刺激。罗丹明-标记的鬼笔环肽染色证明a)饥饿 的Cos6成纤维细胞形成应力纤维，其在d)胰岛素刺激后被重塑成与质膜 毗连的聚合的F-肌动蛋白。b)cA也在饥饿的成纤维细胞中诱导应力纤维损 失。但是与胰岛素不同，cQ能c)不依赖PI3-激酶地改组细胞骨架和e)干 扰胰岛素-刺激的应力纤维破坏；和图5提供了另外的蛋白印迹的结果，说明了用本发明的多种化合物进 4亍的PKB活化。实验一本发明的各种化合物的合成除非另有说明，否则起始材料得自商业供应商并且不经进一步纯化即 进行使用。无水溶剂是HPLC级的。所有非水性反应均在氮气气氛下用烘 箱或火焰干燥的玻璃器亚进行。水指的是去离子水，盐水指的是饱和氯化 钠溶液。溶剂是在减压下用Bttchi旋转蒸发器除去的。快速柱色镨法用硅 胶(35-70^im的微粒)进行。薄层色语法用商购获得的预涂的铝板进行。通 过荧光熄灭或用KMn04或磷钼酸染色使板显影。和13C NMR光i普是在Bruker Avance AMX-300 Fourier Transform 光镨仪上记录的。化学位移值以百万分率(ppm)给出，位于四甲基硅烷的 低磁场，偶合常数(J)值以Hz值的形式给出。除非另有说明，否则NMR 光i普是在300 K下记录的。红外光i普是用Shamadazu FTIR-8700红外分光光度计记录的。熔点 是在Gallenkamp熔点仪上记录的并且未进行校正。质语是用Micromass LCT-KAlll电喷雾质谱仪记录的。精确的分子量是由Department of Chemistry, University College London的工作人员测得的。33，-亚曱基双[l-(2-氯乙基)-4-羟基苯一化合物C所有化学物质和试剂均购自商业供应商一Sigma Aldrich Company Ltd, Avocado Research Chemicals Ltd和Lancaster Synthesis,未经进一步纯化。除非另有"i兌明，否则溶剂均不经进一步纯化直接使用。用于进行洗涤的水是去离子水。盐水指的是饱和氯化钠水溶液。^NMR和"CNMR 光镨学用Bruker仪器AMX分别在300 MHz和75 MHz下进行。IR光语 是在NicoletFT-IR机器上获得的。熔点是用Gallenkamp熔点仪测定的。ci ciOH OH将硫酸(25% w/w水溶液；50ml， 142.7mmol)和曱醛(37。/0 w/v水溶液； 1.2ml， 14.8mmol)加入到4-羟基苯乙基氯(1.96ml， 12.5mmol)中。将该反应 用机械搅拌器进行搅拌并在70'C下在回流下加热2小时。冷却后，滗出水 层，将残余的白色固体溶解于乙酸乙酯(60ml)中。将有机层用水(2 x 30ml) 和盐水(2 x 30ml)洗涤。将有机层干燥(石克酸镁)并真空蒸发，得到固体。通 过用氯仿重结晶对产物进行纯化，得到白色粉末形式的标题化合物(49%， 0.987g)。附/ 161画165。C (氯仿)；IR (石蜡糊法)/cm1 1591m， 1608m, 2932w, 3020w， 3225s (O-H); 5H(300 MHz; CDC13) 3.01 (4H, t， /7.4 Hz， 2-H)， 3.72 (4H, t， /7.4 Hz l-H)， 3.93 (2H， s， CH2), 6.36 (2H， br， OH)， 6.81 (2H， d， / 8,2 Hz， 5誦H), 7.00 (2H， dd， /8.2和2.2 Hz， 6國H)， 7.15 (2H， d， /2.2 Hz， 2-H);6c(75MHz; CDC13) 32.5(2H， ArCH2Ar)， 38.5(CH2CH2C1，)， 45.4(CH2CH2C1)， 116.3， 126.8， 128.5， 131.2， 131.3， 151.7;(FAB) 324 (M+， 52%), 307 ([M画OH+， 24)， 289 ([M-OH-OH2]+， 24)。 m/z HRMS C17H18C1202 [M+的计算值324.06838，实测值324.06843。4-(4-甲氧基苯基)-2-氨基丁烷盐酸盐一化合物M (MGN-M253) (S. K. Chattopadhyay, IC V. Sashidhara, V. Ko腿i， V. Tripathi, A. K. Tripathi， V. Prajapati， S. Kumar, U.S. (2001)6252114)将4-(4-甲氧基苯基)-2- 丁酮(2.09g， 11.74mmo1)、乙酸铵(9.06g， 11.75mmol)和氰基硼氢化钠(0.52g， 0.82mmol)在甲醇(30ml)中的混合物在 室温下搅拌72小时。将该反应混合物用浓HC1 (10ml)酸化并在真空下除去 溶剂。然后加入水并用乙醚(3x50ml)萃取未反应的起始材料。用氢氧化钾 小丸使水性溶液呈碱性，用氯化钠(2g)使其饱和并用乙醚(3 x 100ml)萃取。 将合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并真空蒸发，得到无色粘性液体形式的 3-(4-曱氧基苯基)-l-甲基丙胺。然后通过向该胺中加入20% HCl-甲醇(3ml) 制备其盐酸盐。将该混合物蒸发至干并用二氯甲烷重结晶，得到白色固体 形式的3-(4-曱氧基苯基)-l-甲基丙胺盐酸盐(0.31g， 68%)。 Vmax(膜法)/cm-1 1514， 1612， 2937， 2997， 3423 (N-H拉伸)。NMR (300 MHz; CDC13) 1.52 (3H， d， /6.6 Hz)， 2.09 (2H， m)， 2.88 (2H， m)， 3.66 (1H， m)， 4.01 (3H, s)， 7.17 (2H， d， /8，7 Hz)， 7.45 (2H， d， /8.7 Hz); 13C匿R (75 MHz; CDC13) 17.7， 30.1， 36.0， 47.6， 55.7, 114.5， 129.8, 133.9， 157.5;齡(ES+) 180 ([M-Cl+， 100%);w/zHRMS CuHwNOM + H]+的计算值180.13883,实测值180.13863。2，6-双(羟基甲基)-4-茴香醚一化合物F，其用于合成化合物V (关于其合成，参见B. Masei， S. Saccheo， r"rfl/^金o"， 1993, 49， 10739.)mp 98-100。C (氯仿)(文献，103-104。C)vmax (膜法)/cm-1 1475w, 2835w， 2850w， 2910w， 2935w， 3180br， 3290br (O-H拉伸)；NMR (300 MHz; CDC13) 2.32 (3H, s， 1誦H)， 3.84 (3H，s， 7-H), 4.70 (4H, s，6-H)， 7.13 (2H， s， 3陽H);13C醒R (75 MHz; CDC13) 20.9 (CH3)， 61.2， 62.4， 129.7， 133.8， 134.5， 154.2;m/z (ES+) 182 (M+, 100%), 165 ([M-CH3+， 98)。[3-(3-羟基甲基-2-甲氧基-5-曱基节氧基曱基)-2-甲氧基-5-甲基苯基卜甲醇一 化合物V (MGN-V481(di))。步骤l:向wang (聚合物-结合的对-节氧基节醇)树脂(107g， 4.5mmo1) 在干燥二氯曱烷(30ml)中的混悬液中加入三氯乙腈(4.5ml， 44.88mmo1)。将 该混合物冷却至(TC ，滴加1，8-二氮杂二环[5.4.0十一碳-7-烯(DBU)(0.3ml， 2.00mmol)并将该反应混合物在O'C下振摇1小时。将树脂收集到一个垂熔 玻璃漏斗中并相继用二氯曱烷、四氢呋喃、四氢呋喃/甲醇(l:l)、曱醇、四 氢呋喃/甲醇(l:l)、四氢呋喃和二氯甲烷洗涤。步骤2:将所得的树脂(0.83g， 1.22mmol)在氮气下用四氢呋喃(2 x 3ml) 洗涤，然后混悬于干燥四氢呋喃(20ml)中。加入醇2，6-双(羟基甲基)-4-茴香 醚(3,30g， 18.13mmol)并将该反应混合物振摇20分钟。然后滴加三氟化硼 二乙醚合物(0.093ml， 0.76mmol)并将该树脂混悬液在室温下振摇18小时。 将树脂收集到一个垂熔玻璃漏斗中并相继用四氢呋喃、四氢呋喃/曱醇 (1:1)、甲醇、四氢吹喃/甲醇(l:l)、四氢呋喃和二氯甲烷洗涤。步骤3:向树脂在千燥二氯曱烷中的混悬液中 将树脂如前所述进行 洗涤。将树脂(0.17g， 0.25mmol)重新混悬于1%三氟乙酸/二氯甲烷溶液 (5.0ml)中。将该树脂混悬液振摇4小时，然后相继用二氯甲烷、四氩呋喃、 四氢呋喃/甲醇(l:l)、甲醇、四氢呋喃/甲醇(l:l)、四氢呋喃和二氯甲烷洗涤。 将有机层用水(2 x 50ml)和盐水(2 x 40ml)洗涤，用石克酸镁干燥并在真空下浓 缩。将产物用HPLC纯化，得到[3-(3-羟基甲基-2-甲氧基-5-甲基-千氧基甲基)-2-甲氧基-5-甲基-苯基]-甲醇(MGN-V481(di))(86。/0)。Vmax(膜法)/cnT1 1385iii， 1614m, 1682s, 1714m， 2928w， 2964w， 3418b (O-H拉伸)；NMR (300 MHz; CDC13) 2.32 (6H， s), 3.80 (6H, s)， 4.62 (4H， s)， 4.71 (4H， s)， 7.13 (2H， s)， 7.21 (2H， s);13C匪R (75 MHz; CDC13) 20.8， 61.4， 62.4， 67.4,129.5, 130.4， 131.0,132.5, 134.0， 154.3;/w/z (ES+) 369 (M+ Na， 100%);m/z HRMS C20H26O5 [M + Na]的计算值369.16725,实测值369.16726。5-(2-氯乙基)-3-羟基甲基-2-曱氧基苯基卜甲醇~>[匕合物Z (MGN-Z594)<formula>formula see original document page 26</formula>向4-甲氧基苯乙基氯(5ml)在二氯甲烷(40ml)中的溶液中加入氯化铝 (9.67g，72.52mmo1)。将该混合物在冰中进行冷却，然后滴加乙酰氯(5.16ml， 72.46mmol)。将该反应混合物在55。C下在回流下加热18小时。在冷却后， 将该反应混合物小心地倾倒到水中并用二氯甲烷(3 x 80ml)萃取产物。将有 机层用盐水(2 x 100ml)洗涤，用硫酸镁干燥，真空浓缩并用快速色语法(洗 脱剂乙醚/己烷(l:3))进行纯化，得到双-乙酰化的中间体(4.05g，64。/。)。向该中间体(2.58g， 10.73mmol)和碳酸钾(3.00g， 21.72mmol)在丙酮 (30ml)中的溶液中加入碘甲烷(l,34g， 21.44mmo1)。将该反应在回流下加热 18小时。在冷却后，将碳酸钾滤出，用大量丙酮(3xl00ml)充分洗涤，然 后在真空下除去丙酮。将产物重新溶解于乙醚(60ml)中并用水(2 x 40ml)和 盐水(2 x 40ml)洗涤。将产物真空浓缩，得到O-甲氧基双-乙酰化的中间体 (2.13g， 78%)。在氮气下，将无水曱醇(7ml)加入到该O-曱氧基中间体(0.65g， 2.55mmol)中，然后在冰中冷却至0'C 。滴加13。/。次氯酸钠(24ml， 20.55mmo1)并将该混合物在室温下搅拌18小时。然后緩慢加入18.5。/。盐酸水溶液(5ml) 并将该混合物在室温下搅拌3小时。然后将该反应混合物真空浓缩并在氮 气下重新溶解于无水甲醇(10ml)中。将该混合物在冰中冷却并滴加亚硫酰 氯(056ml， 7.64mmo1)。然后将该混合物搅拌18小时，然后在真空下除去溶 剂和过量的亚硫酰氯并加入水(10ml)。用二氯曱烷(3 x 15ml)萃取该中间体， 用盐水(2x20ml))洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。在氮气下，向氢化铝 锂(0.17g， 4.52mmol)在四氢呋喃(8ml)中的混合物(预先搅拌30分钟)中滴加 位于四氢呋喃(4ml)中的中间体(0.41g， 1.42mmo1)。将该反应在室温下搅拌 4小时。小心地加入水(2ml),然后加入2M氢氧化钠(1.5ml)，然后再次加 入水(2ml)。用二氯甲烷(3x30ml)萃取产物，得到淡黄色粘性液体形式的 [5-(2-氯-乙基)-3-羟基曱基-2-曱氧基-苯基-甲醇(0.25& 57%),将其用快速 色谱法(洗脱剂:二氯甲烷/甲醇，10:1)进行纯化。1H NMR (300 MHz; CDC13) 3.04 (2H， t， / 7.3 Hz), 3.66 (2H， t， / 7.3 Hz)， 3.85 (3H，s)， 4.73 (4H, s)， 7.20 (2H, s);13C醒R (75 MHz; CDC13) 38.7， 45.0， 61.1， 62.3， 129.3， 134.2， 134.7， 155.1;/w/z (ES+) 253 (M+ Na， 100%)， 219 ([(M-OH2) +Na]+, 50);m/z HRMS CnH15C103 [M + Na的计算值253.06019，实测值253.06017。[3-羟基曱基-2-曱氧基-5-(2-甲基氨基-乙基)-苯基]-甲醇盐酸盐~>[匕合物Al (MGN-A1598)向化合物Z (72mg， 0.27mmol)的溶液中加入33。/。乙醇的甲胺溶液(2ml， 13.37mmol)并将该反应在室温下搅拌10天。在真空下除去溶剂，向该反应 混合物中加入水，然后加入1M盐酸(lml)。将有才几层用乙醚萃取。用2M 氢氧化钾(0.5ml)使水层呈碱性并将产物真空浓缩，得到橙色液体。向该胺产物中加入18.5。/。盐^/甲醇(0.1ml)并搅拌30分钟。将该溶液在真空下浓 缩并将产物在水(30ml)和二氯甲烷(2 x 20ml)之间进行分离。将水层在真空 下浓缩，得到化合物Al ， 3-羟基甲基-2-甲氧基-5-(2-甲基氨基乙基)-苯基]-甲醇盐酸盐(63mg, 89%)。v咖x(膜法)/cm1 1477s， 1633w， 1649w， 1710w， 2885w， 2962w， 3362br (N-H 拉伸)；工H NMR (300 MHz; CDC13) 2.61 (3H， s)， 2.92 (2H， t， / 7.5 Hz)， 3.13 (2H， t, /7.5 Hz)， 3.71 (3H， s)， 4.60 (4H， s)， 7.22 (2H， s);13C醒R (75 MHz; CDC13) 31.5 (C-l)， 33.2 (C-4)， 50.4 (C-3)， 58.9 (C-9)， 62.9 (C-IO)， 130.0 (C画6)， 133,4 (C-7)， 134.3 (C-5)， 154.7(C画8); m/z (ES+) 226 [M國Cl+， 100%);wt HRMS C12H20ClNOM-ClI+的计算值226.14377，实测值226.14381。1-[5-(2-氯乙基)-2-羟基苯基-乙酮~>[匕合物Bl (MGN-B1558F1)和1-[5-(2-氯乙基)-2-甲氧基苯基I乙酮一化合物Cl (MGN-C1557F2)在氮气下，将氯化铝(764mg，5.73mmol)加入到在二氯甲烷中的4-曱氧 基苯乙基氯(0.4ml，2.64mmol)中。将该混合物在水中冷却至0'C ，然后滴加 乙酰氯(0.41ml， 5.76mmo1)。将该反应混合物在室温下搅拌24小时。将该 混合物小心地倾倒到冰中并将有机层用二氯甲烷(3 x 30ml)萃取。将合并的 有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将产物通过快速色镨 法(洗脱剂乙醚/己烷，l:4)进行纯化，作为产生双-酰化产物的反应的副产 物得到l-[5-(2-氯-乙基)-2-羟基-苯基-乙酮(MGN-B1558Fl)(24mg， 5%)和 1國[5-(2-氯-乙基)-2-甲氧基-苯基卜乙酮(MGN-C1557F2)(llmg， 2%)。BlVmax(膜法)/cnT1 1487s， 1620m， 1643s， 1650s， 2959m， 3011w;力匪R (300 MHz; CDC13) 2.63 (3H， s)， 3.03 (2H， t， /7.1 Hz)， 3.70 (2H， t，/7.1 Hz)， 6.95 (1H， d， /8.5 Hz)， 7.34 (1H， /8.5 Hz)， 7.58 (1H， s);13C匪R (75 MHz; CDC13) 26.8， 39.2， 45.2， 118.8， 119.9， 128,6， 130.9,137.1161.5， 204.5;/ /^ (ES+) 199 ([M+H+， 100%);w/zHRMS d。HuC102 [M+H+的计算值199.05258，实测值199.05115。 Cl丄H NMR (300 MHz; CDC13) 2.61 (3H， s， ll-H)， 3.02 (2H， t， /7.2， 2-H)， 3.69 (2H， t, /7.2 Hz， l-H)， 3.90 (3H， s， 9-H)， 6.93 (1H， d， /8.4 Hz， 6-H)， 7.33 (1H d， /8.4 Hz， 4-H)， 7.56 (1H， s， 5画H);13C NMR (75 MHz; CDC13) 32.0, 38.1, 45.1, 55.7， 111.9， 128.3， 130.4， 130.7， 134.3， 158.1， 199.6;m/z (ES+) 235 ([M曙Na+， 100%);{6-[5-(2-氯-乙基)-2-羟基-苯基-6-氧代-己基}-氨基曱酸911-芴-9-基曱基酯 获得化合物Fl的路径向Fmoc-s-Ahx-OH (2.00g, 5.66mmol)在干燥二氯曱烷(10ml)中的溶液 中滴加亚硫酰氯(2.5ml，34.2mmo1)。将该溶液在40。C下加热15分钟。在真 空下蒸发掉溶剂和过量的亚硫酰氯并将剩余的白色固体在不经进一步纯化 的情况下使用。向该酰氯中加入硝基苯A(20ml),然后加入在硝基苯(10ml) 中的4-羟基苯乙基氯(0.920g， 5.7mmo1)。将该溶液冷却至0。C并逐份加入氯 化铝(2.6g， 19.5mmo1)。然后将该溶液在57。C下加热16小时。然后加入水(20ml)并将该混合物用乙醚(2x50ml)萃取。将合并的有;IM目用MgS04干燥 并在真空下蒸发掉溶剂。将该粗混合物用快速硅胶色镨法(氯仿，然后氯仿 /MeOH 5%)**进行纯化，得到标题化合物(0.卯g， 34%) &匪R (400 MHz; CDC13) 8 12.27 (1H， s， OH)， 7.76 (2H， d， /7.5 Hz， H-Fmoc), 7.58 (3H， m， H画Fmoc， H-Ar)， 7.39 (2H， t, / 7.4 Hz， H-Fmoc)， 7.32 (3H， m， H陽Fmoc, H-Ar)， 6.94 (1H, d， / 8.5 Hz， H-Ar o醒OH)， 4.83 (1H， t宽 峰，NH)， 4.40 (2H， d， / 6.8 Hz， COOCfl^CH), 4.21 (1H， t， / 6.6 Hz， COOCH^CH)， 3.69 (2H， t， J 7.0 Hz， CH2C1), 3.2 (2H， q， / 6.4 Hz， CH2NH)， 3.0 (4H， m， CH2CH2C1， CH2OAr)， 1.76 (2H， m， CH2CH2)， 1.55 (2H， m， CH2CH2)， 1.44 (2H， m， CH2CH2)13C匪R (100 MHz; CDC13) 5 207.1 (CO)， 161.4 (Ar C國l)， 156,4 (NHCOO) 143.9 (C-q)， 141.3 (C-q), 136.7 (C-q)， 130.0 (Ar-CH)， 128.4 (Ar画CH)， 127.6 (Ar-CH), 126.9 (Ar C-H)， 124.9 (Ar C-H)， 119.9 (Ar C腸H)， 119.0 (Ar C-H), 118.8 (Ar C-H), 66.5 (COOCH2)， 53.4 (CH2CO)， 47.2 (COOCH2CH)， 45.0 (CH2C1)， 40.7 (CH2CH2C1)， 38.0 (CH2NHCOO)， 29.8 (CH2)， 26.2 (CH2)， 23.8 (CH2)./w/zFAB 514 [(M+Na)， 100%] 注*按照一些以前的文献操作步骤，以前用四氯化碳作为溶剂，但是不幸地是， 分离出的唯一产物是**首先用氯仿除去硝基苯，然后，通过增加极性(曱醇/氯仿)可以洗脱下产 物。但是，与产物一起洗脱下来少量杂质，因此所用的甲醇量是在氯仿中 2-5% 。{6-[5-(2-氯乙基)-2-羟基苯基1-6-羟基己基}-氨基甲酸9乐芴-9-基甲基酯向Fmoc酮(0,200g， 0.40mmol)在干燥甲醇(8ml)中的溶液*中加入 NaBH4(20mg，0.52mmol)。将该溶液在回流下加热16小时，然后在真空下 除去溶剂。将残余物重新溶解于氯仿中并用水(10ml)和盐水(10ml)洗涂。将 有机相用MgS04干燥并在真空下蒸发掉溶剂。然后将残余物用快速柱色镨 法(氯仿/MeOH, 7/1)**进行纯化，得到标题化合物(0.100g， 50%)NMR (400 MHz; CDC13) 8 7.95 (1H, s宽峰，OH)， 7.75 (2H， d， /7.5 Hz， H-ArFmoc), 7.57 (2H， d， / 7.5 Hz, H-ArFmoc)， 7.39 (2H， t， / 7.4 Hz， H國ArFmoc)， 7.30 (2H， t， / 7.4 Hz， H-ArFmoc)， 6.98 (1H， / 8.2 Hz， H國Ar)， 6.80 (1H, d， 《/ 8.2 Hz, H-Ar)， 6.78 (1H, s， H國Ar)， 4.80-4.77 (2H， m， NH, CTOH)， 4.40 (2H， d， / 6.7 Hz， COOC^CH)， 4.20 (1H， t, COOCH2C/0， 3.64 (2H， t， / 8.0 Hz， CH2C1)， 3.10 (2H， m, CH2NH)， 2.94 (2H， t， / 7.4 Hz， CJ72CH2C1), 1.76 (1H， m， CH2CH2)， 1.70 (1H， m， CH2CH2)， 1.48-1.35 (6H， m， CH2CH2)13C醒R (100 MHz; CDC13) S 156.6 (NHCOO)， 154.4 (Ar C画l)， 143.9 (C q) 141.3 (C q)， 129.1 (C q)， 129.0 (Ar C-3)， 127.6 (Ar C-5)， 127.5 (Ar Fmoc C-3), 127.0 (Ar Fmoc C-4)， 124.9 (Ar Fmoc C-5)， 119.9 (Ar Fmoc C曙2)， 117.3 (Ar C-2)， 75.6 (CHOH)， 66.5 (COOCH2)， 47.2 (COOCH2CH)， 45.3 (CH2C1)， 40.6 (CH2CH2C1)， 38.3 (CH2NHCOO)， 37.0 (CH2CHOH)， 29.8 (CH2), 25.9 (CH2)， 24.9 (CH2)2-(6-氨基-l-羟基己基)-4-(2-氯乙基)-苯酚~^匕合物Fl向化合物Fmoc醇((U6mg， 0.073mmol)在DMF (5ml)中的溶液中加入 哌啶(lml)。将该溶液在室温下搅拌20分钟，然后在高真空下蒸发掉溶剂。 然后，将固体溶解于氯仿中并用己烷充分洗涤。最后以75。/。的收率获得化 合物Fl*。NMR (500 MHz; CD3OD) 6 7,13 (1H, s， H-5)， 6.94 (1H， d， /8.1 Hz)， 6.67 (1H， d， 《/8.1 Hz)， 4.94 (1H， m， CHOH)， 3.66 (2H， t， /7.1 Hz， CH2C1)， 2.93 (2H， t， /7.3 Hz， C^2CH2C1)， 2.84 (2H， t， /7.5 Hz， CH2NH2)， 1.72 (2H， m， CH2CHOH)， 1.60 (2H， m， CH2)， 1.5-1.4 (4H， m， CH2CH2) 13C NMR (125 MHz; CD3OD) S 154.3， 132.1， 130.4， 129.2， 128.0， 116.2， 70,4 (CHOH)， 46.3 (CH2C1)， 40.9 (CH2NH2)， 39.7 (CH2CH2C1), 38.5 (CH2)， 29.1 (CH2)， 27.4 (CH2)， 26.5 (CH2) m/z ES(+) 272.2 [M+H， 100%(3隱溴丙基)苯酚"匕合物Kl (JW4) (C. J. Cooksey， P. J. Garratt， E. J. Land, S. Pavel, C. A. Ramsden， P. A. Riley, N. P. M. Smit， / C/^附.， 1997， 272， 26226)将3-(4-羟基苯基)-l-丙醇(2.50g， 16.5mmol)、硫酸(lml)和氬溴酸水溶 液(48%, 15ml)的溶液在回流下加热6小时，在冷却至室温后，将该反应混 合物用饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(3x60ml)洗涤。将合并的 有机层用盐水(100ml)洗涤，用硫酸镁干燥，然后真空浓缩。用二氧化硅快 速色谱法(二氯曱烷)进行纯化，得到淡黄色固体形式的标题化合物(2.70g，78%)。丄H NMR (300 MHz; CDC13)》2.15 (2H， tt， / 6.6， 6.6 Hz)， 2.78 (2H, t， / 6.6 Hz)， 3.38 (2H， t， / 6.6 Hz)， 6.79 (2H， d， / 9.0 Hz， Ph-H)， 7.06 (2H， d， / 9.0 Hz， Ph-H);13C匪R (75.5 MHz; CDC13) 33.0， 33.2和34.4， 115.3， 129.7， 132.8， 153.8。 柳/z (-ES) 215 (100， [M-H)。2-(4-甲氧基苯基)-7V，2V-二甲基乙胺一化合物01 (JW8) (Y. Sato, H. Sakakibara， / 6>"《《朋麼似//| 1979， 166， 303.)将3-(4-曱氧基苯基)-l-乙醇(0,30g， 1.39mmol)和二曱胺溶液(2.0M的 THF溶液，2ml， 4.00mmol)的溶液在一个密封管中在室温下搅拌18小时。 将该反应真空浓缩。用二氧化硅快速色谱法(10%甲醇的二氯甲烷溶液)进 行纯化，得到白色固体形式的标题化合物(155mg， 55%)。NMR (300 MHz; CDC13) 2.67 (6H, s)， 2.99 (4H， m)， 3.83 (3H， s)， 6.75 (2H, d， /8.6 Hz， Ph-H)， 7.08 (2H， d， /8.6 Hz, Ph-H);13C NMR (75.5 MHz; CDC13) 30.7， 43.6， 55.3, 59.7， 114.2， 128.6， 129.7， 158.6;柳/z (+ES) 180 (100， MH、 4-(3-(甲基氨基)丙基)苯酚一化合物Ql/K2(JW11) OH向4-(3-溴丙基)苯酚(2.00g, 10.1mmol)和叔-丁基二甲基氯硅烷(1.68g， ll.lmmol)在THF(40ml)中的溶液中緩慢加入咪唑(1.88g， 27.6mmo1)。将该反应混合物搅拌4小时，过滤，然后真空浓缩。将浓缩的滤液重新溶解于 乙酸乙酯(60ml)中并用水(60ml)、饱和碳酸氯钠溶液(60ml)和盐水(60ml)洗 涤。将有机层用-克酸镁干燥，然后真空浓缩。用二氧化硅快速色镨法(5% 二氯甲烷的己烷溶液)进行纯化，得到无色油状物形式的硅烷化的苯酚 (2.95g， 89%)。醒R (300 MHz; CDC13) S -0.01 (6H， s)， 0.98 (9H， s)， 2.12 (2H， tt， /6.6， 6.6 Hz)， 2.70 (2H， t， / 6.6 Hz)， 3.38 (2H， t， / 6.6 Hz)， 6.76 (2H， d, / 8.5 Hz， Ph國H)， 7.04 (2H， d, /8.5 Hz， Ph-H);13C NMR (75.5 MHz; CDC13) §國4.4， 18.2， 25.7， 33.1和34.4， 120.0， 129.4， 133.1， 154.0;Wz (+ES) 353 (40， [M+Na+), 360 (100)。将该珪烷4匕的中间体(0.50g， 1.52mmol)和甲胺溶液(33。/。的乙醇溶液， lml)的溶液在密封的试管中在室温下搅拌18小时。将该反应混合物真空浓 缩，然后将其重新溶解于浓HCl/水/甲醇(l:l:5，21ml)溶液中。将所得的混 合物再搅拌72小时，然后用饱和碳酸氢钠溶液中和并用乙酸乙酯(3 x 30ml) 萃取。将合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，用石克酸钠干燥，然后真空浓缩。 用二氧化硅快速色镨法(氨水溶液/甲醇/二氯甲烷，5:20:75)进行纯化，得到 淡黄色固体形式的化合物Ql (56mg, 22%)。&匪R (300 MHz; CDC13) §1.83 (2H， tt， / 7.4， 7.5 Hz)， 2.43 (3H， s)， 2.54 (2H， t， J 7.4 Hz， C刷，2.63 (2H， t， J 7.5 Hz， C刷，6.76 (2H， d， / 8.5 Hz， Ph-H)， 6.93 (2H， d， /8.5 Hz， Ph國H);13C NM尽(75.5 MHz; CDC13) §30.7, 32.5, 35.6， 50.9， 115.7， 129.3， 132.1， 155.3;附/z (+ES) 165 (100， MH+)。4-(2-(二曱基氨基)乙基)苯酚"^f匕合物Tl/L2 (JW32) (H. Voswinckel，Ber。1912， 45 1004)将4-曱氧基苯乙基溴(0.20& 0.93mmol)和二甲胺(2.0M的THF溶液， 2ml)的溶液在密封的试管中在室温下搅拌18小时。将该反应混合物真空浓 缩并重新溶解于二氯甲烷(2ml)中。在冷却至O^C后，滴加三溴化硼(1.0M 的己烷溶液，l.OOml)并将该溶液在该温度下搅拌10分钟。滴加水(20ml)并 将该混合物再搅拌30分钟。在温热至室温后，将该反应混合物用二氯甲烷 (3x20ml)萃取。将合并的有机层用盐水(30ml)洗涤，用硫酸钠干燥，然后 真空浓缩。用二氧化硅快速色i普法(氨水溶^/曱醇/二氯甲烷，5:20:75)进行 纯化，得到白色固体形式的标题化合物(61mg，40。/。)。AH NMR (400 MHz; CD4OD) -2.31 (6H， s)， 2.54 (2H， m， C^2)， 2.65 (2H， m， C/f2), 6.67 (2H， d， /8.4 Hz， Ph-H)， 6.99 (2H， d, /8.4 Hz， Ph-H); 13C NMR (100 MHz; CD4OD)》34.5， 46.1， 63.5， 117.2,131.4和132.3， 157.8; 附/z (+ES) 166 (100， MH、。2-(4-{2-[2-(2-曱氧基乙氧基)-乙氧基l-乙氧基卜苯基)-乙醇一化合物XI (JMB1)在氮气下，向三甘醇单甲醚(O.SOml， 3.1mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶 液中加入对-甲苯碌酰氯(715mg， 3.75加11101)和三乙胺(0.521111， 3.8mmol)并将该反应混合物在室温下搅拌24小时。将该溶液用水(3 x 5ml)洗涤，分离 出有机层并用硫酸镁干燥。在真空下除去二氯甲烷并将粗产物用二氧化硅 柱色i瞽法(用乙酸乙酯/己烷，2:1洗脱)进行纯化，得到澄清油状物形式的甲苯-4-磺酸2-[2-(2-曱氧基-乙|1&)-乙氧基]-乙基酯(870mg, 88%),将其用于 接下来的偶联步骤。SH (300 MHz; CDC13) 2.44 (3H， s， C仏Ar)， 3.37 (3H， s， C/T3OCH2)， 3.53 (2H， m, PEG)， 3.61 (8H， m, PEG), 3.68 (3H， t， /4.8 Hz， Cfl^CI^OTs), 4.16 (3H， t, /4.9 Hz， C/r2OTs)， 7.34 (2H， d， /8.1 Hz)， 7.80 (2H， d， /8.3 Hz); 8C (75 MHz; CDC13) 21.4, 58.9, 68.5， 69.0, 70.4， 70.6， 71.7， 127.8, 129.6， 132.9， 144.6;柳/z (ES+) 341 + Na+， C14H2206S， 100 %), 319H+， 25%)。在搅拌的情况下，在氮气下，在室温下向2-(4-羟基苯基)乙醇(100mg， 7.24 x 10"mmol)在THF(5ml)中的溶液中加入氢化钠(60%的矿物油溶液， 48mg， 0.72mmo1)。加入上面甲笨璜酰化的PEG (230mg， 7.24 x 10"mmo1) 并将该溶液在回流下加热16小时。将该溶液冷却至室温并在搅拌的情况下 滴加水(5ml， lml min"),用氯仿(10ml)萃取该溶液，将有机层分离出来并 用水(3x5ml)洗涤。将有机层用硫酸镁干燥并在真空下除去溶剂，得到橙 色油状物形式的标题化合物(146mg， 67%)。SH (300 MHz; CDC13) 2.80 (2H， t， / 6.5 Hz， C//2CH2OH), 3.37 (3H， s， C 30CH2)， (3,55， 2H, m， PEG), 3.64-3.74 (IOH， m， PEG), 3.85 (2H, t， /5.2 Hz， C&2OH), 4.11 (2H, t， / 4.7 Hz, Cff2OAr)， 6.83 (2H， d, / 8.6 Hz)， 7.13 (2H， d，/8.6 Hz);Sc (75 MHz; CDC13) 38.3 (CH2CH2OH), 59.0, 63.8 (CH^OH)， 67.5， 69.8，70.6， 70.7， 70.8， 72.0， 114.8， 129.9， 130.6,157.5;附/z (ES+) 307 + Na+， C1SH2405， 100%)， 285 ([M+ H+， 55%)。化合物Yl 0JMB2) <formula>formula see original document page 36</formula>向化合物X1 (50mg， 0.18mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中加入二曱 基甲酰胺( 0.001ml， 031)和亚硫酰氯(0.031111， 0.2mmol)并将该反应混合物 在室温下在氮气下搅拌16小时。用水(3 x 5ml)洗涤该溶液并将有机层用硫 酸镁干燥。在真空下除去二氯曱烷，用二氧化硅柱色镨法(用氯仿/甲醇,95:5 洗脱)分离粗产物，得到黄色油状物形式的Yl (39mg，72%)。 5H (300 MHz; CDC13) 3.00 (2H， t， / 7.4 Hz， CH2CH2C1)， 3.38 (3H， s， C^3OCH2)， 3.56 (2H， m， PEG). 3.65-3.74 (8H， m， CZT2C1和PEG), 3.85 (2H， t， /4.8 Hz， Cff2CH2OAr)， 4.11 (2H， t, J4.7 Hz， Ci/2OAr)， 7.87 (2H， d， /8.6 Hz)， 7.13 (2H， d，/8.6 Hz);Sc (75 MHz; CDC13) 38.4 (CH2CH2C1)， 45.2 (CH2C1)， 59.0， 67.4， 69.8， 70.6， 70.7， 70.8， 71.9， 114.7， 129.8， 130.4， 157.8; 挑/z (ES+) 325Na+， C15H2304C1， 100%)。4-(2-氯乙基)-2-(5-(2-氯乙基)-2-{2-[2-(2-甲氧基乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-节 基)画苯酚—化合物A2/P2 (JMB4)向氯化二聚物(105mg， 3.23 x 10"mmol)在二曱基甲酰胺(5ml)中的溶液 中加入甲^^酰化的PEG (见XI) (103mg， 3.23 x 10"mmol)、碳酸钾(45mg， 0.32mmol)和18-冠醚-6 (86mg, 0.32mmol)并将该溶液在室温下在氮气下搅 拌16小时。加入氷(5ml)并将该溶液用乙酸乙酯(3 x 5ml)萃取。将合并的有 机层用硫酸镁干燥并在真空下除去溶剂。用二氧化硅柱色镨法(用氯仿/曱 醇，95:5洗脱)分离粗产物，得到澄清油状物形式的标题化合物(4mg, 0,009mmol，4%)。m/z (ES+) 493([M + Na十，C24H3205C12， 50%), 187 (100%)。2-溴-4-(2-氯乙基)-苯酚一化合物C2 (RB2B)在0°C下，将溴(0,20ml， 3.90mmol)加入到进行着搅拌的4-(2-氯乙基)-苯酚(600mg， 3.83mmol)在氯仿(20ml)中的溶液中并将该反应混合物搅拌 3.5小时。用饱和碳酸氢钠溶液(20ml)淬灭反应混合物。分离出有机层并用 水(3x20ml)和盐水(20ml)洗涤，干燥(MgS04)，过滤并减压蒸发，得到橙色 油状物形式的所述苯酚(804mg，89。/0)。 i F0.21(4:l己烷乙酸乙酯)； vmax/cm_1 (膜法)3501， 1607， 1497， 1123， 914和822;&H (300 MHz; CDC13) 7.40 (1H, s， Ar)， 7.08 (2H， d， /8.3 Hz, Ar)， 6.97 (1H， d， /8.3 Hz， Ar), 5.56 (1H， s， O用，3.67 (2H， t， /7.2 Hz， C乐C1)， 2.98 (2H， t， /7.2 Hz，C/T2Ar);5C (75 MHz; CDC13) 151.2， 132.1， 131.8， 116.1， 110.2， 44.9和37.9; 柳/z (CI+)实测值M+ 234.9530; C8H8BrC10的计算值M+ 234.9525。溴化2-(4-甲氧基苯基)-AyV，W-三甲基乙铵一化合物G2 (JW29) (J. R. I. Eubanks, L. B. Sims， A. Fry, / 爿肌CAe附.Soc. 1991， /U， 8821)将4-甲氧基苯乙基溴(0.20& 0.93mmol)和三曱胺水溶液(45。/0， 0.22ml) 在THF(0.5ml)中的溶液在密封的试管中在50°C下搅拌18小时。在冷却至 室温，将所得的混合物用饱和碳酸氬钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(3 x 10ml) 萃取。将合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，用硫酸镁干燥，然后真空浓缩。 用二氧化硅快速色谱法(10%曱醇的二氯甲烷溶液)进行纯化，得到淡黄色 固体形式的标题化合物(0.15g， 63%)。SH (300 MHz; CD4OD) 3.08 (2H， m)， 3.24 (9H， s)， 3.56 (2H， m)， 3.76 (3H， s)，6.89 (2H， d， /8.6 Hz， Ph國H)， 7.26 (2H， d， /8.6 Hz， Ph-H);8C (100 MHz; CD4OD) 29.4， 53.8， 55.8， 68.6， 115.4， 129.5和131.2， 160.4;加/z (+ES) 194 (50， MH+), 135 (100， [M-NMe3"。4-(2-(甲基氨基)乙基)苯酚一化合物H2 (JW32) (V. N. Bulavka， A. N. Shchavlinskii， O. N. Tolkachev， 五CyOC-3做f/五CSOC謂4 5"印t 7-3C, 1999和2000， 142-146)将4-曱氧基苯乙溴(0.2(^， 0.93mmol)和甲胺(33。/o的乙醇溶液，2ml)的 溶液在密封的试管中在室温下搅拌18小时。将该反应混合物真空蒸发，然 后重新溶解于二氯甲烷(2ml)中。在冷却至0。C后，滴加三溴化硼(1.0M的 己烷溶液，1.00ml)并将该溶液在该温度下搅拌10分钟。滴加水(20ml)并将 该混合物再搅拌30分钟。在温热至室温后，用二氯甲烷(3x20ml)萃取反 应混合物。将合并的有机层用盐水(30ml)洗涤，用硫酸钠千燥，然后真空 浓缩。用二氧化硅快速色镨法(氨水溶液/甲醇/二氯曱烷，5:20:75)进行纯化， 4寻到白色固体形式的标题化合物(54mg， 36%)。NMR (400 MHz; CD4OD) 2.42 (3H， s)， 2.71 2.84 (4H， m)， 2.65 (2H， m, C刷，6.74 (2H, d, /8.5 Hz， Ph誦H)， 7.05 (2H， d, /8.5 Hz， Ph-H); 13C NMR (100 MHz; CD4OD) 36.2和36.6， 55.0， 117.3， 131.5和132.0， 157.9; 附/z (+ES) 152 (40， MH+)， 120 (100， [M-NMe3+)。l-(3-溴丙基)-4-甲氧基苯一化合物12 (JW31) (A. P. Tamiz， E. R. Whittemore, R, 1VL Woodward, R, B, Upasani， J, F, W, Ke犯a, JB/wg. M^/. CA諷k汰1999， 9， 1619.)将3-(4-甲氧基苯基)-l-丙醇(2.72g， 16.5mmol)、硫酸(lml)和氬溴酸水 溶液(48。/。，15ml)的溶液在回流下搅拌6小时，在冷却至室温后，将该反应 混合物用饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(3x60ml)洗涤。将合并 的有机层用盐水(100ml)洗涤，用硫酸镁千燥，然后真空浓缩。用二氧化硅 快速色H法(二氯甲烷)进行纯化，得到无色油状物形式的标题化合物(1.58g， 42%)。NMR (300 MHz; CDC13) 2.15 (3H, m)， 2.71 (4H， t， /7.5 Hz)， 3.20 (2H， t， / 6.8 Hz)， 3.80 (3H， s)， 6.85 (2H, d， / 8.6 Hz， Ph-H)， 7.02 (2H， d， / 8.6 Hz， Ph曙H);13C腿R (75.5 MHz; CDC13) 33.1， 34.4和35.2, 55.3， 114.0, 129.5, 132.6， 158.1;柳/z (+ES) 230 (30, MH+)， 135 (100， [M-CH2Br,。 乙酸4-(2-氯乙基)-苯基酯一化合物M2 (RG26)在0。C下，将乙酰氯(0,24ml， 3.38mmol)加入到进行着搅拌的4-(2-氯-乙基)-苯酚(261mg， 1.67mmo1)、吡啶(0.68ml， 8.41mmol)和4-二甲基氨基吡 咬(20mg， 0.16mmol)在二氯甲烷(6ml)中的溶液中，使该反应混合物緩慢温 热至室温并将其搅拌17小时。用水(8ml)淬灭反应混合物。将有机层分离 出来并用饱和碳酸氢钠溶液(10ml)、水(3xl0ml)、盐水(10ml)洗涤，干燥 (MgS04),过滤并减压蒸发，得到黄色油状物形式的所述苯基酯(270mg，82%)。v咖x/cm1 (膜法)2959， 1767， 1605， 1508， 1167， 1018和847;8H (300 MHz; CDC13) 7.23 (2H， d， / 8.5 Hz， Ar)， 7.04 (2H， d， / 8.5 Hz， Ar)，3.70 (2H， t， / 7.4 Hz， CZT2C1)， 3.06 (2H, t， / 7.4 Hz， C/T2Ar)， 2.30 (1H， s.C乐COO);Sc (75 MHz; CDC13) 169.5， 149.6， 135.7， 129.8， 121.7， 44.8,38.6和21.1; 加/z (ES+) 221 (M+Na)+ (88%), (CI+)实测值M+ 199.0524; d。H"C102的 计算值M+ 199.0520。乙酸4-(2-乙酰氧基-乙基)-苯基酯一化合物N2o o人o乙酸2-(4-羟基笨基)-乙基酯一化合物02在0°C下，将吡啶(1.64ml， 20.27mmol)加入到进行着搅拌的乙酰氯 (0.58ml， 8.16mmo1)、 2隱(4曙羟基國苯基)-乙醇(510mg， 3.69mmol)和催化量4-二甲基氨基吡啶在二氯甲烷(13ml)中的溶液中，使该反应混合物緩慢温热 至室温并将其搅拌20小时。用水(20ml)淬灭反应混合物。将有机层分离出 来并用饱和碳酸氩钠溶液(20ml)、 lMHCl(20ml)、水(3x20ml)、盐水(20ml) 洗涤，干燥(MgS04)，过滤并减压蒸发，得到粗产物，将其用快速色镨法 进行纯化，用4:1的己烷乙酸乙酯洗脱，得到黄色油状物形式的已知的二 乙酸酯(N2) (Procopiou, P.A., Baugh， S.P.D.， Flack, S.S., Inglis， G.G.A. / Crg.Chen.1998, 63， 2342-2347) (391mg, 48%)。 RF 0.43 (4:1己烷乙酸乙酯)；
vmax/cm(-1) (膜法)2959， 1740， 1506,1367， 1167,1018和851;&H (300 MHz; CDC13) 7.22 (2H， d, / 8.5 Hz， Ar)， 7.02 (2H, d， / 8.5 Hz， Ar)，4.26 (2H， t， / 7.0 Hz， C乐OAc)， 2.93 (2H， t， / 7.0 Hz， C&2Ar), 2.29 (3H， s，C乐COOCH2);8C (75 MHz; CDC13) 171.0， 169.6， 149.3， 135.4， 129.8， 121.6， 64.7， 34.5, 23.6， 21.1和21.0;w/z (ES+) 245 (M+Na)+ (100%)。从上面的操作步骤中还以黄色针状物形式分离出了已知的乙酸烷基酯 (02) (Shashidhar， M.S., Bhatt， M.V. / CA纖。画肌,渭7，654.; Pedrochi画Fantoni， G.， Servi， S. / C%e/m. iS0c尸cA:/" TVyww.丄，7992， 1029) (44mg, 7%),M.p. 54-57。Cj及f 0.27 (4:1己烷乙酸乙酯)；vmax/cm_1 (石蜡举月法)2979， 1644， 1620,1485， 1148和1022; SH (300 MHz; CDC13) 7.08 (2H， d， / 8.5 Hz， Ar)， 6.75 (2H， d， / 8.4 Hz， Ar)， 4.72 (1H， s， 0^0， 4.23 (2H， t， / 7.1 Hz， C乐OAc)， 2.86 (2H， t， / 7.1 Hz， C仏Ar), 2.04 (3H， s， C恥OO);8C (75 MHz; CDC13) 171.5， 154.4， 130.0， 129.7,115.4, 65.4,34.2和21.0;附/z (ES+) 203 (M+Na)+ (100%)。丁酸4-(2-氯-乙基)-苯基酯一匕合物R2 (JMB8)<formula>formula see original document page 42</formula>在搅拌的情况下，在0°C下，在氮气下，向4-羟基苯乙基氯(500mg:3.19mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中加入丁酰氯(0.40ml， 3.8mmol)和吡 啶((K31ml， 3.8mmo1)。使温度升至室温并将该反应混合物搅拌16小时。将 该溶液用水(3 x 5ml)洗涤并用硫酸镁干燥。在真空下除去二氯甲烷并用二 氧化硅柱色镨法(用己烷/乙酸乙酯，95:5洗脱)分离粗产物，得到澄清油状物 形式的标题化合物(680mg， 94%)。dH (300 MHz; CDC13) 1.04 (3H， t， / 7.4 Hz， C&3CH2)， 1.76 (2H，六重峰，/ 7.4 Hz， CH3CJy2CH2)， 2.53 (2H， t, / 7.4 Hz, C^CC^Ar), 3.06 (2H， t， / 7.4 Hz， Ci72CH2Cl)， 3.70 (2H， t， / 7.4 Hz， C乐C1)， 7.03 (2H， d， 《/ 8.5 Hz)， 7.23 (2H， d,/8.5 Hz);8C (75 MHz; CDC13) 13.6， 18.5， 36.2， 38.5 (CH2CH2C1)， 44.8 (CH2C1), 121.7,129.8， 135.5,149.6， 172.2 (CH2C02Ar);附/z (ES+) 249 ([M+ Na+， C12H1502C1， 100%)。2，2，-亚甲基双(4-(3-溴丙基)苯酚)一化合物S2 (JW35)
<formula>formula see original document page 43</formula>
将4-(3-溴丙基)苯酚(0,30g， 1.51mmo1)、曱醛(0.12ml， 1.51mmol)和浓硫 酸(lml)在水(5ml)中的溶液在密封的试管中在80°C下搅拌2小时。在冷却 至室温后，将该反应混合物用饱和碳酸氲钠溶液中和。用乙酸乙酯(3 x 20ml) 萃取所得的混合物。将合并的有机溶剂用盐水(40ml)洗涤，用硫酸镁干燥， 然后真空浓缩。用二氧化硅快速色镨法(30%乙醚的己烷溶液)进行纯化， 得到白色固体形式的标题化合物(72mg， 23%)。力NMR (300 MHz; CD4OD) 8 1.99 (4H, tt, /6.6， 7.2 Hz)， 2.57 (4H, t， /7.2Hz), 3.30 (4H， t， J6.6 Hz)， 3.83 (2H， s)， 6.69-7.05 (6H， m， Ph-H);13C匪R (75.5 MHz; CD4OD) S 31.0， 33.8, 34.1和35.9,116.2， 128.2， 128.7，131.7， 131.1， 154.0;附/z (+ES) 465 (20, [M+Na、304 (100， [M-2Br+Na广； 柳/z (+ES) 441 (100， [M-HD。双(5-(3-溴丙基)-2-甲氧基苯基)甲烷一化合物T2 (JW37)Br、 Br、OMe OMe将氢化钠(60%, 22mg， 0.54mmol)在无水THF(2ml)中的溶液在密封的 试管中在室温下搅拌15分钟。在加热至50°C后，加入S2 (0.12g， 0.27mmo1) 并将该反应混合物在该温度下搅拌30分钟。加入硖甲烷(34jd， 0.54mmo1) 并继续搅拌1小时。在冷却至室温后，加入水(10ml)并将该混合物用乙酸 乙酯(3x 15ml)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(30ml)洗涤，用硫酸镁千 燥，然后真空浓缩。用二氧化硅快速色谦法(10%二氯甲烷的己烷溶液)进 4亍纯化，得到无色油状物形式的标题化合物(54mg， 43%)。NMR (300 MHz; CDC13) 2.07 (4H， m)， 2.63 (4H， t， /7.1 Hz)， 3.35 (4H， t， /6.6 Hz)， 3.81 (6H, s)， 3.94 (2H， s)， 6.81-7.06 (6H, m， Ph-H); 13C NMR (75 MHz; CDC13) 30.0， 33.2， 34.5和35.2， 55.5,110.3， 127.0， 129.1， 130.6， 132.1,156.1。m/z (+ES) 453 (50， [M+Na+)， 180 (100); 实施例l监测PKB调控的实验PKB是PI3K的蛋白质下游效应器，响应于PI3K的活化其(在其活性 所需的残基上)被磷酸化。小牛血清(Natal Calf Serum)(NCS)是PI3K的刺 激物，从而随后导致PKB活化。因此，实验中所用的阳性对照是10%血 清，所用的阴性对照根本没有血清。在一种典型的方法中，使NIH3T3细胞在六孔板中在含有10% NCS的培养基(GibcoBRL)中生长至接近汇合。用0.5%的血清使细胞々几饿2-3 天。然后除去培养基并代之以不含血清的培养基培养15分钟。随后，向反 应孔中加入1。/。NCS,向对照孔中加入0%、 1。/。和10。/oNCS。在孵育20 分钟后，加入化合物，将各孔再孵育15分钟。除去培养基，加入样品緩冲 液，将细胞溶解、沸腾、离心。用10% SDS-PAGE对样品进行凝胶电泳，然后根据标准方案蛋白印 迹在PVDF膜(Biorad)上。用购自New England Biolabs的抗PKB的一级 抗体和与辣才艮过氧化物酶偶联的山羊抗-兔igG的二级抗体(Amersham)来 探测蛋白印迹。然后，根据标准方案用新制备的ECL溶液使膜显影。多种浓度的化合物Q、 B、 D、 E和F的结果如图2a中所示，并且在 图2b中提供了化合物D和E的确证结果。这些结果显示化合物E是PKB 的抑制剂，而化合物D和F是活化剂。还对磷酸-Akt含量的蛋白印迹进行了监测。所用方法同上。图5中的 结果显示9种化合物[A B C D E FIJ Q可活化PKB。实施例2: c48/80和cQ对PKB的活化基于c48/80 (N-曱基-对-甲氧基苯乙基胺和甲醛的缩合产物，是不同聚 合度的阳离子两亲物的混合物)是PKB的活化剂的数据，我们的目标是用 不同的方法对蛋白印迹所获得的有希望的结果进行确证。因此，我们通过 使用磷酸-特异性PKB抗体的免疫荧光显微技术测试了化合物对PKB S473磷酸化的作用。因为c48/80是不同聚合度的阳离子两亲物的混合物，我们的目标是从 纯化的合成的单化合物中找到活化剂。证明这些类似物之一是研究涉及 PKB的路径的甚至更有力的工具。因此，我们集中着眼于对化合物Q(cQ) 进行研究<formula>formula see original document page 45</formula>材料和方法在涂布有PLL的盖玻片上将在含有10% FCS的DMEM中生长的 Cos6成纤维细胞的NIH 3T3饥饿24小时。用c48/80 [10ug/ml进行的刺激 始终是在存在1% FCS的情况下进行10分钟。而将在完全没有血清的 DMEM中生长的细胞用于用cQ [15ug/ml进行的实验。如所示的那样，用 100pM LY294002将细胞预处理30分钟或者用500nM RV001将其预处理 15分钟。在处理后，将细胞用PBS洗涤，用4% PFA固定，用0.25% Triton-X/PBS进行透化处理并充分洗涤。在1% BSA中进行阻断后，将细 胞进行鬼笔环肽染色和/或与砩酸-特异性Ser473 PKB抗体(Cell Signalling) 一起在4'C下孵育过夜并且与荧光素(FITC)-轭合的山羊抗-小鼠IgG (Jackson Immuno Research)—起在室温下孵育1小时。用Dapi对核进行 染色。将盖玻片安放在含Mowiol的载玻片上，密封，然后在Nikon显微 镜上进行分析。c48/80诱导在S473残基上的PKB磷酸化概括说来，成像数据与蛋白印迹的结果一致，证明在NIH3T3和Cos 6成纤维细胞中用3照/ml至10|ng/ml的剂量发生了 PKB磷酸化。c48/80 诱导的PKB活化依赖于少量血清，因为与之前用蛋白印迹所发现的一样， 仅用c48/80进行处理不能诱导PKB活化。因此，c48/80诱导的PKB活化 对1^294002(—种一般性的PI3-激酶抑制剂)敏感，在仅存在血清一1%血 清或10%血清的情况下，LY294002阻断c48/80所诱导的磷酸化(未给出数 据)。cQ诱导PKB的磷酸化，但是在存在血清的情况下其作为PKB抑制剂发挥作用与c48/80不同，单独的cQ在不存在任何血清的情况下足以诱导PKB 在S473残基上的磷酸化(图3c)。令人惊奇的是，浓度增加的血清抑制cQ 诱导的PKB活化。如图3b中所示，在用10% FCS对饥饿细胞进行刺激 后，可检测到磷酸化PKB的水平增加。相反，用cQ进行预处理则完全消 除了 10% FCS对PKB的活化(图3d)。为了研究PI3-激酶依赖性，用PI3-激酶抑制剂LY294002和PTEN抑 制剂RV001(其与生长因子一起协同作用于PKB活化)进行了研究。结果清 楚地证明PI3-激酶活性抵销cQ诱导的PKB活化，LY294002处理强烈增 加cQ诱导的PKB磷酸化(图3h)。另一方面，导致由PI3-激酶产生的 PI(3，4，5)P3水平增加的RV001处理间接抑制cQ攻击后的PKB活化(图3g)。cg^賴應4 :^-冉邀^^^f ^ #麥鬼笔环肽染色的初步数据突出了以下结果cQ参与PKB以外的不同 路径(在酪氨酸-激酶和G-蛋白偶联受体活化后，PKB作为PI3-激酶的下游 靶标发挥作用)。与胰岛素相同，cQ在饥饿的成纤维细胞中诱导应力纤维 的损失(图4)。但是与胰岛素不同，cQ能不依赖于PB-激酶地改组细胞骨 架(图4c)。 cQ处理产生无规的胞质F-肌动蛋白和与质膜毗连的肌动蛋白环 (图4b)。由于在存在cQ的情况下F-肌动蛋白应力纤维量的减少不那么明 显(其中保留了短的胞质无规肌动蛋白纤维)，因此其表现出抵销了胰島素-刺激的肌动蛋白重塑。实施例3:化合物C对PKB的活化 发现50jiM的化合物C (cC):Cl Cl在饥饿的细胞中活化S473上的Akt/PKB磷酸化并且在胰岛素刺激的细胞 中抑制Akt/PKB磷酸化。与这些结果一致，在存在cC的情况下，PI3-激 酶的抑制(渥曼青霉素或LY294002)导致在该部位的磷酸化增加，而PTEN 的抑制和因此产生的PI(3,4，5)P3水平的增加抑制该响应。由于浓度为 50nM的化合物C对NIH3T3成纤维细胞具有细胞毒性作用(MTT试验)， 因此用lpM的浓度测试了其对Akt/PKB磷酸化的作用。单独的该化合物 在饥饿细胞中仍具有活化作用。但是，其对净皮刺激的细胞的抑制作用并不 那么强。所用的方法与实施例2相同。参考文献Berge， S. 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1.下式的化合物和其可药用的盐在制备用于调控PKB活性的药物中的用途其中R1是C1-5烷氧基、OCOC1-3烷基、O(CH2)2O(CH2)2O(CH2)2OMe、O(CH2)2O(CH2)2O(CH2)2OH或OH；R2是H、(CH2)nOH、OCH3、Hal或R3是H或(CH2)nOH；且R4是任选地被一个或多个Hal、OH、COCH3、NH2、NHCH3、NHMe、NMe2、OCOCH3、CO2H或其酯或酰胺取代的C1-6烷基，其中n是1-5。
2. 权利要求1所述的用途，其中PKB被抑制。
3. 权利要求2所述的用途，其中所述的药物用于治疗癌症。
4. 权利要求3所述的用途，其中所述的癌症是其中涉及PKB上调的 癌症。
5. 权利要求4所述的用途，其中所述的癌症是其中还涉及PTEN突变 的癌症。
6. 权利要求4或权利要求5所述的用途，其中所述的癌症是卵巢癌、乳癌、前列腺癌、曱状腺癌或胰腺癌。
7. 权利要求2至6中任意一项所述的用途，其中Ri是甲氧基，W和 R3均是H且R4 A(CH2)2COCH3。
8. 权利要求l所述的用途，其中PKB被活化。
9. 权利要求8所述的用途，其中所述的药物用于治疗变性性障碍。
10. 权利要求9所述的用途，其中所述的变性性障碍是阿尔茨海默病、 中风、梗死、缺氧、骨骼肌损伤或II型糖尿病。
11. 权利要求8至10中任意一项所述的用途，其中化合物是<formula>formula see original document page 3</formula>3<formula>formula see original document page 4</formula>
12. 用在药物中的权利要求1或11中所定义的化合物。
13. 化合物，其是<formula>formula see original document page 4</formula><formula>formula see original document page 5</formula><formula>formula see original document page 6</formula><formula>formula see original document page 6</formula><formula>formula see original document page 6</formula><formula>formula see original document page 6</formula>OMe OMe
14.下式的化合物和其可药用的盐R6 R6 R6R5 R5 R5其中R5是d—5烷氧基或OH;W是任选地被Hal、 NHCH3、 C02H或其酯或酰胺取代的d.s烷基；且R7和R8独立地是(CH2)qOH ，其中q是2-5 。
15. 权利要求13或14中所定义的化合物和其可药用的盐在制备用于 调控PKB活性的药物中的用途。
16. 权利要求13或14中所定义的化合物和其可药用的盐在制备用于 抑制PKB活性的药物中的用途。
17. 权利要求13或14中所定义的化合物和其可药用的盐在制备用于 活化PKB活性的药物中的用途。
18. 包含至少一种权利要求l、 7、 11、 13或14中任意一项中所定义 的化合物并任选地包含一种或多种可药用的稀释剂、载体和/或赋形剂的药19.治疗癌症的方法，其包括对个体施用权利要求l、 7、 11、 13或14 中任意一项中所定义的化合物或权利要求18中所定义的药物制剂。
全文摘要
本发明提供了式(I)化合物和其可药用的盐在制备用于调控PKB活性的药物中的用途其中R¹是C_1-5烷氧基、OCOC_1-3烷基、O(CH₂)₂O(CH₂)₂O(CH₂)₂OMe、O(CH₂)₂O(CH₂)₂O(CH₂)₂OH或OH；R²是H、(CH₂)_nOH、OCH₃、Hal或(II)或(II)；R³是H或(CH₂)_nOH；且R⁴是任选地被一个或多个Hal、OH、COCH₃、NH₂、NHCH₃、NHMe、NMe₂、OCOCH₃、CO₂H或其酯或酰胺取代的C_1-6烷基，其中n是1-5。
文档编号A61K31/045GK101222916SQ200680017087
公开日2008年7月16日 申请日期2006年3月17日 优先权日2005年3月17日
发明者E·罗斯瓦兹, H·哈尔利斯, M·纳姆伯雷, R·沃朔尔斯基 申请人:帝国创新有限公司