用于治疗癌症的4-苯胺基-3-喹啉甲腈的制作方法

文档序号:1124805

专利名称::用于治疗癌症的4-苯胺基-3-喹啉甲腈的制作方法
技术领域
:本发明涉及一种f顿4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基>6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-哌眷l-基)-丙氧基]-喹脉3-甲腈(SKI-606),式(I)化合物治疗癌症的方法和含有相同化合物的组合物。
背景技术
:多种4-苯胺-3-喹啉甲腈衍生物显示出具有抗肿瘤活性,这使得它们作为化疗试剂用于治疗多种癌症,包括胰腺癌、淋巴癌和前列腺癌。美国专利6002008、6384051、6432979和6617333公开了一定的4-苯胺基-3-喹啉甲腈衍生物显示出具有抛中瘤活性。酪氨酸蛋白激酶由功能上相关的受体和非受体组成,可M特定酪氨,基的磷酸化作用发信号给酶以调节细胞生长、活化、区分、发展和转化。受体酪氨酸激酶,如表皮生长因子受体(EGFR)由细鹏卜配合体结合域、一个单独的横跨膜的领域和一个细胞内酪氨酸激酶域组成。非受体酪氨酸激酶,如Src和Abl是可溶性细胞质酶具有多重调整和蛋白-结合域。Src酪氨酸激酶家族是一组通过功能和序列相似度定义的非受体酪氨酸激酶。这个家族的三个成员被广泛表达Src,Yes和FynB。其它6个成员,LcK,Lyn,FynT,Fgr,Hck和Blk,在造血细胞中显著表达。对于非受体酪氨酸蛋白激酶的结构和功能的深度评论和它们在人类癌症中的相关性已经被公开。Src非受体酪氨酸蛋白激酶是Src家族的原型。Src是由生长因子受体和G-蛋白耦合受体调节的路径的下位组分,被认为可用于调整来自于这些不同路径的信号。己知被Src家族激,粦酸化的细胞内耙向蛋白的名单是巨大的并擀卖增长,包括粘连激酶、焦点粘连蛋白(FAK)和其它许多。Src在多数癌包括大多数的J3繊癌、黑素瘤、头颈癌和卵巢癌中被向上调节。Src在前列腺肿瘤系中也被激活。SrcmRNA水平在人鄉思腺肿瘤中高于正常组织样本。巴雷特^m和^m癌也过分皿src。既然c-Src酪氨酸激酶在大多数人类癌症中是恶性细胞行为的决定因素,我们就试着去确定抑制c-Src在胰腺癌化学敏感性,的作用。基于J^H察,抑制Src的化合物可能在治疗具有这些或其它癌症的病人有效。4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基)-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-哌(^1-基>丙氧萄-Hfl^3-甲腈已经被证实在预防、治疗或抑制,原则的癌症上有效。本发明涉及一种预防、治疗或抑制癌症的方法,所述方^括给予治自效量的式(I)化她4-(2,4-二氯-5_甲氧基-苯氨基>6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-哌膝1-基)-丙氧基]-喹脉3-甲腈,或其药学上可接受的盐。本发明也涉及一种治疗胰腺癌的方法,所述方法包括联合纟^治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐与吉西他滨或其药学上可接受的盐。本发明的另一方面是含有治疗有效量的式(I)化,或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物组合物。图l.显示头和颈系HN5对4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基>6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-哌膝l-萄-丙氧蜀4f(fr3-甲腈的反应。术语"癌症'指的是由异常和不可控制的细胞分裂所致的任何恶性增长劍中瘤。它可能通过淋巴系统或血流扩散到身体的其它部位。本申请描述的治疗癌症的方法的目的,癌症包括胰腺、淋巴和前列腺癌。药学上可接受的盐,例如,衍生于有机和无机酸如M昔酸、乳酸、羧酸、柠檬酸、苯乙烯酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、扁桃酸、苹果酸、酢浆草酸、丙酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝石酸、硫酸、乙二醇酸、甲磺酸、乙附图简述发明详述磺酸、甲苯磺酸、7jC杨酸、安息香酸和相似的已知可接受的酸。式a)化合物可口服,通ann内、肌内或静脉注射、输液、月旨质体介导给予、局部、鼻、肛门、阴道、舌下、尿道、真皮、膜内、眼睛或耳给予。为了获得式(I)化合物的持续供应,化合物是单元剂量形式。合适的单元剂量形式包括片剂、胶囊剂和在小袋或安瓿中的粉末。这些单元剂飘式可含有O.l至3OOmg式00化^J,tt^2至100mg。进一步,单元齐i遣形式含有50至150mg式(I)化合物。式(I)化合物可口服给予。一天给予1至6次,通常一天l至4次。有效量为本领職术人员己知;也将于化合物的形式。本领職术人员常规可舰经验活性观赋来确定化合物在生物鉴定中的生物活性以此来确定给予的剂量。本发明也涉及一种含有治疗有效量的44-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基》6-甲氧基_7_[3_(4_甲基_呢眷1_基)_丙氧蜀_顿^3_甲睛,式d)化合物,或其药学上可接受的盐,和药学上可接受的载体的药物组合物。载体可为,例如稀释剂、气雾剂、局部载体、水性溶液、非水性溶固体载体。载体可为聚合物^膏。本发明中的载体包含药学上可接受的任意标准载体,如磷,缓冲溶液、醋酸盐缓冲溶液、7K、乳剂如油/7jC乳剂或甘油三酸酯乳剂,多种润湿剂,片剂,包衣片齐诉卩胶囊剂。含有式O)化合物的组合物可与常规辅料制剂,如填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、矫味剂色添加剂。当经口或局部纟好时,这些化合物可Mil不同的载体给予个体。特别地,这些载体含有辅料如淀粉、奶、糖、特定种类的粘土、凝胶、硬脂酸、滑石、植物脂肪或油、树脂或乙二醇。特定的载据需要的给予方式择,如,磷Kk缓冲溶液(PBS)可用于静脉或系统会^,植物脂肪、奶油、药膏、油膏或^可用于局部<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>式(I)化合物可与适当的稀释抓防腐抓增翻l」、乳化剂、用于治疗或预防肿瘤的辅料和/或载体一起给予。这些组合物是液体或冻干的或别的方式干燥的剂型并且包含含有多种衝中成分的辅料(例如,Tris-HCl、醋麟、磷Kk),PH和离子纟贼,添加齐咖白蛋白或白;鹏以防止表面吸收,清洁剂(例如,吐温20,吐温80,普郎尼克F68,胆麟),增翻U(例如,甘油,聚乙烯丙三醇),抗氧化剂(例如抗坏血酸、钠),防腐剂(例如,噻荥撒、苯甲醇、),膨胀齐蜮张力1封喊U(例如,孚L糖,甘露醇),聚合物共价组合如聚乙二醇、配位金属离子、或化合物引入水MK或脂质体的微粒制剂,微乳,微囊、单层或多层囊,红细胞血影或球芽。这些组合物将会影响化合物或组合物的物理状态、溶解度、稳定性、体内释放率和体内清楚率。组合物的选择将决定与可治疗或预防肿瘤的化合物的物理和化学性质。式O)化合物可通过在一段时间可持续释放化合物的IM来局部给予。控释或缓释组合物包括在亲脂性不为的制剂(例如,月旨肪酸、蜡、油)。本发明进一步提供了一种f,式(l)化^t/作为活性物质预防、治疗和/或抑制癌症的方法。基于^现和得到的结果,SKI-606可用于预防、治疗或抑制癌症mt抑制恶性细胞的增殖。SKI-606抑制Src催化的细胞内蛋白质的磷酸化和细胞增殖。因此,给予人治疗有效量的SKI-606可预防或抑制癌症的形过抑制增殖,或可治疗已得癌症病AM;防止或抑库鹏瘤的进一步增长和/或使肿瘤尺寸变小或根除。出于本发明的目的,术语"抑制"指的是延迟、阻止或停止恶性细胞增殖,推测M阻止或抑制Src催化的磷酸化作用。出于本发明的目的属于"阻止"指的^iM:预防性治疗转移或阻止恶性或肿瘤性增长的持续,或阻止、抑制或终止疾病的进一步进行。出于本发明的目的属于"治疔,指的是给予有需要的病人治疗有效量的SKI-606以预防性地防止癌症的发展,抑制或终止癌症的进展,或恶性劍中瘤性生长,逆转癌症的发展,或恶性劍中瘤性生长,或根除癌症,或恶性或肿瘤性生长。本发明进一步提供一种治疗人类癌症的方法,包括给予感染个体治疗有效量的4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基)-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-哌眷l-基)-丙氧闺-喹脉3-甲腈,其药学上可接受的盐,或含有相同化合物的药物组合物。提供给病人的齐U量4絵依据纟舒什么、舒的目的,纟舒的形式诸如此类而改变。"治疗有效量"^^够以治愈或改善癌症症状的量。式O)化合物可单独使用或与其它可用于治疗癌症的化合物合用。这些化合物包括但不限于甲磺酸伊马替尼(GLEEVEC)、羟基脲、IFNA细胞毒害剂、化疗试剂、NSAIDS,吉西他滨EGFR抑制剂、MEK抑制剂、法呢酰|移酶、吉西他滨、或avastin或渥曼青霉素或其药学上可接受的盐。本发明方法的一个优选的实施例包括给予治疗有效量的式(I)化合物与治疗有效量的吉西他滨或avastin。更地式(1)化合物与吉西他滨一起给药°本发明方法的另一个优选的实施例包括给予治疗有效量的式(I)化合物与治疗有效量的吉西他滨和avastin的联^^合药。本发明方法的另一个tt^的实施例包括联合给予式(I)化合物或其药学上可接受的盐与吉西他滨和avastin或其药学上可接受的盐以治疗胰腺癌。一个实施本发明方法和/或用于本发明组合物的,化合物是4-(2,4-二氯-5-甲^^-苯氨基)-6-甲氧基-7-[3《4-甲基-哌(^1-基)-丙氧基]-[#^3-甲腈和其药学上可接受的盐。式0)化合物根据美国专利6002008的方法制备,这些方法在这里被引用作为参考。反应在翻忡进行,该翻U适于4顿的试剂和原料以及进行的转化作用。有机合成领域技术人员公知存在于分子中的多种功能必须与被提议的化学转化作用相一致。当非特定时,合成步骤的顺序、保护基团和去保护条件的选择对本领域技术人员是显而易见的。此外,在一些例子中,起始原料的取代基与一定反应^j牛不相容。与给定取代對目关的限就本领域技术人员是显而易见的。适宜时反应在惰性气体斜牛下进行。式I化合物由7-(3-氯丙氧基)4-[(2,4-二氯-5-甲辩基)氨闺-6-甲^S-3-喹啉甲腈与N-甲基哌嗪在纯的碘化钠或在翻咖乙二醇二甲基醚的碘化钠存在下反应制得。这些化合物的制备己经在文献[Boschelli,D.H.,等人J.MedChem.,44,3965(2001)]被报道,在这里弓l用作为参考。附图详述图l.头和颈肿瘤系HN5对4-(2,4-二氯-5-甲氧基苯氨基>6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-哌眷l-萄-丙氧基]-ftnt木-3-甲腈的反应。缺乏血浆的HN5细胞用化合物处理4小时,之后加入EGF至50ng/ml,保持10併中。分析溶解产物的Stat3Y705、c-CblY731和Y774以及小窝蛋白Y14的磷酸化作用。结果证实小窝蛋白Y14、c-CblY731和Stat3Y705的磷酸化作用被4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基)-6-甲氧基_7_[3_(4_甲基_呢膝1_基)_丙氧蜀4^1]^3-甲腈^>。,斤式(I)化合娜制耙向肽的Src催化的磷酸化作用。4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基)-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)~丙氧蜀-喹啉-3-甲腈抑制同类酶分析(FRET/Lance格式)中Src催化的磷酸化作用,具有IC50值为3.5nM。4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨萄-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-哌^1-基》丙氧蜀-喹脉3-甲腈与多种酶的活性比M表1。Src和Abl激酶Lance分析重组人类Src酶得于PanVera(P3044)。相应于Cdkl的6-20残基的肽被用作src酶分析的底物(生物素-KVEKIGEGTYGVVYK-COOH)。野生型c-Abl和v-Abl分别购买于Panvera(P3049)和Calbiochem(#102555)。用于Abl激,析的肽得于Synpep(生物素-NH-KEEEAIYAAPFAKKK-COOH)。对Src和Abl激,析而言,同类荧光共振倉疆转移激齢tH柳铕/APC检观赂式(LANCE,PerkinElmer)进行。Src酶(10ng)或Abl酶(2.5ngc-Abl,2.5ngv-Abl)与肽混合(对两个底物月太最后浓度均为2pM),50mMHepes(pH7.5),10mMMgCl2,20ug/mlBSA和0.001%Brij-35(Sigma)。加入化合物至最后DMSO浓度为1%,对Src在37°C培育70併巾,对Abl在27。C培育30併巾。反应用EDTA终止,最后浓度为30mMEDTA/25mMHepes(pH7.5)/10pg/mlBSA。混合物与Eu-标记抗体PT66(PerkinElmer,AD0068)和-APC(PerkinElmer,CR130-100)在50mMHepes(pH7.5)/20ug/mlBSA中结合,根据生产商的说明培育30射中。反应用WallacVictor监测,激发在340nm,释放在665亂娜用LSW繊分析插件辦为Excel(Microsoft)分析。PKAPKC,S6激酶,CAMKHandp38激齢析分析用于PKA(Upstate#14-114),PKC(Upstate#14-232)和S6K(Upstate#14-333)的激,析。ELISA格式用于CAMK-n(Upstate#14-217和p38(重组蛋白在室内生产和纯化)SCINTIPLArE分析96孑LSACovScintiplate(#1450-551)板在酶分析实验之前用PBS(0.1%TritonX100)冲洗4次。60Ml混合物*(见下表)20m1化合物C在10yoDMSO里)20倂中预培养20pi底物luM(见下表)下表所示4祸只用于96孔板9<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>肽1323(LSP16Bio:Bio-RTPKLARQASIELPSM:LSP-1aa243-258.Ser252是磷酸化作用位点)肽1463(PKA底物Bio國GRTGRRNSI)肽1464(S6K底物Bio國RRRLSSLRA)底物加入时反应开始。1-停止反应根据表中所示的时间^ffl20nl的0.5MEDTA。在反应开始以后持续培育板不S31—小时,如果是S6K则为805H中。2画洗^(PBS+0.1。/。TritonX100)洗6次(25(U/孔)3-计数(WallacTrilux计数器)IIELISA接下来是ELISAs中4顿的激酶的分析^[牛。P38用显性的活性变种MKK6歡活。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>1738肽(MK2T334:Bio國QSTKVPQTPLHTSRVL)1895肽(胃泌素1國17:Bio-KKEGPWLEEEEEAYGWMD)激^^析预分析以相同的形式进行见战步骤1至3。检测板是TMuncMaxiSorb,用以l:400比例在PBS中的Amersham山羊抗-GST抗体以100^d/孔涂层2小时。反应板是Costar板,在0.1%凝胶时用阻止缓冲液阻止2小时,毎孔200m1。如下准备ERK/ADB混合物每毫升ADB10m1GST-ERK2将60MlERK/ADB混合物加入阴性对照孔(12行)准备MEK/ERK/ADB混合物(MEA)M31添力卩活性MEK1在分析板中加入60-/孔MEA加入20m1cmpd10%DMSO准备5xATP/ADB舰加入500uMATPtoADB每孔20nlATP/ADB以开始反应。30C培育1小时。每孔中加入200.5MEDTA停止反应。4-含磷肽检测抗体为了检测磷酸化肽,亲和力纯化多克隆磷-特异抗体60521和64273分别代替1323和17384顿。为了分别检测磷酸化1323和1738,加入100Ml终止性缓冲液,补充纯化的60521(0.46mg/ml)l。/。BSAl:20000和抗兔子-Eu(PE弁AD0105)1:4000或纯化的642731:4000和抗画兔子隱Euat1:2000。为了检测磷酸化的1895,加入100Ml终止性缓冲液,补充P/。BSA具有抗國含磷酪氨酸PT100(细胞信号#9411)1:1000和抗-小鼠-Eu(PE弁AD0124)。培育1小时RT(混合器)洗6x250m1PBS0.1%Tween20加入100nl提高溶液(WallacCa说1244-105)培育10分钟RT(混合器)用Victorn读(HTS铕草案在我们的阅读机)缓冲液激酶缓冲液10X200mMHepespH7.5,100mMMgCl2ADBK:20mMMOPS7.2,25mMP-甘油磷酸,5mMEGT入1mM原矶酸钠,20mMMgCl2,lmMDTT终止性缓冲液10mMMOPS7.5,150mMNaCl,0.05%Tween20,0.1%Gelatin,0.02%NaN3RafMEK激酶ELISA试抓sf9昆虫细胞溶解产物含有全长6his-标签的重组人类c-Raf。(特异活性~200U/ml)。人类一隨性Mek-l-GST和人类GST-MAP激酶(重组蛋白产于E.coli)。Rafl激酶阶式分析步骤Raf-1(c-Raf)用于磷酸化和激活非活性GST-MEK1,然后可磷酸化和激活非活性p42GST誦MAPK接下鄉过购于Sigma(cat.#77439219041)的特异^l抗体来测量TEY序列(aa's202-204)的磷酸化作用。激酶分析草案原料溶液Raf分析1.分析稀释缓冲液(ADB):20mMMOPS,pH7.2,25mM卩-磷靴油,5mMEGTA1mM原砜酸钠,1mM二硫苏糖醇2.辛劳ATP混合物500mM冷ATP和75mM氯化镁在ADB中3.活性激酶人类活性c-Raf:在每个分析0.4U点4OT4.非活性GST-MEK1:在齡分析0.1吗点^ffi5.非活性GST-p42MAP激酶在每个分析1%g点4顿ELISA1TBST-Tris(50载pH7.5),NaCl(150mM),Tween-20(0.05%)2.Superblock(Pierce)3.抗-GSTAb(Pharmacia)4.抗國PhosphoMAPK(Sigma)5.抗-小鼠Ab/铕缀合物(Wallac)分析步骤第一步GST-MEK和GST-MAPK的c-Raf,性活化1.^^分析物中加入20mlADB(例組96孑L板的每孔)2.在ADB中加入10ml0.5mM冷ATP和75mM氯化镁3.加入2mlc-Raf(0.4U/分析物),与1.6ml非活性MEKl(0.4mg/分丰j^l讲轭4.加入4ml非活性GST-p42MAP激酶(l.Omg/分析物)5.在震动培育器中3(TC培育60分钟。6.转移混合物至抗-GSTAb涂层的96孔板(GST涂层板,用HerceSupeiblock终止)7.在振动的培育器中在30。C培育60併中8.用TBST洗涤3次,加入抗-磷MAPK(Sigma)(1:3000)9.在振动的培育器中在30。C培育60併中10.用TBST洗涤3次,加入抗-小鼠Ab/铕缀合物(Wallac)(1:500)1l.在振动的培育器中在30°C培育60併中12.用TBST洗涤3次,在WallacVictor模式板阅读器下读板。KDR激柳斤原料1)NuncMaxiSorb96FELISAVWR62409-0242)肽底物聚(Glu4-Tyr),Sigma(P-0275):在水中准备5mg/ml原料3)TBS:BupHTBSPierce(#28376);25mMTrispH7.2,150mMNaCl最后4)TBST:冲洗缓冲液=TBS+0.05%Tween-20:对于500ml:TBS(Jd^)+2,5ml10%Tween(制于TBS)5)化合物制备于DMSO,存储化合物在-80C6)5XKDR激酶缓冲液5XIX50ml的5X20mMHEPESpH7.44mMHEPES1ml1MHEPES5mMMnC12lmMMnC121.25ml200mMMnC12100uMNa3V0420uMNa3V040.1ml50mMNa3V047)酶稀释液0.P/。BSA在4mMHEPES中,pH7.48)2.5XATP[10uM最后]/MgC12HEPES溶液2.5Xcone.rxn中的DC10ml的2.5X25uMAIP10uMATP0.25milmMATP25mMMgC1210mMMgC121ml250mMMgC1210mMHEPES4mMHEPES0.1ml1MHEPES4.45ml7K10)ATP(FW551):AmershamPharmacia#27-2056-01(25画l):画mM溶液11)250mMMgC12:SigmaM-8266,^7_K,FW95.21;1.19g/50ml水8.65ml水9)HEPES2.5X/MgC12溶液(没有ATP):2.5Xconc.cm中的IX25mMMgC1210mMMgC1210mMHEPES4mMHEPES0.5ml250mMMgC120.05ml1MHEPES5ml2.5X12)分析缓冲液PerkinElmer1244-10613)Eu-抗-PY(PT66):PerkinElmerAD0040(50ug,Sigma克隆PT66,抗-^酪氨酸抗体)14)增加溶液PerkinElmer1244-105方法1.往NuncMaxiSorb板加入TBS的25ug/ml的100^1聚(Glu4-Tyr)肽.培育1-4小时在RT.[或者改变最后聚(Ghi4-Tyr)肽浓皿~1-50ug/ml;或使用聚(Ghi6-Ala3-Tyr)肽]2.冲洗含肽的孔3次,4OT200nlTBS3.往*孔中加入29m1kdr激酶混合物[=kdr-ic+5Xkdr冲液+水(混合1:1:0.9)]结合10纯化的KDR-IC制齐i丄,的(ie,1:5to1:20根据制剂而定)在0.1%BSA/4mMHEPES+10m15XKDR>^[^冲液+9^1水PER反应孔。如果4細较多或较少的化合物容积贝湘应地调整水的容积。这些添加物可用Matrix多量吸管操作。4.往旨孔中加入lm1化合物(50xdmso溶液鉴于想要的最后的化合物浓衝(TV=30pi在这个点)5.在RT培育约15射中以使化合物与酶结合6.往样品孔中加入20Ml2.5XATP/MgC12/HEPES溶液,对KDR而言,反应的线性范围是l-100nM,所以使用10uM[或者ATP最后的浓度可改变;在一些反应中fOT没有ATP的2.5XMgC12/HEPES,以确定^酶制剂可行的低端范围]。7.室温培育40併中。[或者分析反应30至60併中;或37C反应、温度,虽然这些与现在的KDR批次差异最小]8.用200m1TBST冲洗板3次9.加入在分析缓冲液中的1:2000的75nlEu-PY10.培育45-60mii^RT11.用200m1tbst冲洗板3次12.加入100m1的增加^液(与rt平衡)13.在VICTOR-TR-荧光板阅读器下读板天然铕(荧光)读数转换为百分比抑制和/或基于未,(不含化合物)对照孔的^fflExcel冲繊的IC50值表i4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基)-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基哌眷1-萄-丙氧^j_pgfr3_甲腊抗各种醇的活性<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>ICsf达到50%抑制的浓度细胞增殖式(I)化合物式一种Src激酶家族激献口Abl激酶的选择性抑制抓基于细胞的分析实验液用于检测4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基)-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-哌審l-基)"丙氧基]-喹脉3-甲腈的选择性。大鼠纤维原细胞过,达一种致瘤形式的Src,其中人类c-Src的催化域被插入v-Src催化域以产生v-Src/人类c-Src融合蛋白。也可^(OTFynB,Lck^L,和Hck^其它Src家族成员进行相似的取代。此外,表繊瘤形式的v-Abl,對夷岛素生长因子-I受体,纤维原细胞生长因子受体,血小板生长因子受体和Her2的相同细胞^M也被构建。这些细胞中的化合物活性用固定-独立生长分析来确定,基于通过鋭纤维原细胞的致瘤蛋白得到固定4te。在这些斜牛下的生长依赖于激酶的活性,激酶活性的抑库哙阻止细胞的生长,以此反应出细胞耙向蛋白磷酸化作用的抑制。表2显示4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基)-6-甲氧基-7-[3-(4-甲晷哌ni■l-基)丙氧基]-喹脉3-甲腈在这些^(牛下得到的增歹直。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>ICs(r50^抑制时的浓度头和颈肿瘤系式(I)化合物;^l^iiSrc的头和颈细胞线中肿瘤细胞增殖的潜在的抑制剂。一个具有代表性的增殖概图是4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基>6-甲氧基-7-[3_(4-甲基-哌膝1-基)-丙^^]-11§1^3-甲腈与朋5系,舒图l,与下游耙蛋白磷酸化作用的抑制证据一起。生物测试禾旨的说明标7隹生长^j牛对于描述于表3中的实验,在用于特定细胞线的标准生长培养基中,在第O天在96liffl胞培养盘的每一孔中放入1000个细胞。第1天加入化合物。相关的细胞数在第4天测定。细胞滴度测定-Glo方法细胞滴度测定-Glo发光细胞生存能力测试(Promega#G7573),其中细胞用细胞浓度测定-Glo试剂溶解,短暂激动,在4吏用用于发光读数的W^allac盘读数器分析之前允许在室黼爐30她MTS分析一些分析借助于细胞浓度测定96分析来监测(Promega#G3580)。这项分析,在第4天,检测试剂被加入到96孑L板,490nN的吸光率被测量到。SRB分析SulforhodamineB(SRB;)分析用于一定黑素瘤系。在这项^M斤中,生长基中的血清浓度是5%和培养基体积是0.21111。在第4天,0.05ml50X的三氯乙酸加入到培养基中,板允许置于室温l小时。培养基被轻轻倒出,板用水冲洗3次。洗后的板千燥,然后加入0.08ml的SRB试剂(购于Sigma;0.4%SRB在1%醋酸中)。室温中IO射中后,板用1%的醋酸冲瓶到溶液中没有自由的红色残留。结合的SRB试剂用0.15mll0mMTris(不加酸)溶解。在混合器中激活5併中后,吸收率为540nM。体内研究所有的动物研究都根据被认可的社会公共机构动物照顾和使用委员会草案进行。肿瘤细胞败悬浮至50百万细膨ml,0.2ml细脱悬浮液被皮下注射至lj一只6-7周大的雌裸鼠的腰窝内(CharlesRiver,Wilmington^MA)。一周后肿瘤大于200mm3的小鼠通aJH莫内注射被纟好制剂或化^t/,剂量为在0.2ml制剂中含有0.5%的甲基纤维素和0.4%的聚山梨酸酯80(Tween80)。表3总结了对T-细胞白血病、前列腺癌、月繊癌、黑素瘤和头颈肿瘤系用4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基>6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-哌窿1-基)-丙氧基]-喹啉-3-甲腈处理得到的增殖实验结果。也显示了给予的4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯氨基>6-甲氧基-7-[3>(4-甲基哌曝1-基)~丙氧基]-[1!#-3-甲腈在裸小鼠中舰A375黑素瘤皮下月中瘤异种抑制物的生长。表3_<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>权利要求1.一种预防、治疗或抑制癌症的方法,所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐id="icf0001"file="S2006800223605C00011.gif"wi="111"he="40"top="61"left="39"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>2.如^l利要求1所述的方法,其中预防、治疗或抑制的癌症是月M癌。3.如权利要求1所述的方法,其中预防、治疗或抑制的癌症是淋巴癌。4.如禾又利要求1所述的方法,其中预防、治疗或抑制的癌症是前列腺癌。5.如才又利要求1所述的方法,其中预防、治疗或抑制的癌症是头颈癌。6.如权禾腰求1所述的方法,其中预防、治疗或抑制的癌症是黑素瘤。7.—种药物组合物,所^^且合物含有治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体8.如权利要求1所述的方法,其中化激斜刺顿或与其它一种或多种用于治疗癌症的化合物联合施用。9.如权利要求8所述的方法,其中其它化合物选自甲磺酸伊马替尼、羟基脲、IFN4、细胞毒害剂、genfitanib、吉西他滨、avastin和渥曼青霉素,或其药学上可接受的盐。10.如权利要求9所述的方法,其中其它化合物是吉西他滨。11.如权利要求9所述的方法,其中其它化合物是吉西他滨和avastin。12.—种治疗胰腺癌的方法,所述方法包括联合给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐与吉西他滨或其药学上可接受的盐<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>13.如权利要求12所述的方法,所述方法进一步包括纟^avastin或其药学上可接受的盐。全文摘要本发明涉及一种使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐来预防、治疗和/或抑制癌症的方法。本发明还涉及含有式(I)化合物的药物组合物。文档编号A61K31/496GK101252931SQ200680022360公开日2008年8月27日申请日期2006年6月13日优先权日2005年6月24日发明者F·C·博谢利申请人:惠氏公司
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