专利名称：：幽门螺杆菌菌株的增殖·运动抑制方法
技术领域：
：本发明涉及抑制成为胃，十二指肠溃疡、胃癌等发生的主要原因的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株增殖运动的方法。更具体地说，本发明涉及对于宿主中固有的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株不会出现抗性菌、无副作用的抑制菌株增殖运动的方法。且本发明中的增殖运动抑制方法，是指包括抑制幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株增殖及抑制幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株活跃运动的任何方法。
背景技术：
：海洋深层水是自1989年日本首次从高知县室户岬通过陆地型深层水取水设施汲水以来，以富山县、冲绳县为主，在日本各地开始取水。海洋深层水因具有营养丰富、清洁、低温稳定等特性而广为人知，近年来，利用海洋深层水的产品开发非常盛行。其中，用于饮料水、水产加工品及发酵品等食品领域的数量众多的商品已在市场流通。这些商品的大多数都着眼于海洋深层水的清洁性及高矿物质含有率，作为单纯的产品原料和品质高的矿物质源而灵活运用。另一方面，以海洋深层水为原料的富含矿物质的饮料水对生物体的作用机理在医学上也逐渐被揭示，其影响整肠作用、生物体免疫力的同时也期待其对生活习惯病等有预防作用，但还未得到充分的证明。另外，有报道指出幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株在人的胃中感染，定植，除上消化道疾病以外，还与自我免疫疾病、急性冠状动脉综合症、生活习惯病等有关。其中，众所周知其与胃*十二指肠溃疡、胃癌等的发生原因密切相关。因此，对此种幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的除菌，进行了使用各种抗菌剂、抑制胃酸分泌的质子泵抑制剂(PPI)和抗生素等的疗法。具体地说，如专利文献l(日本特开平8-20543号公报)中公开的在口腔内用于幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株杀菌的拧檬酸铋等含有铋化合物的局部用口腔内给药剂。且专利文献2(日本特开平8-48629号公报)及专利文献3(日本特开平9-208578号公报)中还公开了针对幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株，以吡啶酮羧酸(Pyridonecarboxylicacid)、其酯或这些盐为有效成分的具有优异抗菌活性的抗幽门螺杆菌剂。而且作为消化性溃疡治疗、慢性浅表性胃炎治疗及其复发防止剂，专利文献4(日本特开平9-295938号公报)中公开了对在胃内粘膜层定植增殖的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株有强抗菌活性的碳青霉烯类化合物及以其药理学允许的盐为有效成分的溃疡治疗剂。以往，作为具有导致胃炎、胃及十二指肠溃疡等所谓的消化性溃疡的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的增殖抑制、除菌排菌效果且对胃肠疾病的治疗及发病预防有效的医药组合物，专利文献5(日本特开2000-63280号公报)及专利文献6(日本特开平10-109942号公报)中公开了，将具有抗幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)活性的黄连、黄柏等的生药粉末或其提取成分与组胺H2受体阻断剂、质子泵抑制剂、胃粘膜防御型胃炎消化性溃疡治疗剂、制酸剂及止泻剂中的至少1种进行组合得到的医药。还有专利文献7(日本特开平11-180888号公报)中公开了作为对幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株有抗菌作用的药剂、感染预防剂及食品，以从属于蔷薇科的果实中获得的多酚为有效成分，专利文献8(日本特开平11-292788号公报)中公开了作为感染预防剂、医药及饮食品，以铁结合型乳铁蛋白为有效成分。同样，专利文献9(日本特开2002-68992号公报)中公开了以与质子泵抑制剂并用的茶多酚为有效成分的饮食品、食品添加剂。且专利文献IO(日本特开2005-68014号公报)中公开了含有从罗布麻、山桑子、刺五加中选择的一种或二种以上的提取物的抗幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的抗菌齐lj。然而，因宿主人不同，幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的种类也不同，所以，使用一般的抗菌剂效果也不明确，或由于抗性菌的出现及副作用，现状是除菌不成功的例子在增加。因此，专利文献ll(日本特开平10-33179号公报)中记载了对幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株本身的检测及鉴定有效的感染诊断用探针，专利文献12(日本特开平10-87512号公报)中记载了以"13C-尿素呼气试验"为原理的实时的感染检查方法，专利文献13(日本特开平10-285099号公报)及专利文献14(日本特开2001-321197号公报)中记载了着眼于幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株基因的引物和幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的克拉霉素抗性的检查方法，专利文献15(日本特开平11-318490号公报)等中记载了通过来自幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的脲酶检测的方法，幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的简便的检测鉴定法已有大量报道，但还没有关于利用海洋深层水进行其增殖抑制、运动抑制的报道。专利文献l日本特开平8-20543号公报专利文献2日本特开平8-48629号公报专利文献3日本特开平9-208578号公报专利文献4日本特开平9-295938号公报专利文献5日本特开2000-63280号公报专利文献6日本特开平10-109942号公报专利文献7日本特开平11-180888号公报专利文献8日本特开平11-292788号公报专利文献9日本特开2002-68992号公报专利文献10日本特开2005-68014号公报专利文献11日本特开平10-33179号公报专利文献12日本特开平10-87512号公报专利文献13日本特开平10-285099号公报专利文献14日本特开2001-321197号公报专利文献15日本特开平11-318490号公报
发明内容对应于如上所述与胃*十二指肠溃疡、胃癌等的发生原因密切相关的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的多样性，希望有可抑制抗菌剂的副作用、抗性菌的出现的胃肠疾病的预防或治疗方法。另一方面，因可通过抑制幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的增殖*运动来预防*治疗，所以考虑预防时，与经常使用药剂相比，在用餐时持续摄取可抑制幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株增殖，运动的食品对健康来说安全性既高，摄取也容易。因此，如果通过利用廉价的材料，例如日常摄取的饮料水等能够达到抑制幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株增殖运动的目的应该最为理想，所以本发明以提供此物质为课题。本发明的课题还是，确立通过使用因富有营养性、富含矿物质成分而多用于饮料水、水产加工品及发酵品等的食品领域且原料价格低廉的海洋深层水，着眼于在日常生活中可作为饮料水轻松摄取，抑制在人的胃内定植*感染、除上消化道疾病以外与自我免疫疾病、急性冠状动脉综合症、生活习惯病等有关的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的增殖及运动的技术。本发明鉴于上述状况，找到了通过矿物质含有物抑制幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株增殖及运动的方法，确立了通过利用日常摄取的饮料水等，抑制幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株增殖及运动的技术。即本发明因着眼于海洋深层水中含有的多种矿物质中所大量含有的镁、钙、钠、钾，且着眼于将使用的矿物质的形态作为在日常生活中可轻松摄取的液体来研究，结果通过利用至少含有镁、转、钠、钾的l种以上的液体，找到了抑制幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株增殖及运动的方法，所以确立了通过利用日常摄取的饮料水等，抑制幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株增殖及运动的技术。此处研究的矿物质来自有害物质等污染少的海洋深层水，所以作为饮食品的原料优选，但不特别限定于来自海洋深层水的物质。每1Kg中的矿物质含量只要为40mg以上，即可抑制幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的增殖及运动。且每1Kg中的矿物质含量为5，900mg以上时，可抑制所有的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的增殖及运动，从经济观点来看，不需要比5，900mg更多的量。通过选择从海洋深层水中获得的高矿物质水并轻松摄取，可抑制宿主中固有的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的增殖、运动性，在进行上消化道疾病等的预防、治疗时不需担心抗性菌的出现和治疗药剂的副作用，这是本发明的巨大优点。图1琼脂培养基上生成的菌落的状态具体实施方式[幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的增殖抑制试验方法]本发明中使用的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的增殖抑制试验通过以下方法进行。从培养第2天的琼脂培养基(表1)中取1白金耳左右幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的各种菌，使其悬浮于1ml的2.8%BrucellaBroth培养液中，使O.D.600=0.3。将如此调整的溶液用灭菌水稀释到If)—4,10—5,10—6倍，将此菌悬液在含有表2所示的由海洋深层水调整的高矿物质水A,B，C，D，E，F，G(试验水)的各琼脂培养基(表3)中按每次lOul滴下，在37。C、0)210%环境下培养3天后，测定CFU(活菌数)。此外，对照水使用Milli-Q水。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表2_<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表3<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>[使用的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株]此外，试验中，主要使用临床分离株。KMT系列高知大学医学部临床分离株NY系列抗生素(甲硝唑及克拉霉素)抗性株(日本株)26695:充分分析到基因水平的临床分离株(欧州株)NCTC11637:临床分离株(美国)HPK5:临床分离株(日本株)HPKT510:用基因重组制备的HPK5的cdrA基因(细胞分裂相关基因)破坏株[增殖抑制的评价方法]以对照水中的CFU(活菌数)为画，判定试验水A，B，C，D，E，F，G的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的增殖抑制效果。考虑到试验中操作上的不平均，将试验水的CFU与对照水相比，显示比80%小的值时判定为有效果。进行3次试验，2次以上有效果时判定为具有增殖抑制效果(O印)。[幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的运动抑制试验方法]从培养幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的琼脂培养基中，将各种菌使用灭菌后的牙签刮取，在由海洋深层水调整的高矿物质水A，B，C，D，E，F，G及作为对照使用Milli-Q水的BrucellaBroth琼脂培养基(表4)中接种，在37'C、0)210%环境下培养3日后，测定菌落的直径。表4琼脂培养基的组成<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>[运动抑制的评价方法]评价方法为，试验水的菌落直径比对照水的菌落直径小时判定为有效果。进行3次试验，2次以上有效果时判定为有运动抑制效果(印)。且在对照中菌落的直径不足2mm时认为是生长繁殖不充分，不算在试验次数内。以下将本发明用针对试验水A，B，C，D，E，F，G的实施例表示，但由海洋深层水调整的高矿物质水不限于此。针对各种幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的试验水的增殖抑制效果如表5所示。表5对各种jfeZicc^"erwJcm'菌株的增殖抑制效果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>如表5所示，即使是同一菌株，因试验水的种类不同，有显示增殖抑制的情况，也有不显示增殖抑制的情况。且如表5所示，试验水D对大部分菌株都显示增殖抑制效果，因菌株不同增殖抑制的效果也不同。从以上结果中发现，通过轻松摄取从对各种幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的增殖有抑制效果的海洋深层水中获得的高矿物质水，不必在意抗性菌的出现及副作用，即可预防，治疗由幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株所引起的上消化道疾病等。实施例2表6显示了对在使用从海洋深层水中获得的高矿物质水的琼脂培养基上培养的各种幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的运动抑制效果。表6对各种jfe」'c。&"erP7"Jari菌株的增殖抑制效果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>如表6所示，KMT44、45、46株中，试验水B，C，D，E具有运动抑制效果。从以上的结果发现，通过适当选择所使用的高矿物质水，能抑制宿主中感染'定植的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株运动。实施例3以总矿物质浓度为400mg/kg的高矿物质水为原料，按表7中所示的离子比率将总矿物质浓度变为2011，800mg/kg，探讨对幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株的增殖抑制效果。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>考虑到试验中操作上的不平均，试验水的CRJ与对照相比，显示比80%小的值时判定为有效果。试验进行3次，2次以上有效果时判定为有增殖抑制效果(O印)。但是，使用的菌株是116中所示的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株o将总矿物质浓度从20ll，800mg/kg依次提高浓度进行探讨，结果如表8表15所示。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表9总矿物质浓度40mg/kg<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表IO总矿物质浓度100mg/kgN。，菌名ABcDEFG1KMT27Oo2KMT313KMT40o4KMT44o5KMT456KMT467KMT478KMT50OO9NY110NY811NYll12NY31oooo132669514HPK515HPKT5101611637表ll总矿物质浓度l,200mg/kgNo.菌名ABcDEF1KMT27〇Oooooo2KMT31oooo3KMT40oooo4KMT44Ooooo5KMT45Ooooooo6KMT46oo07KMT47Ooooo8腿TSOOo0o09腿oo10NY8oo11NYll12NY31oo0o1326舰14HPK5oooo15HPKT510Oo1611637Ooo表12<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表13<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表14总矿物质浓度5,900rag/kgN。.菌名ABcDEF1KMT27Oo0oooo2KMT31〇oooooo3KMT40Oo0oooo4KMT44Oo0oooo5KMT45Oo0oooo6KMT46〇o0oooo7KMT47Oo0oooo8KMT50Ooooooo9NY1Oo0oooo10NY8Oo0o0oo11NY11ooooooo12NY31oo0oooo132669goooo〇oo14HPK5ooooooo15HPKT510oo0oooo1611637oo0oooo表15总矿物质浓度ll，800mg/ksN。.菌名ABcDEFG1KMT27Ooooooo2KMT31Ooooooo3KMT40Ooooooo4KMT44Ooooooo5KMT45O〇ooooo6KMT46Ooooooo7KMT47O〇o〇〇oo8KMTSOOoooooo9NY1ooooooo10NY8ooooooo11NY11ooooooo12NY31ooooo〇o1326695ooooooo14HPK5ooooooo15HPKT510ooooooo1611637o00ooo0随着由海洋深层水调整的高矿物质水的总矿物质浓度升高，可抑制增殖的菌株种类明显增多，总矿物质浓度上升到5900mg/kg时，对于所有的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)菌株均具有增殖抑制效果。且镁浓度高时，菌株的增殖抑制效果就更为显著。权利要求1.方法，其通过矿物质含有物抑制幽门螺杆菌菌株的增殖·运动。2.权利要求1中所述的抑制幽门螺杆菌菌株增殖，运动的方法，其特征在于，每1Kg中的矿物质含量为405，900mg。3.权利要求1或2中所述的抑制幽门螺杆菌菌株增殖运动的方法，其特征在于，至少含有镁、钙、钠、钾中的l种以上。4.权利要求13中任一项所述的抑制幽门螺杆菌菌株增殖运动的方法，其特征在于，矿物质含有物是液体。5.权利要求14中任一项所述的抑制幽门螺杆菌菌株增殖运动的方法，其特征在于，矿物质含有物来自海洋深层水。6.饮食品，其特征在于，其是权利要求15中任一项所述的抑制幽门螺杆菌菌株增殖运动的饮食品。全文摘要已知幽门螺杆菌菌株是宿主人固有的在胃内感染·定植、与上消化道疾病等有关的菌，本发明提供抑制幽门螺杆菌菌株增殖·运动的更经济的方法及利用该方法的饮食品。具体地说，通过轻松摄取从由海洋深层水获得的高矿物质水中选择的、抑制宿主固有的在胃内感染·定植的幽门螺杆菌菌株增殖及运动的高矿物质水，从而不必担心以往使用的为除菌而投给药剂时所引起的抗性菌的出现和副作用，并可预防、治疗上消化道疾病等。文档编号A61K35/02GK101272797SQ200680035330公开日2008年9月24日申请日期2006年9月25日优先权日2005年9月26日发明者中川光司,安川岳志,池上良成,竹内启晃申请人:赤穗化成株式会社;国立大学法人高知大学