控制病原体的产品的制作方法

专利名称：：控制病原体的产品的制作方法控制病原体的产品本发明涉及用于控制病原性疾病和对抗可能或易于引起感染的致病菌存在的制剂和其他产品。在病原性生物中，分为细菌、真菌和病毒。需要继续寻求能够控制游离状态(即，可能存在于环境或外界中)和病原性生物侵入宿主体内导致与特定生物体相关的疾病症状的感染状态的病原性生物的抗感染剂和消毒剂。一般地，许多起因于病原性生物的疾病状态使用抗生素治疗，抗生素是已被发现并商品化以用于治疗这种感染的典型药物。在医院病房、或诊所、手术室、诊疗室或类似环境中，商业可获得的消毒剂用作预防措施来控制和特别是杀灭或除害病原体，例如可能存在于例如地板、墙壁、盆、门等表面的细菌。有许多往往是基于卣代/芳香烃的可广泛获得的消毒剂。其他化学类型也是已知的。商业可获得的消毒剂也用于家庭和办公室环境，例如医务工作者的家庭和/或办公室中。需要为医院内或与医院相关的环境提供感染控制系统。但是，目前存在对抗生素耐药致病菌株的出现的关注，例如MRSA(甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌)；VRE(万古霉素耐药肠球菌)；耐克拉霉素幽门螺旋杆菌，甲硝唑仅指出少数几种。由于这种获得性耐药性使得用常规的抗生素治疗抗生素耐药细菌是有问题的。相应地需要提供不依赖于目前或已发现的抗生素药物的替代的治疗和预防方案。也存在对与芳香卣代消毒剂相关的健康的关注，同样需要研发替代的不依赖于闺代芳香组分的消毒剂和抗感染剂。在我们以前出版的WO01/15554申请中已经建议大量含有金属离子的组合物在治疗病原性生物中是有益的。我们现已惊奇地发现在我们所述的早期出版物中公开的组合物的选择在抗特异病原性生物中是有用的，其中病原性生物是抗生素耐药的或难于治疗或控制，和/或可以存在于医院、诊疗室、诊所和手术室、家庭和环境中在治疗方案下对活的人体细胞没有显著危害或有害作用的。我们也已发现这种有益合物中。我们也已惊奇地发现基质可以浸渍本文描述的组合物来荻得令人惊奇地有效和长效抗菌特性，例如，我们已经发现目前商业可获得的用于清洁医院表面的微纤维和/或超微纤维布料可以浸渍本文描述的组合物并用作强效广谱抗菌和/或抗真菌消毒剂辅助物。我们也已发现这种微纤维布料可以洗涤、再浸渍和再使用很多次，具有显著的经济利益。我们也已意外地发现本文描述的含有离子修饰的铜的组合物可以同时有效地对抗多种不同病原体，并提供对抗这些多种不同病原性生物感染和再感染的保护。本文描述的组合物可以局部应用于患有感染的病人，例如局部应用于患者的皮肤来预防或治疗MRSA和/或VRE。我们进一步研发了一种感染控制系统，其基于通过优选的微流体测定法检测在表面或大气环境内存在的至少一种病原性生物，检测的结果显示或其他表现，通过将一种或多种本文描述的类型的组合物应用于表面或大气环境处理检测的致病菌，重复检测步骤并重复显示步骤。这一过程的步骤可以组成实质的感染控制系统。组合物可以以喷雾、细雾或"雾"使用或应用来对抗致病菌。在这种应用中用作消毒试剂的组合物分散于小水滴上，其随后用作细雾或雾来覆盖暴露的和/或隐藏的表面，并进入建筑内部的裂缝和缝隙。一旦处于表面，络合铜离子的消毒特性是有效的并在相当长时间内保持有效。可以使用不同的喷雾设置，小水滴的大小和应用组合物的浓度各异。表面活性剂可以包含于这些组合物中用作此目的。本发明也包含掺有本发明含铜组合物的清洁剂组合物。特别地，当用于洗涤医务工作者或其他与患有感染的病人接触的人穿着的衣服时，这种清洁剂会变成消毒的并能够控制致病菌，例如细菌和耐药的细菌。类似地这种消毒清洁剂可以用于洗涤患有感染的病人的衣服或床单。根据我们上文提及的专利申请概述的一般过程，方便地制备下文描述的组合物，除了在某些情况下酸的添加限于获得在较低范围起始的电解电势外，例如至少高达150毫伏，但某些实施方案低于350mV。其中存在额外的成分，例如，帮助在表面清洁抗感染产品的表面活性剂，这显示于表中。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>在其他具体实施方式中低浓度的铜是需要的，例如80-140g，例如90-130g或大约100-120g硫酸铜，假定其他組分的量相同。这对局部应用和对抗幽门螺旋杆菌感染是有用的。在上表中，组合物作为含铜水溶液，其中在来自溶解的铵试剂的铵离子水溶液的存在下并可能与之结合，铜作为溶解的金属离子存在，并且组合物显示明显的至少150mV的电解电势，虽然在某些优选具体实施方式大于300mV,例如至少350mV。我们已经惊奇地发现，当在低于100ppm的浓度下，例如50ppm应用于这些大肠杆菌细胞的培养物时，前述组合物可以高效对抗例如大肠杆菌顽固菌林的难以治疗的菌林，同时对至少两种不同的例如HT-29和U-937人细胞培养物缺乏细胞毒性。但是，在某些具体实施方式中预期高达1000ppm当量铜的浓度。优选组合物中铜当量浓度是大约10-50g/升，优选20-40g/升，更优选25-35g/升，溶剂相是蒸馏(与去离子相比)水。室温下1分钟至12小时、或1分钟至6小时或0.25至3.0小时的时间内，用含有范围0.01-100ppm当量铜的组合物治疗目标病原性生物是优选的。但是，对于喷雾/雾化治疗，由于喷雾剂可以短期内爆发，应用时间可以短些。本发明铜组合物可以在例如0.5-500ppm的当量铜下^f吏用来对抗幽门螺旋杆菌(H.pylori)和特别对抗耐药幽门螺旋杆菌，二者是胃/消化性溃疡的主要诱因。本发明铜组合物特别可治疗的耐药林是耐克拉霉素幽门螺旋杆菌、耐甲硝唑幽门螺旋杆菌和(虽然罕见)耐阿莫西林幽门螺旋杆菌。本发明铜组合物可以配制成可以应用于皮肤和粘膜表面的局部制剂例如乳剂、凝胶剂和喷雾溶液、浸渍敷料和灌洗溶液。本发明的铜组合物可以用于浸渍用于清洁表面以消毒该表面的吸收性基质。优选的基质是从JohnsonDiversity,Inc获得的称为微纤维和/或超微纤维(UMF)布料。如上文预示的，这种浸渍微纤维布料可以洗涤和再使用许多次。浸渍的这种布料提供了一种控制细菌生长和/或发展的简便方式，例如抑制细菌生长和/或发展，例如抑制细菌生长和/或复制或至少抑制这种细菌的细菌活性。同时本发明的范围广泛至足以包含浸渍的微纤维基质与任何抗微生物剂的组合，本发明也包括用得自上表或落入本发明范围内含铜組合物的铜組合物浸渍的微纤维基质的特定具体实施方案。将本发明基于铜的金属离子杀虫剂混合到例如微纤维或超微纤维布料的基质的一个优点是其可以预防表面的交叉污染，这是没有它时真正的危险。特别地这种浸溃微纤维布料可以用于消毒表面(例如，在医院、诊疗室、诊所、手术室)来对抗难以治疗的医院感染MRSA(野生株)、ACCB(野生林)、VRE(野生林)、C.diff(孢子悬液)、本文随后定义的LPn(军团杆菌属)和沙门氏菌。本发明组合物和浸渍其的基质能够提供非常实质的和显著的细菌活性的抑制，即能够妨碍并籍此控制用常规的抗生素和/或常规的消毒方案迄今难以处理的这种医院致病菌的生长、发展和/或复制。这种细菌致病活性的抑制可以令人惊讶地实现，而对周围普遍的人细胞没有显著的并发的细胞毒性。在本文附带的权利要求中限定本发明。为了说明本发明，使本发明更容易理解并易于被本领域技术人员实施，其具体实施方式现在只是以非限制实施例的方式给出，并参考附图进行描述，其中图1是在组合物20ppm当量铜下的MRSA时间-杀菌曲线，单独的铜盐和组合物剩余组分(本文俗语称为'粘合剂，)作为对照，图2是与图1相似的MRSA时间-杀菌曲线，但是在150ppm当量铜下，图3是在40ppm下与图1相似的ACCB时间-杀菌曲线，图4是在150ppm下与图3相似的ACCB时间-杀菌曲线，图5显示使用标准EN12054实验方法配制的含有CuAL42[A]和PurelTM[困]手部凝胶的X-凝胶水性介质对MRSA细菌存活的抗菌作用，图6与图5相似的视图，但显示使用相同制剂对ACCB存活的作用，图7是与图5和6相似的视图，但显示使用相同制剂对C.diff(芽胞)存活的作用，图8A-8D是表示三种铜制剂和单独的硫酸铜[口]对人小肠上皮HT-29细胞的细胞毒性作用的图，图9A-9D是与图8A-8D相似的图，但显示三种铜制剂与单独的石克酸铜[口]相比对人单核淋巴瘤U937细胞的细胞毒性作用的图，图10-14是显示与幽门螺旋杆菌实施例12相关的举例的铜制剂作用的图，其中AL用作CuAL42的缩写，PC用作CuPC33的缩写，浓度以ppm给出，其中Q表示对照，图15显示使用举例的编码CuAL42的铜制剂获得的和与糖尿病足溃疡相关的8种细菌微生物的抑菌带，图16显示与图15中相似的抑菌带，但使用编码CuWB50的铜抗菌组合物，图17-19是代表三种铜组合物在低剂量(lppm)下对抗许多难以处理和/或抗生素耐药细菌的时间-杀菌曲线的图表，图20显示与实施例13相关的手部凝胶残留物的抗MRSA活性，其中根据本发明(X-凝胶)的凝胶类型水性介质与商业可获得产品比较，图21显示通过三种配制的铜抗细菌組合物浸渍的与实施例14相关的MRSA-污染的UMF(超微纤维)布料的消毒作用，以及图22是手部凝胶对A431人皮肤细胞系的细胞毒性与其它在实施例15中说明的相关产品的对比。实施例1介绍根据本文表l的实施方案l-8获得的编码CuAL42、CuPC33和CuWB50的三种铜金属离子制剂用于测试对抗下列目标生物的活性曱氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA);醋酸钙-鲍曼不动杆菌(ACCB);肠球菌(万古霉素耐药；VRE);艰难梭菌芽胞；嗜肺性军团病杆菌。在用蒸馏水稀释前，三种金属离子制剂母液中当量元素铜的浓度是30.43g/升。三种铜制剂母液实质上各自用去离子水稀释，随后在当量元素铜百万分之0.25、0.5和1.0(ppm)的最终稀释后的浓度下测试对抗对数生长期的微生物。相同的组合物在lppm下也测试了对抗稳定期的微生物。缩写ACCB，醋酸钩-鲍曼不动杆菌；MRSA，甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌；PBS，磷酸盐緩冲盐水；VRE，肠球菌(万古霉素耐药)。材料和方法血琼脂、营养肉汤和BYCE培养基由OxoidLtd(UK)购得。MRSA、ACCB和VRE在血琼脂上纯培养物中生长，单一菌落转移至营养肉汤并在37匸振摇6小时培养。然后离心6小时的肉汤培养物(对数期细胞)使细胞沉淀，丢弃肉汤并洗涤细菌细胞，使用pH7.2的磷酸盐緩冲盐水(PBS)离心三次。在PBS中制备最终的混悬液，活细胞计数调节至试验需要的接种量U.5xl08)。这些细胞随后接触最终浓度为0.25、0.5和1.0ppm的本发明举例的铜制剂。在15、30、60和120分钟从这些培养物中取样，通过Miles和Misra技术测定活菌数。在15和120分钟制备PBS样品对照培养物以确保接种物的活性和稳定性。使用从24小时琼脂平板培养物获取的稳定期细胞在1.Oppm重复上述实施例，在初期的PBS洗涤后将其直接混悬于PBS中，接种物调节至1.5xl()8细胞/ml。通过混悬在血琼脂上50:50乙醇生理盐水中厌氧培养的5天的微生物培养物制备艰难梭菌孢子悬液。随后对该混悬液进行Miles和Misra计数以测定活的芽胞的最终浓度，接种物最终调节至5xl(T芽胞/ml用于试验。由PBS中BCYE培养基上5天的培养物制备嗜肺性军团病杆菌的混悬液，使用活菌计数调节混悬液至5xl(T细胞/ml。使用营养肉汤中6小时的培养物作为刺激接种物测试所有三种铜制剂对抗MRSA、ACCB和VRE。结果所有三种铜制剂-CuAL42(表A)、CuPC"(表2)和C11WB50(表3)以剂量依赖性方式减少细菌数目。在lppm浓度下，所有3种铜制剂得到MRSA、ACCB和VRE的大约3对数抑制。CuAL42和CuPC33产生对艰难梭菌芽胞的2对数抑制，同时CuWB50产生对艰难梭菌芽胞的3对数抑制。CuAL42和CuWB50产生对嗜肺性军团病杆菌的2对数抑制，CuPC33产生大约3对数抑制。如表4所示，当使用MRSA、ACCB和VRE时3种铜制剂对对数生长期和稳定期细胞的抑制作用是相似的。在其他试验中细菌在PBS中生长并观察到显著的杀菌作用。如表5所示，当在营养肉汤中生长时MRSA、ACCB和VRE对杀菌作用较不敏感，表明蛋白质或其他组分抑制铜制剂的活性。由于在获得细菌生长上的技术困难没有对艰难梭菌和嗜肺性军团病杆菌进行测试。讨论这里显示的结果显示在直到lppm的浓度下所有3种铜制剂对致病菌是高度杀菌的。但是当细菌在营养肉汤中生长时这种活性多少会被中和，表明肉汤的蛋白质或其它组分降低铜制剂的功效。有趣地是，铜制剂对抗生长的细菌和稳定期的细菌是非常有效的，表明对细菌细胞的细胞毒性作用而非只是抑制作用。我们已经显示了在0.lppm的CuAL42存在下生长10天的MRSA在接触lppm的CuAL42时100%地被杀灭。表ACuAL42时间-杀菌曲线(硫酸铜/疏酸铵/疏酸)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>(d)肠球菌(万古霉素耐药，野生林)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表2CuWB50时间-杀菌曲线(硫酸铜/氯化铵/盐酸))MRSA(野生抹)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>)不动杆菌(野生林)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>)艰难梭菌孢子悬液<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>(C)艰难梭菌孢子悬液<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(d)肠球菌(万古霉素耐药，野生林)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(e)嗜肺性军团病杆菌NCTC<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表43种铜制剂(lppm)对稳定期细菌的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>初始接种量-lQSCFU/ml实施例2介绍根据本文表1的实施例1-8获得的相同的三种金属离子(铜)制剂编码的CuAL42、CuPC33和CuWB50，当吸收至超微纤维(UMF)布料并随后用于消除来自普通环境的医院表面(层状的操作台表面)的高水平的活细菌接种物(MRSA、ACCB或Cdiff),用于研究其杀菌性质。缩写ACCB，醋酸钙-鲍曼不动杆菌；Cdiff，艰难梭菌(芽胞)；MRSA,甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌；PBS,磷酸盐緩冲盐水；ppm，百万分率；UMF，超孩吏纤维布料。材料和方法用于研究的MRSA、ACCB和Cdiff(芽胞)生物是临床分离菌。层状表面接种100ju1含有2xl()6菌落形成单位(cfu)的MRSA或ACCB或3xl()5芽胞/ral的Cdiff的磷酸盐緩冲盐水(PBS)，使用无菌平的涂布器涂布超过100cm2的区域并允许千燥。干燥后区域接触涂板以确保接种物的活力。然后用蒸馏水(对照)或最终浓度为75ppm的各个铜制剂湿润至推荐的湿度限度的UMF清洁该区域。随后区域再次接触涂板来评价UMF消除的接种物。然后UMF装于迷你手提袋中置于室温下16小时以模拟去洗衣房或病房中的静态储存。16小时后UMF置于100mlPBS中并在Stomacher(匀浆器,SewardLtd,UK)中250rpm下搅拌3分钟。对洗脱剂进行活菌计数，10ml的洗脱剂在3500rpm下离心10分钟，沉积物在血琼脂上培养。对任何环境污染测试板的本底计数和PBS计数。显示的结果是三次单独测定的平均值。结果如表6所示，接触涂板显示UMF非常有效地消除大量的活的接种物。但是，在铜制剂不存在时细菌在UMF布料上保持活力。所有三种铜制剂杀灭100。/D的不动杆菌和艰难梭菌芽胞并产生对MRSA的4对数杀灭。UMF-Cu制剂浸渍的布料的匀浆器洗脱剂中没有可回收的不动杆菌或艰难梭菌细菌。讨论这些研究调查了含和不含基于铜的抗细菌制剂的超微纤维布料清洁被污染的表面的能力。同时UMF布料显示对从表面清除细菌是非常有效的，细菌在布料上保持活力至少16小时。当UMF布料用3种基于铜的制剂的任意一种预处理时，清洁效力不变，但在布料上ACCB和Cdiff芽胞的细菌存活完全被防止，MRSA减少4对数级。这些结果表明UMF布料对清洁被污染的表面是非常有效的，但根据本发明的实施例用基于铜的抗细菌制剂对布料的预处理极大地减少了这些致病菌在布料上的存活率，这在医院和家庭是非常有益的。表6含或不舍基于铜的抗细菌制剂的超微纤维布料对被污染的表面的清洁<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>'环境污染物的检查。"PBS的无菌检查。实施例3介绍医院中非常难以消灭的抗生素耐药细菌的存在，例如甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和万古霉素耐药肠球菌(VRE)、艰难梭菌芽胞，是日益严重的问题。这些微生物也可以寄居于护士的制服上，并且这代表了细菌在医院传播以及进入普通环境的一种方式。因此，采用本实施例来测定本文已证实在体外对抗MRSA、不动杆菌、大肠杆菌和艰难梭菌是有效的称为CuWB50(如本文定义的)的基于铜的金属离子制剂与和不与Ariel生物清洁剂在洗涤系统模型中是否具有活性。缩写Cdiff，艰难梭菌；MRSA,曱氧西林耐药金黄色葡萄球菌；ppffl，百万分率；材料和方法在研究中使用的MRSA和Cdiff(芽胞)是临床分离菌。Stomache,400循环器由SewardLtd(UK)购得。1.使用Arie1清洁剂和或不和本文称为CuWB50的铜制剂的实施例的洗涤试验设计。护士制服材料(100cm2)的样品用MRSA或Cdiff芽胞污染并允许在室温下干燥3小时。每个样品添加至含有20ml水的塑料袋中，加入制造商推荐的浓度的Ariel清洁剂和或不和200ppm的CuWB50。每个样品在室温下循环匀浆器中240rpm处理15分钟来才莫拟低温洗涂周期。洗涤后，2ml的洗脱剂与2ml的富含钙的林格溶液混合来中和任何遗留的CuWB50。当菌落在双份板上计数时，中和的洗脱剂(0.lml)随后涂布于血琼脂板上并在37匸下在空气中(MRSA)或无氧条件下(Cdiff芽胞)过夜培养。2.具有CuWB50加至冲洗周期中的洗涤试验设计。护士制服材料(100cm2)的样品用MRSA或Cdiff芽胞污染并允许在室温下干燥3小时。每个样品添加至含有20mL水的塑料袋中，然后在室温下循环匀浆器中240rpm处理15分钟来模拟低温洗涤周期。在只用水洗周期后，用20ml含有200ppmCuWB5Q的水更换水，然后在匀浆器中再次处理5分钟以模拟冲洗周期。2ml的洗脱剂与2ml的富含钙的林格溶液混合来中和任何遗留的CuWB50。当菌落在双份板上计数时，中和的洗脱剂(0.lml)随后涂布于血琼脂板上并在37X:下在空气中(MRSA)或无氧条件下(Cdiff芽胞)过夜培养。结果如表7所示，当护士制服材料样品只用Ariel清洁剂洗涤时，MRSA和C.diff的洗涤后回收量从初始的接种水平减少了2-3对数级。相反，当洗液含有Ariel和200ppm的CuWB50时会有完全的6对数杀灭。当护士制服材料样品只在水中洗涤时，表8所示的每个实例中MRSA和Cdiff的洗涤后回收量只是轻微地减少了小于1对数级。但是，在含有200ppm的CuWB50水中沖洗5分钟后所有残留的微生物都被杀灭，没有观察到菌落。结论我们使用模型洗涤系统和被甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)或艰难梭菌芽胞(Cdiff)污染的护士制服材料样品来评价用Ariel生物清洁剂与和不与CuWB50或将CuWB50加入冲洗周期的洗涤的抗菌作用。结果表明当Ariel减少2-3个对数级的细菌污染时，当加入洗涤或冲洗周期时CuWB50在消除/杀灭细菌中是100%有效的。根据本发明基于铜的金属离子制剂的加入到医院和家庭洗衣中可能是一种消毒衣物的经济有效的方式。表7使用Ariel清洁剂和或不和CuWB50的洗涤实验设计<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>实施例4介绍糖尿病性溃疡代表了难以治疗的严重疾病，特别是感染了厌氧菌或抗生素耐药细菌时。糖尿病足溃疡经常致残以及导致脚趾、脚、甚至是腿的截肢。糖尿病性溃疡的感染通常与一种或多种下列微生物一起发生甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)、绿脓假单胞菌、醋酸钙-鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯杆菌、脆弱拟杆菌、不解糖卟啉单胞菌、大芬戈尔德菌、厌氧消化链球菌[l-3]。本实施例的目的是测定已经证明抗MRSA、不动杆菌、大肠杆菌和艰难梭菌是有效的本文定义的称为CuAL42、CuPC33和CuWB50的三种基于铜的金属离子制剂是否也具有抗上述所列的糖尿病性溃疡-相关的微生物的活性。材料和方法研究中使用的生物体是临床分离菌。表l中使用的菌林的名称和缩写名如下甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)、A醋酸钙-鲍曼不动杆菌(ACCB)、绿脓假单胞菌(Paerug)、肺炎克雷伯杆菌(Kpneum)、脆弱拟杆菌(Bfragilis)、不解糖卟啉单胞菌(Pasacch)、大芬戈尔德菌(Fmagna)、厌氧消化链球菌(Panaerob)。0.5ml的MacFarland标准混悬液由每种在緩冲生理盐水中这些生物体制备。拭子浸蘸细菌混悬液并随后使用旋转板涂于血琼脂上以在琼脂板上培育细菌菌苔。含有不同浓度的CuAL42、CuPC33和CuWB50(以每纸盘元素铜的Mg数计算)纸盘置于琼脂表面，板在DonWhitleyAnaerobic工作站中37'C下无氧培养24小时(厌氧菌)或37X:下空气中培养24小时(需氧菌)。使用电子测径器测量抑菌圏并记录。表9所示的结果是平行测定的。结果如表9和图15和16所示，所有三种铜制剂在超过100jLig元素铜的浓度下对抗所有8种微生物始终是非常有效的。观察到某些细菌对3种不同制剂敏感性的一些轻度变异，例如，在50mg下醋酸钾-鲍曼不动杆菌对CuAL42和CuPC33比对CuWB50更敏感，在50jag下肺炎克雷伯菌只对CuAL42敏感。MRSA、Bfragilis和不解糖卟啉单胞菌在测试的最低浓度10yg下对所有3种铜制剂是敏感的。讨论很明显纸盘上所有3种铜制剂超过100|ig元素铜的浓度对所有8种生物体产生显著的抑菌圏。这些结果与在营养肉汤存在下需要至少75jag的铜制剂抑制细菌的使用试管稀释试验的研究一致，也与使用超微纤维75jjg的铜制剂完全杀灭在储存的布料上的细菌的研究一致。如这些纸盘试验中宽的抑菌圏显示的，通常在糖尿病病人感染性溃疡中发现的需氧菌和厌氧菌都对100jig或更高水平的铜敏感。在不同的铜制剂和某些生物的活性上有一些差异，但这些差异并不大。结果表明，由于其杀灭导致糖尿病性溃疡持续和传播的细菌的能力和加速皮肤愈合过程的能力，含有一种或多种例举的铜制剂的洗剂、肥皂和凝胶在治疗糖尿病性溃疡中是有用的。表9三种铜金属离子制剂和8种与糖尿病性溃疡有关的微生物获得的抑菌圏储舰歸1ACCBPaerugKpne咖BfragilisPasacchFmagnaPanaerobL柳對的直径(咖)CuAL421010.3900011.322.43005010.627.957.078.6920.9830.5515.349.8110010,8310.808.629.3825.1734.2618.3015.3520011.1213.4712.5011,2426.3739.1122.3417.6530012.3315,5115.0613.5529.1842.4624.1623.74CuPC33109.8000012.9118.307.205010.007.777.58018.1022.2914.8911.9810012.2810.059.497.8924.8930.6619.2115.8020013.4312.0512.429.9825.9140.9623.1020.0030023.61R5213.9913.7027.2842.6425.1126.44謹501013.1400011.3515.57005022.6906.83019.6620.7412,7210.9110023.598.567.377.7123.9329.5416.7615.3620023.1910.379.538.8425.8835.1225,1118.6530025.8214.2111.2911,0528.8039.5228.0322.13i缩写显示于材料和方法中。实施例5介绍目前少有证据证实HSG(95)18中给出的推荐的洗衣时间/温度关系对在医院内感染中特别关注的生物体是有效的。进一步，这些洗衣条件少有科学支持。因此，采用本实施例来定义在冷洗涤条件下导致受污染的亚麻制品减少的条件。冷洗循环被认为是抗菌铜制剂最苛刻的测试。另外，看起来可能日益增加的高能量花费导致在工业和家庭洗涤中较低洗涤温度的使用，特別是如果能够研发出足够容易应用和经济的并对织物也很"柔和，，的抗菌产品。本研究描述了使用被标记微生物污染的织物的洗涤去污染作用的研究。试验材料是在Electrolux洗衣机中使用低温(18")洗涤的称为CuWB50的金属离子(铜)制剂和两种商业可获得的洗涤清洁剂(指定为A和P)。缩写ACCB,不动杆菌；BSA，牛血清白蛋白；cfu，菌落形成单位；MRSA，耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌；PBS，磷酸盐緩冲液。方法和材料典型的医院材质制服织物的商业可获得的样品由CarringtonCareer&WorkwearLtd(UK)提供。才羊品纟且合物是67%的聚脂/33%的195g/m'重的棉混纺织物。新的Claris控制系统升级的商业洗衣机购自Electrolux。ClarisClaris系统也提供记录每个洗涤周期指标的电子数据输出。Stomache^400循环器购自SewardLtd(UK)。洗涤清洁剂A和P购自当地超市。牛血清白蛋白(BSA)购自Sigma-Aldrich。所有孩吏生物试剂和琼脂板购自OxoidLtd(UK)。PBS和BSA购自Sigma,在体积为2ml含有7。/。BSA的PBS中样品各自用2乂108细菌接种量的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)或多重耐药不动杆菌(ACCB)的临床分离菌污染。在洗涤研究使用之前，在室温下干燥样品。样品附着于压载亚麻织物得到每个冷水洗涤最终重量为5kg以模拟15升水中15分钟标准洗涤时间的正常洗涤。使用两种细菌林评价6种洗涤条件1.水单独；2.水+清洁剂A;3.水+清洁剂P;4.水+CuWB50;5.水+清洁剂A+CuWB50;6.水+清洁剂P+CuWB50。C11WB50的浓度是100ppm，使用单一gelule的清洁剂A(50ml)或清洁剂P(25g)，除非另有说明。在每个洗涤的最后收集1升洗衣机洗后的水，100ml离心，细菌片状沉淀物用于检查菌落形成单位数(cfu)。以cfu计进行细菌污染的实际测定的洗过的污染的样品(n-3)、对照未污染的(清洁的)样品(n-2;用于评价在洗涤中细菌从污染的样品的转移)、和污染的、未洗涤的样品(与初始接种量相反，因此在干燥期间控制生物体活力的损失)，各自置于含有20ml的PBS的塑料袋中并在室温下于均浆器中振摇15分钟。得到的均浆细菌混悬液的10倍稀释液和洗衣机洗过的水涂板于双份的琼脂板上，在37X:下24小时培养阶段后对cfu计数。结果在下列各表中结果显示的是(i)对照污染的样品-以cfu计初始细菌接种量，(ii)洗过的污染的样品-洗涤后在污染的样品上残留的细菌的cfu,(iii)洗涤后洗衣机洗脱液-在15分钟洗涤周期结束时洗衣水中游离细菌的cfu数，和(iv)洗涤后清洁的样品-洗涤后未污染的样品上细菌的cfu(表示洗涤期间细菌的转移)。表IO中的结果表明冷水洗涤引起污染样品上cfu数目的适度的减少-ACCB减少2个对数级和MRSA减少4个对数级。洗涤后机器洗脱液中ACCB和MRSA的cfu对两种细菌是相似的，并且转移到清洁的样品上的细菌cfu比洗涤后残留在污染的样品上的cfu水平低大约2个对数级。这些结果表明只用冷水的15分钟的洗涤周期可以使污染样品上的部分细菌进入水中，在洗涤循环中这些游离细菌中的一些可以附着在清洁的样品上。表ll中的结果表明使用任一清洁剂的冷水洗涤引起污染样品上不动杆菌cfu数目的适度地减少-比使用清洁剂A减少的2个对数级略大，比清洁剂P减少的2个对数级略小。清洁剂A洗涤后机器洗脱液中ACCB的cfu比清洁剂P略大，虽然在实施例中清洁剂A的初始接种量也略高。转移到清洁的样品的细菌cfu比洗涤后残留在污染的样品上的cfu水平低大约2个对数级。这些结果表明用冷水和清洁剂的15分钟的洗涤周期可以使污染样品上的部分不动杆菌进入水中，在洗涤循环中这些游离细菌中的一些可以附着在清洁的样品上。但是，该结果与表10所示的只用水的结果不是非常不同的，表明这些清洁剂对不动杆菌没有抗菌活性。表12中的结果显示使用两种清洁剂的冷水洗涤引起污染样品上MRSA的cfu实质上5-6个对数减少，表明两种清洁剂对MRSA都具有强的抗菌作用。洗涤后机器洗脱液中和转移到清洁的样品上的MRSA的cfu水平非常低，这支持了清洁剂对MRSA具有强的抗菌作用的观点。这些结果表明两种清洁剂对MRSA具有强的抗菌作用，未见对不动杆菌的作用(表ll)。表13中的结果显示只用CuWB50的冷水洗涤在广泛的浓度范围内在降低细菌污染上是高效的。不动杆菌对CuWB50更敏感并且在100和15ppm浓度下被完全杀灭。在l-10ppm的CuWB50浓度下仍具有相当的抗菌作用，不动杆菌的cfu减少3-5个对数。在几乎所有的CuWB50浓度下，不动杆菌不能在机器洗脱液中存活或转移至清洁的样品上。CuWB50对MRSA也是有效的，在l-100ppm的浓度下引起4-5个对数级杀灭。与不动杆菌一样，在CuWB50任何的浓度下在机器洗脱液或清洁的样品上几乎检测不到MRSA。这些结果表明两种细菌林都对CuWB50高度敏感，不动杆菌比MRSA稍微更敏感。表14中的结果清楚地显示100ppm的CuWB50与清洁剂A或P组合导致不动杆菌和MRSA的完全杀灭，在洗涤后的样品中没有可检测到的cfu。表ll的结果表明任一清洁剂单独对不动杆菌几乎没有杀菌作用(2个对数级杀灭)，同时表13的结果表明100ppm的CuWB50完全杀灭不动杆菌，这解释了上述结果。表12的结果表明两种清洁剂单独对MRSA都是十分有效的，产生5个对数级杀灭，表13中的结果表明CuWB50对MRSA也十分有效(5个对数级杀灭)。因此，上述结果表明CuWB50对清洁剂的附加作用导致MRSA的完全杀灭。表15所示的结果证实了表14的结果，表明与清洁剂A组合的100ppm的CuWB50在冷洗涤条件下完全杀灭不动杆菌和MRSA。进一步地，表15的结果表明清洁剂A和在降至低达5ppm的浓度下的CuWB50对杀灭两种细菌是非常有效的。MRSA也会被清洁剂A加2ppm的CuWB50完全杀灭，同时不动杆菌对这个浓度较不敏感，只有2个对数级杀灭。这些结果表明5ppm和更高的浓度的CuWB50与清洁剂A组合形成有效的抗菌制剂组合，甚至是在低洗涤温度下使用。讨论^使用工业Electrolux洗衣才;L评价杀灭生物的铜化合物，CuWB50，与和不与2种商业洗涤清洁剂对MRSA-或不动杆菌污染的护士制服织物样品冷水洗涤的作用。单用冷水洗涤引起污染样品上MRSA和ACCB的cfu的2-3个对数级减少(表10),但在机器洗涤后洗脱液和无菌样品上检测到释放的细菌。单独使用的两种商业清洁剂从污染的样品上清除MRSA(cfu减少5-6个对数级；表12)比ACCB(cfu减少1-2个对数级；表11)更有效。在两种情况中，在机器洗涤后洗脱液中和无菌样品上检测到活的细菌，但在MRSA中回收的细菌数减少了，表明清洁剂对这个细菌林中等的抗菌作用。如表13所示，在IOO和15ppm下CuWB50单独完全杀灭ACCB并在低达lppm的浓度下减少3-4个对数级的cfu。在l-100ppm下CuWB50单独减少4-5个对数级的MRSAcfu。在两种情况中，在机器洗涤后洗脱液中和无菌样品上回收的细菌数目实质上减少，表明在冷水洗涤中甚至在低浓度下CuWB50单独的抗菌作用。在机器洗涤后洗脱液中和无菌样品上，100ppm的CuWB50与任一清洁剂組合导致污染的样品上ACCB和MRSA10(^的杀灭(表14)。由于100ppm的CuWB50单独对抗MRSA不是完全有效的(表13)以及两种清洁剂显示其杀灭MRSA能力的一些差异性(表l2)，很明显存在两种产品一起导致完全杀毒作用的附加作用。ACCB对两种清洁剂单独都相对耐药(表ll)，但对CuWB50非常敏感(表13)，CuWBSO与任一清洁剂的组合导致ACCB的完全杀灭。事实上，CuWB50和清洁剂A的组合在C11WB50的所有浓度(2-100ppm)下抗MRSA和CuWB50的5-100卯m浓度下抗ACCB是非常有效的。在所有情况中，在机器洗涤后洗脱液中或无菌样品上没有回收到活的细菌。总之，这些结果表明单独用清洁剂冷水洗涤护士制服不可能有效地消除所有的细菌污染。添加5-10ppm的CuWBSO和任一清洁剂使用冷水洗涤造成MRSA-和ACCB-污染的样品和才;L器洗涤后洗脱液和无菌样品的完全杀菌。通过向15升洗液加入5ml配制的组合物母液制得10ppm浓度的CuWB50并考虑这些试验中使用的样品中细菌污染的高水平(大约108cfu)，这些结果表明机器洗液中加入CuWB50和普通量的商品洗涤清洁剂能有助于显著减少所有医院洗衣房的细菌污染。虽然没有测试C.difficile芽胞，我们此处的结杲表明C.difficile芽胞也可以通过CuWB50/清洁剂组合被有效地杀灭。表IO单独冷水洗涤从污染样品消除不动杆菌(ACCB)和MRSA的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>NT-没有测试表11使用清洁剂A或P的冷水洗涤从污染样品消除不动杆菌的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表12使用清洁剂A或P的冷水洗涤从污染样品消除MRSA的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>表14使用C11WB50(lOOppm)和2种清洁剂(A和P)的冷水洗涤从污染样品消除不动杆菌(ACCB)和MRSA的效果C<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>实施例7介绍在医院卫生学中一个重要的因素是手部的清洁。PurellTM(GojoIndustriesInc，USA)是目前在英国医院中广泛为护理人员使用的基于醇的手部凝胶。本文已经显示铜金属离子组合物CuAL42对5种普通致病菌林具有有效的杀灭活性。因此，基于芦荟的无醇手部凝胶和含有314ppm的CuAL42称为Xgel已被制备并在本实施例中与Purell进行比较。使用的试验设计基于EN(欧洲标准)12054(1997)，其为试验产品必须在60秒内产生4个对数级杀灭以获得需要的标准的标准化过程。缩写ACCB，不动杆菌；BSA，牛血清白蛋白；cfu,菌落形成单位；MRSA,耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌；PBS，磷酸盐緩冲液；结果如图5-7所示，就MRSA和ACCB分别而言，Purel^和Xgel在60秒内都取得需要的4个对数杀灭。但是，在两种情况下Xgel比Purell更相当有效，因为Xgel杀灭100°/。的两种菌林。就艰难梭菌芽胞而言，Purell是无效的，而同时Xgel在60秒内几乎取得(3000-倍杀灭)需要的4个对数级杀灭。材料和方法遵循标准EN12054(1997)试验设计。简要地，9ml的试验手部凝胶接种lml的细菌混悬液并混合。然后在30和60秒时取1毫升等份样品并与9ml的林格溶液混合5分钟。当对CFU计数时，取一部分涂布于琼脂板上并过夜培养。讨论在医院卫生学中手部清洁是非常重要的，因为细菌或其芽胞可以很容易地通过手部接触在医院传播。Purel1是目前在英国医院中广泛为卫生工作者使用的基于醇的手部凝胶。本研究的结果清楚地显示Xgel，含314ppm的CuAL42的基于芦荟的手部凝胶，对抗3种重要的致病菌-MRSA、不动杆菌和艰难梭菌芽胞-比PurelTM相当更有效。在这方面，注意到艰难梭菌变成比MRSA对病人的健康更大的威胁是重要的，现在更多的病人正死于艰难梭菌感染而非M亂Purell,像所有基于醇的手部凝胶，已知反复、延长使用会引起皮肤干燥和开裂。相反，作为不含醇并具有芦荟基质的Xgel对手更加温和。进一步地，我们初步的研究表明当醇蒸发后PurelTM留下的残留物仍可以支持MRSA和不动杆菌的生长至少3个小时，而Xgel残留物丝毫不会容许细菌存活。实施例8MRSA和不动杆菌(ACCB)抗铜组合物编码的CuAL42、CuPC33和CuWB50，它们的粘合剂组分和硫酸铜溶液的时间-杀菌曲线(TK)的报告介绍我们已经指出(参见图17-19)低浓度的这些铜制剂(CuAL42、CuP。3和CuWB50)在lppm时在2小时内获得3-4个对数级杀灭。我们在最小杀菌浓度(MBC)下使用RPMI-1460介质通过MIC/MBC试管法进行了一系列的时间杀菌试验并且在15Oppm下(如实验环境清洁情形中使用的)也进行了试验。MIC/MBC测定每个化合物、相关的粘合剂和硫酸铜的MIC/MBC是通过在RPMI-1460介质中(Sigma)制备从100ppm到下至lppm的最终浓度并随后每试管接种2xl()5接种量的细菌测定的。所有试管37C下过夜培养，MIC作为显示无生长的第一个试管，从lppm往上读数。通过次培养所有不显示生长的试管至血琼脂，37r过夜培养，读数任何存活的菌落的生长测定MBC。MBC被作为第一个显示血琼脂上无生长的试管(从最低浓度向上读数)。时间杀菌曲线时间杀菌曲线是4吏用RPMI-1460介质(Sigma)完成的。在组合物、粘合剂和石危酸铜为20ppm和150ppm下对MRSA进行测试(参见图1和2)。在组合物、粘合剂和硫酸铜为"ppm和1S0ppm下对ACCB进行测试(参见图3和4)。每个试验的生长对照组仅由RPMI-1460和测试生物体组成。每个反应试管由10ml包含需要浓度的组合物、粘合剂和硫酸铜的RPMI-1460组成，接种2xl(^的生物体并迅速在37t:培养。在0、15、30、60、120、360和960分钟的时间点取样，活菌计数三次，使用四分之一浓度的林格溶液作为稀释剂和中和剂，接种于血琼脂上37匸过夜培养。对菌落计数，存活数以菌落形成单位表示。菌落计数的对数值对每个时间点作图，生成每个生物体在各个化合物、粘合剂和硫酸铜的每个浓度下的TK曲线。生长对照曲线绘制于各自曲线系列上以比较生长率。本文俗称的术语粘合剂用于包含除铜化合物自身之外的存在于铜组合物中的组分。结果概述MRSA的MIC/MBC测定结果是10/20ppm。ACCB的MIC/MBC测定结果是20/40ppm。时间杀菌曲线抗MRSA:在20ppm下CuAL42和CuWB50在6小时内获得4个对数级杀灭，在6和16小时期间的一些时间获得6个对数级杀灭。CuPC33的对数杀灭分别是3个对数级和6个对数级。在150ppm下CuAL42和CuWB50在60分钟后荻得6个对数级杀灭，CuPC33在120分钟后获得6个对数级杀灭。所有的粘合剂和硫酸铜具有某些活性但细菌恢复。抗ACCB:在40ppm下三种制剂都在6小时后获得4个对数级杀灭，在6和16小时期间获得6个对数级杀灭。在150ppm下三种组合物都在60分钟后获得6个对数级杀灭。所有粘合剂和硫酸铜都几乎没有初始活性但细菌恢复。附图1-4显示在0、15、30、60、120和360分钟和960分钟后(26小时培养)记录的每种组合的生长曲线。实施例9包含基于铜的杀虫剂的无醇手部凝胶的消毒效能通过应用为特定目的制作的手部凝胶的手部消毒对感染控制是必要的。目前大多数手部凝胶包含异丙醇，其赋予凝胶杀虫和快速千燥的特性。醇对手和环境都不友好，并且吸收进入血流。我们配制了4种无醇芦荟手部凝胶，三种包含三种无机杀虫剂之一(CuWB50、CuAL42和CuPC33)，杀虫剂包含300ppm的区域，例如314ppm的有效铜，研究这些凝胶是否能像商业制剂一样有效消毒手部。106CFU或MRSA、或Ecoli，应用于志愿者的手部，然后迅速提取掌/指印。然后四种手部凝胶之一擦于手部，随后在时间间隔取印。与芦荟对照不同，在使用后即刻和之后任何时间没有MRSA可以从含有CuAL42或CuWB50的凝胶中恢复。MRSA可以从CuPC33治疗15分钟的手部恢复。与对照组不同，E.coli在任何时间都不能从含有CuAL42的凝胶处理的手部恢复；对其他两种凝胶生物体的完全消失只在更迟的时间观察到。我们认为含有CuAL42的凝胶快速和有效地从手部消灭活的生物体，并可以提供对含醇凝胶更人性和生态学上可接受的替代。结果显示于图5、6和7中。实施例10CuAL42、CuPC33和CuWB50的安全性组织培养物中对活的人体细胞细胞毒性的研究背景、目标和目的本文的其他实施例已经确定这些组合物具有显著的抗菌活'峻，意外地优于单个组分。本实施例旨在研究CuWB50、CuPC33和CuAL42对细菌病原体的抗菌和毒性特性是否会延伸于哺乳动物(人类)细胞。材料和方法提供三种含铜抗菌溶液-CuPC33、CuAL42和CuWB50，每种含有30.43g/L的铜离子。石危酸铜对照溶液在蒸馏水中制备为相同浓度。两种人类细胞系用于本实施例HT-29,肠道上皮细胞系，和U937,单核细胞淋巴瘤。合适的完全培养基中各种浓度的含铜抗菌溶液或石危酸铜的样品被加入以建立细胞培养物，细胞进一步培养24或48小时。通过显微镜检查后细胞随后被固定并染色以使用磺酰罗丹明(sulforhodamine)(SRB)细胞毒性测定法定量测定细胞毒性，在国立癌症研究院研发和验证。在含有5%或25^胎牛血清(FCS)的培养基中使用HT-29细胞在24和48小时的时间点评价CuPC33(■)、CuAL42(A)、CuWB50(T)和硫酸铜()的细胞毒性百分比。所有试验培养物一式三份。结果显示于图8中。在含有5%或25%胎牛血清(FCS)的培养基中使用U937细胞在24和48小时的时间点评价CuPC33(■)、CuAL42(A)、CuWB50(T)和硫酸铜()的细胞毒性百分比。所有试验培养物一式三份。结果显示于图9中。结果显微镜检查没有发现在l-100卯ffi浓度下含铜离子的抗菌溶液或硫酸铜对用5°/。或25%FCS培养的任一细胞系有明显的毒性作用。但是，在含有25%FCS的培养基中1000卯m的含铜抗菌i^液和石克酸铜引起HT-29细胞聚集，而含5%FCS的培养基中HT-29细胞显示明显的细胞死亡的迹象(粒状细胞质聚集和折射性丧失)。这些作用在24和48小时培养物中是相似的。含有5%或25%FCS的培养基中HT-29生长的同样地好(参见图8说明中的对照光密度值)，增加的血清浓度产生对含铜抗菌溶液的细胞毒性作用的一些保护作用。U937细胞在含有25%FCS的培养基中比在含有5%FCS的培养基中生长地更好(参见图9说明中的对照光密度值)，但显示与HT-29相似的含铜抗菌溶液和石克酸铜的细胞毒性模式。SRB测试结果证实3种含铜金属离子的抗菌溶液的任意一种或石克酸铜高至100ppm的浓度下对HT-29细胞(图8)或U937细胞(图9)没有显著地细胞毒性。lOOOppm的所有三种含铜抗菌溶液对24和48小时的两种细胞系培养物通常都具有80-100%的细胞毒性。增加的血清浓度的适度的保护作用不能通过SRB测定加以区别，这强调了细胞显微镜评价的价值。在含有25%FCS的培养基中硫酸铜对HT-29和U937细胞是相当小的毒性的(图8和9，组C和D)。结论3种含铜抗菌溶液CuPC33、CuAL42、CuWB50和石危酸铜在l-100ppm的浓度下对2种不同的人细胞系没有显著的细胞毒性。在1000ppm的浓度下3种含铜抗菌溶液对2种人细胞系具有非常强的细胞毒性(80-100%)，培养基中更高地FCS水平只能有限地减少该作用。lOOOppm的石充酸铜对2种人细胞系也是非常有毒性的，虽然增加血清浓度实质上减少该毒性并且通过SRB测定可以使其直观化。结果表明，考虑到其对细菌而非哺乳动物(人)细胞的作用，所有三种铜组合物的毒性存在非常大的生物学安全窗口。该结论是基于組合物在l-100ppm的浓度范围内明显的抗菌作用，在此浓度下没有检测到对人细胞系的细胞毒性。实施例11CuAL42、CuWB50和CuPC33减少或消除污染的清洁布料上存在的细菌生物负荷的能力背景、目标和目的最常使用基于湿环的专有技术或更现代(和有效的)的基于孩i纤维的布料使细菌从表面消除。基于超微纤维的布料(UMF)从硬表面消除细菌是特别有效的。这些布料最好与不含清洁剂的水一起使用。在医院环境使用后，这些布料成为一种生物公害，因为它们包含数百万如果不是十亿的活的^t生物，已知至少其中一些至少是医院获得性感染的原因。由于这些布料最好用水浸湿使用，我们研究了CuWB50、CuAL42和CuPC33加入水中是否会减少或消除被布料携带的这些生物体的活力。材料和方法层状表面使用含有合适浓度的MRSA、不动杆菌或艰难梭菌芽胞的緩冲盐水接种，使用无菌平的涂布器涂布于超过100平方厘米面积并允许干燥。该区域接触涂板以确保活的、有生机的致病生物满意的沉淀。该区域随后使用湿润至推荐的湿度范围并且具有最终浓度为75ppm的各个铜組合物的超微纤维布料(IMF)清洁。然后该区域再次接触涂板来评价UMF消除的接种量。UMF随后装于迷你手提袋中，置于室温下16小时模拟去洗衣房。16小时后UMF置于100ml磷酸盐緩冲液中，匀浆器(设计用于从织物和粮食中释放活的生物体的设备)中250rpm搅拌3分钟。洗脱液进行活菌计数，10ml的洗脱液3500rpm下离心IO分钟，沉积物在血琼脂上培养。对任何的环境污染测试板的本底计数和PBS计数。结果显示于下表16中。表16<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>结论接触涂板显示被UMF有效消除的有活力的接种物。所有三种铜组合物在16小时的时间范围内获得对不动杆菌和艰难梭菌芽胞的完全杀灭以及对MRSA的4个对数杀灭(99.99%)。不动杆菌或艰难梭菌UMF-Cu布料的洗脱液的离心沉积物中没有可恢复的细菌。该实施例显示所有三种组合物以75ppm存在时，当与目前被NHS评价和应用的布料清洁技术结合使用时，是非常有效的杀生物剂。同时其他灭菌剂(例如季胺类化合物、囟化物等)在本文中同样有效，可能目前对其消除环境原因的倾向会产生对更安全选择的需要。本文显示的数据支持了这些铜金属离子组合物可能提供这样一种选择的预测。实施例12铜抗菌剂CuAL42和CuPC33对抗H.pylori的效力在这个实施例中使用标准NCCLS方法进行测试，使用菌林NCTCCagA阳性、NCTCCagA阴性和ACTCJ5(基因组序列已知)。临床分离菌是UK1曱硝唑耐药和Bl克拉霉素耐药的。使用1og7cfu/ml的最终接种量(每毫升菌落形成单位数)。在本方法中，每个抗菌产品在0.5、1.0、5.0和12ppm的浓度下的标准杀菌曲线通过在15、30、60和120分钟取样获得。使用的中和剂(neuturaliser)是l/4的林格乳酸盐。至于量化，制备十倍稀释液，IOO微升涂板。板在CampyGen产生的大气中37匸培养5天。结果如附图10-14描述，CuAL42比CuPC33更有效。5ppm的CuAL42在120分钟内减少5-6对数的活菌数。12ppm的CuAL42在30分钟内减少5-6对数的活菌数并导致60-120分钟内没有生长。CagA状态或对曱硝唑或克拉霉素的耐药对两种铜离子组合物的效力没有任何影响。实施例13手部凝胶残留物抗MRSA活性方法手部凝胶以每10cm21毫升涂布于层状表面板上，在室温下允许干燥过夜。0.lml的MRSA的PBS混悬液(106CFU/ml)小心地涂布于每个10cm'标记的区域(各个时间点每个手部凝胶残留物的正方形)并允许干燥10分钟。正方形立刻(t-0小时)并随后在高至24小时的不同时间点接触涂板。接触涂板培养24小时，对菌落形成单位数进行计数(CFUs)。结果如图20所示，在任何时间点Xgel残留物中没有CFUs，推测是由于残留物中CuAL42存在的缘故。相反，在高至3小时的任何时间点Purell残留物中都检测到CFUs，虽然这些以时间依赖方式减少，表明残留物中防腐剂和一些其他成分具有适度的抗菌活性。这不是由于Purell残留物中存在乙醇，因为其在过夜干燥阶段已经蒸发了。结论Xgel残留物在所有时间点都预防MRSA的存活和生长，同时Purell残留物支持MRSA存活至少3小时。据NHS估计每月每床使用1升的Purell。由于1升的Purell含有70%的乙醇然后每月会在每个床存放约300ml的残留物，这可能潜在地支持了MRSA的存活(初步结果显示与抗生素耐药的不动杆菌相似的结果)。相反，Xgel残留物不支持MRSA的存活(或不动杆菌-初步结果)并且因此有助于在医疗保健设置中防止细菌的生长和存活。实施例14使用7Sppm的三种铜组合物消毒MRSA污染的UMF布料方法PBS中MRSA(2xl06)涂布于层状表面板(50cm2)并允许干燥10分钟。正方形立即用超孩t纤维(UMF)布料擦拭、stomached、涂板、24小时后菌落形成单位(CFU)计数以确定接种物正确并且被UMF布料完全吸收。其他板用水浸湿的对照UMF或含有75ppm的3种铜纟且合物的水浸湿的UMFs擦拭。这些污染的UMFs置于塑料袋中16小时，然后stomached、涂板和24小时后计数CFUs。结果如图21所示，接种对照组含有2xl(T的CFUs，表明UMF布料吸收了所有的MRSA细菌。仅用水浸湿并储存16小时的对照UMF布料含有lxl()S的MRSA，而用3种铜化合物浸湿的UMF布料储存16小时后不含活的细菌。结论这些结果清楚地显示了UMF布料从层状表面消除MRSA是非常有效的，例如医院中应用的那些。但是，UMF布料上细菌的存活是非常好的，这些布料的弃置或洗涤引发了向各处传播细菌的严重风险。因此，用铜化合物浸湿的UMF布料16小时后不含残存的MRSA的事实是非常重要的。这种由3种铜组合物观察到100%有效的消毒作用在需要从表面消除可能危险的细菌的医院和其他地方是非常有价值的。实施例15手部凝胶对A431人皮肤细胞系的细胞毒性方法人鳞状上皮细胞系A431在添加了10%FCS、2g/L碳酸氢钠和2mM的L-谷氨酰胺(完全培养基)的RPMI1640培养基中，75cm2组织培养瓶中增湿培养箱中37匸下含5。化02的大气中进行培养。对细胞毒性试验，A431细胞于200n1的完全培养基中以每孔5x104细胞数涂布于平底96孔板的孔中并且允许生长融合。试验当天，吸取衰竭的培养基并用100U1新鲜的完全培养基替换。手部凝胶的样品在完全培养基中稀释使图中显示的浓度加倍，100pl的各种样品添加于随后进一步培养24小时的细胞中。显微镜检查后，细胞固定并染色以如下所述定量测定的细胞毒性。磺酰罗丹明(sulforhodamine)B(SRB)细胞毒性测定法在国立癌症研究院研发和验证。筒要地，细胞用RPMI培养基(无FCS)洗涤两次然后在4。C下用10%的三氯乙酸固定一小时。用自来水洗涤两次后，在室温下细胞用SRB(l。/。的醋酸中0.4%w/vSRB)染色30分钟。用自来水洗涤两次后，剩余染料溶解于10mM的Tris碱中，在540nm下DynatechMultiplateELISAreader中测定孑L的光密度(0.D.)。细胞存活的百分数通过试验0.D.除以对照0.D.乘以100计算。结果如附图22显示，Xgel基质(用黄原胶和柠檬酸作为增稠剂的芦荟凝胶)在任何测试的浓度下对A431细胞存活没有显著的作用。Xgel是含有具有314ppm的铜基杀虫剂CuAL42的Xgel基质的无醇手部凝胶；该产品在最高浓度下减少大约25%的细胞存活，但在低浓度下没有作用。10%的乙醇减少大约50%的A431细胞存活但在低浓度下没有作用。Purell是目前医院中用于手消毒的基于醇的手部凝胶。Purell含有62%的变性醇加十四(烷)酸异丙酯、丙二醇、醋酸维生素E、ammonomethyl丙醇，在10%的浓度下其杀灭超过95%的A431细胞，但在低浓度下没有作用。Spirigel和Softalind也是含醇的手部凝胶，但Spirigel同时具有与Purel1相似的特性，Softalind在只是1%的浓度下杀灭大约50%的A431细胞。但是，Softalind含有变性醇和丙醇的混合物以及PEG-6辛酸/癸酸甘油酯和二异丙基己二酸酯，这大概解释了对A431细胞显著更多的毒性作用。Nexan是含有0.2%的三氯生加清洁剂的手部凝胶，它是非常细胞毒性的，在所有测试浓度下杀灭A431细胞。在高浓度下(#)Nexan实际上溶解A431细胞(显微镜观察)，这最可能归因于清洁剂的作用。最后，2种含有季铵化合物的清洁产品CBC和Activ8对A431细胞也是非常细胞毒性的。在较高的浓度下(')这些产品粘附死亡的A431细胞于塑料盘(显微镜观察)上，给出细胞存活改善的假象。结论结果显示含有醇的手部凝胶对培养物中A431皮肤上皮细胞具有适度的细胞毒性作用。但是，在这些产品被医务人员使用到手部的1/10或更低的浓度下观察到这些细胞毒性作用，例如，有文献证明频繁日常使用Purell会引起皮肤干燥或开裂。Xgel在1/10正常强度下也表现非常适中的细胞毒性-大约与Purell在1/33正常强度下的作用相同-这大概是由于CuAL42灭菌剂存在的作用，因为Xgel基质在任何浓度下对A431没有显著的作用。这些结果表明Xgel会比Purell对皮肤更温和。进一步地，其他研究已显示在杀灭MRSA、抗生素耐药的不动杆菌和艰难梭菌芽胞方面Xgel比Purell是相当更有效的。事实上，Purell对艰难梭菌芽胞是完全无效的，并且由于可能引起致命的腹泻的这种细菌现在是医院中比MRSA更大的死亡原因，使用Xgel而非Purell会是更合理的选择。Nexan包含0.2%的三氯生和清洁剂，它在所有测试的浓度下完全杀灭A431细胞。令人惊异地，Nexan在意大利的医院中被医务人员用作标准的手部凝胶。包含季铵化合物作为其活性成分的2种清洁产品CBC和Activ8对A431也是非常细胞毒性的，但是由于这些产品假定被戴有橡皮手套的人使用，它们不会引起皮肤问题。实施例163种铜组合物对由医院暴发分离的不同细菌物种敏感性的测定目的测定三种铜组合物对例如肠杆菌、假单胞菌、葡萄球菌和肠球菌等一系列细菌的活性概要使用MIC测定法测试总计170种不同细菌菌株(22种不动杆菌、18种肠道细菌、27种克雷白杆菌、26种肠球菌、IO种假单胞菌、37种粘质沙雷菌和45种葡萄球菌)对三种铜组合物的敏感性。区域从11-31mm大小不等，不显示耐药的类型。材料1)使用的铜组合物，如本文定义和编码的由表1实施方案1-8得到的CuAL42、CuWB50和CuPC332)Isosensitest琼月旨(ISO琼脂)3)Isosensitest肉汤(ISO肉汤)4)抗菌敏感性测试盘(0X0IDCT0998B)5)由商店获得的无菌拭子6)过夜生长的细菌培养物方法抗菌敏感性测试盘(OXOIDCT0998B)用20ul的每个铜组合物饱合，分别在热气干燥箱中干燥2小时，储存于4x:。细菌培养物接种于适当的培养基上(营养琼脂或MacConkey)并过夜培养。用环蘸取5孔分离的菌落并接种于5ml的Isosensitest肉汤中(ISO肉汤)。肉汤在36<€-/+20匸下有氧过夜培养。接种物通过涡旋过夜的肉汤，用长的塑料巴斯德吸管向5ml的ISO肉汤中移取"x"滴过夜培养物如下制备肠杆菌1滴假单胞菌1滴肠球菌5滴葡萄球菌2滴无菌拭子浸入涡旋的接种物混悬液、靠压管壁并旋转除去过多的液体。使用旋转接种器接种涂板。使用无菌镊子使板置于涂板上以佳L它们完全与琼脂接触。一旦应用就不移除板。读数测定组合物抑制生长的抑制区域。记录结果。A=CuAL42B-CuWB50C-CuPC33区域的大小以mm计结果。金黄色葡萄球菌ABCEMRSA-15H040220409E15Bl262223H040220408E15B3272222H040340351E15B3262626H061500550E15B5272527H061500522E15B7312527H061440332E15Bl302727H061520148E15B17222219,1520592E15B8242525HO61780511E15Bl201718H061780562E15B2302725H061880414E15B3201919H062040630E15B3242021EMRSA-16,5180281E16Al302825,0220405E16A16252221H053000200E16A14252221H055140586E16A12232120H060620616E16A16242220H060620609E16A2222223H060780341E16All222219,1620087E16A7242220H061700478E16A29272219H060780344E16A1212121H060440423E16A14232220H060200417E16A16201918EMRSA-1H043980582GOS262626EMRSA-17,1940150S'hampton262626H053100245S'hampton262625Irish-1H042280049Belfast252525H054360295Craigavon252422Irish-2H052080391Craigavon272624CA-MRSAH043880199ST1PVL-252422H060180184ST5PVL+252525H045260142ST8PVL+272422H044300316ST22PVU221917H060640427ST30PVL+272524H060660187ST59PVL+242322H054960270ST80PVL+252525H052320141ST88PVL+252525MSSAs55/348880/81;PVL+272726H051680084Distinct262522H051760098组II242423MSSAH051660517组II242424MSSAH05126016Q組II272425MSSAH051640376WSS-96272726H052260557DisPVL+272524H060940449NTPVL+262212屎肠球菌H062940352H062940351H06276023OH062920531H062940372H063000437H063000438H062740365H062980090H062940548H062940550H062940547H062940549H062940322H062980250粪肠球菌麵3000"90H062980583H062380292H062960351302730,2960251302832鹁鸡肠球菌H062980247293129阴沟肠杆菌ABCH062680089171620H062760216191819cBAE性性4生生4Ej^i欧性Si性性;v曰曰曰曰曰月月性性性曰tfl曰i生性月曰月<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>H062920245151414H062920257121414绿脓假单胞菌暴发菌林HPA86圣乔治医院ABCH062880427201725H062880428171723H062680429171723H061820407201824H061420彻181621H062500552211824H062500553191723H053940608201724H053940608201724H0539福09181723粘质沙雷氏杆菌暴发菌林圣玛丽儿童医院ABC画28803U191724H062880312181820H062880313201820H062880314201823H062880315191820H062880316201820H062880317202220鲍氏不动杆菌ABCA/3009SEclone222023,3260547SEclone222022,1340585SEclone181821A/3214OXA-23clone201622,4640092OXA-23clone202023画0謂607OXA-23clone191820H044220140NWstrain212127H034940173Tstrain221920H052600376Tstrain201922H060560322Tstrain2118253/A/3311Sporadic1171419H043860186Midlands2161317H060980542Sporadic3201716A/2875/1Wstrain111113躍2034Wstrain131116H060800430賺C-1121112OXA-23cloneU1012H0345601772……0XA-23clone""",22206352111112,2900157Sporadic2121113H04120019824AC-1222023结论总计170种菌林、22种不动杆菌、18种肠道细菌、27种克雷白杆菌、26种肠球菌、IO种假单胞菌、37种粘质沙雷菌和45种葡萄球菌测试对抗三种铜组合物。没有耐药性。区域从11-31薩大小不等。权利要求1、一种抗菌制剂，包含(a)至少一种能够在水性介质中分解形成铜离子的水溶性铜化合物；(b)至少一种能够在水性介质中分解形成铵离子的水溶性铵试剂；(c)至少一种水溶性酸，和(d)组分(a)、(b)和(c)溶于其中的水溶性介质，所述制剂具有(e)酸性pH和(f)超过50毫伏的电解电势。2、如权利要求1所述的制剂，其中(a)包含一种或多种无机铜盐，例如硫酸铜、氯化铜、硝酸铜。3、如权利要求1或2所述的制剂，其中(b)包含至少一种无机铵盐或氢氧化物。4、如任一前述权利要求所述的制剂，其中(c)包含一种或多种无机酸，例如盐酸、石克酸、硝酸和磷酸中的一种。5、如权利要求l-3任一所述的制剂，其中(c)包含一种或多种酸，其选自柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乙酸、乳酸组成的组。6、如任一前述权利要求所述的制剂，其中水溶性介质包含纯的蒸馏水或基本上由纯的蒸馏水组成。7、如任一前述权利要求所述的制剂，其中pH值(e)小于5，优选小于4，更优选小于3，最优选小于2.5。8、如权利要求7所述的制剂，其中pH值(e)是2或更小。9、如任一前述权利要求所述的制剂，其中电解电势值(f)超过100毫伏，优选超过150毫伏，更优选超过200毫伏，甚至更优选超过300毫伏，例如在300-400毫伏的范围内。10、如任一前述权利要求所述的抗菌制剂，其中水性介质包含凝胶基质。11、如权利要求IO所述的制剂，其中凝胶基质包含,荟和一种或多种增稠剂。12、如权利要求11所述的制剂，其中增稠剂包含至少一种黄原胶。13、如权利要求10-12任一所述的制剂，其中铜化合物(a)是有才几盐，并且以25-500ppm、优选50-400ppm、更优选100-350ppm的浓度存在。14、如任一前述权利要求所述的制剂，其基本上由其中所述的组分组成。15、如权利要求14所述的制剂，除任何不可避免的杂质可能存在外，其由其中所述的组分组成。16、如任一前述权利要求所述的制剂，其中铜化合物U)是水合的结晶硫酸铜，酸(c)包含一种酸，选自硫酸、盐酸和磚酸，铵试剂(b)包含一种铵化合物，选自硫酸铵、氯化铵和磷酸铵。17、用于控制细菌生长和/或繁殖的任一前述权利要求所述的抗菌制剂。18、如权利要求17所述的制剂，其中细菌难以治疗或是持续性细菌。19、如权利要求18所述的制剂，其中细菌是医院内细菌或耐药性细菌。20、用于制备处理细菌或细菌感染的药物的任一前述权利要求所述的制剂。21、如权利要求20所述的制剂，其中细菌难以治疗或是持续性细菌，例如医院内细菌或耐药性细菌。22、任一前述权利要求所述的制剂作为抗细菌制剂的用途。23、一种处理含有例如医院内或耐药性细菌的细菌的表面或材料的方法，包含将权利要求1-21任一所述的制剂应用于所述的表面或材料。24、如权利要求1-21任一所述的抗菌制剂，与至少一种清洁剂组合。25、一种清洁剂组合物，包含与如权利要求l-21任一所述的抗菌制剂结合的一种或多种清洁剂。26、一种浸渍至少一种如权利要求1-21任一所述的抗菌制剂的材料基质。27、如权利要求26所述基质，其为组织材料。28、如权利要求26所述基质，其为纺织或织物材料。29、如权利要求28所述基质，其为布材料。30、如权利要求29所述基质，其为微纤维布材料。31、如权利要求30所述基质，其为超^t纤维布材料。32、一种抗菌制剂，包含权利要求1-21任一所述的制剂和其可接受的载体、稀释剂或赋形剂。33、一种消毒表面的方法，其包括将权利要求26-31任一所述的材料基质应用于表面。34、一种洗涤含有细菌的材料的方法，其包括使用权利要求24所述的制剂或权利要求25所述的清洁剂组合物洗涤材料。35、如权利要求1-21任一所述的抗菌制剂，以乳剂、肥皂、洗剂、喷雾溶液、敷料溶液、灌洗液或喷雾制剂的形式。36、一种消毒表面的方法，通过使表面与权利要求1-21或35任一定义的抗菌组合物的喷雾或雾接触。37、一种细菌感染控制系统，其涉及(i)检测细菌，(ii)显示检测的结果，(iii)通过表面应用或喷雾权利要求1-21或35任一定义的组合物处理检测到的细菌，(iv)重复检测步骤并重复显示步骤。38、如权利要求37所述的感染控制系统，其中检测步骤(i)是通过孩l流体检测法完成的。全文摘要一种抗菌制剂，包含(a)至少一种能够在水性介质中分解形成铜离子的水溶性铜化合物；(b)至少一种能够在水性介质中分解形成铵离子的水溶性铵试剂；(c)至少一种水溶性酸，和(d)组分(a)、(b)和(c)溶于其中的水溶性介质，所述制剂具有(e)酸性pH和(f)超过50毫伏的电解电势。文档编号A61P31/00GK101360533SQ200680051202公开日2009年2月4日申请日期2006年11月17日优先权日2005年11月17日发明者S·S·希考克申请人:治疗研究有限公司