专利名称：3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-γ-丁内酯作为抑制氯代奎宁诱导产生的细胞质空泡化药物 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)i-丁内酯的新用途，尤其涉及3-苄基 -5-(2-硝基苯氧甲基)- 丁内酯作为抑制氯代奎宁诱导产生的细胞质空泡化药物的应 用。
背景技术：
y-丁内酯结构式为
<formula>formula see original document page 3</formula>
分子式C4H602 分子量86
性状Y-丁内酯是无毒透明的油状液体和水完全可以互溶，可溶于乙醇、乙醚、苯 和丙酮，能溶解许多有机和无机化合物。是一种沸点高、溶解性强、电性能及稳定性好 的溶剂。
丁内酯衍生物在有机合成领域中获得广泛应用，是一类非常重要的中间体和终产 物。丁内酯结构是一类非常重要的结构单元，许多天然产物和合成药物中都含有该结构 单元。现在，由于取代r-丁内酯衍生物的药理学和药物特性、经济价值，其仍为研究 人员研究的重点。但是，目前丁内酯衍生物研究报道多是对丁内酯衍生物已经合成的这 类衍生物的生物活性进行试验，表明该类衍生物具有抗肿瘤、抗溃疡、消炎杀菌、镇静 止痛、抗痊挛、抑制血小板凝集、抑制中枢神经等作用。而利用其作为抑制氯代奎宁诱 导产生的细胞质空泡化药物进行药理学的研究与应用，经权威机构检索查新，目前国内 外尚未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种丁内酯衍生物3-苄基-5- (2-硝基苯氧甲基)-Y _丁内酯 的新用途，即3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯作为抑制氯代奎宁诱导产生的细 胞质空泡化药物的应用。
本发明的Y -丁内酯衍生物3_芳甲基-5-芳氧甲基_ Y _丁内酯用下述通式(I )表示
<formula>formula see original document page 3</formula> (I) 其中R'代表H、 C卜5烷基、d-5垸氧基、卤素、硝基、羟基之一；
R2代表H、 d—5烷基、苯基、取代苯基、萘基、取代萘基之一。 本发明所述的3-苄基-5- (2-硝基苯氧甲基)_ Y -丁内酯中 R'优选代表硝基， R2优选代表苯基。
本发明涉及3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯作为抑制氯代奎宁诱导产生的
细胞质空泡化药物的应用。 具体为
3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯作为抑制氯代奎宁诱导血管内皮细胞产生 的细胞质空泡化药物的应用。
其中所述能有效抑制氯代奎宁诱导血管内皮细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度
为60tiM 180uM。
上述能有效抑制氯代奎宁诱导血管内皮细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度优选 为110yM 140uM。
上述能有效抑制氯代奎宁诱导血管内皮细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度最优 选为120 uM。
3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯作为抑制氯代奎宁诱导血管平滑肌细胞产 生的细胞质空泡化药物的应用。
其中所述能有效抑制氯代奎宁诱导血管平滑肌细胞产生的细胞质空泡化的药物浓 度为60uM 180nM。
上述能有效抑制氯代奎宁诱导血管平滑肌细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度优 选为110uM 140iiM。
上述能有效抑制氯代奎宁诱导血管平滑肌细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度最 优选为120 uM。
为了更好地理解本发明的实质，下面用3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯的 药理实验及结果来说明其在抑制氯代奎宁诱导的血管内皮细胞和平滑肌细胞细胞质空 泡化中的应用。
血管内皮细胞和平滑肌细胞的制备
以常规方法培养人脐静脉血管内皮细胞和人脐动脉血管平滑肌细胞，选取生长状态 良好的、且处于对数生长期的血管内皮细胞和平滑肌细胞备用。
采用细胞生物学和分子生物学的方法，进行如下实验研究3-苄基-5-(2-硝基苯氧 甲基)-Y-丁内酯在抑制氯代奎宁诱导产生的细胞质空泡化中的应用。
1、倒置相差显微镜观察细胞形态学变化
将人脐静脉血管内皮细胞接种于24孔细胞培养板中，设置对照组在含有血清和 生长因子的条件下加入8iiM氯代奎宁培养；实验组在含有血清和生长因子的培养条
件下加入浓度为8nM氯代奎宁和浓度分别为40y M、 60nM、 100uM、 120yM、 140"M、 180uM和200yM的3-节基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯培养。37'C， (]02孵箱内培
养，倒置相差显微镜下观察血管内皮细胞的形态学变化。
将人脐动脉血管平滑肌细胞接种于24孔细胞培养板中，设置正常组在含有血清
和生长因子的正常条件下培养；溶剂对照组在含有血清和生长因子的条件下加入二甲 基亚砜(DMS0)培养；氯代奎宁处理组含有血清和生长因子的条件下加入16iiM的氯 代奎宁培养；3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯处理组含有血清和生长因子的
条件下加入浓度分别为40yM、 60ixM、 100 uM、 120 nM、 140 uM、 180yM禾卩200 yM 的3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-y-丁内酯培养；氯代奎宁和3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲 基)-Y-丁内酯共同处理组含有血清和生长因子的条件下加入16yM的氯代奎宁和浓 度分别为40uM、 60uM、 100uM、 120tiM、 140iiM、 180pM禾n 200uM的3—苄基_5-(2— 硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯共同培养。37°C， C02孵箱内培养24小时之后，倒置相差显微 镜下观察血管平滑肌细胞的形态学变化。
结果表明用浓度为60uM 180yM的3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯， 能有效的抑制氯代奎宁诱导的血管内皮细胞和平滑肌细胞的空泡化，其中有效抑制氯代 奎宁诱导血管内皮细胞和血管平滑肌细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度最优选为 120 nM。
2、 经过吖啶橙染色用荧光显微镜观察细胞质中酸性膜泡的变化 将人脐静脉血管内皮细胞接种于24孔细胞培养板中，设置对照组在含有血清和
生长因子的正常培养条件下培养；氯代奎宁处理组在含有血清和生长因子的培养条件
下加入8 u M的氯代奎宁进行培养；氯代奎宁和3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y -丁内酉旨 共同处理组含有血清和生长因子的条件下加入8yM的氯代奎宁和浓度分别为40uM、 60 y M、 100 u M、 120 y M、 140 y M、 180 y M和200 ti M的3_节基-5- (2-硝基苯氧甲基)i 一 丁内酯共同培养。37°C， C02孵箱内培养6小时之后，经吖啶橙染色，酸性膜泡被染成 橙红色，在荧光显微镜下观察酸性膜泡的变化。
将人脐动脉血管平滑肌细胞接种于24孔细胞培养板中，设置正常组在含有血清 和生长因子的正常条件下培养；溶剂对照组在含有血清和生长因子的条件下加入二甲 基亚砜(DMS0)培养；氯代奎宁处理组含有血清和生长因子的条件下加入16yM的氯 代奎宁培养；3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯处理组含有血清和生长因子的
条件下加入浓度分别为40"M、 60uM、 100uM、 120yM、 140uM、 180uM禾卩200nM 的3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯培养；氯代奎宁和3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲 基)-Y-丁内酯共同处理组含有血清和生长因子的条件下加入16nM的氯代奎宁和浓 度分别为40 u M、 60 y M、 100 y M、 120 y M、 140 " M、 180 u M禾卩200 " M的3-苄基-5- (2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯共同培养。37°C， C02孵箱内培养24小时之后，经吖啶橙染 色，酸性膜泡被染成橙红色，在荧光显微镜下观察酸性膜泡的变化。
结果表明60uM 180uM 3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯，能有效的抑 制氯代奎宁诱导的血管内皮细胞和血管平滑肌细胞的空泡化。
3、 中性红染色检测细胞中酸性区室总体积的变化
中性红经常用于溶酶体染色，并且用于定量测定细胞的酸性区室总体积。
将对数生长期血管内皮细胞接种于直径6cm的培养皿中，分组处理细胞，37°C， C02 孵箱内培养24小时之后，经中性红染色法计算不同处理组的酸性区室总体积。
将对数生长期血管平滑肌细胞接种于直径6cm的培养皿中，分组处理细胞，37°C， C0J睜箱内培养24小时之后，经中性红染色法计算不同处理组的酸性区室总体积。
结果表明60yM 180uM的3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯能够显著抑
制氯代奎宁引起的血管内皮细胞和血管平滑肌细胞酸性膜泡体积的增加。 4、 NaT—ATP酶活性检测
将血管内皮细胞接种于直径10cm的培养皿中，分组处理细胞，37°C， C02孵箱内培养 24小时之后，消化细胞，经超声破碎提取各组细胞酶液，通过Na+K+—ATP酶试剂盒检测 各组Na+K+—ATP酶活性。
将血管平滑肌细胞接种于直径10cm的培养皿中，分组处理细胞，37'C， C02孵箱内培 养24小时之后，消化细胞，经超声破碎提取各组细胞酶液，通过Na+K+—ATP酶试剂盒检 测各组Na+K+—ATP酶活性。
结果表明60uM 180nM的3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯能有效的抑 制氯代奎宁诱导的血管内皮细胞和平滑肌细胞的空泡化，以及抑制氯代奎宁引起的NaT 一ATP酶活性升高现象。.
上述的实验数据统计学处理
实验数据以平均值土标准误差表示，经t检验代O. 05表示有显著性差异；代O. 01 表示有极显著性差异。
由上述实验及其结果，可以得出如下结论
本发明首次发现氯代奎宁作为广泛的抗疟疾药物能够诱导血管内皮细胞和血管平
滑肌细胞空泡化，而且此过程伴随着Na+K+—ATP酶活性的降低。
浓度为60 u M 180 y M的3-苄基-5- (2-硝基苯氧甲基)-Y -丁内酯能有效的抑制氯 代奎宁诱导的血管内皮细胞和平滑肌细胞的空泡化,其中有效抑制氯代奎宁诱导血管内 皮细胞和血管平滑肌细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度最优选为120 y M。
因此，本发明涉及的3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯为研制开发有关抑制 氯代奎宁诱导产生的细胞质空泡化药物奠定了基础。
图1倒置相差显微镜观察血管内皮细胞形态学变化。
其中A， D, G分别为8幽的氯代奎宁处理6小时，12小时，24小时的血管内皮细胞； B， E， H，分别为8幽的氯代奎宁和120幽的3-苄基-5-(2_硝基苯氧甲基)-y-丁内酯共同 处理6小时，12小时，24小时的血管内皮细胞；C, F, I分别为8幽的氯代奎宁和180幽 的3-节基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯共同处理6小时，12小时，24小时的血管内 皮细胞。
图2倒置相差显微镜观察血管平滑肌细胞形态学变化。
其中A为正常组；B为DMS0处理组；C为氯代奎宁处理组；D为3-苄基-5_(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯处理组；E为氯代奎宁和3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁 内酯共同处理组。
图3经过吖啶橙染色用荧光显微镜观察血管内皮细胞酸性膜泡的变化。
其中A为对照组；B为氯代奎宁处理组；C为氯代奎宁和3-苄基-5-(2-硝基苯氧
甲基)-Y-丁内酯共同处理组。
图4经过吖啶橙染色用荧光显微镜观察血管平滑肌细胞酸性膜泡的变化。
其中A为正常组；B为DMSO处理组；C为氯代奎宁处理组；D为3-苄基-5-(2-硝基
苯氧甲基)-Y -丁内酯处理组；E为氯代奎宁和3-苄基-5- (2-硝基苯氧甲基)_ Y -丁内酯 共同处理组。
图5中性红染色法检测血管内皮细胞中酸性区室总体积的变化。
其中CQ代表氯代奎宁；3BD0代表3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯
林表示与氯代奎宁处理组相比，P〈0.01。
图6中性红染色法检测血管平滑肌细胞中酸性区室总体积的变化。
其中CQ代表氯代奎宁；3BDO代表3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯
图7血管内皮细胞的Na+K+—ATP酶活性检测。
其中CQ代表氯代奎宁；3BD0代表3-节基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯
表示与对照组相比，P<0. 05;林表示与对照组相比，P<0. 01; #表示与氯代奎宁组
相比，P〉0.05， &表示与氯代奎宁组相比，P<0.05. 图8血管平滑肌细胞的Na+K+—ATP酶活性检测。
其中CQ代表氯代奎宁；3BD0代表3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯
具体实施例方式
实施例1 3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯的制备
将0. 235克(10.22毫摩尔)金属钠加入10毫升无水乙醇中，待钠反应完毕后，开 始搅拌。升温至5CTC，然后缓慢滴加2.503克(IO.OI毫摩尔)苄基丙二酸二乙酯的乙 醇(2毫升)溶液。降温至37°C，加入1. 953克(10. 02毫摩尔)3-(2-硝基苯氧基)-1， 2-环氧丙烷的乙醇(2毫升)溶液。55'C反应3.5小时后，冷却至15'C以下，加入1毫升 醋酸。减压蒸出乙醇，剩余物加入10毫升水，用氯仿萃取三次(每次20毫升)。合并 有机相，用5% NaHC03溶液洗三次(每次6毫升)，水洗两次(每次6毫升)，用无水硫 酸镁干燥，过滤，减压浓縮。剩余物采用硅胶柱层析分离(展开剂为石油醚/乙酸乙酯 =3:1，体积比)，得到"r和tra/7r 3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯混合物 (0. 721克)，收率22%。 结构式如下
实施例2
3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯作为抑制氯代奎宁诱导产生的细胞质空泡 化药物的应用。
血管内皮细胞和平滑肌细胞的制备
以常规方法培养人脐静脉血管内皮细胞和人脐动脉血管平滑肌细胞，选取生长状态 良好的、且处于对数生长期的血管内皮细胞和平滑肌细胞备用。
采用细胞生物学和分子生物学的方法，进行如下实验研究3-苄基-5-(2-硝基苯氧
甲基)-Y-丁内酯在抑制氯代奎宁诱导产生的细胞质空泡化中的应用。 1、倒置相差显微镜观察细胞形态学变化将人脐静脉血管内皮细胞接种于24孔细胞培养板中，设置对照组在含有血清和 生长因子的条件下加入8uM氯代奎宁培养；实验组在含有血清和生长因子的培养条
件下加入浓度为8uM氯代奎宁和浓度分别为120uM禾P 180uM的3-苄基-5-(2-硝基苯 氧甲基)-Y-丁内酯培养。37°C， C02孵箱内培养，倒置相差显微镜下观察血管内皮细胞 的形态学变化。(见附图1)
将人脐动脉血管平滑肌细胞接种于24孔细胞培养板中，设置正常组在含有血清
和生长因子的正常条件下培养；溶剂对照组在含有血清和生长因子的条件下加入二甲
基亚砜(DMSO)培养；氯代奎宁处理组含有血清和生长因子的条件下加入16uM的氯
代奎宁培养；3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯处理组含有血清和生长因子的
条件下加入120yM的3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯培养；氯代奎宁和3-苄
基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯共同处理组含有血清和生长因子的条件下加入
16nM的氯代奎宁和120uM的3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)i-丁内酯共同培养。37t:， C(M瞎箱内培养24小时之后，倒置相差显微镜下观察血管平滑肌细胞的形态学变化。(见 附图2)
结果表明用浓度为120uM、 180uM的3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯， 能有效的抑制氯代奎宁诱导的血管内皮细胞和平滑肌细胞的空泡化。
2、 经过吖啶橙染色用荧光显微镜观察细胞质中酸性膜泡的变化
将人脐静脉血管内皮细胞接种于24孔细胞培养板中，设置对照组在含有血清和 生长因子的正常培养条件下培养；氯代奎宁处理组在含有血清和生长因子的培养条件
下加入8 u M的氯代奎宁进行培养；氯代奎宁和3-苄基-5- (2-硝基苯氧甲基)-Y _丁内酯 共同处理组含有血清和生长因子的条件下加入8uM的氯代奎宁和120yM的3-苄基 -5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯共同培养。37°C， C02孵箱内培养6小时之后，经吖啶 橙染色两分钟，吸弃吖啶橙，酸性膜泡被染成橙红色，在荧光显微镜下观察酸性膜泡的 变化。(见附图3)
将人脐动脉血管平滑肌细胞接种于24孔细胞培养板中，设置正常组在含有血清 和生长因子的正常条件下培养；溶剂对照组在含有血清和生长因子的条件下加入二甲 基亚砜(DMSO)培养；氯代奎宁处理组含有血清和生长因子的条件下加入16uM的氯 代奎宁培养；3_苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯处理组含有血清和生长因子的 条件下加入120uM的3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯培养；氯代奎宁和3-苄
基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯共同处理组含有血清和生长因子的条件下加入
16uM的氯代奎宁和120uM的3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯共同培养。37'C， C02孵箱内培养24小时之后，经吖啶橙染色两分钟，吸弃吖啶橙，酸性膜泡被染成橙红 色，在荧光显微镜下观察酸性膜泡的变化。(见附图4)
结果表明3-节基-5- (2-硝基苯氧甲基)-Y -丁内酯能有效的抑制氯代奎宁诱导的 血管内皮细胞和平滑肌细胞的空泡化。
3、 中性红染色检测细胞中酸性区室总体积的变化
中性红经常用于溶酶体染色，并且用于定量测定细胞的酸性区室总体积。 将对数生长期血管内皮细胞接种于直径6cm的培养皿中，24小时后吸出旧培养液， 分组处理24小时后，吸出培养液，用PBS洗皿2次，每次1分钟。加入中性红孵育液 (0.5%中性红贮液IO倍稀释于1XPBS),置于培养箱中孵育4分钟。吸出孵育液，用
PBS洗3次，每次1分钟。加入酸乙醇(含50%乙醇，1%乙酸，49%水)3ml，提取出 细胞酸性膜泡所吸收的中性红。将中性红的酸乙醇溶液在Cintra 5 UV-visible Spectrometer分光光度计上测其540ran波长的0D值。以对照组的VAC为100%,计算 实验组的相对VAC，公式如下实验组相对VAC二 (A5一实验组/实验组蛋白浓度)/ (A54。 B 对照组/对照组蛋白浓度)X100%。(见附图5)
将对数生长期血管平滑肌细胞接种于直径6cm的培养皿中，24小时后吸出旧培养 液，分组处理24小时后，吸出培养液，用PBS洗皿2次，每次1分钟。加入中性红孵 育液(o. 5%中性红贮液io倍稀释于ixras)，置于培养箱中孵育4分钟。吸出孵育液， 用PBS洗3次，每次1分钟。加入酸乙醇(含50%乙醇，1%乙酸，49%水)3ral，提取 出细胞酸性膜泡所吸收的中性红。将中性红的酸乙醇溶液在Cintra 5 UV-visible Spectrometer分光光度计上测其540nm波长的0D值。以对照组的VAC为100%，计算 实验组的相对VAC，公式如下实验组相对VAC二 (A54。 $M/实验组蛋白浓度)/ (AM。
对照组/对照组蛋白浓度)X100%。(见附图6)
结果表明3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯能够显著抑制氯代奎宁引起的 酸性膜泡体积的增加。
4、 NaT—ATP酶活性检测
将血管内皮细胞接种于直径10cm的培养皿中，分组处理细胞，37°C， C02孵箱内培养 24小时之后，消化细胞，经超声破碎提取各组细胞酶液，通过NaY—ATP酶试剂盒检测 各组NaT—ATP酶活性。(见附图7)。
将血管平滑肌细胞接种于直径10cm的培养皿中，分组处理细胞，37°C， C02孵箱内培 养24小时之后，消化细胞，经超声破碎提取各组细胞酶液，通过Na+K+—ATP酶试剂盒检 测各组Nat+—ATP酶活性。(见附图8)
结果表明3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-Y-丁内酯，能有效的抑制氯代奎宁诱导 的血管内皮细胞和平滑肌细胞的空泡化，以及抑制氯代奎宁引起的NaT—ATP酶活性升 高现象。
权利要求
1、3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-γ-丁内酯作为抑制氯代奎宁诱导血管内皮细胞产生的细胞质空泡化药物的应用。
2、 如权利要求1中所述的应用，其特征是所述能有效抑制氯代奎宁诱导血管内皮 细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度为60 y M 180 y M。
3、 如权利要求2中所述的应用，其特征是所述能有效抑制氯代奎宁诱导血管内皮 细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度为110 y M 140u M。
4、 如权利要求3中所述的应用，其特征是所述能有效抑制氯代奎宁诱导血管内皮细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度为120 yM。
5、 3-节基-5-(2-硝基苯氧甲基)- 丁内酯作为抑制氯代奎宁诱导血管平滑肌细胞产 生的细胞质空泡化药物的应用。
6、 如权利要求5中所述的应用，其特征是所述能有效抑制氯代奎宁诱导血管平滑 肌细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度为60iiM 180iiM。
7、 如权利要求6中所述的应用，其特征是所述能有效抑制氯代奎宁诱导血管平滑 肌细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度为110 ii M 140 n M。
8、 如权利要求7中所述的应用，其特征是所述能有效抑制氯代奎宁诱导血管平滑 肌细胞产生的细胞质空泡化的药物浓度为120 uM。
全文摘要
本发明公开了一种3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-γ-丁内酯作为抑制氯代奎宁诱导产生的细胞质空泡化药物的应用。其中所述能有效抑制氯代奎宁诱导的血管内皮细胞和平滑肌细胞细胞质空泡化的3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-γ-丁内酯浓度为60μM～180μM。本发明所述3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-γ-丁内酯用途为制备和开发有关抑制氯代奎宁诱导产生的细胞质空泡化药物奠定了基础。
文档编号A61P43/00GK101095673SQ20071001618
公开日2008年1月2日 申请日期2007年7月6日 优先权日2007年7月6日
发明者宁 孟, 张尚立, 苗俊英, 静 赵, 赵宝祥 申请人:山东大学